Diagnóstico viral
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Diagnóstico viral
Pasos útiles para el diagnóstico viral Toma y procesamiento de una muestra clínica adecuada. Información epidemiológica, identificación correcta y edad del
paciente Fecha de obtención de la muestra. Averiguar si el paciente ha recibido vacunas virales o terapéutica
antiviral en una fecha reciente.
MUESTRA CULTIVO CELULAR EXAMEN DIRECTO RESPIRATORIAS Si Inmunotinción (IF) Secreciones nasofaríngeas Si Virus sinicial respiratorio Secreciones endocraneales si Adenovirus, parainfluenza,
influenza Lavaje bronquioalveolar Si sarampión Biopsia del pulmón Si Hisopado faríngeo Único método disponible GASTROINTESTINALES Solo diarrea Microscopia electrónica Heces No ayuda Rotavirus, Adenovirus,
coronavirus, virus similares al Norwalk, astrovirus, calicivirus, inmunoensayo enzimático y aglutinación con latex solo para rotavirus
Enfermedad sistémica (otros síntomas además de diarrea)
Método de elección
Heces (preferentemente) Hisopado rectal (menos adecuado) CUTÁNEAS inmunotinción Vesiculas HSV Pústulas VZV Biopsia Vaccina OCULARES Inmunotinción Lágrimas HSV Tejido VZV
Adenovirus SANGUÍNEAS Uso experimental de hibridación in
situ de ácidos nucleicos para CMV, EBV y detección de antígeno para HIV
Anticoagulada con citrato Único método para la mayor parte de los virus
GENITOURINARIAS Experimental de hibridación de ácidos nucleicos in situ para CMV
Orina Si Secreción cervical vaginal / uretral Si DEL SISTEMA NEVIOSO CENTRAL LCR
si
Detección experimental de antígenos para HSV hibridación de cDNA/RNA para enterovirus
TEJIDO ENCEFÁLICO Indispensable: la inoculación de animales puede ser esencial para virus coxsackie A, MLC y algunos arbovirus
Inmunotinción para HSV o rabia
Muestras sugeridas para el diagnóstico viral
Condiciones de las muestras Obtenerlas en un estadio temprano de la enfermedad
(dentro de las primeras 72hs). Las muestras deben obtenerse de forma aséptica si se va
a intentar el aislamiento del virus. El volumen de la muestra debe ser suficiente como para permitir la realización de los ensayos apropiados y la conservación.
Obtención de muestras Hisopados: Conjuntivales, Genitales, Rectales, Mucosa
oral, Lesiones cutáneas Sangre Aspirado nasofaríngeo Lavado bronquioalveolar Expectoración Orina Líquido cefalorraquídeo Materia fecal Biopsias
Medios de transporte de los virus Transportar en un medio que les provea estabilidad. Esto se obtiene
agregando proteínas (albúmina de bovino o gelatina). Con el agregado de antibióticos y anti fúngicos se logra prevenir el sobre desarrollo de la flora bacteriana y fúngica residente del huésped
las muestras deben transportarse a 4ºC, en recipientes estériles adecuados y con tapa hermética.
Para enviar virus de alta transmisibilidad (virus de la Hepatitis B o VIH) deberá colocarse el recipiente que contiene la muestra dentro de un contenedor de preferencia metálico con tapa de rosca y rotularse como peligro biológico.
Principales técnicas Métodos directos:
Características clasificación virus
Aislamiento viral cultivos celulares
Tiene una sensibilidad y una especificidad muy alta
Cultivos 1arios, líneas celulares diploides, líneas celulares continuas, hemadsorción, hemaglutinación
VRS, Adenovirus, MRC5, CMV, VRS, Echo virus, Influenza
Aislamiento de CMV en líneas celulares continuas a partir de muestras de sangre entera.
características
clasificación virus
Técnicas inmunológicas
Detección de antígenos - anticuerpos
Inmunofluorescencia directa: identificación rápida del virus directamente sobre la muestra
Test de aglutinación: detección de antígenos virales en muestras clínicas
Radioinmunoensayo
Enzimoinmunoanalisis
CMV, VRS, Influenza Ay B, Parainfluenza 1, 2, 3, Adenovirus, HSV tipo 1 y 2
Antígeno de Rotavirus en heces, antígeno de Adenovirus
Antígeno de sup. hepatitisB
Características
Clasificación Virus
Investigación de ácidos nucleicos virales
Tecnicas de biología molecular
• Sondas de ac. Nucleico
• sonda sintética *
• Amplificación de ácidos nucleicos virales mediante una reacción en cadena de la polimerasa
Citomegalovirus, Papilomavirus, Epstein Barr
Características: Virus
Microscopia electrónica
Observa morfología de viriones en muestras clínicas
Rotavirus, Adenovirus, Coronavirus y Calicivirus
Métodos indirectos Son aquellos que reconocen la respuesta inmune (humoral o
celular) por parte del huésped:• Detección de anticuerpos específicos antivirales por técnicas
inmunológicas (EIA, IFI,WB, etc.).• Producción de anticuerpos in vitro.o Este método se emplea para el diagnóstico de enfermedades
como: Rubéola, Citomegalovirus, Hepatitis a virus A, VIH
Inmunofluorescencia indirecta Determina anticuerpos virales en el suero del paciente
Enzimoinmunoanalisis indirecto
Método versátil, económico, sensible y de lectura objetiva
Test de aglutinación Detecta anticuerpos antivirales
Western Blot Útiles para el diagnóstico de HIV
Producción de anticuerpos in vitro
Aplicada para el diagnostico de la infección perinatal
Elección de la prueba de diagnóstico: parámetros
sensibilidad Proporción de personas con la infección que reaccionan positivamente en la prueba diagnóstica realizada
especifidad proporción de personas sin la infección o enfermedad que reaccionan como negativos.
Valor predictivo
probabilidad de tener la enfermedad dado el resultado del test