Copper biosorption by chemically treated Micrococcus luteus cells

5
Copper biosorption by chemically treated Micrococcus luteus cells Akira Nakajima 1, *, Masahide Yasuda 2 , Hidekatsu Yokoyama 3 , Hiroaki Ohya-Nishiguchi 3 and Hitoshi Kamada 3 1 Department of Chemistry, Faculty of Medicine, Miyazaki Medical College, Kiyotake, Miyazaki 889-1692, Japan 2 Department of Applied Chemistry, Faculty of Engineering, Miyazaki University, Gakuen-Kibanadai, Miyazaki 889-2192, Japan 3 Institute for Life Support Technology, Matsue, Yamagata 990-2473, Japan *Author for correspondence: Tel.: 81-985-85-0993, E-mail: [email protected] Received 16 August 2000; accepted 7 March 2001 Keywords: Biosorption, copper, chemically treated cells, electron spin resonance, Micrococcus luteus Summary In order to clarify the binding states of copper in microbial cells, copper biosorption from aqueous systems using the chemically treated Micrococcus luteus IAM 1056 cells (hot water-treated, diluted NaOH-treated, chloroform± methanol-treated, and chloroform±methanol/concentrated KOH-treated cells) was examined. The intact cells of M. luteus adsorbed 527 lmol of copper per g cells, and its copper adsorption was very rapid and was aected by the solution pH. The chloroform±methanol/concentrated KOH-treated cells showed higher copper biosorption capacity than the intact and the other chemically treated cells. The electron paramagnetic resonance (EPR) parameters, g k and jA k j, of Cu(II) ion in microbial cells indicate that Cu(II) ion in the intact and all the chemically treated cells have coordination environments with nitrogen and oxygen as donor atoms, being similar to those of type II proteins. The parameter g k also indicated that the coupling between Cu(II) ion and the cell materials in the CHCl 3 ±MeOH/concentrated KOH-treated cells is rather more stable than those between Cu(II) ion and the cell materials in the other treated cells. Introduction Biosorption of heavy metals has received much attention from the standpoints of recovery of useful metals and of removal of toxic metals. Microorganisms are the most potentially useful materials for heavy metal biosorption, because of their abilities to take up metal ions, suitabil- ity for natural circumstances and low cost. Recently, much research has been concentrated on the study of copper biosorption from aqueous systems using bacteria (Mattuschka et al. 1994; Macaskie 1995; Philip et al. 1995; Chang et al. 1997; Karna et al. 1999), actinomy- cetes (Mattuschka et al. 1994), fungi (Huang & Huang 1996; Kapoor et al. 1999), yeasts (Brady & Duncan 1994), and algae (Nakajima et al. 1979; Matheickal & Yu 1999). These works have shed light on our under- standing of the mechanisms of copper biosorption. In a previous paper, one of the authors screened 32 bacteria for selective biosorption of heavy metal ions, and found that Bacillus subtilis IAM 1026, Micrococcus luteus IAM 1056 and Pseudomonas stutzeri IAM 12097 have excel- lent abilities to adsorb copper selectively from metal mixed solution (Nakajima & Sakaguchi 1986). Further screening of these bacteria for copper biosorption showed, that M. luteus IAM 1056 had the highest ability to adsorb copper. Previous results showed that heavy metal biosorption using chemically treated mi- crobial cells gave important information on the states of heavy metals in the cells (Nakajima et al. 1981). In this paper, in order to clarify the binding states of copper in microbial cells, copper biosorption by chemically treated cells of M. luteus IAM 1056 was examined using electron paramagnetic resonance (EPR) spectrometry. Materials and Methods Strains, medium and growth conditions Strains used in this study were generously donated by IAM Culture Collection, Center for Cellular and Mo- lecular Research, Institute of Molecular and Cellular Biosciences, The University of Tokyo. Chemicals (guar- anteed reagents) used in this study were obtained from Nacarai Tesque, Inc. and Wako Pure Chemical Indus- tries, Ltd. Media for growing bacteria used in this study were: 3 g of meat extract, 5 g of polypepton, 5 g sodium chloride in 1 l of deionized water, pH 6.5. Microbial cells were grown in 300 ml medium in a 500 ml culture ¯ask with continuous shaking (130 rev/min) at 30 °C. World Journal of Microbiology & Biotechnology 17: 343±347, 2001. 343 Ó 2001 Kluwer Academic Publishers. Printed in the Netherlands.

Transcript of Copper biosorption by chemically treated Micrococcus luteus cells

Page 1: Copper biosorption by chemically treated Micrococcus luteus cells

������ ��������� �� � �������� ����� ����������� ���� �����

����� ��������� �� ����� �� ���� ������� � ��������� ������� ������� �������� ������� �� ����������������� ���� ����� ������� ��� � ��� � ����� ��� ��� ������� � ������ � ����� ������� � !��������������� "��� �� ���� ����� ������� #�� ���� ��� � ����� $� %��� ��� &������� '����� �� ����� ���� �� � !�����(��� ���� � ) � *����� +�������� ������� ,������� ��-� ./0� !����1"���� � ������������2 +��32 �����4��4�-��0� #��� �2 �������5���3� ����� ����3��36�

����� �� ! ���� � �"""# ����$��� % ����� �""

���7���2 &�� ��$���� ��$$�� �������''� ������� ��'' �'������ $�� �� ������ � ������� ������

�������

(� ����� �� �'���)� ��� *������ ���� �) ��$$�� �� �����*��' ��'' ��$$�� *�� ��$���� )��� �+���� � ��� � ��� ����������''� ������� � ������� ������ (�� ",! ��'' -��� .������������ ��'���� ������������ ��'���)���/�������'�������� ��� ��'���)���/�������'0������������ ����������� ��'' 1 .� �2������3 4�� ������ ��'' �)�3 ������ �� ��*�� ,�% ���' �) ��$$�� $�� � ��'' ��� �� ��$$�� �� ��$���� .� ��� ��$�� ��� .� �5����� *� ��� �'����� $�3 4�� ��'���)���/�������'0������������ ����������� ��'' ��.�� ������ ��$$�� *�� ��$������$����� ���� ��� ������ ��� ��� ����� �������''� ������� ��'' 3 4�� �'������ $����������� �� ������ -67�1$�������� �� ��� ���� �) 8�-((1 ��� �� �����*��' ��'' �������� ���� 8�-((1 ��� �� ��� ������ ��� �'' ��� �������''�������� ��'' �� � ������������ �� �������� .��� �������� ��� �2���� � ����� ���� *���� ���'�� �� ��� � �)��$� (( $������ 3 4�� $�������� �� �' � ��������� ���� ��� ���$'��� *��.��� 8�-((1 ��� ��� ��� ��'' �������' �� ���8�8'�/����0������������ ����������� ��'' � ������ ���� ��*'� ���� ��� � *��.��� 8�-((1 ��� ��� ��� ��''�������' �� ��� ����� ������� ��'' 3

��������

&�� ��$���� �) ��� � ����' �� ����� �� ���� ���������)��� ��� ����$���� �) ���� ��� �) � �)�' ����' ��� �)���� �' �) ��2�� ����' 3 ����������� � ��� ��� �� �$�������''� � �)�' �������' )�� ��� � ����' *�� ��$����*���� � �) ����� �*�'���� �� ���� �$ ����' ��� ����*�'���� )�� ������' ������ ����� ��� '�. �� �3 ������'����� �� ����� �� *��� ������������ �� ��� ���� �)��$$�� *�� ��$���� )��� �+���� � ��� � ��� *�������-����� ���� �� ��3 99:# ���� ��� 99,# 7��'�$ �� ��399,# 8���� �� ��3 99%# ����� �� ��3 9991 ������������� -����� ���� �� ��3 99:1 )���� -����� ; �����99!# ��$��� �� ��3 9991 ��� � -&���� ; <�����99:1 ��� �'��� -�������� �� ��3 9%9# ���������' ;�� 99913 4�� � .��� �� � ��� '���� �� ��� ������ ������� �) ��� ������� � �) ��$$�� *�� ��$����3 (� �$�� ��� $�$�� ��� �) ��� ������ ������� �� *�������)�� �'���� � *�� ��$���� �) ��� � ����' ��� ��� )�������� 8�� ���� ��'� � � (�� "�! � ������� ������ (��",! ��� 9�������� ������� (�� �"9% �� � �2��'�'��� �*�'���� �� �� ��* ��$$�� �'���� �'� )��� ����'��2�� �'����� -�������� ; =�������� 9>!13 ?������ �������� �) ��� � *������� )�� ��$$�� *�� ��$���� ��.�� ���� �3 ������ (�� ",! ��� ��� ����� �

�*�'��� �� �� ��* ��$$��3 7�� ��� �� �'� ��.�� ������� � ����' *�� ��$���� � ��� �������''� ������� ������*��' ��'' �� � ��$������ ��)�������� �� ��� ���� �)��� � ����' �� ��� ��'' -�������� �� ��3 9>13 (� ��� $�$�� �� ����� �� �'���)� ��� *������ ���� �) ��$$�� �������*��' ��'' ��$$�� *�� ��$���� *� �������''� ���������'' �) �3 ������ (�� ",! .� �2������ � ����'������ $����������� �� ������ -67�1 $����������3

�������� �� �� ���

*��� ��� ��� �� ��� ��7�� ��� � ��

=����� � �� �� ��� ���� .��� ������� '� ������� *�(�� 8�'���� 8�''������ 8����� )�� 8�''�'�� ��� ���'���'�� �� ����� (� ������ �) ��'���'�� ��� 8�''�'��&�� ������ 4�� @�� �� ��� �) 4����3 8������' -����������� ������� 1 � �� �� ��� ���� .��� �*������ )���������� 4� +�� (��3 ��� A��� 7��� 8������' (��� ����� B��3 ����� )�� ���.��� *������� � �� �� ��� ����.���C � � �) ���� �2����� , � �) $�'�$�$��� , � �������'����� �� ' �) ������D�� .���� $� !3,3 �����*��'��'' .��� ���.� �� �"" �' ������ �� � ,"" �' ��'����E� � .��� ��������� ������ -�" �� 0���1 �� �" �83

:��� !����� � ��' ��� ; 8 �������� ��C �:�/�:% �""3 �:�� �"" ���7�� "����� � 9�'� �����3 9� ���� � ��� <����������3

Page 2: Copper biosorption by chemically treated Micrococcus luteus cells

8�'' �� '�����'� ���.��� $�� � .��� ��''����� *�������)������� ->""" ��1 .� ��� ��������'� .���� ������ ����� ��'����� �'����� ��� ���� � �� )���� ��$���� �2$������� 3

9������� � ���� ����� ������� �����

8������''� ������� ��'' .��� $��$���� � )�''�. -�������� �� ��3 9>1C -1 ��� .������������ ��'' 3��� ���� -��� .����� *� � 1 �) )�� � ��'' �) �3 ������(�� ",! .� ������� .��� "" �' �) ������D�� .���� ��"" �8 ����� ��E�2 )�� � �3 4�� ��'' .��� ���� ��''�����*� ������)������� .� ��� ��������'� .��� ������D��.���� ��� � �� )�� ��� �* �+���� �2$������� 3 4�����'� .� >" �� ��� .�����3 -�1 <�'��� ����� �����2���� -����1�������� ��'' 3 ��� ���� -��� .����� *� � 1�) )�� � � ������� ��'' .� ������� .��� "" �' �)"3�F ���� �'����� ��� ������ ��������� '� �� �������$������� )�� �" �3 4�� ��'' .��� ���� ��''����� *�������)������� .� ��� ��������'� .��� � ������ �������'����� �'����� ����' ��� $� �) ��� .� � �'����� .� �� ������' ����� ������ % ��� ���� � �� )�� �* �+�����2$������� 3 4�� ���'� .� %!� �� ��� .�����3 -�18�8'�/������������ ��'' 3 4.� ���� -��� .����� �*� � 1 �) )�� � � ������� ��'' .��� ������� .���"" �' �) 9!F -.0 1 �������' �� !, �8 ����� ��E�2 )��" ���3 � �"" �' �) ��'���)��� .��� ����� �� ��� � $�� ��� ��� ��2���� .� ������ )�� �" ��� ��� �����'' .��� ���� ��''����� *� ������)������� ->""" ��134�� ��'' .��� � $����� ����� �� "" �' 8�8'�/���� -�C1 �'����� ��� ��� � $�� ��� .� ������ )���" ���3 4�� ��'' .��� ����� ��''����� *� ������)�������->""" ��1 ��� � �� )�� �* �+���� �2$������� 3 4�����'� .� ,! �� ��� .�����3 -:1 8�8'�/����0������������ $��� ��� �����2��� -���1�������� ��'' 3��') �) ��� ��'���)���/�������'�������� ��'' -%,> ����� .����� *� � 1 .��� � $����� �� "" �' �) �:F -.0 1 ��� �'����� ��� ��� � $�� ��� .� '�)� �� ����)�� � � ����� �� E�. *���� ������ ���� ����''�3 4����'' .��� ��''����� *� ������)������� ->""" � �1 ��� � $����� �� " �' �) �:F -.0 1 ��� �'����� �����)�� � �3 4�� ��'' .��� ��''����� *� ������)�������->""" ��1 .� ��� ��������'� .��� � ������ �������'����� �'����� ����' ��� $� �) ��� .� � �'����� .� �� ������' ����� ������ � �� ��� ���� � �� )�� �* �+���� �2$������� 3 4�� ���'� .� !9 �� ���.�����3

����� ' ���� � �=��� �����

4�� ��$$�� �� ��$���� �2$������� .��� ��������� � )�''�. C $����'����� )�� � ��'' �� �������''� ���������'' -�" �� ��� .����� *� � 1 .��� � $����� �� :" �'�) � �'����� ���������� ��� �� ���� ������ �) ��$$��38�$$�� .� �$$'��� � ��$$��-((1 �������3 4�� �'�����$� .� ���� ��� �� �� ���� �'�� .��� "3 � �8' ���"3 � ���� �'����� 3 �)��� ���� � $�� ��� ���*��� ����� -�" �� 0���1 �� �, �8 ��� ��'' .�����''����� *� ������)������� ->""" ��1 ��� )���D�������3

������ �) ��$$�� �� ��*�� .��� ���������� *���� ����� ��$$�� ������� �� ��� �$�������� .��� ��������� �'� ���$'�� $'� �� +���������� -=�����D�(87G�"""((13 4�� �2$������� .��� ��������� ��������� ��� � ������3

������ ��� � ����� ������� � � ��' �� �����

4�� ������ �) ��$$�� �� ��� ��'' .��� ���������� *�������� ���� ����� ���'� � 3 ?���D������� ��'' .������������� �� ��� H�$�� ������ 6����� �� ����� (� ������� �� H���: ������� )�� ��� �� � ������' �������E�2 �) , � "� �0��� � 3 4�� "�93" ��I �) ����� )���!!8� -��� ��') '�)� ,3" ���1 ��� �:,3, ��I �) �����)��� !:8� -��� ��') '�)� �3> �1 .��� � �� )�� ���'� � 3

#������ ���������� � �������� ������������

?� � ��''����� �) ��� )���D������� $�.��� ��$'� .���$�� ���� � +����D ��$'� ��*� �) , �� �������� ������� � �� )�� 67� ���'� � 3 6'������ $������������� ������ $����� .��� ��� ���� � ��� J�*��� 6=� $���������� -H6�B H6= �6�J ��� H6= 46�""1 �������� ��������� �) �����.� � )��+����� 93:: K�D#�������� L�'� �" �4# L�'� ��$'����� %, �4# L�'�����'����� "" ��D# ����'����� .���� "3�� �4# ������.� � $�.�� , �A ��� ��� ���� ��� ���� "3� 3

������ �� ���������

����� ' ���� � �' � � �� '����� �

(� � $�� ��� $�$�� �� *������� .��� ������� )�� �'���� � *�� ��$���� �) ��� � ����' ��� ��� �� .� )���� ���� 83 ��'� � � (�� "�! �3 ������ (�� ",!��� 93 ������� (�� �"9% ��� �2��''��� �*�'���� ���� ��* ��$$�� �'���� �'� )��� ��2�� ����' �'����� -�������� ; =�������� 9>!13 4�� )������ ��������)�� ��� ��2���' ��$$�� �� ��$���� .� ���������� ��� ��� � ����� $���� �) *������� �� �'����� ����������� : � >" � "�, � ��$$�� -$� ,13 8�$$�� �� ��$����*� ���� *�������� �*�� ��� B������� �� ��$����� ������ > � � � >� � ��0- M � � ��1 .���� >� � ��� ��2���� �� ��$���� ��$����� -���'0� ��� ��'' 1 ����� �+��'�*���� ��$$�� ������������� -�1 ��� � ����� ��$����/�� ��$���� �+��'�*���� ��� ���� -?����� 134�� B������� $�������� �) ���� *�������� ��� �������D�� �� 4�*'� 3 � ������� ������ �� ��� ����� �>� �'�� ,�% ���'0� ����� ��� *������� �� ���3 4�� � �'�� �) ��� � *������� .��� �*��� 3"/�3: � ": '0��'3 8���� �� ��3 -99%1 � ������� ��� ��$$�� *�� ��$����� ��$����� �) 93 ����� ��� 7@� � ��3/��3 ��0���� ��'' -�:>/�!: ���'0� ��� ��'' 1 ��� � � :3:�/!3!, ��0' -3,"/�3�, � ": '0��'13 4���� �� �'� .����'�� � �� ��� ��� ����� � ��� � �) ��� �� �'� 3 7��'�$�� ��3 -99,1 �*������ ��� ������ ��$$�� *�� ��$������$����� ," ��0� ��� ��'' -%>! ���'0� ��� ��'' 1 )��93 ����� ���3 ��.� �� ���� ��� ��� �� � ��� � �'��3

�:: "3 <���6 �� �� �'3

Page 3: Copper biosorption by chemically treated Micrococcus luteus cells

��$��� �� ��3 -9991 �2������ *��� ��� B������� ���?�����'��� ����' )�� ��� � ����' *�� ��$���� �)"����� ���� � ���3 (� ��� �� � � � ������ �) ���� �*��� ����' .��� �2������3 � '��->1 � '��-��1 $'�� ��.�� ����'����� ��� � )������ �� �� ��� �� ���?�����'��� ����' .� �������3� �3 ������ (�� ",! �� �� �2��''��� �*�'��� ��

�� ��* ��$$�� ��� *������ ���� �) ��$$�� �� �3 ��������'' .��� �2������3

"������ ����� ' ���� � '� ��� ������3 '���� �����

4�� �� ��$���� �) ��$$�� *� ������ � ������� ��'' .� ������'� �5����� *� ��� �'����� $�3 4�� ��2����� ��$$�� �� ��$���� .� �* �� �� �� ������ $� :-?����� �13 4�� ������ �) ��$$�� �� ��*�� *� ��� ��'' ��$��'� ������ �� *�'�. $� : ��� ������''� ������ ���*� � $� ,3 8���� �� ��3 -99%1 ��.�� ��� ������ � �)��$$�� *�� ��$���� *� 93 ����� ��� 7@� .��� ��������� � �) ��� �'����� $� �$ �� $� ! ��� )���� ��

��2���� $���3 4�� � �� �'� ��������� ���� ��� $�$��L'� �) ��$$�� *�� ��$���� *� *������� .�'' ��5�� .�����5����� $���� �) *�������34�� �� ��$���� �) ��$$�� *� ������ � ������� ��''

.� ��� ��$��3 4�� �� ��$���� ������� �+��'�*����

.����� " ��� �)��� ������� .��� ��$$�� �'�����3 8������ ��3 -99%1 �' � ��.�� ���� ��� *�� ��$���� �) ��$$��*� 93 ����� ��� 7@� ������� �+��'�*���� .������" ��� �)��� ������� .��� ��$$�� �'�����3 4�� ��$���� ��$���� *� *������� .� �' � �* �� �� �� �������*�� ��$���� -8����� �� ��3 99�13 4�� ��� � ����'*�� ��$���� *� *�������' ��'' � ��$��3

����� ' ���� � '� ���� ����� ��������3 '���� �����

(� ����� �� �'���)� ��� *������ ���� �) ��$$�� �������*��' ��'' �3 ������ ��'' .��� ������� .��� ���.���� ��'���� ���� 8�8'�/���� ��� 8�8'�/����0������������ ��� ��� ���� ��� ��$$�� ��� ��$���� *� ��� �������''� ������� ��'' .� �2������)��� � �'����� -$� ,1 ���������� > � "�: � �) ��$$��-4�*'� �13 4�� ������ �) ��$$�� �� ��*�� *� ��� ���.������������ ��'���� ������������ ��� 8�8'�/������������ ��'' -�� 8� $�� � ��� ��'' 1 ��� �'�� � ��� � ��� � *� ��� ������ ��'' 3 4�� ����� �) ��$$���� ��$���� �� ���� �) ��� ������ ��'' .��� ����'� ��$��$������ �� ��� ���'� 3 4�� � �� �'� ��������� ���� �����$$�� �� ��*��� �*�'���� �) �� ����' ��'' ���$����� ����� � ������� ��'' .��� �'�� � ��� � ��� � �) ����2������� ���$����� -�"/�,F �) ��� ������ ��'' 1 ���

� ���� �3 ( ������ �) ��$$�� �� ��$���� �� $� , *� *�������3 �C 83

��'� � � (�� "�! �C �3 ������ (�� ",! �C 93 ������� (�� �"9%3

4.���� ��''����� -��� .����� *� � 1 �) �����*��' ��'' .��� � $�����

�� :" �' �) � �'����� -$� ,1 ���������� :/>" � "�, � ��$$�� )�� �3

6��� $���� ��$�� ��� ���� N ������� �� ������ �) ���$'����� 3

+�'�� �3 7�������� �) B������� � ������ )�� 8� *�� ��$���� *�

*�������3

=$���� >�

-���'0� ��'' 1

-": '0��'1

83 ��'� � � (�� "�! ��% N % 3: N "3"�

�3 ������ (�� ",! ,�% N � 3" N "3"!

93 ������� (�� �"9% �! N �" �3: N "3�

7�������� ��$�� ��� ���� N ������� �� ������ �) � ��������3

� ���� 3 65��� �) �'����� $� �� ��� ��$$�� �� ��$���� *� �3 ������

(�� ",!3 �����*��' ��'' -�" �� ��� .����� *� � 1 .��� � $����� ��

:" �' �) � �'����� -$� �/!1 ���������� : � "�: � ��$$�� )�� �3

6��� $���� ��$�� ��� ���� N ������� �� ������ �) ���$'����� 3

����� ' ���� � '� ���� ����� ������� ���������� '���� ����� �:,

Page 4: Copper biosorption by chemically treated Micrococcus luteus cells

� �'���� ��� $�'� ��������� $������ ��� ���� '�.��'���'�� .����� �* ����� )�� ����.���� ���������'�$�� )�� 8�8'�/���� ��������� ��� $������ ���$�'� ��������� )�� ��'���� ���� ���������3 �� �������� ���� ��� ������ �) ��$$�� �� ��*�� *� ���8�8'�/����0������������ ����������� ��'' .������� '����� ���� ��� � �) ����� ��'' ���� ��� ����� �)��$$�� �� ��$���� �� ���� �) ��� ������ ��'' .��� �$ ���:F3 4�� �� ����' ���$����� �) ��� ������� ��'' -�*��� %F �) ��� ������ ��'' 1 �� � � ������ �*�'��� ���� ��* ��$$�� ���� ��� �'���� ���$����� -'�$�� $������ ��� $�'� ��������� 13

#9? ��@((A � ����'�� � ��� ���� ����� ����������������� �����

4�� 67� $������ �) 8�-((1 ��� �� ��� �������''�������� � ������� ��'' .� ��� ����3 =���� ������'�� �'��� ��$$�� ���$'�2� ��� �� � ���������''� �� ���������������' �� �������� ��� 67� $������ �) � $�.��� ��$'� � �) ��� �2��' ��$� ��.��� � ����� �* ��$������ ������ L�'� �� �� ��� '� �� �* ��$���� �� '�.�� L�'��� ��3 � ��� ���'��� $�� �) ���� ������''� ���������� ���$� !�8� ��� !,8� � �0� ��� 67� $������ �)8�-((1 .�'' ��. � ��$��L�� $'������ �) )��� )������ 34�� 67� $������ �) 8�-((1 ��� � �� ���*�� *� ���)�''�.��� $�� ����'������#

� � �&��������� ���� � ������� �������� ���� � ������� �

.���� �& � ��� &��� �������� �� � ����� ����� ����� � ��� ��� $�����$'� �2� ���$����� �) �� �'�� �� � ����� ����� ��� �� � ��� ��� $�����$'� �2� ���$����� �) ��$��L�� ���$'��� ��� ���� B= B�B� ��� ���$����� �) ����� �������� L�'� *= *� *���� ���$����� �) �'������ $�� (= (� (� ��� ���$������ �) ��$$�� ���'��� $�� � � �� ��� (-8�1 � �0�3

4�� �� �'�� ��� �� �� � )�''�. -����L�� )����*����� ; 7���� 9,# K�� ���� ; =.�'�� 9!�1#

�� � ���� :��� ��

�� � ���� ���� ��

�� � �����:�%� � � ��� � �� � ���%��� � ���:

�� � ������%� � � ��:��� � ��� �,

.���� �� � �3""��# ��� �� �'�� �) )��� �'������ �#��� $�����*�� ���$'��� ��� ���� -�>�> ��� )�� )���8�-((1 ���1 � � #-�=�1 � #-�=� � ��1 �� � #-�=�1 �#-�=� � ��1# ��� '����� L�'� ��� ���� 9# ��� ��$�'� ����-"3"�! ��� )�� )��� 8�-((1 ���1 ��# ��� ���'������ ��� ����) 8�-((1 ��� ��� �# ��� ���������� )�� ?���� �����������3 4�� �� ��� ���� *���� � ������� .��� ��� '�����L�'� ��� ���� ��� ��� ���'������ ��� ��� �) 8�-((1 ������ �)��� *� � �� �� � ��� �������� �) ��$$�����$'�2� -7�� ��� ; &'��*��� 9%:13 � $��� �) ���67� $������ �) 8�-((1 ��� �� �������''� �������� ������� ��'' � ��.� �� ?����� � ��� ��� $��������� �*������ )��� ��� � $����� �� �� ��� ���� ���'� ��� �� 4�*'� �3 4�� 67� $����� �������� ��� ��$���'$�.��� $������ �) 8�-((1 ��� �� � ���������''� �� ������

+�'�� 3 8�$$�� *�� ��$���� *� �������''��������� �3 ������ ��'' 3

�����*��' ��'' ���'�

-��1

8� �� ��*��

-���'0�1

(����� ��'' """ :�%3! N �3� -""3"1

8������''� ������� ��''

��� .������������ >" :�%3% N �3> ->�3"1

<�'���� ������������ %!� :�:3> N �3, -%%3,1

8�8'�/������������ %,> :�:3� N :3" -%,3�1

8�8'�/����0����������� !9 !"93% N �3> -�:31

4�� �������''� ������� ��'' -�" �� ��� .����� *� � 1 .���

� $����� �� :" �' �) � �'����� -$� ,1 ���������� > � "�: � �)

��$$�� )�� �3 I�'�� �� $������� � �������� ��� ����� �) ��$$��

�� ��$���� �2$�� �� � $��������� �) ���� �) ������ ��'' 3

=��$���� ������ -���'0�1 ��$�� ��� ���� N ������� �� ������

�) ���$'����� 3

� ���� 03 67� $����� �) 8�-((1 �� ��� ������ ��� �������''� �������

��'' �) �3 ������ (�� ",!3 -�1 (����� ��'' -*1 ��� .������������ ��''

-�1 8�8'�/����0������������ ����������� ��'' 3

�:! "3 <���6 �� �� �'3

Page 5: Copper biosorption by chemically treated Micrococcus luteus cells

���������' �� ��������3 � �� ��� ���� �� 4�*'� � ��� ����� ����� �) �3�:%/�3�>" ��� %3!/93 ���� 8�-((1 ������ ��'' �� ��� '����� .��� �������� ��� �2��������� ���� .�'' *� �� � ���'�� ������������ �� ��������� � ��� � �) ��$� (( ��$$�� $������ -7�� ��� ;&'��*��� 9%:13 � ��� 8�-((1 ��� � �� ���������������� �� ��� ���*��� .�'' .��� )��������' ����$ ��� � ���*�2�'�� ���� ��� ����� �� �2������ �������' �� �����'' 3 4�� �2���� ��� �������� ����� ���� ���'���������� )��� ���*�2�' ��� ����� ����$ 3 ��$����� ��3 -99%1 ���� ��� ���� *��� ���*�2�' ��� ���������$ $'�� �� ��$������ ��'� �� ��$$�� *�� ��$���� �)"3 � ���3 =���'�� �� �'� .��� �' � )���� �� ��$$���� ��$���� *� 83 ��'� � � ��'' .�'' -&� ������ ; ������9>"13 4�� �� �'�� �) 8�-((1 ��� �� ��� 8�8'�/����0������������ ����������� ��'' � ��''�� �� ��� � �)����� ��'' .��'� ���� �) 8�-((1 ��� �� ��� ��� .������������ ��'' � '�����3 ?��� 6+������ -�1 ��� ��''�� �� �'�� '��� �� ��� '����� � �'�� ��� ��� '����� �� �'���� ��� ��''�� � �'��3 � ��� '����� � �'�� ���� ����� ��*'� ���$'��� *��.��� ����' ��� ��� '����� -�����'' ; ������� 99!1 ��� ���$'��� *��.��� 8�-((1��� ��� ��� ��'' �������' �� ��� 8�8'�/����0������������� ����������� ��'' � ���.��� ���� ��*'� ������� � *��.��� 8�-((1 ��� ��� ��� ��'' �������' �� �������� ������� ��'' 3 � ��� �'����� *� ��� ��'���� ������� 8�8'�/���� ��������� .� � ��'' ��� ��$$���*������ �� �������� .��� �'�� � ��� ��� � ��� � �)��� ������ ��'' 3 4�� �� ��� ���� �) 8�-((1 ��� �� �����'���� ���� ������� ��'' ��� ��� ������� ��'' .����'�� � ��� � ��� � �) ��� ������ ��'' 3

�������������

4�� .��� �� *��� �$$����� *� ��� K����������� )��=������L� �� ����� ��� ���� ��� �) 6�������� =������=$��� ��� 8�'���� �) H�$�� ��� *� ��� ������@�� �� ���7������ )�� ��� H���� @ � �) H�6�( ?���'���� 3

���������

�*����� �3 ; 7���� �3�3B3 9, 4����� �) ��� ���'��� ��$��L��

�������� �) $����������� �� ������ $����� �� ��� ��' 3 9������

��� ��� ?��� *� ��� �� ! �,/,�3

&���� <3 ; <����� H3�3 99: &��������'����� �) ����' ������ *�

*����������� ����% � ��3 "��� �� � ��' ��� ��� 8 ��������

"� :9/,:3

&� ������ 43H3 ; ������ �3K363 9>" =��� �) ����' ��$� ����� �� ���

��'' .�'' �) 8�� ���� ��'� � �3 !����� 8����� ��� �"� >%!/>>%3

8���� H3=3 B�. �3 ; 8���� 8383 99% &�� ��$���� �) '��� ��$$��

��� ������� *� *���� �) 9�������� ����� ��� 7@�3:����

?������� #� !,/!,>3

8����� <3 I������ 73 8�)����� B3 ; �� ��� �3 99� =��$���� �)

����' ��� *� .��'� ��'' �) 8�� ���� ��� � �������3 #�% ���

������ +������� �# ,,/,,93

K�� ���� �3�3 ; =.�'�� H3<3 9!� 6'������ $����������� �� ��

����� $����� �) ��$$�� ���$'�2� 3 !����� ���� ��� 9��� �� #$

���/����3

����� 83 ; ����� 8373 99! �$$'������� �) "����� ���� ����� ���

?������ ����� )�� 8�-((1 ���� �'3 :���� ?������� # 9>,/

9""3

����� �3�3 @�� B3 =�*�������� K3 ; ����� 73�3 999

&�� ��$���� �) ��2�� ����' ��� *� �'��'��������� *���� �) �

������ �����*�������� 9��� � �� %����� ���� &<@ �","3

:��� !����� � ��' ��� ��� 8 �������� �! %�9/%��3

��$��� �3 I�������� �� 43 ; 8�''����� <3�3 999 ���� �' �)

��� � ����' � ��� )���� "����� ���� � ���3 8 ������� +������

�� � 9,/":3

���� ��� B363 99, 8�$$�� ��'������ $�� $���� � ���� ��� ���

��$$�� �$���� *� � ��� � ����'�������'����� � ��'����� $���� 3

� ��' � %" �%/,�3

�����'' �363 ; ������� �3<3 99! ����� �����=�� � �C����

*��� ��3 8��$��� � 7'���� 7�� ��. ���� ��� B�����3 (=&�

"��"!�:,�:>�"3

���������' H343 ; �� G3 999 &�� ��$���� �) '���-((1 ��� ��$$��-((1

)��� �+���� �'����� *� $���������� *���� �) �� ���'���

������ �'���3 8 ������� +������� $& ���/��93

����� ���� &3 =����*� K3 ; 4�� �� H343 99: =�' �� ��$$�� '���

��� D��� ������'����� *� 9�������� ������� �K�,9 ���

*���������� ��'��C �'������ ����� ��$� ��� ������ �� $�� � �

J���� ����� 3 8 ������ � �"/�">3

�������� �3 ������ �� 43 ; =�������� 43 9> =����� �� ���

������'����� �) ��� � ����' �'����� �� *��'�����' � ��� 3 JI((3

=�'���� � ������'����� �) ��� � ����' ��� *� 8�'���''� ����'��� 3

!����� "��� �� � ��' ��� ��� 8 �������� �� %!/>�3

�������� �3 ; =�������� 43 9>! =�'���� � ������'����� �) ��� �

����' *� ����������� � 3 "��� �� � ��' ��� ��� 8 �������

�� �" ,9/!:3

7�� ��� H3 ; &'��*��� A363 9%: =��������' ��$'������� ���� ��

)��� ��� ���'� � �) �'������ $����������� �� ������ $����� �)

������' ��� ����L���' ��$$�� $������ 3 "��� %�� 8 ���� ���� ���

8 ���� �� �$! !9/%">3

7��'�$ B3 (������ B3 ; I����*����� 83 99, &�� ��$���� �)

��$$��-((1 *� 9�������� ����� ���3 (������� ��� !�����

#�% �������� 9���� � ! 9�/993

+�'�� 03 6=� $�������� �) 8�-((1 ��� �� ��� �3 ������ ��'' 3

�����*��' ��'' �� �� ����-����1

(����� ��'' �3�!" N "3"": �3":" N "3"": >3, N "3,

8������''� ������� ��''

��� .������������ �3�>" N "3"": �3":� N "3"": %3! N "3,

<�'���� �����

�������

�3�!" N "3"": �3":" N "3"": >39 N "3,

8�8'�/�����

�������

�3�!� N "3"": �3":� N "3"": >3� N "3,

8�8'�/����0

�����������

�3�:% N "3"": �3"�% N "3"": 93 N "3!

7�������� ��$�� ��� ���� N ������� �� ������ �) � ��������3

����� ' ���� � '� ���� ����� ������� ���������� '���� ����� �:%