熊本大学学術リポジトリ

Kumamoto University Repository System

Title ADAMTS13に着目した急性心筋梗塞における病態生理、予

後と治療

Author(s) 松川, 将三

Citation

Issue date 2009-03-25

Type Thesis or Dissertation

URL http://hdl.handle.net/2298/15809

Right

学位論文

ＤＯＣ↑or，sThesisヨー

論文題名：ADADAMTS13に着目した急性心筋梗塞における

病態生理、予後と治療

Prognosis, and Treatment Aimed at ADAMTS13

in Patients with Acute Myocardial Inforction

Pathophysiology,ologY，

松川将三

Mosakazu Matsukawa

著者名●、

熊本大学大学院医学教育部博士課程

臨床医科学専攻循環器病態学小川久雄教授

指導教員名

●●

分子病理学担当教授氏名山本哲郎

代謝内科学担当教授氏名荒木栄一

分子遺伝学担当教授氏名尾池雄一

JU臆血管ﾀﾄ科学担当教授氏名川筋道雄

審査委員名

●●

凸

２００９年３月

▲

目次

1．要旨

2．発表論文リスト

3.謝辞

4.略語一覧

5.研究の背景と目的

Ａ､臨床研究

６－A・研究方法

７－Ａ結果

Ｂ基礎研究

６－日研究方法

７－日結果

8.考察

9．結語

10．参考文献

４５６

’

３

7-8

9-19

20-22

23-30

31-34

35-42

43-50

51

52-62

－２‐

1．要旨

|目的lvonWilleb｢ond因子（VWF）は血小板の粘着や凝集を介して、血小板血栓の

形成に重要な役割を担っていろ。急性冠症候群の患者では、発症早期の血漿ＶＷＦ

濃度の上昇が、その後の心血管イベントの発症率と有意に相関していることが

報告されていろ。近年、ＶＷＦを切断する酵素であるADAMTS13の存在が明らかに

なった。本研究の目的は、急性ｌｕ筋梗塞（AM|）患者のＶＷＦとADAMTS13の経時的

変動を測定し、その変動の予後に与える影響を検討し、更には予後改善が期待

できる薬剤について検討する。

|方法１９２名の急性'毬筋梗塞患者において、入院時、発症１日、３日、７日、１４

日後の血漿VWF、ADAMTS13の濃度を測定し、正常冠動脈の４０名の対照群と比較

した。またＡＭＩ患者に対して－年間の心血管イベントの有無とVWF、ADAMTS13

濃度の関係について検討した。更にADAMTS13が内皮細胞からも分泌されている

ことから、内皮保護作用を有する抗血小板薬であるシロスタゾールに着目して

実験を行った。ｌｎｖｉ↑｢０としてヒト膳帯静脈内皮細胞（HUVEC)、ｉｎｖｉｖｏとしてマウ

ス（C57BL/6J）にシロスタゾールを投与して、ADAMTS13の発現を確認した。

|結果ｌＡＭｌ群のＶＷＦは対照群と比ぺ入院時から有意に高値であり（p<0.01)、３

日目をピークに上昇し、その後漸減した。一方、ADAMTS13は対照群に比ぺ入院

時から有意に低値であり(p<0.0001)、３日目をピークに減少し、その後漸増した。

血栓形成傾向をより数値化するために求めたVWF/ADAMTS13ﾋﾋは、入院時から対

照群にヒヒし有意に高く、３日後をピークに上昇し、１４日目も対照群より高値であ

った。次にAMl患者の１年以内の'ご血管イベントについて検討した。COXヒヒ例ハ

ザード解析、Koplon-Meie｢解析において急性期にVWF、VWF/ADAMTS13が上昇するほ

ど、あるいはADAMTS13が減少するほど、血栓症の発症率を有意に上昇させた。

HUVECにシロスタゾールを投与することで有意にADAMTS13の発現は上昇し、マ

ウスにシロスタゾールを投与することでも有意に大動脈でのADAMTS13の発現を

冗進させた。更にシロスタゾールは低酸素に暴露して低下したHUVECでの

ADAMTS13の発現を上昇させ、マウスのＬＰＳ投与で低下した大動脈でのADAMTS13

の発現を有意に上昇させた。

|結論１ＡM1発症後早期のＶＷＦの上昇、ADAMTS13の低下は、その後の血栓症発症

の有効な予測因子になり、ADAMST13の補充療法やADAMTS13の分泌を促す薬剤が

血栓症を予防する可能性がある。その薬剤の一つとしてシロスタゾールが考え

られた。

･３．

Summory

【Bqckground】VonWilleb｢qndfqc↑0｢(VWF),ocofqclorinplotele↑qdhesionqndqggregq↑ionenhqnces

hqemostqsisond↑h｢ombosis､Recen↑|V’０ｍｅ↑qllop｢0↑eqse↑hq↑cleqvesVWFmultime｢shqsbeenidentified，

nqmelV,ＡＤＡＭＴＳ１３Ｔｈｅｏｉｍｏｆ↑hisｓ↑ｕｄｙｗｑｓ↑oinvestigq↑etherelq↑ionbe1weense｢iqlchQngesin

plqsmoVWFqndADAMTS13､ｑｎｄｔｈｅｐ｢ognosisofterqcutemyocq｢diqllnforction(AMI)．

【MelhodsqndResults】Wemeqsu｢edseriolchqngesofplqsmoVWFqndADAMTS13qntigenleveIsin

９２AM1potien1sond40con↑rolsubjects・VWFIevelswe｢esignificqn↑lyhigherinAM1pqtienlscompq｢eｄ

wi↑hcontr01s(p<0.01）０nqdmissionbpeokedlh｢eedoysqf↑e｢odmission,Ｑｎｄ｢emqinedelevq↑eｄｆｏｒ１４

dqys.|ncontrqst,onodmission,ADAMTS131eveIswe｢esignificontlylowerinAM1pq↑ien↑scompqredwith

CO､↑ｒｏｌｓ(p<０．０００１),wnhminimumqn↑igenlevelsreqchedqf↑erIhreedqys,ｑｎｄ｢emoinedlowe｢fo「１４

dqVsJherq↑ioofVWF/ADAMTS13qn↑igenlevelswqshighe｢inAMlpq↑ien↑scompqredwl↑ｈｃｏｎ↑｢01ｓ

throughout↑ｈｅ↑imecou｢se・Coxhqzqrdsqn0lysisreveqled↑hq↑↑ｈｅｅｏ｢|ｙinc｢eｏｓｅｏｆＶＷＦｑｎｄ

VWF/ADAMTS13｢qtiolevelsond↑heeqrlydecreqseofADAMTS131evelsweresignificqntp｢edic↑Oｒｓｏｆ

Murethr0mboticevenIsduringone-yeqrfollow-upperiod,KopIon-MeierqnqlYsisdemonstrqledthqI

po1ien↑swi↑hbo1hmojo｢dec｢eosesofADAMTS131evelsqndhighincreqsesofVWF/ADAMTS131evels

hqdsignificqn↑Ｉｙｇｒｅｑ↑erp｢obobili↑iesfordevelopment0f↑hrombo↑iceven↑ｓ（p二0.0104.ｐ=0.0209,

respectivelV)．

【ConclusiOn】Thesefindingssugges↑↑hqtmoni↑oringlhechongesofVWFqndADAMTS13qnngenlevels

in↑heeqrlyphqsemightbevqluqbIefo｢predic↑ingqndp｢eventlngthrombosisdu｢ingone-yeqrfollow-up

inpq1ienlswithAM1．

-4.

2．発表論文リスト

①関連論文

① Mo1sukqwqMKqikitqK,SoejimqK,FuchigqmiS,NqkomurqY,ＨｏｎｄｑＴ,Tsuji↑０Ｋ.Nogoyoshi

Y､KojimqS・Shimomu｢0Ｈ,SugiyomoS,Fujimot0K,YoshimurqMNqkqgqkiT,ogqwqH・

Ｓｅ｢iolchongesinvonWilIeb｢Ondfoclo｢-cleqvingp｢0↑eqse(ADAMTS13)qndprognosisofter

qcutemyocqrdiqlinfqrc↑iｏｎ

,zlmjCtzmｌｂｌ２００７;100:758-63.

②その他の論文

1.Kqiki↑ｑＫ,SoejlmoK,Ｍｏ↑sukqwqM､NqkqgqkiT,０gqwoH

ReducedvonWillebrqndfqc↑or-cleqvingproteqse(ADAMTSl3)ｑｃ↑Ｍ↑yinqcu↑emyocordiql

lnfQrction

j77ｳの､６ﾉｩbBmOsパ2006;4:2490-3.

２HondqT,ＫＱｉｋｉ１ｑＫ,Tsuji↑ＯＫ↑HqyqsqkiT､Mq1sukqwqlV1,FuchigqmiSSugiVomqS，

Sqkoshi↑ＯＮ,OgowoH,TqkeyolVI

Pioglltqzone・qper0xisomeprolife｢q↑or-qc↑ivqtedrecep↑Or-gqmmqqgonistqttenuotes

myocordiolischemiq-｢epe｢fusioniniuryinmicewithme↑obolicdisorde｢s・

山脇〕/６泊ﾘﾘﾉＣ物mmlZ2008;44:915-26.

3．FuchigqmiS,ＫｑｉｋｉｔｑＫ・SoejimqK,MqtsukqwqlVLHondqT,Tsuji↑ｑＫ,NqgqyoshiY,Kojimq

SNqkqgqkiT,SugiyqmqS,ＯｇｑｗｑＨ・

ChongesinplqsmqvonWlllebrondfoc↑Or-cleqvingp｢oteqse(ADAMTS13)|evelsinpq↑ien↑s

withunstqbleqnginq、

７７ｹの"１６（bsb2008;122:618-23.

4．Uemu｢ｑＴ,Kqiki↑0Ｋ,YqmqbeHSoejimqK,Ｍｑ↑sukqwqMFuchigqmiS,TqnqkqY､Morihisq

KEnomotoK,SumidqH,SugiVqmqS,ＯｇｑｗｑＨ・

ChongesinplosmovonWilleb｢ondfoc1orqndADAMTS131evelsqssociqtedwithleftqtriol

remodelinginot｢iolfibrillq↑ion、

７hｍ肋/fbsb2008Nov7・ｉｎｐ｢ess．

－５‐

３．謝辞

本研究は熊本大学大学院医学薬学研究部循環器病態学小川久雄教授の御指

導の下に行いました。研究において御指導頂きましたことを深く感謝致します。

本研究において直接御指導頂きました熊本大学大学院医学薬学研究部循環器

病態学海北幸一講師と、化学及血清療法研究所副島晃亭様に深甚なろ謝意

を表します。

また、本研究のサンプリングやデータ収集に御協力頂きました国立病院機構

熊本医療センターの藤本和輝先生、福岡徳洲会病院の下村英紀先生、仲村佳典

先生、熊本大学大学院医学薬学研究部循環器病態学の小島淳先生、永吉靖央先

生、大庭圭介先生に深く患謝致します。

基礎研究におきましては、熊本大学大学院医学薬学研究部循環器病態学の杉

村公一先生、野崎俊光先生に大変御世話になりました。深く患山正!悟先生、菅

謝致します。

･６．

-ムー

↓an

Sdl

６０１

１０１

9-11

1ＭＩＩ

０ﾖﾊnH

DoO-91AlH

」OＨ

８－」9」ｕ

ｌＯＨ

Ｄｌｌｌ/qlld9

qId9

HOdV9

O001-V9

IllA」

SHHJ

vsnヨ

ハＡＯ

ＯＳＭ

ｄ８０

ｘｄＯ

ＯＩＡｌＯ

ＢｌＡｌ－ＸＯ

ｄⅢｇ０

ＶＮＯｏ

ｄｌＡｌＶｏ

ｄＮ８

ｌⅢｇ

ｌＩＡ１Ｖ

ｄＯＶ

ｅＩＳ上lAlVOV

SOV

ヨ０Ｖ

eu1Uolll↓e山：

ep1｣DLlooDsAIododll：

Ｕ｣ⅡⅡ｣0601：

ｕ１ｅ↓0｣dod1lAⅡsuep-Mol：

９－uDlnel｣e↓ul：

Ｌｕo｣e｣｣e↓ul：

slleOlDllBV↓oPUeuleAlpO1l1q山nuDmnLl：

esD↓onpe」Ｖａ山Azuaoo1A｣､↓nl61ALHe山一ＣＯ!↓Dd8u；

」o↓0,」し|↓Mo｣６ｅ↓AoolDd8U：

o1sDq-｣o↓oDJLl↓Mo｣６↓sDIqo｣cilJup山､１１：

ｕ旧↓o｣dod1lA↓lSuep-Ll61Ll：

、Ⅲ/qllu18l0｣dooAl6：

qIu1e↓o｣dooAl6：

esDu860JpALlepe↓DLldsoUd-e-sepAueplD｣eoAl6：

B-u1olJe↓oLldW/u1o1u｣､↓u８９：

ｌｌｌＡ」0↓0,J：

｣BJsupJM6｣euBeouDuose｣eoueosa｣0,1｣:

ADssD↓ueqJosoun山Iu1pe)lu1l-eujAzu8：

」a4DAApell!↓SlP：

ep1xoJ1nslALl↓B山ｌｐ：

ｕ13↓0｣deA1IoDe｣－０：

esDuDl011dsoLld8ul↓､e｣０：

↓IDs山n1POsasolnllaolAIlle山AxOqJDo：

ａ山Azu90sIBlAl-3sDu1V3ul↓､e｣ｏ：

８↓DLIdsoudouo山eulsouDn601loAo：

plopo1elonuoqUAxoepA｣､↓ue山ald山００：

ｅ↓DudsoLldouo山au1sou8pDo1loAo：

epUdodo!↓e｣､!｣IDｕ(u1D｣日)９．A↓－８：

XePU1SSD山ＡＰＯｑ：

uO1↓o｣DJu1lDIP｣DoOAuja1noD：

ｅ↓DudsoLId1p-Beulsouap、：

し|↓llWesDe↓oJdollD↓e山ｐｕＤ．uID山ｏｐｅ》l1l-u!｣６０↓u1s1pD：

ｅ山o｣puAsA｣Duo｣0０８↓no、：

ｅ山Azua6uI↓｣aAuoo-u1sue↓o16uD：

Bl-J1↓o山’８．A↓u1puodsoq山o｣し|↓

鼈一躍寵.し

mRNA

NS

OR

PDE3

PDGF

PGl2

ROC

rpm

RT-PCR

STEMI

TNFa

TTP

Tyr

ULVWF

VEGF

VWF

VWF-CP

95％Ｃｌ

:messengerribonucleicqcid

:ｎｏ｢mqlsqline

:oddsroiio

:phosphodies↑erqse3

:ploiele↑-de｢ivedg｢owthfoc↑ｏｒ

:prostoglondinl2

:ReceiveOpe｢qhveCu｢ｖｅ

:「evo1uiionsperminute

:ReverseT｢qnsc｢iption-Po1ymerqseChoinReqc↑iｏｎ

:STelevq↑edmyocordiOlinfqrcnon

:iissuenecr0tizingfqc↑0「ｑlfq

:lhromboIic↑hr0mbocytopenicpurpu｢ｑ

:↑Vr0sine

:UnusuqllylqrgevonWilleb｢qndfoclor

:vqsculorendo↑heIiqlgr0wIhfoc↑or

:vonWilleb｢ondfoc↑ｏｒ

:vonWillebrqndfoc↑orcleqvingproieqse

:９５％confidenceinte｢vol

－８‐

5.研究の背景と目的

5-1．血栓形成の機序

血液は生命にとって不可欠なものである。上トのように閉鎖血管系をもつ生

物は血液が血管ﾀﾄﾍ失われるのを防ぐ強力な止血機構をもつ。止血は侵襲に対

する重要な生体防御反応の一つで、血管壁と血液成分（血小板、血液凝固因子、

線溶因子）の複雑な相互作用により血管障害部位で止血栓が形成されることに

よる。一方、止血栓は局所にとどまり際限なく全身の血管内に拡大するという

ことはない。つまり土管障害の起こった場所と時間のみ止血反応が起こるよう

に巧妙に調節されていろ。そして生理的状態では血液は血管内では凝固するこ

となく流動性を維持していろ。

血管壁が損傷したときに一番初めに起こるのは局所の一時的な血管収縮であ

る。これは血流を低下させ失血を抑えろ。同時に、流血中の血小板が露出した

血管壁の内皮下にあるコラーゲン線維にvonWillebrqnd因子（VWF)を介して粘着・

凝集して速やかに血小板血栓をつくり傷ロを塞ぐ。これを一次血栓という。血

小板血栓はすばやく出血を止めるのに役立つが脆い欠点がある。次に血液が組

織液と混じることにより組織因子の作用により血液凝固が起こり、トロンピン

が生成する。トロンピンは血小板を凝集させると共に血小板血栓を包むように

強力なフィブリン網を作り血栓を補強する。これを二次血栓と呼ぶ。一方、粘

着・凝集した血小板表面には血小板第３因子が発現して凝固反応の場を提供し

て凝固を促進する。すなわち、血小板と凝固反応はお互いに共同して止血を加

速する。止血のためにできた血栓は時間と共に血管壁が修復されろと、線溶に

より溶解除去されて、元の正常な血管壁に戻る（図｜)。

-９．

1m管壁の損傷

内皮下組織の璽出 組織因子の混入

iliiT竃血管収縮

Ｉ

ｍ轡壁の修復止血栓の除去(線溶）

図１．血栓形成の機序

5-2．急性心筋梗塞における冠動脈内血栓形成

急性ﾊu筋梗塞は冠動脈の急速な女流障害により引き起こされるが、その原因

は冠動脈血栓による急速閉塞によるものと認識されていろ。冠動脈造影で内腔

が狭いほど,ご筋梗塞が起こりやすいと長い間信じられてきたが、’ご筋梗塞症例

の発症前の冠動脈造影の検討から、責任病変の８０%は造影上の狭窄度が５０%未満

の軽度～中等度狭窄の病変であることが明らかとなった2.現在では、急性'ご筋

梗塞は冠動脈プラークの破綻を契機として（図２)、あるいはプラーク表層のび

らんや冠寧縮により冠動脈内腔に血栓が形成され、内腔が閉塞ないしは亜閉塞

をきたして発症すると理解されていろ。

‐１０‐

脂質プール

霧

一一 ＝＞ 一沙

プラーグの破綻 血栓閉塞線維性被擬 血栓

図２.プラーク破裂による冠動脈内血栓形成のメカニズム

脆弱化したプラークが破綻し内皮細胞が剥離、損傷す患ど、WVF、colldgBn、

fibr0neciin、virironectinなどの内皮下組織に存在する粘着蛋白質が血流に露出する。

血小板上にはぞれら粘着蛋白質に結合する種薄め膜蛋白受容体が存在している

た坊、次々に血小板が付着し、血小板が活性化されろ。特にＷＶＦは膜糖蛋白GiPlb

を介して相互作用することにより活性化さオL、GiPlbとGiPllb/|I1n両者との強固な結

合により損傷血管壁に固着し、血小板血栓を形成する３．

血小板港性化により血小板膜のリン脂質からアラキドン酸を経てトロンボキ

サンＡ２が生成され、血小板凝集、血管収縮が促進されろ。また血小板中の濃染

穎からADP、セロトニンを、ｑ１穎粒からPDGF、VWF、跣↑hromboglobulin、ｐｌｑ↑elB↑fﾛ｡↑Or

4、fibrinDgen、Plqsminogenqc↑ivqi0｢－１などを救出し、血小板を血管壁に集羨させると

ともに血管収縮、血管平滑筋細胞の選定と増殖を誘導するなど動脈硬化の進展

にも関与していろと考えられくいろ。

続いて血小板凝集塊を裏打ちするｆｉｂｒｉｎの形成が起こる凝固反慮が開始されろ。

内皮細胞障害に伴い、タト因系凝固反応のiniIiQiorである↑issuefqc↑0｢が発現し、↑issue

fQcior-Vllq因子複合体形成が血小板、ｆｕ管内皮細胞表面で起こり、カスケード反

応により最終的にpro↑hr0mbinが↑hrDmbinに変換されろ。この↑hrDmbinが血漿中の

fibrinogenを分解して不溶性のfib｢ｉｎに転換し、血小板凝集塊を補強するfibrin形成が

・１１．

生じろ。

5-3.ＶＷＦとADAMTS13

vonWilleb｢0,．因子（VWF)は、fpL液凝固第Ｖｌ１１因子（FV111)の安定化因子/キャリアー

として、ＦＶｌｌｌと複合体を形成しfEL中を循環しているほか、障害を受けたipL管壁か

露呈した内皮下組織への血小板粘着・凝集反応の際のコラーゲンとの橋渡しを

することで、血小板血栓の形成に重要な役割を担っていろ。ＶＷＦは血管内皮細胞

内では、通常の|o｢geマルチマーよりもさらに高分子量のUnusuollylqrgeVWFマルチ

マー（ULVWF)として存在することが知られているが、血流中へ放出されろと速や

かに部分的にｶﾛ水分解されて分子量500～20000k,０の不連続に分布するマルチマ

ーパターンを示すようになる4。そして、ＶＷＦの血小板粘着・凝集などの生物学

的活性は分子量に依存しており、マルチマーが高分子量であるほどその活性は

強い5-7（図３)。

Ｊ１子－

－

UnusunIIylor9emullim街

（ULVWF）三川川 ＋＋＋

Lﾛ噸mmlimer ＋＋

Imermedin1Emultimer ＋

smollmullimer ＋／－

健常人血漿内皮産生 血小板凝集能

図３.ＶＷＦのマルチマー像の模式図

－１２‐

1924年にMoschowllzによって報告された８，古典的５徴候（紬小血管障害性溶血

性貧血、血小板減少、発熱、精神神経症状、腎障害)を特徴とする血栓性血小板

減少性紫斑病（TTP)の病態は、ULVWFが血漿中に存在することによる可能性があ

ると１９８２年にMoqkeらによって報告されたが，、なぜ血漿中にULVWFが存在する

ようになるのか不明であった。ＴＴＰには先天性と後天性が知られているが、１９９８

年にＦｕｒｌ０ｎら'0、Tsqiら’'は、成人の後天性のＴＴＰの原因は、ULVWFを切断する酵

素（VWFcleovlngp｢oteose〈VWF-CP>)を中和する自己抗体が存在することによると報

告した。２００１年にSoejimqら’2を含めた複数の研究グループが同時にヒト血漿か

らのVWF-CP活性を有するタンパク質の精製に成功し’３'4、これがADAMTS13（０

disintegrin-likedomoin,ondmet0110p｢oteose,ｗｉｌｈ↑hr0mbospondintypelmotif-13）である（図４)。

Signal

Propeptide

Metallopmtease

Disiriegnn

ＴＳＲ１

Ｃysteine-nch

Spacer

ＴＳＲ２－８

１ｏ ＣＵＢ１－２Ｏ

○○○鰯鰯ﾛ図~－m￣￣鰯園ＩＩ

ＮＮ１

ＮＮＮＮＮＮ1４２７

Zn++-bindingmotifノ[

ＶＷＦ切断部位

図４.ADAMTS13の構造（TsqlHMExpertRevCordiovoscThe｢､２００６－部改変）

ADAMTS13はADAMTSファミリーに属する亜鉛型メタロプロテアーゼで'２１５．１６、

VWFのＴｙ｢1605-Me↑1606を特異的に切断する酵素である。ADAMTS13の血漿中濃度

は約１ﾉug/､Ｌであり１７，主な産生臓器は肝臓l215j6j8、その中でも肝星細胞との報

－１３‐

告がなされていたが'９．２０、Reve｢seTrqnscrip1ion-PolymeroseChoinReqcTlon(RT-PCR)を用い

た発現解析によれば、ADAMTS13mRNAは肝臓以ﾀﾄでも種々の臓器で検出されてお

り１５１８､最近では更に血小板2L22や血管内皮細胞2324での発現も報告されていろ。

フローチャンバーを用いたｆｌｏｗ下のｅｘｖｌｖｏの実験から、内皮細胞障害により

Welbel-Polqdebodyから放出されたULVWFは、このとき同時に放出されるＰ－セレク

チンと結合し、その内皮細胞上にアンカリングするとの報告がある２５．ｍ流中ア

ンカリングしたULVWFは、血管内のずり応力によりコンフォメーション変化を

生じ、露呈したＡ２ドメイン内のADAMTS13切断部位であるTyr1605-Metl606が、

ADAMTS13により速やかに加水分解されろと推察されている2６（図５)。

ULVWFとP-selecllnの発現

ずり応力によって固定され

引き延ばされたULVWFⅡ

？璽蔦零 一流一直書

－９ニーー

ご￣￣￣二一ｒ￣､１－-－型ｑｌ＝L争一-－－－－－凸一一学一二■－－－

ULVWFと接合したADAMTS13ロ■■

lll

､可

VWFの切断と放出lＶ ご灯船唇

７．｜藝

〆縦入

Ｙ,讓逢、 霊Ｔ

Ｅ国軍 舂為一壷一 一郎＝￣-１

。Ｉ

血流し

図５.ADAMTS13によるULVWF切断のメカニズム（DongJFBlood､２００２－部改変）

･１４－

5-4．急性心筋梗塞とVWF

5-4-1・血栓形成におけるＶＷＦの作用

血栓形成過程におけるＶＷＦの作用には、３つの重要なポイントがある。

一つ目は、高いずり応力下で起こる血小板の正常な粘着や凝集の際に、ＶＷＦ

が血小板と結合するという点である。血小板への結合はＶＷＦの活性化が必要で

あり、それはＶＷＦのＡ１領域が血小板表面上で血小板のGPlb-lX-V複合体に結合で

きるように構造変化することで起こる”28．この結合は非活性化の血小板でも起

こる２，.ＶＷＦは血管内皮細胞が何らかの影響で障害を受けて露出した内皮下組織

30、あるいはずり速度が1000/s以上となるような紬小動脈や動脈硬化病変に結合

することで活性化する３１。更には、VWFが血小板のＧＰｌｂに結合することで血小板

由来マイクロパーテイクルを放出するようで、これがその後更に血栓形成を助

長する32．

ＶＷＦと結合する次なる血小板の受容体であるGP11b/llIqは、血小板の活性無しに

はＶＷＦとは結合しない。このGPl1b/'''０は、例えばGPlb-lX-V複合体とＶＷＦが結合す

るなど、様々な刺激により血小板表面に顕在化してくる３３．GPl1b/'''０とＶＷＦの結

合は、内皮下組織への血小板の最終的な、不可逆的な結合に貢献していろと考

えられ、特に高いずり応力下では血小板凝集において主要な役割をしている34．

二つ目は、血漿ＶＷＦはいくつかのタイプのコラーゲンと結合するが、最も重

要なのは内皮下組織に存在するタイプ|Ｖである３５．コラーゲンと結合している

ＶＷＦは第Vlll凝固因子との親和性を低下させるため、結果的に放出された第Ｖｌｌｌ

因子は局所的にフィブリン塊を形成するのに寄与しているのかもしれない36．こ

のことはＡＣＳのときなど血管が損傷して内皮下組織が露出したときなどに、特

に重要なことと思われろ。

三つ目は、ＶＷＦが第Ｖ''1因子のキャリアプロテインとしてはたらき、フィブリ

・１５．

ン塊の形成を担っている点である。ＶＷＦが存在しなかったら、第Ｖ|||因子は活性

化プロテインＣやプロテインＳによってタンパク分解ざれ不活性化されるため、

その半減期は１０～２０倍短くなる３７．第V|||因子の欠乏が重度の血友病Ａを引き起

こすことを考えろと、第Ⅷ因子が臨床的にいかに重要かが認識できろ。Von

Willebrqnd病では第V|||因子は低下しており、このような患者では第Vll|因子の低下に

より、フィブリン塊や初期の血小板血栓の形成不全を認めろ。

5-4-2.ＡＣＳにおけるＶＷＦ

急性,ご筋梗塞は粥腫が破綻し、内皮下に存在する前凝固因子が露呈されるこ

とで発症する。ＶＷＦはこの過程に必須である。ＶＷＦは傷害を受けた血管の内皮下

組織への血小板の粘着に寄与し、血小板の凝集、更にはフィブリン塊の形成を

促進させる。また、ＡＭ|患者の血漿は対照群にﾋﾋべてＶＷＦが高値であるため、ず

り応力惹起血小板凝集が高度に冗進する３a31oAM|患者の新鮮な血栓を免疫染色

で評価したところＶＷＦが血栓内に多量に存在しており、ＶＷＦがＡＭ|発症時に深く

関与していることが分かる４０（図６)。

？■■■

勺…モ甲一・か

ﾊﾞｰを,･･聖,､圭一,,麹

図６．ＡM|冠動脈内血栓の免疫染色（Kqlkl↑ｑＫＪＴｈ｢ombHoemost2006）

いくつかの論文をまとめたデータによると、血漿ＶＷＦ濃度はAMlでは１９６±３９％

(､=877)と高値であり、続いて不安定狭'Ｕ症１５６±４１％（､=345)、安定狭ﾊL2症140±

－１６‐

30％(､=300)、そして正常群１１０±17％(､=394)であった４１.

血管病変を有する患者の血漿ＶＷＦ値とその後!､u筋梗塞を発症する率について

の関係はほぼ確立されていろ。ＥＣＡＴｓ↑udy（thelq｢geEuropeqnConce｢tedAc↑ionon

Thr0mbosisqndDisobilitiess↑udy)によると、ＶＷＦは狭'､U症患者のＭ|発症の独立した予測

因子になると報告していろ。VWFの値で５分位したとき、最高位群では冠危険因

子で補正した後でも最低位群に比べて１．８５の相対危険度があった42゜その他にも

同様の報告が多数されており、例えば心筋梗塞発症後１年以内に死亡した群の

VWFは生存群と比較して有意に高値であるとの報告や43,70歳未満の八u筋梗塞発

症患者のＶＷＦ値は再梗塞や死亡率と独立した相関を持っているとの報告もある

“

Ｏ

ＳＴ上昇型'ご筋梗塞（STEM|）における急性期のＶＷＦの経時変動は、入院時より

高値で、４８～７２時間でピークに達し、１４日で入院時と同じレベルに戻る４５。更

に急性冠症候群における急性期のＶＷＦの上昇は、短期予後の独立した危険因子

であることが報告されている４６~49゜例えばSTEMl患者の発症２４時間のVWF上昇値

は心不全の発症率だけでなく、３０日以内の致死率とも有意な相関を示した碑。

同様にESSENCE↑｢iol(↑heEfficqcyqndSofetVofSubctoneousEnoxopqrininNon-Q-WoveCoronqrV

Eventst｢iol）でも、不安定狭心症や非Ｑ波心筋梗塞では発症４８時間のＶＷＦの上昇

が､発症１４日あるいは３０日以内の'ご血管イベントの発症の独立した危険因子で

あることが報告されている46。

5-5．シロスタゾールの作用

シロスタゾール（Cilos↑OzoI）は血小板凝集・活性化抑制作用、血管拡張作用、

血管内皮細胞保護作用、血管平滑筋細胞増殖抑制作用、中性脂肪低下作用など、

多岐に渡る作用を有する抗ipL小板剤である。シロスタゾールは100～200mg/日の

・１７．

用量で、’慢性動脈閉塞症、脳梗塞（再発抑制）を適応疾患とする。

Ｈ

０、ｌ／

〆、Ｎ－Ｎ

〃

ＮへＮ ０

○／へ、／図７．シロスタゾールの化学構造式

シロスタゾールはcyclicnucleotidephosphodies↑erqse3(PDE3)選択的阻害作用をもち、

薬理作用の多くはPDE3活性阻害による細胞内cAMP濃度の上昇によるものである

5q５１.血小板などの血液細胞では細胞内cAMPが増加すると、細胞機能が抑制され

ろ。CAMP依存性蛋白リン酸化酵素を活性化させることがcAMPによる細胞機能抑

制に関連することが明らかにされているが、この段階以降の機構はまだ良く解

明されていない。血管内皮から産生されるプロスタサイクリン（PG12）などの物

質は、アデニルシクラーゼを活性化し、ｃＡＭＰ濃度を増力口することにより血小板

機能を抑制する。一方、ＰＤＥはcAMPを分解する酵素であり、細胞内cAMP濃度は

これら２つの酵素活性のバランスで調節されていろ。PDEにはＰＤＥ１からPDE11ま

でのアイソザイムが知られているが52、血小板にはPDE3A、ＰＤＥ５が主として存在

する。PDE3ＡはｃＡＭＰ分解酵素であるが、ＰＤＥ５はｃＡＭＰよりｃＧＭＰを主として分解

する酵素である。シロスタゾールはPDE3Ａを強力に阻害することにより、細胞内

cAMP濃度を増加させ、血小板機能を抑制する。血小板のみならず、血管平滑筋

に存在するPDE3A、脂肪細胞に存在するPDE3Bに対してもシロスタゾールは高い

親和性を示すため、血管においては拡張作用53、また血管平滑筋に対しては増殖

‐１８‐

抑制作用など54.55、血小板抑制作用以ﾀﾄに多様な作用を示す。

多様な作用の一つに血管内皮細胞保護作用がある。シロスタゾールは紬胞培

養条件下で各種刺激による血管内皮細胞死に対して保護作用を有していろ。ま

た高グルコース刺激、低酸素刺激によるヒト動脈由来内皮細胞死を抑制し、こ

れはシロスタゾールの肝細胞増殖因子（HGF）産生促進作用を介していろと考え

られている56.57。また、シロスタゾールはヒト臓帯静脈由来内皮細胞に対して

TNF-a産生抑制作用、アポトーシス抑制蛋白質Bcl-2の増ｶﾛ作用、アポトーシス

促進蛋白質Boxの減少作用、チトクロームＣ放出抑制作用を有し、リポポリサッ

カライド（LPS）刺激による内皮細胞のアポトーシスを抑制する58。

5-6.本研究の目的

臨床研究として、急性'ご筋梗塞患者における血漿ＶＷＦとADAMTS13濃度を経時

的に測定し、対照群と比較検討し、経時変動とその後発症する,ご血管イベント

について評価する。

ADAMTS13の分泌を促進させる薬剤についての報告は現時点で認めておらず、

また前述の如くシロスタゾールが血管内皮機能改善効果を有していることが報

告されていろ。このことから、基礎研究としてシロスタゾールが内皮細胞、特

に傷害された内皮細胞でのADAMTS13の発現への影響について検討した。

-１９．

A、臨床研究

6-A、方法

6-A-1．対象

対象患者は１３２名（男性９２名、女性４０名：平均年齢６５±１歳）で、内訳は

発症２４時間以内に入院となったAMl群連続９２名（男性６７名、女性２５名）と対

照群４０名（男性２５名、女性１５名）。AMlの診断は①３０分以上続く胸痛、②,辿

電図の１２誘導中連続する２誘導以上で0.2ｍＶ以上のＳＴ上昇を伴う、③CK-MBが

正常値の２倍以上の上昇、で確認した。対照群は冠動脈造影上50%以上の器質的

病変を認めず、冠箪縮誘発アセチルコリン負荷試験で冠動脈箪縮が誘発されな

かった患者で、ＡＭＩ群と年齢、性別を調整した群である。どの患者も登録時に血

栓塞栓症、膠原病、播種性血管内凝固症候群、肝不全、敗血症やその他炎症性

疾患を合併していないことを確認した。

6-A-2.冠動脈造影検査

ＡＭＩ群では全例に対して、発症２４時間以内に冠動脈造影検査および経皮的冠動

脈形成術を行った。AMl群でステント植え込み術を行った患者においては、亜急

性血栓閉塞の予防として、一ヶ月間のチクロピジン200mg/dqy内服をした。

対照群では、前述の如く全例に冠動脈造影を行った上で、５０%以上の器質的病

変が無く、冠寧縮誘発アセチルコリン負荷試験で冠寧縮が誘発されないことを

確認した59。

6-A-3.採血方法

ＡM1群では入院時（搬入後すぐ、ヘパリンやその他薬剤が投与される前)、入

院１日、３日、７日、１４日復の計５ポイントの採血を全例行った。対照群は、冠

－２０．

動脈造影時に静脈血より採血した。Ｏ５ｍｌのクエン酸ナトリウム溶液が入った採

血管に4.5,1の血液を採取し、すぐに3000｢p､、４℃、１０分間遠心分離を行い、得

られた血漿を測定するときまで-80℃で保存した。

6-A-4．血漿VWF濃度の測定

血漿VWF濃度は、市販のサンドイッチＥUSAキット（Asse｢qchr0mVWF;Roche）を

使用して測定した。

6-A=5.血漿ADAMTS13濃度の測定

fpL漿ADAMTS13濃度は、ADAMTSl3のポリクローナル抗体を使用しサンドイッチ

ELlSA法で測定した１７。

6-A-6.長期フオローアップ

ＡＭＩ群において、ＡＭＩ発症後一年間の予後調査を行った。調査項目は血栓症の

発症か緊急入院が此要なうっ血性'､u不全の発症であり、血栓症は`ｕ筋梗塞再発、

不安定狭一症、亜急性血栓閉塞、脳梗塞、虚土性心臓死と定義した

6-A-7.統計学的解析

血漿ＶＷＦとADAMTS13濃度は正規分布を示した。データは正規分布するものに

関しては平均±標準偏差、正規分布しないものに関しては中央値と四分偏差で

表記した｡AMl群と対照群の比較には一元配置分散分析、Ｘ二乗検定を用いたが、

中性脂肪、ＣＲＰの比較にマンホイットニーＵ検定を用いた。血栓症と関連した独

立因子を検討するために、ＣＯＸ比例ハザード解析を行った（独立変数：年齢、男

性、高血圧、糖尿病、現喫煙者、ＢＭＩ、家族歴、総コレステロール、ＨＤＬコレステ

･２１．

ロール、ＬＤＬコレステロール、Log中性脂肪、尿酸値、LogCRP､LogBNP､LogmqxCPK、

LogmqxCK-MB、Killip分類||以上、Ｆｏ｢｢ester分類''以上、前壁心筋梗塞、アスピリ

ンの内服、チクロピジンの内服、△ＶＷＦ【△＝発症３日目の値（dqy3）－入院時の

値（dqyO)】、AADAMTS13、△VWF/ADAMTS13)。また、Kqplqn-Meier生存解析を行った

（カットオフ値はReoeiveOpe｢qiveCurve<ROC>解析で決定した)。ｐ<0.05を統計学的

に有意差があるとした。

‐２２－

7-A、結果

7-A-1．患者背景

表１に示すように、年齢、性別、高血圧、糖尿病、ＢM1、総コレステロール、

HDLコレステロール、ＬＤＬコレステロール、尿酸値はAMl群と対照群で差を認め

なかった。現喫煙者、中性脂肪、ＣＲＰはAMI群で有意に高値であった。二群間で

の入院時の内服に差は認められなかった。AMl群では入院後標準的な内服治療が

施された。内訳は、アスピリン内服（97%)、チクロピジン（73%)、カルシウム拮

抗薬（42%)、硝酸薬（16%)、βプロツカー（21％)、アンギオテンシン変換酵素阻

害薬（48%)、アンギオテンシンⅡ受容体拮抗薬（47%)、HMG-Coo還元酵素阻害薬

（41％）であった。

患者十

AM1群（n=92） 対照群（n二40） ｐ値

年溌（識）

男性/女性

高血圧

糖尿病

喫煙

Bodymossindex(kg/m2）

総コレステロール（､9/dL）

HDLコレステロール(mg/dL）

LDLコレステロール(､g/此）

中性脂肪（､g/dL）

尿酸（､g/dU

CRP(､g/dL）

６５±１

６７/2５

５８(63%）

２２(2496）

４８(52%）

２３８±０．３

１９９±４

４５±１

１２２±３

１３３(98-178）

５．８±０１

０．１６(0.05-0.42）

６５±１

２５/1５

１９(48%）

９(23%）

１１（28%）

２３．９±０５

１８５±５

４９±１

１１３±４

９９(76-132）

５．６±0.2

0.05(002-0.14）

６

妬型肥闘皿夘叱旧叫的妃⑪

２

－２３‐

７－A-2．急性J越筋梗塞患者における血漿ＶＷＦとADAMTS13濃度の経時的変化

図８－１の如く血漿VWF濃度は、ＡＭＩ群では対照群に比してどの時相においても

有意に高値であった（p<0.01)。AMl群において、ＶＷＦ濃度は入院時と比べ発症３

日後に有意に上昇し（p<0.01)、その後徐々に減少したが、発症１４日後も対照群

と比ぺ依然有意に高値であった。

一方、血漿ADAMTSl3濃度は、AMl群では対照群に比してどの時相においても

有意に低値であった（p<0.0001)。AMl群において、ADAMTS13濃度は入院時とﾋﾋﾍﾟ

発症３日後に有意に減少し（p<0.01)、その後徐々に増加した（図8-2)。

。､栓形成傾向をより数値化するために、ＶＷＦとADAMTS13の比（VWF/ADAMTS13）

を求めて評価した（図8-3)。VWF/ADAMTS13は全時相で対照群に比してAMI群で

有意に高値であり（p<0.0001)､発症３日後に入院時と比ぺ有意に上昇し(p<0.01)、

その後徐々に低下した。

2６

2４ニミョ掴轤豈三懸目

2２

2ｐ

８６

１１

学1４

入院崎１３７

図8-1．血漿ＶＷＦの経時変動

１４

（日）

･２４．

1.0 工面（｜Ｅへ已幽鴨の一ｍ三苫く鶏旦

lAM,群(､二,2〕+鐡罵群(､=⑩0-9

土ｐ《0.0001Ｖ二対照群Ｔｐ《ＯＯＩｖ二人院時

OＢ

_L

IUｕフ

0６

0.5１－

１４

（日）入院時 ３ ７

Ｐ■ⅡⅡⅡ

図8-2．血漿ADAMTS13の経時変動

5.0

廿諏上蝋鐵職繍■鰍Ｔｌ,鯛ｆ蝋11<iii鰍;:j;ｌｌｌ:j1i鱗胤鱸

4J0

望鶯三雲

P￣｣1,6

－；。

3Ｄ

‐伊田博勺抄Ｎｗ代、隈桿厭山防即興娘吟出呪化院内咽・趾や比・叩・蛆１和・咀且田』へ。

『ｑｑｄ’四

ＪＺ６ｉＪＬＬｏ』｣

2， k7LYJﾛﾏ｡!■

Ⅱ

ＩｌＭｌ１

００

１

小

曰尹□７分口明曰叫日研・□■

ザ叩。、０ｍｍいく罵血Ａ

Ｖ可●、Ｄ叩●由勧

Ｃ・岱口Ｌ０ｒ研が４屯

‐いい■』

■■■■｜Ⅱ・１■咄卜

而扣Ⅱ少剛ロ・△乢酔叱可々、輕巴Ｑ■■

■２ＡⅢロロ伊心いふ

。。５５．心■

■Ａ

■■０日■■ｂＴ０

可ｒ牛Ⅱ呵扣▽閃町口珀‐‐関所泊旺』

■Ｊ●６』

‐Ｉ■ｒＵＯ

Ｒ■』５０凸ⅡⅢ▽毎

面■氾咄餌勺割ロ日『ｌ１Ｐ

ｋ－Ⅲ８Ｊ丁

日日守凸」

■■旱且刀枳Ｍ凸

好叩旧・湖・紐

。１■凸

Ⅱｕい●巾汀一川平二四ｍⅣ。

１㎡町ロ九■

帆珂馴庶罹晒Ｄロー酪

叩‐侃汁旺叩瓜ユ

ロ●

。彗洵け。四。幻

已■Ⅱ品如■■０Ｊ．凸

乎豚，』

一別ｒｈＱと

ＢＢＵ

．.▲･仏ロ▲▽■□

対照群入院時１３７１４（日）

±ｐ<OJOOO1va対照群ｆｐ<OJOIvs・入院時

図８－３VWF/ADAMTS13の経時変動

7-A-3．単変量、多変量ＣＯＸ比例ハザード解析

AMl群において、発症1年間のイベント発生について調査した。９２名中１３名

(14.1％）が血栓症を発症した。その内訳は、急性ﾊｭ筋梗塞再発症１名、不安定

－２５‐

狭,辿症５名、亜急性血栓閉塞４名、脳梗塞２名、虚血性'ご臓死１名であった。

また６名が'ご不全による再入院を要した。表２は血栓症、’ご不全による再入院、

あるいは両イベントを併せたものに対してCOX比例ハザード解析で評価した結

果である。，ご不全による再入院は、VWF、ADAMTS13、VWF/ADAMTS13に影響は受け

なかった。しかしながら、発症３日後のVWF、VWF/ADAMTS13が高いほど、有意

に血栓症を発症しやすいことが分かった（VWF：オッズ比1.46,95％Ｃｌ1.06-2.01,

p=0.019、VWF/ADAMTS13：オツズヒヒ1.41,95％Ｃ'1.14-1.75,ｐ=0.001)。更に、△VWF、

△VWF/ADAMTS13が高値であるほど、△ADAMTS13が低値であるほど、有意に血栓

症を発症しやすいことが分かった。。､栓症を発症した患者としなかった患者で

は内服による差は認めなかった。

表３で示すように、AVWF、△VWF/ADAMTSl3の高値、△AOAMTS13の低値は血

栓症発症の有効な予測因子であり、多変量解析では△VWF/ADAMTS13が血栓症発

症の一番の予測因子になることが分かった。

－２６．

表２ＡM1発症後１年間の鐘血管イベントについてのCOX比例ハザード解析

,ご不全＋血栓症

（n=17,18.4%）

，ど不全

(n二6,6.5%）

血栓症

(､=１３，１４１%）

0Ｒ(95％Ｃｌ）

ｐ値

ＯＲ(95％ＣＤ

ｐ値

0Ｍ95％Ｃ|）

ｐ値

VWF入院時 ０．９４(062-1.42）

0.79

1.13(086-1.48）

0.38

1.17(0.91-1.51）

0.20

０７２(0.26-202）

ｑ54

1.13(0.68-1.88）

0.61

1.23(080-1.87）

0.33

1．１１（063-1.96）

０．７０

１４６（106-2.01）

0.019

1.41（103-1.95）

0０３

ＶＷＦ３Ｂ目

ＡＶＷＦ（３日目一人暁時）

ADAMTS13入院時 0.47(0.07-303）

0.42

0.08(0.008-009）

0.04

0.12(0.006-233）

0.16

0.20(0.003-15.18）

046

０．１９(0.001-258）

0.51

3.36(0.006-1752）

0.70

１．９２(0.16-21.9）

0.59

０．０６(0002-212）

0.12

0001（0.0001-0.08）

0.002

ADAMTS１３３日目

AADAMTS13（３日目一入院時）

VVVF/ADAMTSl3入院時 0`９８(0.81-1.18）

0.87

1.20（1.03-1.40）

００１５

１．２１（104-140）

００１１

０９７(0.63-1.49）

ｑ９０

Ｍ６(0.87-1.54）

０２８

１．１７(0.89-1.53）

０．２５

0.92(0.68-1.26）

o63

L41（1.14-1.75）

0001

1.49（1.21-1.82）

qOOO1

VVVF/ADAMTS１３３日目

ＡＷＶＦ/ADAMTSl3

（３日目-入院時）

讃３血栓症発症群と非発症群のAM1発症後薬物治療

血栓症発症群

（n=13）

血栓症非発症群

（､=79） p値

１２(92%）

８(62%）

３(23%）

４(31%）

３（23%）

９(69%）

４(31%）

４(319,

アスピリン

チクロピジン

ｃｑ拮抗薬

硝酸薬

βプロッカー

ACE阻害薬

アンギオテンシンⅡ受容体拮抗薬

l-mIG-CoA還元酵衆阻害薬

７７(97%）

５９(759,

36(469,

11（１４%）

１６(20%）

３５(44%）

３９(4999

34(43%）

醜鋼Ⅲ旧引碑、羽

①●□ＤＣｃ■■

－２７‐

表４ＡM1発症後１年間の血栓症発症についてのＣＯＸ比例ハザード解析

単変量解析 多変量解析

ｐ値OＲ９５％Ｃｌｐ値95％ＣｌoＲ

1.05

0.83

1.45

0.48

2.66

0.93

0.56

０．９９

0.95

1.00

0.13

１．１６

０．７６

３．９３

２．２８

２．５８

０．６３

０．７１

Ｌ2５

３．３１

１．７０

1.41

0001

１．４９

0.99-1.10

0.25-2.71

0.48-4.33

0.15-1.49

0.82-8.66

０．７８－１．１１

０１５－２０４

0.98-1.00

0.89-1.00

0.98-1.01

0.09-2.16

0.80-1.68

031-1.86

0.84-18.40

0.51-10.16

0.66-10.05

0.17-2.31

023-2.11

041-3.86

042-25.56

0.55-5.22

1.03-1.95

00001-0.08

1.21-1.82

056

.76

.50

.20

.10

.44

.38

.55

.08

.99

.15

.41

.55

.08

.27

.17

,49

.53

.68

.25

.34

.03

.002

.0001

1.10年齢

,陸別（男‘住）

高血圧

糖尿病

喫煙

Bodymqssindex

冠動脈疾息の家族歴

総コレステロール

HDLコレステロール

LDLコレステロール

Log(中性脂肪）

尿酸

Log(CRP）

Log(BNP）

Log(mqxCPK）

Log(moxCK-MB）

Killip分類〉１

For｢es1er分類〉１

前壁の急性!ご筋梗塞

アスピリン内服

チクロピジン内服

△VWFdoy3-doyO

AADAMTS13dqy3-dqＹＯ

0.99-1.22 ０５７

0.71 0.09-5.41 ､7４

3.24

5.12

0.21-49.49

089-29.27

､39

.06

1.66 1.12-2.47 011△VWF/ADAMTS13doy3-dqYO

－２８‐

7-A-4Koplon-Meie｢生存解析

△VWF、△ADAMTS13、△VWF/ADAMTS13それぞれのカットオフ値をＲＯＣ解析で求

め、一年間の血栓症の発症の有無をKqplon-Meier生存解析で評価したところ、A

ADAMTS13が低い群（p=0.0104)、△VWF/ADAMTS13が高い群（p二0.0209）で有意に血

栓症を発症しやすいことが分かった（図９)。

【ＡＶＷＦｄｑｙ３－ｄｑｙＯ】

ＩＤＢ△

１００

一己鬘唖竺「薑

①竺口曰匡．・

●－

．、･･･････････････････…･･･････････････､＄■●●●●●、●□●●

P=0.3966

△ＶＷＦ《０．６２△ＶＷＦ》ｑ6２

■■■■■■■■■■■■

□■■■■■●●

Ｏ５０１００１５０２００２５０３００３５０４００（日）

【AADAMTS13dqy3-dqyO】１

０８６

１００

・饅舅隻「薑

のこ□召員。

｣＝0，１０４

△ADAMTS13《－ｑｌｌ△ADAMTS13》-0.11

■■■■■■■■■■■■■

■■■●■●、■0

Ｏ５０１００１５０２００２５０３００３５０４００（日）

【△VWF/ADAMTS13duy3-dpyO】

；１００

…薑‐薑

①筐ロヨ旨。

●●●

●●●■●●●●■

●●■□●■□●□●■■■■■□■□●■■●■■●●□■□●い■

Ｏ●●■■■■■●●□●

P=0.0209

ＡＶＷＦ/ADAMTS13《１J37AVWF/ADAMTS13》1３７

■■■■■■■■■■■■

●●●■●●□●

Ｏ５０１００１５０２００２５０３００３５０４００（日）

図９.Koplqn-Meie｢生存解析

-２９．

7-A-5．△VWF、AADAMTS13と発症１ヶ月後の駆虫率との関係

△VWF、△ADAMTS13と発症１ヶ月後の駆出率との関係について調べた。△ＶＷＦ

と駆虫率には相関は認めなかったものの、AADAMTS13が低いほど、言い換えれ

ば発症３日間でよりADAMTS13が減少するほど、発症1ヶ月復の駆出率が低下す

る傾向にあった（図９)。

４２０２４６１

０００００

一一一

（窟墾樋‐韓ロ②）、一望窒夷豆

●（窟謹樋‐軽口己

４】」

２０２

一

ロー【)］7６

叫豈夢口

-４、＝ＵＯ３Ｃ

５０６０７０８０９０三

ヶ月機の駆出率0，口

３０４０

発症１

2０ ２０３０４０５０６０７０８０９０

発症１ヶ月復の駆出率CＤ

図１０．△VWF、△ADAMTS13と駆出率

－３０‐

B，基礎研究

6-日方法

6-B-1．培穣細胞

ヒト脇帯静脈内皮細胞（HUVEC）は三光純薬株式会社から購入した。６wellｄｉｓｈ

にHUVECを２%Fet01bovineserum、VEGF、hFGF-B、インスリン様成長因子、アスコル

ビン酸、ヘパリン、ｈEGF、ハイドロコルチゾン、GA-1000を含んだメディウム

（EGM-2：三光純薬株式会社）に標準培養条件下で培養した。confluen↑になった時

点で実験を開始した。

6-B-2．シロスタゾールによる刺激と低酸素の影響

終濃度が１０ⅨＭとなるようにdime↑hylsulfoxide（､MSO）で溶解したシロスタゾー

ルを、confluen↑まで塔議したHUVECに投与した。コントロールとして０．１％の、MSO

を投与した。シロスタゾールを投与して２４時間培養後、継続して標準培養条件

下の群と、低酸素条件下（０２=1%、CO2=5%）の群に振り分けて更に１２時間培養し

た。低酸素に十分暴露できたかどうかは、血管内皮増殖因子（vosculo｢endo1helioI

groMhfoc↑0｢:VEGF)の発現の上昇で確認した60．シロスタゾールの投与量は１’Ｍ、

１０似Ｍ、３０川と濃度分配をして、また低酸素の暴露時間は６，１２，２４，４８時間

と↑imecourseをとって、一番適した濃度、時間を採用した。

6-B-3．シロスタゾール投与モデルによるマウスの検討

Ｗｉｌｄtypeマウスとして頻用されているC57BU6J（日本クレア：３，８週齢）を

使用した。経ロ的に胃内に胃管ゾンデを使って0.5％cqrboxVme1hylcellulosesodiuｍｓｏｌｔ

-３１．

（CMC）で溶解したシロスタゾールを２０mg/Kｇで投与し、更にその２４時間後に再

度同量投与した。その４時間後にペントパルビタールで麻酔下に肝臓と大動脈

を摘出した。対照群としてＣＭＣのみを投与したC57BL/6Ｊを使用した。採血はシ

ロスタゾール、ＣＭＣ投与前と、肝臓、大動脈摘出前の２回行った。ペントパル

ビタールで麻酔後、ヘパリンコーティングした毛細管（DrummondScientificCompqnV：

Cqllbrq↑edPipe↑Hepq｢inized）で眼窩静脈叢から全血50川採取し、エッペンチューブ

に移した後、速やかに遠'ご分離（４度、3000rpm、１０分間）をして、血漿のみを

採取し、測定までの間-80度で保存した。

6-B-4.HUVEC、C57BL/6ＪマウスにおけるＬＰＳ投与モデル

ヒトやマウスにlipopolysocchqride（LPS）を投与した実験では6162、ＬＰＳ投与２時間

後に土中のADAMTSl3活性の低下を認めていろ。マウスのLPS投与モデルでは、

肝臓でのADAMTS13の発現低下に伴う血中の活性低下であると報告している62。

そこでHUVECやC57BL/6ＪマウスにＬＰＳを投与した際のADAMTS13の発現を確認す

ると同時に、その際にシロスタゾールを投与することによる効果を確認した。

６－B-1のHUVECを使用した。脱イオン水（､Ｗ）に溶解したＬＰＳを、終濃度が

100,9/m１，Ｍg/､l、１０此g/､lとなるようにHUVECに投与して、４８時間後にHUVEC

の↑o↑qlRNAを抽出した。

また、C57BL/6Ｊマウスに６－B-3と同様に２日間シロスタゾールを投与し、２日

目投与４時間後に生理食塩水（NS）に溶解したＬＰＳを２５mg/Kgで静注した。その

２時間後に肝臓、大動脈を摘出して、↑0↑qlRNAを抽出した。対照群は同量のＮＳを

投与した群とした。６－B-3と同様にシロスタゾール、ＣＭＣ投与前と、肝臓、大動

脈摘出前の２回採血を行い、測定までの間血漿は-80度で保存した。

－３２‐

6-B-5．定量的リアルタイムRT-PCR解析

６－B-2のHUVEC4群と6-B-3のマウスからの肝臓と大動脈のtotolRNAはRNAeqsVmini

kit(QicIgenBulimbqGe｢mqny)を用いて抽出した。これらto↑qlRNAを汲光度計でRNAの量

を測定後、Quqntitec↑ReverseTrqnscriplionKi1(Qiogen)を使用してcDNAを合成した.リア

ルタイムRT-PCRでは、Assqys-0n-DemqndGeneExpressionProduc↑s(AppliedBiosys↑ems,FOS↑er

CiⅣ,ＣＡ)として市販されているToqMonpr0beをそれぞれ使用し、TqqMqnUniversq1Mqster

Mxkit(AppliedBiosystems)を用いてＡＢ１Ｐ｢ism7900sequencede↑ectionsVstem(AppliedBiosVs1ems）

で検出した。各プライマーのコードは以下の通り：ヒトＶＷＦ（HsOO169795)、ヒト

ADAMTS13(HsO1009828)、ヒトβ－０ｃｔin(Hs99999903)、ヒトＶEGF(HsOO900058)、マウス

VWF（MmOO550376)、マウスADAMTS13（MmO1218030)、マウスGAPDH（Mm99999915）

6-B-6．血漿ADAMTS13活性、VWF濃度の測定

６－B-46-B-5で得られた血漿でADAMTSl3活性、VWF濃度の測定を行った。

ペントパルビタールで麻酔のみをしたC57BL/6Jから6-B-3と同様の方法で血漿

を採取した。血漿は同様の方法で5匹から得て、混成してstqndq｢｡として使用した

。Ｏ～６仏|の血漿を、Reqc↑ionBuffe「（5mMBis-Tris、２５mMCqC'2,0.005％Tween-20：ｐＨ6.0

）に混ぜ、そこにADAMTS13の特異的基質で、切断部位周囲に蛍光基（

2-(N-methylqmino)benzoyl,Nmq）と消光基（24-dini↑｢ophenVlPnp）を導入した消光性蛍光

基質FRETS-VWF73（図１１）加え、マイクロプレートリーダー（CORONA：MTP-800

、Exci↑qtion365nm、Emission450nm、３７℃）で5分毎60分間経時的に蛍光度を検出し、

スタンダード曲線を作製した。実際に測定する検体は、Reqc↑ionBufferに血漿４似Ｍ

とFRETS-VWF73を混成して測定した。

－３３‐

園l1LFRETS-VWF73

血漿VWF濃度は、vonWillebrqndFqclorEUSAki1（ASSERACHROM）を使用して、サン

ドウィッチELlSA法で測定した。

6-B-7．統計解析

統計解析はSiqI-View-Vソフトウエア（SASlns↑i↑u↑e）を用いて行った。データは

すべて平均値±標準偏差で表記した。２群間の差については対応のない↑検定

で比較した。

･３４．

7-B･結果

7-B-1.HUVECにおけるシロスタゾール（１０匹Ｍ）投与後の

VWF、ADAMTS13の発現（経時変動）

まず、HUVECにシロスタゾールを投与して、ＶＷＦとADAMTS13の発現を「eol-hme

RT-PCRを用いて経時的に測定した（図１２)。シロスタゾール投与１日目からVWF、

ADAMTS13共に有意に発現は上昇しており、４日後､７日後の変化は認めなかった。

同じ内皮細胞から尚血栓作用を有するＶＷＦと、抗血栓作用を有するADAMTS13が

同時に発現してくるため、臨床試験時と同様にＶＷＦとADAMTS13のヒヒをとること

で血栓形成傾向を調べたところ、ヒヒでは有意な差は認めなかった。

ｐ=UDD6

Uｐ=0.01Ｔ

ｌ=HUzp=umlFO83

ｐ=ODUnl

n戸ＵＵｌ５

ｐ=ｕ６５

Ｄ=U8０

p=u９０１戸

｜’

Ｉ

p=duD20pEu”Ⅱp=咽 u団

脾Ⅲ頤０

画巴三江〔豆へ」菫ン

p=U82I

-iili

『、

□０

２Ｉ

的百二昌筵二崖已」菫夛

ⅢⅢ

０

２畏皇昌江三匹Ｅ向’四戸こくロニ

，１「，｜ロ11

￣Ｆ「１ ｌ－Ｌｌ

］，，Ⅱ

田ｎＳＯＩｐＢ４Ｈ目７回目ｍｄＳＯＩＥ目４日目７口目 田ＨＳＯｌＨＢ４Ｈ目７回目

図１２シロスタゾール投与後の経時変動でみた、ＶＷＦとADAMTS13の発現

-３５．

7-B-2HUVECにおけるシロスタゾール投与濃度による

VWF、ADAMTS13の発現の変動

シロスタゾールの投与量を濃度分配してＶＷＦとADAMTS13の発現を調べたとこ

ろ（図１３)、ｌＯｌｕＭでVWF、ADAMTS13の発現は有意に上昇したが、そのﾋﾋで確認

すると有意差は認めなかった。

ﾛｰＵＤ６ｐ=UOD副ﾛﾌﾟ

ﾛ■ＵＩ４ｐ=ＵＤ３ＦＯＢ７ｐ=０－００３

１

Ｆ02ワｐ=ＵＤＩワｐ=053ｐ=ＵＺ４ｐ－Ｕヨワｐ=Ｕ、

’’百戸Nl

l＝１＝-１

５０戸Ｉ｜＝！

’「’Ｉ

ｌ１Ｉ１１１

、０

ｍ

３苗一江至已両一巴二昌江

戸戸戸１|曰

岡一巴三ごロミ」菫夛

皿晒０

黒ニニベニ崖已」菫ン

ｈI

Iu5

|Ｉ

ＤＭＧＤＩｊＥＭＩＯｊ[MＵＤｊｕＭ UlImHli１，回■３０浬■ 似凹 IOj[MUOjfMUXT.ＨⅡ 似■

シロスタゾールの濃度分配でみた、ＶＷＦとADAMTS13の発現の変動図'１３

－３６‐

7-B-3HUVECにおける低酸素暴露後のVWF、ADAMTS13の発現と、

シロスタゾールの影響

まずHUVECを低酸素（02=1％、CO2=5%）に暴露させ、経時的にＶＷＦとADAMTS13

の発現を確認した（図１４)。低酸素に十分暴露できているかどうかはＶＥＧＦの発

現で確認したが、暴露６時間から有意に発現の上昇を認めた（p=０．０１７)。ＶＷＦは

暴露１２時間後、ADAMTS13は２４時間後から有意な上昇を認め（共にｐ<０．０００１）、

共に以後漸増した。そのﾋヒ（VWF/ADAMTS13）で確認すると、１２時間後のみが有

意に高値であった（p=０．０２)。

ｐ=O-67

p=O-51P=０８３ｐ=O-OO3p<00001１「Ⅱ1－

ｐ<00001 ｐ<OOOOl

p=Ｏ３０ ｐ<００００１￣￣￣￣

Ｔ

’5-0

０００００

４３２１

暁一坐夛②一江二』Ｅ韓一や」二江□鉦

０００００

４３２１

竺色夛⑩｜迂三崔皀」三コ

１ｉ

ＴＴ

｢］［］［]

Ｔ

､|「NormoDoq６ＨｒｌＺＨ「Ｚ４Ｈｒ４８H「 Normom６H「１２H「２４H「４８Hｒ

Hypoxlq HYpqdq

p＝0-02p＝００００１

ｐ=Ｏ６９ｐ＝O-OO4p＝Ｏ｣Ｏｐ=O５２ＵＩＩＩＩＩ2.0

p=ＯＤ１７ｐ=ＯＯ１６ｐ=018,<００００１可「ｉ「Ⅱ

250

’ １

｜」

０

砕一⑫』言亟ロベヘ」二コ

０００００

０５０５

２１－

竺由尹色一江三竺皀｜」ご］ン

１１￣１「

,ｒ１ｒｌ｡

‘

Normoxlo６Ｈｒｌ２Ｈｒ２４HＴ４８H「 Normcooq６Ｈ「１２H｢２４Ｈ「４８Ｈ「

HypoDdo Hypoodq

図１４.HUVECにおける低酸素暴露後のVWF、ADAMTS13の発現（経時変動）

－３７‐

そこでシロスタゾール１０/ｕＭを投与し（対象群としてＤMSOを投与）２４時間経

過させた後に、低酸素に１２時間暴露させ､ＶＷＦとADAMTS13の発現を確認した（図

１５)。その結果ＶＷＦの低酸素暴露下での発現は、シロスタゾール投与の有無に影

響は受けず（p=0.28)、ADAMTS13はシロスタゾールを投与しておくことで、有意

にその発現の低下を抑えることができた（p=0.006)。またVWF/ADAMTS13の比で

確認すると、、MSOでは低酸素により有意に上昇するが（p<0.0001）、シロスタゾ

ールが投与されていろとその比は有意に低下した（p二０００４)。

ｐ＝００００１ｐ=O２８－１ｌ p＝０１６

「’

５０

５０

０

蜆一色シ坐一江三筐Ｅ」ニン

、＝0006

５０５０

１１０

⑭一色シ色一豆三匹Ｅ③一⑫檮二江邑迂

ＴＴ

１

｜「'？

NormoD(lqHypoDdqHYpoDm

DMSODMSOCilosmｏｌｌＯ仏Ｍ

ｐ〈00001１ｐ＝０００４

１

Normqoq

DMSO

HypcmqHypcDdo

DMSOCiIosIにoｌｌＯＨＭ

ｐ〈００００１

ｐ〈0.00016０

Ｉ

００

２

おーい』三藏色辻へ」三コ

I００００００

５４ｑ〕２１

竺坐ア①一江二笙一』」□］動

Ｌ'

：ⅢⅡ

Ｔ

｢１0

NC｢ｍｏ００ｏ

ＤＭＳＯ

HYpoxio HypcDdq

DMSOCilosI皿０１１０四Ｍ

HVpo）m Hypoxio

DMSOCilosI正oＩＩＯＵＭ

Normo)Oｑ

ＤＭＳＯ

図１５.HUVECにおける低酸素暴露１２時間後のVWF、ADAMTS13の発現

（シロスタゾール前投与の有無による違い）

－３８‐

7-B-4．マウスにおけるシロスタゾールの影響

C57BL/6Ｊマウスにシロスタゾールを投与して、肝臓と大動脈のVWF、ADAMTS13

の発現を調べた。肝臓ではシロスタゾール投与の有無で共に発現に差は認めな

いものの（それぞれｐ=０２１，ｐ=0.51）、大動脈においては有意にADAMTS13の発現

の上昇を認めた(p=0.018)（図１６)。しかしVWF(p=0.39)､VWF/ADAMTS13の比(p=026）

では有意な差は認めなかった。

【肝臓】p=051 p＝0８１

p＝0２１

０５０←。０

２１１０

出一色尹②－ごｚ』Ｅ屏一吟』ニベロベ』①シ』］

１

５０５０

１１０

⑪｜⑭』重く邑杠｛」二コ』④シ』］

０Ｆ。

０

０

醍一坐ァ②一二三』Ｅ」ニン』出シ｜】

１

’

「１Cilost皿01

20ｍｇ/K９

Cilosf皿01

20mg/K９

CiIOsIm01

20mg/KﾛＣＭＣCＭＣ ClJllC

【大動脈】

０００００

４３２１

串一色シ色一江室』こ」鉤一⑬岸雪江色亟ローちく

ｐ＝０．０１８

１［

p=０２６ｐ＝０３９１１ ■■■■■■５

０Ｆ○

０

０

韓一⑫』こく色迂へ」ニンロー』●江

Ｐｏ

ｎ）

Ｆロ

ｏ

ｎ〉

出一色シ色一江ｚ｝一二’二コご←』Ｃく

'１１’

］

Ｈ１

Cilosf正01

20mg/Kロ

Cilosl□zol

20mg/K９

CiloslmoI

20mg/KロCＭＣ ＣＭＣＣｌIWC

図１６．マウスのシロスタゾール投与モデルにおける、

肝臓、大動脈のVWF、ADAMTS13の発現

-３９．

同マウス群における土中のＶＷＦ濃度、ADAMTS13活性を求めた（図１７)。ＣＭＣ

投与群とシロスタゾール投与群ではＶＷＦ濃度、ADAMTS13活性、更には

VWF/ADAMTS13ヒヒに有意差は認めなかった。

､＝０７５p=056

加帥㈹０

１

（醇）尋龍吟一匡二菖べ蕪旦

p＝062－Ａ

家１６０－〆

1６

’ ２８４０

Ⅱ００

韓一吟』三虹色鉦へ」ニン

-';「;

恥印知０

１醤鴻」三コ悪日「

CiIosImDl

20mq/Kロ

CilosImol

20mq/Kロ

CIIOs1垣０１

２０mg/K９CＭＣＣｌＥｌＣＣＭＣ

図１７．マウスのシロスタゾール投与モデルにおける、

血漿ＶＷＦ濃度とADAMTS13活性

次にＣＭＣあるいはシロスタゾールを２日間投与した後にＬＰＳを静注し、肝臓

と大動脈のＶＷＦとADAMTS13の発現を調べた（図１８)。肝臓ではVWF、ADAMTS13

の発現、その比はそれぞれ有意差を認めなかったが（それぞれｐ二0.86,ｐ=0.46,

p=0.40)、大動脈ではＬＰＳを投与することでADAMTS13の発現が有意に低下し

（p=０．０１２)、そこにシロスタゾールが投与されていることでその低下を有意に抑

えることができた（p=０．０２)。またＬＰＳを投与することでVWF/ADAMTS13は有意に

上昇し（p=０．０１３)、シロスタゾールを投与することでそのﾋﾋの上昇を有意に才FPえ

ることができた（p=０．００６)。

－４０‐

【肝臓】ｐ=0.17ｐ二0.86￣「 p＝０．７５ｐ＝０．４６ ｐ声0.39ｐ=Ｏ４０

Ｉｌｉｌ５０

Ｆ０

０

０

竺小裏四一ベニ竺巨］（〉｜⑭』重く』ご己亡Ｃく

lｉｌ１ ５

０５

０

０

句｜嬢Ｐこく邑迂へ」ニンロ｜』○豆

０５

０

０

鵠一型。＄｜迂三竺一』｜」ニンヨ｜』Ｃく

|r， 』i」ＣＭＣＣＭＣＣｉＩｏｓＩⅢoｌ

ＮＳＬＰＳＬＰＳ

ＣＭＣ

ＮＳ

ＣＭＣ

LPS

CilosI皿ＯＩ

ＬPＳ

ＣＭＣ

ＮＳ

ＣＭＣＣｉＩｏｓＩｍｏｌ

ＬＰＳＬＰＳ

【大動脈〉p=0.013ｐ=０００６p=0.0 ２ ｐ二0.02

１

ｐ=Ｏ９６ｐ=０２１m

戸。

、〕

Ｐ。

（Ｕ

（Ｕ

齢一色シ②｜江三』一二」二コ□一法）ぐ

０５

０

０

二（二四一『二』Ｅ伶一②桴ニベロベロＥＣく

'11

５０５０

１１０

⑭一牢岸ニベロ江へ」ニンロ←こぐ

■■■■■■■■■■■

Ｔ

｜］ＣＭＣ

ＮＳ

ＣＭＣＣｉｌｏｓｍｏＩ

ＬＰＳＬＰＳ

ＣＭＣ

ＮＳ

CMCCiIos正oＩ

ＬＰＳＬＰＳ

ＣＭＣＣｉｌがfｍ０１

ＬＰＳＬＰＳ

ＣＭＣ

ＮＳ

図１８．マウスＬＰＳ投与モデルにおける、肝臓、大動脈のVWF、ADAMTS13の発現

同マウス群における血中のＶＷＦ濃度､ADAMTS13活性を調べた（図１９)｡ADAMTS13

活性はＬＰＳ投与で有意差は認めなかったが（p=0.79)、ＶＷＦ濃度、VWF/ADAMTS13

ﾋﾋはＬＰＳ投与により有意に上昇し（それぞれｐ=0.04、ｐ=0.017)、シロスタゾール

を投与しておくことでその上昇を有意に抑えることができた（それぞれｐ=0.03,

0.02)。

p=０．４２ｐ=0.79ｐ＝０．０４ｐ＝0.03Ⅱ

p=ＯＯ１７ｐ=０．０２

００

２８

側０

（夢）挙籍的一筐三景藍］巴

￣￣2.0 －｜￣

墨'６０－〆

６２８４０

１１００

℃一中‐［重迂邑亟へ」三卦

|’ １

印加㈹０

－蟹贈」ニン蕪目

ＣＭＣ

ＮＳ

CMCCilosI血o１

ＬＰＳＬＰＳ

CMCCilosImol

LPSLPS

ＣＭＣ

ＮＳ

CMCCiIoslⅢoｌ

ＬＰＳＬＰＳ

ＣＭＣ

ＮＳ

マウスＬＰＳ投与モデルにおける、血漿ＶＷＦ濃度とADAMTS13活性図'１９

－４m‐

7-B-5.HUVECにおけるＬＰＳの影響

HUVECにＬＰＳを投与して、ＶＷＦとADAMTS13の発現を調べた（図２０)。その結果

LPS濃度依存性にADAMTS13の発現は有意に上昇し、逆にＶＷＦの発現は低下した。

LPS濃度が高いほど、VWF/ADAMTS13は有意に低下した。

ｐ=Ｏｍ５

ｐ=004ｐ宮002￣戸

ｐ＝００１６p=ＯＯ４－ｌ

２１１０

嵯芭シ苫一ペエ崖臣』三⑭。｜壺亟（｜く

０５０５０

p=00002

１１

’

０５

０

０

エ②シ②｜迂二生Ｅ’’二コ

Ⅱ'１’

０５

０

０

記｜吟」こくここ（」ニン

p=ODO5

1illl

1１

nＷ OCTⅥ/ＩＴｌ１２ｇ/､１１０口ロ/nｌ DW10d1O/mll2O/､１１０叩/1ｍDWlOOnD/､１１皿ロ/ＩＴ１１０ｍｇ/､Ｉ

ＬＰＳＬＰＳＬＰＳ

図２０.ＨＵＶＥＣｌこおけるＬＰＳ投与濃度による、VWF、ADAMTS13発現の変動

この結果はinvitroにおける結果（図１８）とは全く正反対の結果であり、ｉｎｖｌ↑ｒｏ

におけるＬＰＳ投与によるADAMTS13の低下は、ＬＰＳそのものの作用によるものでは

なく、ＬＰＳ投与により発生したサイトカインや酸化ストレスなど、二次的な関与

が疑われたが、そのような状況下においても、シロスタゾールの投与はADAMTS13

の発現を増ｶﾛさせる可能性がある。

･４２－

８．考察

ＡＭ|患者における、発症早期の血漿ＶＷＦとADAMTS13の経時的変動を評価し、

その後発症する'ご血管イベントについて検討した。

今回の調査で、AMl群では対照群と比較してＶＷＦが入院時から有意に高値で

あり、３日後をピークに増カロし、その後徐々に減少するも１４日後も依然高値で

あった。逆にADAMTSl3はＡＭＩ群では入院時から有意に低値であり、３日後をピ

ークに減少し、その後増ｶﾛするも１４日後もなお有意に低値であった。ＶＷＦは内

皮細胞のWeibeI-PqlqdebodyにULVWFという形で貯蔵されており、ＡＭＩ時にはトロン

ピン、ヒスタミン、アドレナリンや低酸素など様々な刺激によりＶＷＦの放出が

促進される結果63-65、血漿のＶＷＦ濃度が上昇すると考えられていろ。しかし

ADAMTSl3がAMlで減少する原因は不明である。

考えられるメカニズムの一つとしてはAOAMTS13が消費されたことにより減

少した可能性がある。以前我々は、ＡＭＩ患者の冠動脈吸引血栓を免疫染色したこ

とがあり、その結果血栓内のＶＷＦとADAMTS13の分布がほぼ一致していた4０（図

6)。このことから、ＶＷＦにADAMTS13が作用するときに、血栓内に一緒に取り込

まれ、その結果ADAMTS13が減少した可能性がある。

血栓形成あるいは血栓溶解に関わるメディエーターによりADAMTS13がタン

パク分解される可能性もある。トロンビンはAMlの急性期に有意に上昇すること

は報告されているが66、ヒト血漿内で、トロンビンやブラスミンはADAMTSl3を

非活性化させることが指摘されている67゜しかし、入院後に全患者が未分画へパ

リンの持続静注を受けているため、トロンビンは高度に不活性化されていろと

考えられ、ADAMTS13の低下はトロンビンによるものとは考えにくいのかもしれ

ない。また今回の結果では発症１４日間経過しても対照群に比べて依然ＶＷＦは高

値でADAMTS13は低値であったが、この原因についても説明できる根拠の一つに

インターロイキン６（|L-6）の存在が考えられろ。ｌＬ－６は'ご筋梗塞発症後も数週

間高値を持続することが報告されており68-70、また血流下において’し－６は

ADAMTS13の活性を押えるからである７１。

－４３‐

また、今回の基礎実験の結果を踏まえろと、AM1時に何らかの影響で内皮機

能の低下が起こり、ADAMTS13の発現が低下した結果、土中のADAMTS13濃度が低

下した可能性も考えられろ。ADAMTS13のmqinsourceは肝臓の肝星細胞ではないか

と言われているが、肝星細胞は肝臓のうちの５%前後しか存在しておらず、全身

に張り巡らされている内皮細胞数の方が圧倒的に多い。そう考えろとADAMTS13

のmqinsou｢Ceが内皮細胞である可能性も十分にあり、その内皮細胞の機能が低下

してADAMTS13の発現低下が生ずれば、血漿ADAMTS13濃度が低下してもおかし

〈ない。

急性冠症候群発症早期のＶＷＦの上昇は、その後の'ご血管イベント発症率と相

関するとの報告がなされていろ…，。今回の研究では、ADAMTS13がＶＷＦを切断

することで血小板の粘着や凝集を調整している点を踏まえて、ｌｕ筋梗塞発症後

のＶＷＦとADAMTS13のバランスが'ご血管イベントの発症に深く関与しているので

はないかという仮説を立てた。そこで血栓形成傾向を数値化させるために

VWF/ADAMTS13のﾋﾋを求めて、'ご血管イベントとの相関を調べた。COX比例ハザー

ド解析ではAM1発症３日間のVWF/ADAMTS13が増加するほど、有意に'ご筋梗塞再

発などの血栓症が発症することが分かった。また、Koplon-Meier解析では、ＡＭＩ発

症３日間でADAMTS13が減少した群、あるいはVWF/ADAMTS13が増加した群で、

有意に血栓症を発症することが分かった。以上の結果からAlV11発症早期のＶＷＦ

とADAMTS13の変動が、その後発症する血栓症に大きく関与している可能性が示

唆された。実際の一例を提示すると、AIVll発症４日目にステント内の亜急性血栓

閉塞を来した患者のデータでは、３日目のＶＷＦは５．７６（平均242)、く３日目一人

院時＞が２２３（平均0.36)、ADAMTSl3は３日目が０．６７（平均0.59)、く３日目一入

院時＞が-0.16（平均-0.05）と、３日目にＶＷＦが高度に上昇し、ADAMTS13が高度

に低下した翌日に亜急性血栓閉塞を発症していろ。このように比較的急性期に

発症した血栓症は、AlV11発症急性期のＶＷＦとADAMTS13の変動が直接関与してい

る可能性が考えられろ。しかし中にはAM1発症半年から１年後に血栓症を発症し

ている例も存在する。このような症例がAM1発症急性期のVWF、ADAlV1TS13の変動

‐４４‐

が直接影響していろとは考えにくい。ＡＭ|発症時のＶＷＦやADAMTS13の変動は前

述の如く様々な因子が関与しいていろと考えられろ。そのような因子に暴露さ

れた際にＶＷＦやADAMTS13が“変動しやすい人，，（言い換えればAIVll急性期にＶＷＦ

が上昇し、ADAMTS13が減少しやすい人）が、その後また同様な何らかの因子に

暴露されたときに血栓症を発症した可能性がある。

ＡＣＳ発症後のＶＷＦの変動は単に予後を予測する指標としてはたらくのではな

く、その後発症する'ご血管イベントの原因物質となりうることが様々な報告か

ら想定されろ。血栓性血小板減少性紫斑病（TTP）ては血漿中のULVWFが上昇し

ているが、ＴＴＰで心筋梗塞や'ご原性ショックに陥った症例がいくつか報告されて

いる72-74。更にはＴＴＰ患者の剖検例で、壊死'ご筋領域の微少血栓の免疫染色で、

多量のＶＷＦを認めていたことから75、AMlの血栓形成にＶＷＦが関与していたこと

が示唆されろ。ＶＷＦに対する様々な抗体を投与した実験では、ＡＣＳ患者の血小板

凝集を抑え、カニクイザルを用いた実験では冠動脈内血栓を減少させている1.76。

またデスモプレシンはvonWillebrond病などの際に内皮細胞からのＶＷＦの放出を促

進させる薬剤として使用されているが、デスモプレシンを投与した後に'辿筋梗

塞に陥った例が報告されている77-80｡また血液型が０型の群は非０型の群に比べ、

有意に心筋梗塞の発症が低いと言われるが81.82、その原因として０型は血漿ＶＷＦ

濃度が有意に低いためとも考えられている83゜以上の報告から、急性冠症候群の

発症にＶＷＦの関与は強く疑われ、またＶＷＦを唯一知られている天然基質として

いるAOAMTS13の急性ﾊｭ筋梗塞への関与も十分考えられろ。

ADAMTS13は肝星細胞19だけでなく、ＶＷＦと同様活性化された内皮細胞23や血

小板2'’22からも分拠されている。それゆえ、VWF/ADAMTS13の比は、炎症などに

より刺激されて放出されたＶＷＦの量と、放出と消費あるいは抑制により調節さ

れたADAMTS13の量のバランスを指し示していろと考えられろ。更には、

VWF/ADAMTS13のﾋﾋはＶＷＦが関与する血栓形成傾向を示していろと考えられろ。

ChquhqnらのADAMTS13ノックアウトマウスを使用した実験によると84、ヒスタミ

-４５．

ンによる静脈系の内皮細胞の刺激、及び塩化鉄による動脈系の内皮細胞の傷害

で生じるＶＷＦ媒介性の血小板凝集による微小血管の閉塞までの時間が、遺伝子

組換えADAMTS13の事前投与により有意に延長していろ。この結果からＡM1急性

期にVWF/ADAMTS13が高値である症例に対して遺伝子組換えADAMTS13を投与す

ることは、その後引き起こるjhL栓症を予防できるのかもしれない。

△VWF、△ADMATS13と駆出率を評価した結果、発症３日間でよりADAMTS13が

減少するほど、発症１ヶ月復の駆出率が低下する傾向にあった（図１０)。ＭＲＩで

AM|発症後の微小血管閉塞の有無と左室駆出率の程度を調べた報告がある。それ

によると、微小血管閉塞を起こした群では発症直後、更には発症３ヶ月後の駆

出率が、起こしていない群と比較して有意に低下していた85。

1００

００

８６

［⑰シ『ＰＮ回山

０００

４２

⑩の閂咀Ｉｕｐ①Ｐ図覗

、《OL

２０ ２５

（月）、 1５５０

図２１．微小血管閉塞の有無でみたKqplqn-Meier生存解析（ＷｕＫＣ・Circulo1ion､1998）

AMl発症急性期の微小血管傷害を起こす原因としては血栓の関与も考えられて

いる86．今回ADAMTS13の減少と駆出率に相関があったのは、血栓が形成される

際に消費性にADAMTS13が減少し、その血栓が微小血管閉塞を起こし、駆出率の

低下を未した可能性がある。

-４６．

以上臨床研究により、ＡＭ|急性期にVWF/ADAMTS13が上昇する程その後血栓症

が発症しやすいことが分かり、このことはAMl急性期にVWF/ADAMTSl3を低下さ

せることが、その後発症する血栓症を抑える可能性が示唆された。本来であれ

ば遺伝子組み換えADAMTS13を投与するのが望ましいと思われたが、現存する内

服薬でVWF/ADAMTS13を低下させる薬剤を調べることとした。

VWF/ADAMTS13を低下させるべく、まずＶＷＦを低下させる薬剤について調ぺた。

,ご不全患者に対してＡＣＥ阻害薬（リシノプリル）を使用したところ血中ＶＷＦ濃

度が減少したという報告や87、鍵常人にデキストランを投与することで土中ＶＷＦ

濃度が低下するとの報告を認めた８８．次にADAMTS13を低下させる薬剤について

は、マウスにＬＰＳを投与することで血漿ADAMTS13活性の低下を招くが、そこに

野中球エラスターゼ阻害薬であるシベレスタットをあらかじめ投与しておくこ

とで、その低下を押えるとの報告がある89゜

私が今回着目したのは抗血小板薬の一種シロスタゾールである。前述してき

たようにADAMTSl3はこれまで肝臓の肝星細胞から分泌されていろと考えられて

きたが、近年内皮細胞や血小板からも分泌されることが報告されており、mqin

sourceはむしろ内皮細胞である可能性がある。シロスタゾールはcyclicnucleo↑ide

phosphodies↑e｢qse3（PDE3）選択的阻害作用により抗血小板作用を有する薬剤である

が、その他にも多様な作用を有しており、その中の一つに血管内皮細胞保護作

用がある。シロスタゾールは細胞培義条件下で各種刺激による血管内皮細胞死

に対して保護作用を有していろ。また高グルコース刺激、低酸素刺激によるヒ

ト動脈由来内皮細胞死をｵip制する56.57。また、HUVECに対してＴＮＦ－ａ産生抑制作

用、アポトーシス抑制蛋白質Bcl-2の増加作用、アボトーシス促進蛋白質Ｂｑｘの

減少作用、チトクロームＣ放出抑制作用を有し、ＬＰＳ刺激による内皮細胞のアポ

トーシスを抑制する58。このようにシロスタゾールは傷害を受けた内皮機能を攻

-４７．

善させる作用があり、このことから急性'辿筋梗塞などの内皮が傷害され、

ADAMTSl3の発現が低下した状態でのシロスタゾールの投与が、ADAMTS13の発現

を冗進させると仮定した。

今回の実験から、HUVECにシロスタゾールを投与することで、有意にADAMTS13

の発現が増加することが分かった。また、マウスにシロスタゾールを投与する

ことで、大動脈でのADAMTS13の発現が元達することも分かった。更には低酸素

に暴露すると血栓形成傾向の指標となりうるVWFmRNAlevelsとADAMTS13mRNA

levelsの比（VWF/ADAMTS13）が有意に増加したが、シロスタゾールを投与するこ

とでその比が有意に減少した。またＬＰＳを投与したマウスでは大動脈での

ADAMTS13の発現は減少する傾向にあり、そこにシロスタゾールが投与されてい

ることでその減少を抑制させた。更にはＬＰＳを投与することで上昇したＶＷＦや

VWF/ADAMTS13がシロスタゾールを投与しておくことで有意に減少した。このLPS

によるADAMTS13の発現の低下は、直接ＨＷＥＣにＬＰＳを投与した際に、濃度依存

性にADAlVlTS13の発現が増えていることから、大動脈に対するＬＰＳの直接的な作

用によるものではなく、ＬＰＳを静注したことにより発生するサイトカインや酸化

ストレスなどによる二次的な物質により発現抑制が起こっていろと考えられろ。

LPSを投与することで土中|L-6などのサイトカインが上昇することは多くの論文

で報告されているが90,｜L-6は血流下においてADAMTS13の活性を抑えることが

報告されている７１．またヒト肝星細胞とHUVECを使ったinvi↑｢０の実験では､|L-4、

TNFα、ｌＦＮ７を同細胞に投与することで、ADAMTSl3の発現が低下し、培養液中の

ADAMTSl3活性も低下していろ。AMlにおいてもlL-6などのサイトカインの上昇は

報告されており68-m､LPS投与モデルは全身性の炎症が冗進しているAMlに近似し

た状態と考えられるかもしれない。そのような状態においてもシロスタゾール

－４８‐

を投与することで大動脈におけるADAMTS13の発現は上昇し、更には土中のＶＷＦ

濃度、VWF/ADAMTS13は有意に低下しており、このことはAMlにおいて、ADAMTS13

の発現が抑えられているであろう内皮細胞に対してシロスタゾールを投与する

ことでADAMTS13の発現を冗進させ、易血栓状況を打破出来る可能性を示唆して

いろ．実際に臨床研究でのシロスタゾールの有効性は報告されていろ。安定労

作性狭'逗症患者にアスピリン＋チクロピジンまたはクロピドグレルの２剤併用

療法群と、これに更にシロスタゾールを投与した３割併用療法群では、有意に

３割併用療法群の方がステント留置術後３０日以内のステント内血栓症が有意に

低下したとの報告や９１，２５ｍｍ以上の長い冠動脈病変に対して薬剤溶出性ステン

トを留置した例では、アスピリン＋チクロピジンの２剤併用療法群よりも、こ

れにシロスタゾールを追加した３剤併用療法群の方が、主要,ご血管イベント（,ご

血管死、，ご筋梗塞、再インターペンション）の発症率が有意に低値であった９２。

また症例報告として、薬剤溶出性ステントを留置してアスピリン、クロピドグ

レル、シロスタゾールの３剤併用療法をしていた患者で、４ヵ月後にﾀﾄ科手術の

ためにシロスタゾールだけ中止にしたところ、その４日後にステント内血栓症

を発症したとの報告もある'3。

本来であればAM1急性期にVWF/ADAMTS13が上昇している例に対しては組換え

型ADAMTS13を投与、補充することで、その後発症し得る血栓症の発症を抑える

可能性がある。しかし組換え型ADAMTS13はまだ臨床で使うことは出来ないため、

今回は現存する内服薬であるシロスタゾールに着目して調査したところ、障害

された内皮細胞に対して効果的であることが分かった。しかしシロスタゾール

に限らず、他の内皮機能を改善する薬剤、例えばＡＣＥ阻害薬94.95やアンギオテン

シン'1受容体拮抗薬9Ａ,7、スタチン98、ピオグリタゾン”、ニコランジル１００など

-４９．

でも、AMl急性期に投与することで内皮機能を改善させ、内皮でのADAMTS13の

発現を増加し、血栓形成刺n制にはたらく可能性がある。

-５０．

9．結語

本研究ではAM1における急性期のＶＷＦとADAMTS13の経時的変動について明ら

かにすると共に、ＡＭ|発症３日間のVWF/ADAMTS13の上昇がその後の血栓症の発

症率と相関があることを示した。このことから、急性期のＶＷＦとADAlVlTS13の変

動を把握することで、その後発症し得る血栓症を予測できる可能性があり、更

には組換え型ADAMTS13、あるいはADAMTS13の分泌を促す薬剤を投与することな

どにより血栓症の発症を予防できる可能性が示唆された。

｜ｎｖｉ↑｢o、invivoでの検討により、シロスタゾールが内皮細胞からのADAMTS13の

分泌を促す可能性が示唆された。このことから、ＡＭ|急性期におけるシロスタゾ

ールの投与はADAMTS13の血中濃度を上昇させることにより、その後発症し得ろ

血栓症を予防する可能性がある。

-５１．

10.参考文献

Ｅ１ｏＫ・lsshikiT､YomomoloH・ｅｔｑｌ・AJvW-2・qnqnti-vWFmonoclonqlqntibodV･inhibi↑s

enhoncedploteletqggregqtioninducedbYhighsheqrstressinplqtele↑-richplqsmqf｢ｏｍｐｑ↑ients

wi1hocu↑ｅｃｏ｢onorysynd｢omes.,4｢/白/71.ｓｂＶｂｒ７７ｉｍｍ６１/h９℃ａｂＩＡｐｒｌ９９９;19(4):877-882．

FolkE,ＳｈｏｈＰＫ,Fus↑eｒＶ､Coronqryploquedis｢up↑i0,.ＧｍルノMn/zAugl

l995;92(3):657-671．

GotoS,ＨｏｎｄｑＳ・ＣＯ｢onory↑hrombosis,Effec↑sofbloodflowonlhemechqnismof↑hrombus

formq↑ionJbﾉﾌｈｂＤｒノリ(Sepl998;39(5):579-596．

Rugge｢iZMZimme｢monTS､Thecomplexmul↑imericcomposi↑ionoffqc10｢Ｖ''1/vonWilleb｢ond

focto｢・ａｂｏＤ(Ｊｕｎｌ９８１;57(6):1140-1143．

SixmqJJ,SqkqriqssenKS,Beeser-VisserNH,ｅ↑ｑｌ・Adheslonofplqteletst0humqnq｢tery

subendo↑helium:effect0ffoc1orVl11-vonWilleb｢ondfoc↑0｢ｏｆｖｏ｢iousmullime｢iccomposi1ion・

abodJonl984;63(1):128-139．

SpornLAIVIorde｢ＶＪ，Wogne｢、D・Induciblesec｢e↑ionoflo｢ge・biologicqllypotentvonWilleb｢qnd

fqct0｢multimers.ＣとⅥ(Jull81986;46(2):185-190．

Spo｢ｎＬＡＭｑ｢derVj,WognerDD・ｖｏｎWillebrondfqc1orreleqsedf｢OmWeibel-Pol0debodies

binｄｓｍｏｒｅｑｖｉｄｌｙ↑Oext｢qcellulormotrixthonlho↑secre↑edconstitutivelV・ａｂｏＱ(MqV

l987;69(5):1531-1534．

MoschcowitzEHyperplostico｢teriosclerosisve｢ｓｕｓｏ↑he｢osclerosis・ｊ４ｍ/脇？W1ssDGJul8

1950143(10):861-865．

ＭｏｑｋｅＪＬＲｕｄＶＣＫ,TrollJH,ｅ↑０１.Unusuqllylqrgeplqsmqfqc↑orVlll:vonWilleb｢ondfqct0r

mul↑imersinchr0nic｢elqpsing↑hr0mbo↑ic1hrombocytopenicpu｢pu｢０.〃ＢＭＷ/M9D(Ｄｅｃ２

1．

2．

3．

4．

5．

6．

7．

8．

9．

－５２．

1982;307(23):1432-1435.

Fu｢ＩｑｎＭＲｏｂｌｅｓＲ,GqIbuserqMetql､vonWiIleb｢ondfqc↑0｢-cleqvingproteosein↑hrombotic

↑h｢ombocy↑openicpurpu｢００，.↑hehemoIV↑ic-u｢emicsVnd｢0me.〃E”ＷＭ９ＵＮｏｖ２６

１９９８;339(22):1578-1584．

TsqiHMLiqnEC・AntibodiestovonWillebr0ndfqctor-cleqvingp｢0↑eoseinqcu↑e↑h｢ombotic

thrombocyl0penicpu｢pur０.〃ａ，/山脇ｦ[ＸＮｏｖ２６１９９８;339(22):1585-1594．

SoejimoK,ＭｉｍｕｒｑＮ,HirqshimqMet01・AnovelhumqnmelqlloproteqsesVn↑hesizedin↑heliver

ondsecre↑edin↑０↑hebIood:possibly,thevonWilleb｢qndfqcto｢-cleovingpr0teqse？Ｊａｉﾌcｿﾞｳα刀

(7b/bﾉﾛﾉLOC↑2001;130(4):475-480.

FujikqwqK,SuzukiH,McMullenBe↑01.Purificq↑ionofhumonvonWiIlebrqndfqc↑or-cleoving

p｢0↑eoseonditsidemificqlionqsqnewmemberof↑ｈｅｍｅ↑qllop｢o↑einqsefqmily､abDaSepl5

2001;98(6):1662-1666．

Ge｢ri↑senHERoblesR,LqmmIeB,etql.Ｐor↑iqlqminoqcidsequemeofpu｢ifiedvonWilleb｢qnd

foc↑or-cleqvingp｢oteqse､aboq<Ｓｅｐｌ５２００１;98(6):1654-1661．

Ploimque｢Ｂ,ZimmermqnnK,VolkelD・ｅｔｏ１・Cloningexpression･qndfunctionolchq｢qc↑e｢izq↑ion

oflhevonWillebr0ndfqct0｢-cleqvingp｢o↑eqse(ADAMTS13).abomNovl5

2002100(10):3626-3632

ZhengX・ＣｈｕｎｇＤ,TokqyqmoTKe↑０１.Struc↑ureofvonWillebrqndfqctor-cleqvingpr01eqse

(ADAMTS13),omelqllopr0↑eoseinvoIvedinthromboticth｢OmbocV1openicpurpu｢ｑ,/３Ｄ/〃am

Nov22001;276(44):41059-41063．

SoejimoKNqkomurqH､HirqshimqMe↑０１.AnqlVsison↑heMoleculq｢SpeciesondConcen↑｢otion

ofCi｢cuIq↑ingADAMTS13inBl0od､ｊａｂｃｈａｍ（7bk)'口ﾉLJqn2006;139(1):147-154．

LeWGG,NicholsWC,ＬｉｏｎＥＣ,ｅ↑０１.lV1utq↑ionsinomembe｢oflheADAMTSgenefqmilycquse

↑h｢ombo↑icthrombocylopenicpurpurqAb九"己０ct42001;413(6855):488-494.

1０．

1１．

1２．

1３．

1４．

1５．

1６．

1７．

1８．

－５３‐

UemurqMTq↑sumiK､Ｍｄ↑sumo↑０１V１，ｅ↑０１.Locolizq↑ionofADAMTS13toIhestellq1eceIlsof

humqnliver,abo〔iAugl2005;106(3):922-924．

ZhouW,lnqdqlV1,ＬｅｅＴＰ,ｅ↑01.ＡDAMTS13isexpressedinhepotics↑ellotecelIs・ｍ６ｊｈ僻(Ｊｕｎ

2005;85(6):780-788．

LiuLChoiH,ＢｅｍｏｒｄｏＡ,ｅ↑０１.Pl0teIet-derivedVWF-cleqvingmetO110pro↑eqseADAMTS－１３．

Ｊ77ｹ､､bﾉｳb曰/ｍｓｆＮｏｖ２００５;3(11):2536-2544．

SuzukiM,MurqtqIVLMqtsubqrqY,ｅ１０１．０e↑ec↑ionofvonWillebr0ndfoclor-cleqvingp｢o1eose

(ADAMTS-13)inhumqnplq↑eIe↑s､β(,cｿﾞｩ師３１ｺ【ｺﾉｩﾉﾊﾞs/ｆ復ｓＣｂ/、z"zJon2

2004;313(1):212-216．

ShongDZhengXW,NilyolV1oetql・Apicolsor↑ingofADAMTS13invqsculo｢endo↑heliqlcellsqnd

Mqdin-DorbVcqninekidneycellsdependson↑heCUBdomqinsond1heirqssociq1ionwithlipid

mfts・abool0cI12006;108(7):2207-2215．

Tume｢Ｎ･Ｎｏ１ｑｓｃｏＬＴｑｏＺ,ｅ↑０１.Humqnendotheliolcellssyn↑hesizeqndreleqseADAMTS-13，

j77inam6hbB"1,sﾊﾟJun2006;4(6):1396-1404．

PodillqA,MookeJLBernq｢ｄｏＡ,ｅ↑０１.P-seleciinqncho｢snewlyreleqsedul↑rqlqrgevon

Willeb｢ondfqcto｢multimersto↑heendotheIiqlcellsurfoce.βｌｂＤａＭｑｒ１５

２００４;103(6):2150-2156．

DongJF・MoqkeJLNoloscoLetql・ADAMTS-13r0pidlycleqvesnewlysecre↑ｅｄｕｌ↑rqlqrgevon

WiIIeb｢ondfqc↑ormuHimersontheenclo↑heliqlsurfoceunderflowingcondi↑ions・abaXDecl

2002;100(12):4033-4039．

ＭｉｕｒｑＳｏＬｉＣＱＣｏｏＺ,ｅ↑ｑ１．１，↑e｢００↑ionofvonWillebrondfqc↑ordomqinA1wlthplo↑eIe↑

glycopr0teinlbqlphq-(1-289).Sl0wintrinsicbindingkine↑icsmedio1eropidploleletodhesion・ｊ

ａｂ/α>amLMOr172000;275(11):7539-7546．

BonnefoyAYqmqmo10H,ＴｈｙｓＣ,e↑01.Shielding↑hefron1-s↑｢qndbeto30fthevonWilleb｢on。

1９．

2０

21.

22.

23.

24.

25.

26.

27.

28.

･５４‐

fqc↑orAldomoininhibitsi↑sbinding↑ｏｐｌｑ↑ele↑glVcop｢otelnlbqlphqaboD<Febl5

2003;101(4):1375-1383

SqvqgeBShq↑tilSJ,RuggeriZlVl・Modulo↑ionofplq↑ele↑func↑ionthroughqdhesion｢ecep↑ors・A

duolroleforglYcop｢oteinllb-lllq(integrinolphqllbbe↑ｑ３)mediqtedbyfibrinogenond

glycop｢0↑einlb-vonWilleb｢ondfqctor.,/ａ1ｺ/ChaﾉﾌzJun51992;267(16):11300-11306．

SqdlerJE・Biochemist｢ｙｏｎｄｇｅｎｅ↑icsofvonWillebrqndfqc↑0｢・ハノ?'xﾉﾉﾏbyab的”

1998;67:395-424．

SiedleckiCA,LestiniBJ,ＫＯ↑tke-MqrchqntKKetqI､Sheqr-dependenlchqngesin↑ｈｅ

↑h｢ee-dimensionqlstructu｢eofhumonvonWillebrqndfqct0r､ａｂｏａ０ｃｔ１５

29.

30.

31.

1996;88(8):2939-2950.

Reininge｢ＡＪ,HeijnenHF,SchumqnnH,ｅ↑０１.MechqnismofploIeletqdhesionlovonWiIleb｢ond

fqct0r0ndmic｢Opq｢↑iclefo｢mqiionunde｢ｈｉｇｈｓｈｅｏｒｓ↑｢ess､６IbDQ(Mqyl

2006;107(9):3537-3545．

SqvqgeB,SqldivorE,RuggeriZMlni1iq↑ｉｏｎｏｆｐｌｑ↑ele↑odhesionbVqr｢estｏｎ↑ofibrinogenor

↑｢qnslocq↑iononvonWilleb｢ondfqclo｢.ＣＭＪｑｎ２６１Ｗ６;84(2):289-297.

F｢ed｢icksonBJ,DongJEMcln↑i｢eLV,ｅ１０１.Sheqr-dependentrollingonvonWiIleb｢qndfoc10rof

mqmmqliqncellsexp｢essing↑heplq↑ele↑glycop｢o↑einlb-lX-Vcomplex､６ｌｂ０はNovl5

1998;9200):3684-3693．

Sont0roSAAdso｢p↑ionofvonWillebrqndfqc1or/fqc↑0｢Ｖｌｌｌｂｙ↑hegene↑icqlIydis↑inc↑in↑ers↑itiql

coll0gensJZ2hqmM臼sNorl51981;21(6):689-691．

Bende↑owiczAV,ＷｉｓｅＲＪ,Gilber↑ＧＥＣＣllqgen-boundvonWlllebrqndfqc↑orhqsreduced

qffinliyforfqclorVlll､Ｊａｂ/肋釘凧Ａｐｒ３０１９９９;274(18):12300-12307．

KoedqmJA,Meije｢sJQSixmqJJ.e↑０１.lnqc↑ivq↑ionofhumqnfoc↑orVlllbyqc↑ivq↑edproteinC・

Cofocto｢ｑｃ↑ivitVofpr0↑ｅｉｎＳｑｎｄｐ｢o↑ec↑iveeffect0fvonWillebrqndfoc↑0｢.』Ｃ〃Ｍ７僻ｆ０ｃ↑

32.

33.

34.

35.

36.

37.

･５５．

198882(4):1236-1243.

６０↑ＯＳ,SokoiHlkedoY,ｅｔｏＩ・AcutemVocqrdiolinfo｢ctionplqsmqougmenlspIq↑elet↑h｢ombus

g｢owthinhighsheqrrqtes・La1ceAFeb221997;349(9051):543-544．

Got0S･SokoiH,Ｇｏ↑0Ｍe↑qlEnhqncedsheq｢-inducedplq↑eletoggregq↑ioninqcu↑emyocq｢diql

infqrction､Ｇｒ１ｃＭﾌﾉｉｍＬＦｅｂ９１９９９;99(5):608-613．

Kqiki↑ＯＫ,SoejimqKMq1sukowqM,ｅ↑ｑ1.ReducedvonWillebrclndfqctor-cleqvingp｢o↑eqse

(ADAMTS13)ｑｃ↑ivityinocu↑emyoco｢diqlinfq｢c↑ion・ｊ７７ｉｍｍ６ﾉﾀbBmD9ﾊﾟNov

2006;4(11):2490-249a

SpielAO,GilbenJC,ＪｉｌｍｑＢ・vonWilleb｢qndfoctorinco｢diovqsculordiseqse:focusonocu↑e

co｢onq｢Ｖｓyndromes.Ｑ化ub/M,/ｚＭｑｒｌ８２００８;117(11):1449-1459．

ThompsonSaKienqs↑J・PykeSD.e↑ql・Hemostoticfoc↑0｢sqndthe｢iskofmyoco｢diolinforction

orsuddendeo↑hinpqlien↑swi↑hqnginqpec↑orisEuropeqnConcertedAc↑iononThrombosisqnd

Disobili↑iesAnginqPec↑0｢isＳ↑udyGr0up〃と、リノM，[ZMqr91995;332(10):635-641．

HoinesARHowor↑ｈＤ,ＮＣ｢↑ｈＷＲ,ｅ101.Hqemostqticvorioblesond↑heouicomeofmyocordiql

inforc↑ionJ7m7m6ﾉｳbBmosﾊﾟＤｅｃ３０１９８３;50(4):800-80a

JqnssonJH,NilssonTK,JohnsonOvonWiIleb｢qndfoci0「inplqsmo:onoveIriskfqc↑Orfor

｢ecurren↑myoco｢diqlinfQrctiononddeqlh・けﾉｳﾋﾋﾟＷｕ(Novl991;66(5):351-355．

SqkqiHGo↑ＯＳ,ＫｉｍＪＹｏｅ↑q1Plqsmoconcen↑rq↑ionofvonWillebrqndfqc↑orinqcu↑e

myoco｢diqlinfo｢c↑ion'7ｹ、､ｳﾉｩb曰mosfAug2000;84(2):204-209,

MontqIescotaPhilippeF,AnkriA,ｅｔｏｌ・EorIVinc｢eqseofvonWillebr0ndfqc↑o｢ｐ｢edicts

odverseou↑comeinunstqblecoronqryq｢↑erydiseqse:beneficiqleffec↑sofenoxqpq｢in.Ｆ｢ench

Investigq1orsoflheESSENCETriql.‘)ｹ℃伽/N,/jLJul281998;98(4):294-299,

Montqlesco↑Ｇ,Colle↑卯,ＬｉｓｏｎＬｅｔｏｌ・Effectsofvoriousqnticoqgulonttreq↑mentsonvon

Willebrondfqc↑orreleoseinuns↑qbleqnglnq,/'4/776℃ﾙﾉＣt"z7lI,lJul2000;36(1):'１０－１１４．

38.

39.

40.

41.

42.

43.

44.

45.

46.

47.

･５６．

Colle↑ＪＰ,Montolesco↑６，Vicqu↑Ｅ,ｅｔｑｌ､Acu1ereleoseofplqsminogenqc↑ivq↑orinhibi↑oｒ－１ｉｎ48.

ST-segmenlelevq↑ionmYocqrdlolinfqrctionpredic↑ｓｍｏｒ↑qli↑V､Ｃ)化酬ﾌﾉ>1.hlJul29

2003;108(4):391-394．

RqyKK・Ｍｏｒｒ０ｗＤＡＧｉｂｓｏｎＣＭ,ｅ↑０１，Ｐ｢edic↑o｢sｏｆ↑heriseinvWFqf↑erSTeIevq↑ion

myocordiqlinfqrction:implicqtionsfortreqtmen↑strotegiesondclinicqlou↑come:AnENTlRE-TlMl

23substudy・ＥＵｍｂ[ﾌﾘｰMMqr2005;26(5):440-446．

SudoT,TqchibqnqKTogqK,etql・ＰＣ↑en1effec↑sofnovelqn↑i-plq↑ele↑oggregq↑o｢ycilosIqmide

onqloguesonrecombinqn↑cYclicnucleo↑idephosphodies↑e｢qseisozymeqc↑Ｍ↑V・３Ｄ助Ｇｍ

ＲｍｈｍＤｍｌＦｅｂｌ５２０００;59(4):347-356．

UmekowoHTqnqkoT,Kimu｢ｏＹ,ｅ１０１.Ｐｕrificq↑ionofcycIicodenosinemonophosphq↑e

phosphodies↑erqsefromhumqnplq↑ele↑susingnew-inhibi↑orSephqrosechromq↑ogrqphy・

ａｂ的a/７７Flmm7qcD1Novll984;33(21):3339-3344．

MqngonielloVCDege｢mqnECvclicnucleo↑idephosphodiester0ses(PDEs):diverse｢egulqt0｢sof

cyclicnucleo↑idesignqlsqndinvi↑ingmoleculqr↑q｢ge↑sfornovel↑he｢qpeu↑icqgen↑sJ7imm6

/9h日/770sﾊﾟAugl999;82(2):407-411．

TqnokqTJshikqwqT,HqgiwqroM,ｅ↑Cl1.Effectsofcilos↑OzoI,qseIeciivecAMP

phosphodies↑e｢qseinhibi10｢on↑hecon↑rqc↑ionofvqscuIqrsmoo↑hmuscle､Fh(Jm7CDbg),6

1988;36(5):313-320．

lshizqkqNTqguchiJ,Kimu｢ｑＹ,ｅ↑０１.EffecIsofqsinglelocqlodministrqtionofcilos↑qzolon

neoin↑imolformqlioninbqlloon-injuredr0↑cqro↑iｄｏ｢↑erWzl伽、9℃ｿbnaslMqn

l999;142(1):41-46．

lnoueY,ＴｏｇｑＫＳｕｄｏＴ.e↑０１.SuppressionoforteriqlintimqlhyperpIosiqbVcilos↑qmide・ocyclic

nucleo↑idephosphodies↑erose3inhibi↑0｢,inorq↑bqlloondouble-injurVmode１．３Ｗﾋﾟﾘmml7cDA

Moy2000;130(2):231-241.

49.

50.

51.

52.

53.

5４

55.

･５７．

Mo｢ishi1qR,HigqkiJ,HqyoshiSLetql・Roleofhepqlocy↑egr0w1hfqc10rinendo↑heliql

regulq1ion:preventionofhighD-glucose-inducedendotheliolcelldeo↑ｈｂｙｐｒ０ｓ↑oglqndinsqnd

phosphodies↑e｢qse↑ype3inhibi↑0｢・Ｄ１ｂ６ｅ/ｂﾙｺﾂﾞbLSepl997;40(9):1053-1061．

AokiMMo｢ishi↑ｑＲ,HoyoshiS.ｅ↑ql.|nhibitionofneoin↑imqlfo｢mqlionqf↑erbqllooninJurVby

cllostqzol,qccompqniedbyimpr0vemen↑ofendo↑heliqldVsfunc↑ionqndinduc↑ionofhepqtocy↑e

grow↑hfoc↑orinrqtdiqbe↑esmodeLatz6e/ｂ/bgItZAug2001;44(8):1034-1042．

KimKY,ＳｈｉｎＨＫＣｈｏｉＪＭｅ１ｏｌ.|nhibilionofIipopolysqcchq｢ide-inducedopopt0sisbycilostqzol

inhumonumbilicolveinendo↑heliqlcellajFhDrmoCD/ａｐ７７ｹa/:Feb2002;300(2):709-715.

56.

57.

58.

YosueHHorioY・Nqkomu｢ＯＮ,ｅｔ０１､Inductionofco｢0,q｢Ｙｑ｢teryspqsmbyoce↑VlchoIinein59.

pq↑ientswi↑ｈｖｑ｢ion↑qngino:possibleroleof↑ｈｅｐｑ｢osVmpqtheticne｢voussys↑ｅｍｉｎ↑he

pq↑hogenesisofco｢onqryqr↑e｢yspqsm.｡hﾙﾘb/)b/zNovl986;74(5):955-96a

SuzukiH,Ｓｅ↑ＯＫ,ShinodqY,etqlPo｢qcrineupreguIo↑ionofVEGF｢eceptormRNAinendo↑heliql

cellsbVhypoxiq-exposedhepG2cells.」/77Ｊ〃｣'５)1ｺ/<Jqnl999;276(１Ｐ↑１):692-97．

Rei↑erRAVqrodiK,TurecekPL,e↑０１.ChqngesinADAMTS13(von-Willeb｢ond-foc↑o｢-cleoving

p｢oteose)qctivitVofle｢inducedreleqseofvonWillebrqndfqct0｢duringocutesystemic

inflqmmolionJhm/776ﾉｳb曰'77ＤｓパＭｏ｢2005;93(3):554-558．

Mimur0J,ＮｉimurqlVl,KqshiwqkuroY,ｅ↑０１.UrboloncedexpressionofADAMTS13qndvon

Willeb｢ondfqc↑orinmouseendo↑oxinemiqj7m7m6斤随2008;122(1):91-97．

Wqgne｢､､,Bonfqn↑iR､vonWilleb｢qndfqctorqnd↑heendothelium・ﾉﾙﾚ)'DQlhF)rDqJun

l991;66(6):621-627．

PqleoIogEMCr0ssmqnDC,McVeVJH,ｅｔｏｌ.、ifferen↑iqlregulq↑ionbycV↑okinesofcons↑i↑u1ive

qndstimulq↑edsecrelionofvonWilleb｢qndfqc↑ｏｒf｢omendolheIio1cells・abodFebl

l99q75(3):688-695．

PinskyDJ,ＮｑｋｑＹＬｉｑｏＨ･ｅｔｑＩ・Hypoxio-inducedexocVt0sisofendotheliqlceIlWeibel-Polode

60.

61.

62.

63.

64.

65.

－５８．

bodies・Amechonismforrqpidneu1｢ophilrecruitmenlqf↑ｅｒｃｑ｢diqcp｢ese｢vqtion・ｊＧｌｈｈしりsf

Jqnl51996;97(2):493-500．

Se｢eb｢ｕｏｎｙＶＬＧｕ｢belPA,ShustovARet01､He1erogeneitVofplqteletqgg｢egqtionqndmqjo「

su｢foce「ecep↑Orexp｢essioninpq↑ien↑ｓｗｉ↑hqcutemyocqrdiqlinfo｢c↑ｉｏｎＡｍﾉｩbＤｒＭＳep

l998;136(3):398-405．

CrowleVJT,ＬｏｍＪＫ,RqnceJB,ｅｔＱｌ・Pr01eolVticinqc↑ivqtionofADAMTS13by1h｢ombinqnd

pIqsminaboo(Ｆｅｂｌ２００５;105(3):1085-1093．

MiyooY,ＹｏｓｕｅＨ,ogqwqHetol・Elevo1edpIosmoin↑e｢leukin-6Ievelsinpq↑ientswithocute

myocordiqlinfqrction.,２１ｍﾉｳborMDecl993;126(6):1299-1304.

0hoshiY,KowqshimqSNoriT,ｅｔ０１､So1ubleCD401igqndondin↑erIeukin-6intheco｢onq｢y

circulotionqf↑erqcuiemyocq｢diqlinfqrctionルノｊＣｎｍｌｂｌＳｅｐｌＯ２００６;112(1):52-58

UedqKTokohqshilVl,ＯｚｑｗｑＫ,ｅ↑ｑ1.Dec｢eosedsolubIein↑erleukin-6｢ecept0rinpq↑ientswi↑h

ocu↑emyocordiqlihfq｢ction’４ｍﾉｳl9aﾌﾟu(Novl999;138(５Ｐｔ１):908-915．

ＢｅｒｎｑｒｄｏＡＢｏｌ１Ｃ･Ｎｏｌ０ｓｃｏＬ・ｅｔｑｌ・Effec↑sofinflqmmqt0rVcy↑okinesonthereleqseond

cleovqgeｏｆ↑heendotheliqlcell-de｢ivedult｢qIqrgevonWilleb｢qndfqclormul↑imersunderflow・

aboaJull2004;104(1):100-106．

PC↑schonDWitzkeO.、uhrsenU,ｅ↑０１.Acutemyoco｢diolinforc↑ionin↑hrombotic

mic｢oqngiopq↑hies--clinicqlchqrqc↑e｢istics,riskfqc↑o｢sondoulcomeルリ【ｺﾉｶの/DMWhm5pIzl7f

Jun2006;21(6):1549-1554.

66.

67.

68.

69.

70.

71.

72.

HqsperD,Ｓｃh｢qgeDNiesporekS,ｅｔｑｌ､Ｅｘ↑ensivecoronqryth｢Ombosisin73.

↑h｢ombo↑ic-↑hrombocytopenicpu｢pur０.〃ＪＣｍｏｌｂＺＪｑｎ２６２００６;106(3):407-409．

LqppH・ＳｈｉｎＤＩ,KroellsW,ｅ↑０１.ＣＱrdiogenicshockduelo1hromboIic↑h｢ombocylopenic

purpuro・ＺＡｂｍｌｂＺＪｕｎ２００４;93(6):486-492

PodolskySH,ZembowiczASchoenFJ,ｅ↑０１.Mossivemyocq｢diqlnecrosisin1h｢ombo↑iｃ

74.

75.

－５９‐

↑hrombocylopenicpu｢purq:qcqserepo｢lqndreviewoftheliterqture・小０カFbﾉｿｹﾛ/しめ/M9UOct

1999;12300):937-940．

KqgeyqmqS･YqmqmotoHNqkqzqwqH,e↑q１.Phq｢mocokine↑icsondphqrmqcodynqmicsof

AJW200,qhumqnizedmonoclonqlqntibodV↑ovonWillebrqndfqc10r,inmonkeys.,２１ﾉ7白'7bsCybr

77i、/7,61/bsCablJon2002;22(1):l87-192

McLeodBC・Myocqrdiqlinfqrctioninoblooｄｄｏｎｏｒｑｆ↑erodminis↑rqtionofdesmop｢essinLq'７℃ｇパ

Nov31990;336(8723):1137-1138

0'B｢ienJR,Ｇ｢eenPJ,SqlmonG,ｅ↑０１.Desmop｢essindndmyocqrdiqlinfqrc↑ion・Ｌａ７ＵＰ（Mor25

1989;1(8639):664-665．

LoweGDDesmopressinondmVocqrdio1infq｢c↑i0,.ｍｍeパＡｐ｢２２１９８９;1(8643):895-896．

BondLBevqnD・Myocq｢diolinfo｢c↑ioninqpqtientwi↑hhemophiliqtreotedwithDDAVP.〃ｆ７⑲/

山脇,[ＸＪｏｎｌ４１９８８;318(2):121．

MeqdeTW，CooperJA,Ｓ１ｉ｢|ｉｎｇＹ,ｅ↑ｑ1.FOC↑ｏｒⅦ|,ＡＢＯｂｌｏｏｄｇｒｏｕｐｑｎｄ↑heincidenceof

ischqemicheq｢↑diseqse．〃ＪﾉｳbB/77(7ＭＮｏｖ１９９４;88(3):601-607.

B｢on↑e-Stewo｢↑Ｂ,ＢｏｔｈｑＭＯＫ｢utLH・ABObloodg｢oupsin｢elotiontoischqemicheqrtdiseqse・

ｹﾞｰﾉﾙﾋ[]ＵＪｕｎｌ６１９６２;1(5293):1646-1650．

vonBeckerq↑ｈＮ,KochWMehilliJ,ｅ↑０１.ABOlocusO1qlleIeqndriskofmVocqrdiqlinfqrction、

6M,０(]/６℃(】Ｗ/EibnhD/)'５UMqn2004;15(1):61-67．

ChquhqnAK,Mot↑ＯＤａＬｏｍｂＣＢ,ｅｔｑｌ・SVS↑emicqn1i↑hromboticeffectsofADAMTS13.I/ａｐ

/M9q(Mqr202006203(3):767-776．

ＷｕＫＣ,Ｚｅ｢houniEA,ＪｕｄｄＲ１Ｖ１,ｅ↑０１.Ｐ｢ognoslicsignificQnceofmicr0vqsculqrobs↑｢uc1ionby

mogneticresonqnceimoginginpo↑ienlswithocu↑emyocq｢diqlinforction・口、ﾉﾘbﾉillhLMqr3

199897(8):765-772．

MukherjeeD,Moli↑e｢noDJAchieving↑issue-levelperfusionin↑hese↑↑ingofocutemyoco｢diql

76.

77.

78.

79.

80.

81.

82.

83.

8４

85.

86.

－６０．

infqrc↑i0,.,4〃I/ＣｔＪｍＩｂ/(Apr272000;85(8A):39C-46C・

GibbsCR,BlqnnAD,ＬｉｐＧＹ,etqLAbnormqli↑iesofhemorheol0gicql,endo↑heliql,qndplotelet

functioninpq↑ien↑ｓｗｉ↑ｈｃｈ｢omcheqr↑fqilu｢einsinusrhythm：effec↑sofqngiotensin-corⅣe｢↑ing

enzymeinhibi↑0｢ｑｎｄｂｅ↑q-blocker↑herqpy・助ult7/lｂ/1LApr32001;103(13):1746-1751．

MorthiqssonSELindblqdB,Berqqvis↑、,ｅ↑ｑｌ・StudVof↑heinteroc1ionofdex↑｢qnqnd

enoxqpqrinonhqemos↑qsisinhumqnsJ7inqm6ﾉｳb日/770sfNovl994;72(5):722-727．

Mimu｢０Ｊ,NiimuroMSokq↑ｑＹ,ｅ↑ｑｌ・UmbqlqnsedexpressionofADAMTS13qndvonWillebrqnd

fqc↑Urinmouseendot0xlnemlq77im/７１Ｍ役s;Ｎｏｖｌ９２００８;122(1):91-97.

87.

88.

89.

LuYendykJP,SchqbbquerGA,TencqtiM,ｅ↑ｑｌ・Gene↑iconqlysisof↑ｈｅ「o1eoHhePl3K-Akt90.

pothwqyinlipopolYsqcchq｢ide-inducedcWokineqnd↑issuefqc↑orgeneexp｢essionin

monocY↑es/mqc｢ophqges,Ｊｈｌ"7u、/ｌＭｑｒｌ５２００８Ｉ１８０(6):4218-4226．

ＬｅｅＳＷ,ＰｑｒｋＳＷＰｑｒｋＳＪ,ｅ↑０１.Tripleversusduqlqntiplqielet↑herqpVqf↑e｢coronqrys↑e､↑ing：

impqc↑０，s↑e､↑↑h｢ombosis.（/4ﾉ77Ｃｎｌ/ＣｔｍｂＩ０ｃ↑１９２００５;46(10):1833-1837．

ｌｅｅＳＷＰｑｒｋＳＷ,ＰＣ｢ｋＳＪ,ｅ↑０１.Compq｢isonoftripleversusduqlqn↑iplqtele↑↑herqpyof↑er

drug-elutings↑e､↑implon↑q↑iｏｎ(f｢０ｍ↑heDECLARE-l0ng↑｢iql).伽ＪＧｑｍＩｂ/(Jull8

2007;100(7):1103-1108

1mELeeSH,JqngY,ｅ↑o1Drug-elu↑ings↑entlhrombosisqf↑ercilos↑qzolwi↑hdrqwqlinqpq↑ient

previouslY↑req↑ｅｄｗｉ↑ｈ↑｢ipleqntiplq↑ele↑↑heropy.〃ＪＣｍ】Ii21Jun252008

GotoKFujiiK,FujishimoM,e↑０１.Angio↑ensln-conver↑ingenzymeinhibl↑o｢preventsqge-relq↑ed

endo↑heliqldysfunc↑ion・伽ﾌ5r/圏ﾉｽＳＩＩ,hLOc↑2000;36(4):581-587．

PieperGMSiebeneichW・Temocqpril,onOngio↑ensinconver↑ingenzVmeinhibi↑or,pro↑ec↑s

qgqins↑diqbe↑es-inducedendo↑heliqldVsfunction､ＥｉＪｒｊ〃(７rｌｗＤｍＺＳｅｐｌ

2000;403(1-2):129-132.

91.

92.

93.

94.

95.

NqyqMTsukqmo↑０Ｔ,Tsu↑sujiH,ｅ↑Ｃｌ､o1mesqrtqn,ｂｕ↑no↑qmlodiplne,improves96.

－６１‐

endo↑helium-dependen↑coronqrydilqtioninhVpe｢↑ensivepq↑ien↑s､ｊ４ｍＣＭＣｂｒｕｌｂｌＳｅｐ４

２００７;50(12):1144-1149.

F｢QncischettiEA,CeIo｢iqBlV1,GenelhuVA,ｅ１ｑｌ､Treotment0fhype｢↑ensioninidMduqlswi↑hthe

cq｢diomelqbolicsynd｢ome:r01eofonqngiotensinllreceplorblocker,Ielmisq｢10,.apa'Ｗ７ｂｙ

ＣｂｍＩﾌα】６℃乃郎Mor2008;6(3):289-303．

Gomez-CerezoJF,Pogqn-MunozB,Bqrbqdo-HernondezFJ,ｅｔｑｌ､Theroleofendotheliol

pr0genit0rcellsonds↑otinsinendo↑hellolfunction:oreview．‘ロmlI,眺獅/9hmoノロ/,49煩ﾉﾌﾉＷＭｇ(]／

肋a/7Zoo↑2007;5(4):265-272

Woh｢ｌｅＪ･ＭｏｒｘＮＮｕｓｓｅｒＴ,ｅ↑ｑｌ.|mpqc↑ofPiogli↑qzoneoncoronq｢yendotheliolfunc↑ionin

non-dlobe1icpo↑ien↑ｓｗｉ↑ｈｃｏ｢onq｢ｙｑ｢↑erydiseqse，ＣＭ'7/n9sCbmIlllApr24

2008;97(10):726-73a

ZhqoJLYqngYJ,ＧｑｏＲＬｅ↑ｑ１.Nico｢qndiIreducesmyocqrdiolno-reｆｌｏｗｂｙｐｒ０↑ectionof

97.

98.

99.

1００．

endolheliqlfunctionviotheoctivo↑ionofKATPchqnnel・Ｃｌ〃7Chl7McmJun3

2006;374(1-2):100-105.

-６２．