CÂNCER DE PULMÃO NÃO – PEQUENAS CÉLULAS Molecular do... · xxxBIOLOGIA MOLECULAR DO CÂNCER...
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CÂNCER DE PULMÃO NÃO –
PEQUENAS CÉLULAS
Clarissa Baldotto
II CURSO DE BIOLOGIA MOLECULARII CURSO DE BIOLOGIA MOLECULAR
27 DE AGOSTO DE 2011
xxxO MARCO MOLECULAR
xxxO QUE O CLÍNICO PRECISA SABER?
IDENTIFICAR UM ALVO DE ONCOGÊNESE
ENCONTRAR UM BIOMARCADOR
ESTABELECER A EFICÁCIA
xxxBIOLOGIA MOLECULAR DO CÂNCER DE PULMÃO
• EGFR– Descrição da via
– Como interpretar o laudo
– Perguntas mais frequentes (qual mutação buscamos, onde buscá-las,)
– Resistência aos TKIs (EGFR, cMET)
• EML4-ALK– Descrição
– Métodos de diagnóstico
• BRAF e etc
VIA DO EGFR
ATIVAÇÃO DO EGFR
ALTERAÇÕES TESTADAS DO EGFR
EXPRESSÃO DA PROTEÍNA POR IMUNOHISTOQUÍMICA
NÚMERO DE CÓPIAS DO GENE EGFR POR FISH
STATUS MUTACIONAL DO EGFR POR SEQUENCIAMENTO
QUAL TESTE UTILIZAR?
VALIDAÇÃO EM ESTUDO
CLÍNICO
CAPACIDADE DE
PREDIÇÃO
xxxEGFR – QUAL É O MARCADOR PREDITIVO?
Kobayashi S. NEJM 2006; 352: 786.
xxxEGFR – QUAL É O MARCADOR PREDITIVO?
INTEREST – Pacientes com FISH +
xxxEGFR – Resultados moleculares IPASS
• SLP
xxxEGFR – Resultados moleculares IPASS
FISH pos/ EGFR mut FISH pos/ EGFR selvagem
xxxEGFR – Resultados moleculares IPASS
FISH neg / EGFR mut FISH neg/ EGFR selvagem
MUTAÇÕES DE EGFR
MUTAÇÕES DE EGFR
DECIFRANDO O CÓDIGO
MUTAÇÕES DE EGFR
xxxEGFR – Desmistificando o laudo
Exon 21
xxxEGFR – Desmistificando o laudo
Exon 21
xxxEGFR – Desmistificando o laudo
Aminoácido 3 letras 1 letra
EXEMPLO
xxxTIPOS DE MUTAÇÕES DE EGFR
CLASSIFICAÇÃO DE ACORDO COM A SENSIBILIDADE AO TKI
ALTA SENSIBILIDADE
Deleções exon 19 L858R (exon 21) L861Q (exon 21) G719S (exon 18)
SENSIBILIDADE INTERMEDIÁRIA (erlotinibe > gefitinibe?)
D761Y (exon 19) L747S (exon 19)
RESISTÊNCIA T790M (exon 20) Inserções no exon 20
xxxMÉTODOS DE DETECÇÃO DA MUTAÇÃO
MÉTODOS TECNOLOGIAS DE SCREENING
DETECÇÃO POR MUTAÇÃO ESPECIFICA
PCR/ Sequenciamento ✔
Nested PCR/ Sequenciamento ✔
PCR/HRMA/dHPLC (MELT) ✔
ARMS ✔
PNA/LNA Clamp ✔
SNAPSHOT ✔
ME PCR/ Sequenciamento ✔
xxxO QUE O CLÍNICO PRECISA SABER? - EGFR
IDENTIFICAR UM ALVO DE ONCOGÊNESE
ENCONTRAR UM BIOMARCADOR
ESTABELECER A EFICÁCIA
EGFR É UM DRIVER DA ONCOGÊNESE
A PESQUISA DE MUTAÇÃO DE EGFR É O PADRÃO OURO
VÁRIOS ESTUDOS DE FASE III
• QUEM BIOPSIAR
• ONDE BIOPSIAR
• E QUANDO TUDO FALHAR?
DÚVIDAS CRUÉIS
xxxEM QUEM PESQUISAR?
Não tabagista
Tabagista
Ex-tabagista
Homens
Mulheres
Frequência de mutação de EGFR por (A) carga tabágica e (B) sexo
JClinOncol 2011; DOI: 10.1200/JCO.2010.32.6181
xxxO TUMOR É HOMOGÊNEO?
• Três pequenas áreas foram selecionadas nos 50 tumores– Sem diferença de mutEGFR
• Cinco tumores foram dissecados
em 100 ou mais partes– Sem diferença de mutEGFR
Yatabe Y. J Clin Oncol 29:2972-2977
xxxPSEUDO-HETEROGENEIDADE TUMORAL
• MASI
Yatabe Y. J Clin Oncol 29:2972-2977
xxxRESISTÊNCIA AOS EGFR TKIS
Primária(< 10%)
Precoce Tardia
Mecanismodesconhecido
T790M : 50%Hiperexpressão de cMet : 20%
Outros: 30%
xxxRESISTÊNCIA AOS EGFR TKIS
• Mutação pontual
adquirida
• Mudança de uma
treonina para
metionina no códon
790 do exon 20
xxxEGFR – Mutação T790M
Kobayashi S. NEJM 2006; 352: 786.
xxxRESISTÊNCIA AOS EGFR TKIS
xxxINCIDÊNCIA DA MUTAÇÃO T790M
• SLP MEDIANA
__T790M positiva
__T790M negativa
SIGNIFICADO DA MUTAÇÃO T90M “INICIAL”
ROSELL, ASCO 2010
• SLP MEDIANA
– T790M positiva: 19 meses
– T790M negativa: 12 meses
SIGNIFICADO DA MUTAÇÃO T90M “ADQUIRIDA”
• SG MEDIANA
– T790M positiva: 39 meses
– T790M negativa: 26 meses
Oxnard et al. CCR publication on line Dez 2010
xxxOPÇÕES ATUAIS DE TRATAMENTO
Continuar TKI
Continuar TKI e adicionar QT
Continuar TKI e Adicionar CETUXIMABE
Parar TKI e adicionar QT
TKI irreversível (estudo)
Estudos Clínicos
xxxOPÇÕES ATUAIS DE TRATAMENTO
Continuar TKI
Continuar TKI e adicionar QT
Continuar TKI e Adicionar CETUXIMABE
Parar TKI e adicionar QT
TKI irreversível (estudo)
Estudos Clínicos
xxxPROBLEMA DE RECIST
ASPIRATION STUDY
CPNPC avançado
EGFR mutado n=204
PD peloRECIST
PD por decisão médica
ERLOTINIBE ERLOTINIBE
PFS 1
xxxOPÇÕES ATUAIS DE TRATAMENTO
Continuar TKI
Continuar TKI e adicionar QT
Continuar TKI e Adicionar CETUXIMABE
Parar TKI e adicionar QT
TKI irreversível (estudo)
Estudos Clínicos
Estudo fase II (BIBW e
Cetuximabe))
H1650 – Deleção exon 19
xxxREVERTENDO A RESISTÊNCIA
H1975 – Exon 20 T790M
Exon 21 L858R
Mok et al. Dados não publicados. WCLC 2011.
xxxBIBW 2992 + Cetuximabe
Jangijian et al. ASCO 2011. Abst # 7525
BIBW 2992 + CETUXIMABE: Resposta
xxxMet
xxxMET - EGFR
• Inibe a estimulação da
via pelo HGF
xxxcMet - MetMAb
xxxMET Mab: IHQ
xxxMET Mab em pacientes com IHQpos
xxxO QUE O CLÍNICO PRECISA SABER? - MET
IDENTIFICAR UM ALVO DE ONCOGÊNESE
ENCONTRAR UM BIOMARCADOR
ESTABELECER A EFICÁCIA
A HIPEREXPRESSÃO DE C-MET ESTÁ ASSOCIADA A CRESCIMENTO
TUMORAL
IHQ É PROMISSORA PARA MetMab
ESTUDOS PROMISSORES DE FASE IIFASE III EM ANDAMENTO
xxxESTUDO IDEAL
RESISTÊNCIA A TKI
BIÓPSIA MANDATÓRIA
T790M
C-MET
Outro
TKI irreversível
MetMab + TKI
Quimioterapia
xxxTRANSLOCAÇÕES DE ALK
1)
2)
xxxTRANSLOCAÇÕES DE ALK
xxxTESTE PARA IDENTIFICAR ALK - FISH
xxxTESTE PARA IDENTIFICAR ALK - FISH
xxxTESTE PARA IDENTIFICAR ALK - FISH
CRITÉRIOS DE POSITIVIDADE
• A separação (split) de 3’ALK/5’ALK ocorre quando os sinais
verde/vermelho estão separados por um intervalo > 2 sinais
de diâmetro
• A amostra é positiva para o rearranjo de ALK quando os sinais
de split ou sinais isolados de 3’ALK estão presentes em > 15%
das células tumorais
CONSIDERAÇÕES
• Mínimo de 50 células tumorais
• Validado em estudo clínico (Kwak et al. NEJM, 2010)
• Reconhece outros parceiros de fusão
xxxTESTE PARA IDENTIFICAR ALK – FUTURO?
xxxSobrevida Global – Criotinibe 2a e 3a linhas
xxxESTUDOS CLÍNICOS COM CRIZOTINIBE
xxxO QUE O CLÍNICO PRECISA SABER? – EML4 -
ALK
IDENTIFICAR UM ALVO DE ONCOGÊNESE
ENCONTRAR UM BIOMARCADOR
ESTABELECER A EFICÁCIA
EML4-ALK É UM DRIVER DA ONCOGÊNESE
FISH É O PADRÃO OUROA IHQ É PROMISSORA
ESTUDOS DE FASE II PROMISSORESESTUDOS DE FASE III EM ANDAMENTO
xxxBRAF
xxxBRAF – CARACTERÍSTICAS CLÍNICAS
Paik et al. J Clin Oncol 29:2046-2051
xxxBRAF – MUTAÇÕES
A: CPNPC B: Melanoma
Paik et al. J Clin Oncol 29:2046-2051
xxx
“Doutor, aqui está meu
perfil molecular…”
Clarissa Baldotto | [email protected]
II CURSO DE BIOLOGIA MOLECULAR