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产品编号：MB0101

用户手册

培氏™ 微生物测试片

-----菌落总数测试片

使用前，请仔细阅读本说明书妥善保管以备需要时查阅。

杭州妙丽生物技术有限公司The Miller Laboratories CO., LTD.

培氏™为杭州妙丽生物技术有限公司注册商标产品编号：MB0101

杭州妙丽生物技术有限公司电话： 0571-56971232 | 134-5684-6660 技术支持邮箱： [email protected] 官方网址： www.millerlabs.biz

公司地址：杭州市滨江区江陵路 88号万轮科技园 3幢 313室邮编： 310052

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警告和注意事项

• 本产品的使用必须遵照中华人民共和国法律法规和行业准则。

• 本产品的不适用于生物武器的研究、设计和制造。

• 使用后的测试片必须视作生物废弃物，具有潜在传染性。需要特别处理后才可以释放到环

境中。

• 没有经过专业培训的人士禁止使用本产品。

使用须知

感谢您使用本产品，请仔细阅读说明，以便您能快速掌握本产品的使用方法，更好的使用

本产品。

本产品适用于食品及原料中菌落总数的测定，也可用于与食品直接接触的容器、操作台及

其他设备表面的卫生检测。依据食品安全国家标准 GB4789.21、进出口商品检验行业标准

SN0168--922和国际通用标准 3精心配制。

mailto:[email protected]

http://www.millerlbas.biz




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培氏™产品简介

培氏™微生物测试片改进自 1892年德国

科学家培氏™（Julius Richard Petri，1852－

1921）发明的培养皿，具有检测快捷，结果

准确，高效等特点。

培氏™微生物测试片将标准配方微生物

培养基(culture media formulation)通过生物胶

（biological gelling agent）镀在薄膜上。该薄

膜体系能完全隔离污染菌，同时满足细菌生

长的物理条件，包括却不局限于温度，水分，

氧气通透性等，对比传统的培氏™培养皿

（Petri-dish）体系，结果完全符合培养皿的

相应科学标准。通过不同调节手段，培氏™微

生物测试片能够设计成各种期望的微生物培

养基，设计的调节手段包括却不局限于：

一、营养物质促进微生物生长，包括特定碳

源，特定氮源，或者其他合成氨基酸。

二、微生物生长抑制剂（比如抗生素，胆盐

等）。

三、微生物生长显色剂（比如红四氮唑 2,3,

5-Triphenyltetrazolium chloride, TTC）。

四、 pH指示剂。

五、温度调节来培养特定的嗜冷型细菌

(psychrophilic bacteria) 或者嗜热型细菌

（thermophilic bacteria)。

六、自动扩散介质(self-spreading agent)， 25

摄氏度时，1 毫升去离子水可以自动散布在

20 平方厘米的薄膜上。

七、通过薄膜材料的选择和气体通透性来规

范好氧细菌（Aerobic bacteria）或者厌氧细菌

（Anaerobic bacteria）的生长。

培氏™微生物测试片采用辐照灭菌，按照

“ 医疗器械辐照灭菌标准（国标

GB18280-2007）”严格灭菌，产品拆封后可

直接使用。大大减少工序，缩减工时。

自备实验设备和材料

• 经校验的培养箱

• 经校验的冰箱：2摄氏度~8摄氏度

• 1毫升可灭菌的移液器

• 接种环或接种针

• 记号笔

• 75%酒精棉球（用于环境灭菌）

• 酒精灯

质量控制

参考WS/T 232 - 2002.《商品性微生物培

养基质量检验规程》、SN/T 1538.2-2007.《培

养基制备指南第二部分：培养基性能测试实

用指南》，详见附录一《质量控制》。

性状描述

使用前：米色干燥粉末状凝胶附于薄膜表面。

水化后：透明水样凝胶附于薄膜表面。

规格

25片/包。

贮存

• 未开封时，冷藏于 2~8摄氏度，贮存期

一年。

• 开封后可以用胶带封紧以防受潮，保存

再封的培养基无需冷藏，可于温度≤25摄氏

度，湿度<50％条件贮存，并在一个月内用完。

建议开封后在包装上标上打开日期，以便在

有效期内用完。






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配方

25摄氏度时，1毫升去离子水散布在 20

平方厘米的薄膜上，所含有的培养基浓度为：

使用说明

详细操作见附录二《培氏™ 使用方法卡通连环

画》及《培氏™ 判读说明》。

废弃物处理

所有标本、污染物和接种过的试剂在丢

弃之前，都需经高压灭菌，烧烬或浸泡杀菌

剂。

文献

[1] GB 4789.2-2010 食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定[S].

[2] SN/T 0169-1992 中华人民共和国进出口商品检验行业标准出口食品平板菌落计数[S].

[3] Buchbinder et al. Public Health Reports[Z]. 1951 66. 327-329.






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常见问题

培氏™ 微生物测试片是什么？

是一种微生物培养基，通过生物胶将营养成分镀在两层薄膜上，而使在两层薄膜间生长的

细菌，生长条件完全符合相应科学标准。这些标准包括，但不局限于：营养物质浓度，氧气浓

度，细菌生长调节剂（比如抗生素），显色染料等。

与传统的方法相比，她具有什么优势?

相较于传统琼脂平板法，培氏™微生物测试片每片操作耗时约 10秒钟，结果更精准。大大

缩减工时，更高性价比。

培氏™ 微生物测试片中可以生长哪些细菌？（具体取决于培养基配方和设计）

霉菌（fungus），好氧细菌(aerobic bacteria)，兼性厌氧细菌（facultative anaerobic bacteria），

微需氧细菌（microaerophilic bacteria），厌氧细菌（anaerobic bacteria）。

培氏™ 微生物测试片为什么不需要高压蒸汽灭菌？

每一片培氏™微生物测试片都按照“医疗器械辐照灭菌标准（国标 GB18280-2007）”灭菌，

可以直接使用。

培氏™ 微生物测试片一定要在无菌环境下使用吗？

我们推荐无菌条件下操作，而我们的实验数据显示，在洁净环境下使用培氏™微生物测试

片与无菌环境下没有显著差异。

培氏™ 微生物测试片如何满足细菌对营养物质的需求？

依照国标及相关科学文献，严格配比营养物质的浓度（在 25摄氏度，当 1毫升去离子水

散布在 20平方厘米的薄膜上时，其浓度符合相关标准），以确保细菌在严格的营养浓度下生

长。

培氏™ 微生物测试片如何营造细菌需氧环境？

针对所培养的细菌种类不同，对氧气的需求不同，选用不同透气性质的薄膜来营造：需氧

环境、兼性需氧环境、微需氧环境和厌氧环境。对需氧条件环境，采用透气薄膜材质，以确保

细菌呼吸。而对兼性需氧或微需氧条件环境，使用特殊工艺薄膜确保氧气供给达标。






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售后服务

在任何时候，我们竭尽全力保证客户完全满意和最高科学标准，如果您对产品有任何不满

意，我们遵循全额退款原则。这是承诺。

培氏 TM为杭州妙丽生物技术有限公司注册商标

杭州妙丽生物技术有限公司

电话：0571-56971232 | 13456846660客户服务：[email protected]官方网址：www.millerlabs.biz地址：杭州市滨江区江陵路 88号万轮科技园 3幢 313室邮编：310052微信公众号：Chinafoodsafety

Chinafoodsafety






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质控报告

杭州妙丽生物技术有限公司

年月日

操作人员（签章）：

审核人员（签章）：

主管人员（签章）：

附录一






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1.实验材料

1.1培养基

表 1培养基列表培养基编号名称生产商及货号

1培氏™微生物测试片杭州妙丽生物技术有限公司

产品代码：MB0101

2平板计数琼脂( Plate Count Agar, PCA ) OXOID公司

产品代码：CM0131B

3平板计数琼脂( Plate Count Agar, PCA ) Becton, Dickinson and Company

产品代码：247940

4平板计数琼脂( Plate Count Agar, PCA ) 广东环凯微生物科技有限公司

产品代码：022070

5胰酪胨大豆琼脂培养基 ( Tryptose Soya

Agar, TSA )

Becton, Dickinson and Company

产品代码：211043

1.2设备和仪器

表 2设备和仪器表仪器生产商和型号

恒温恒湿培养箱上海科辰实验设备有限公司，型号：HSP-150B

蒸汽灭菌锅上海印溪仪器仪表有限公司，型号：XFS-280B+（不锈钢）

超净工作台苏州苏洁净化设备有限公司，型号：PCR-1A

移液器（1000μL）大龙兴创实验仪器设备有限公司，型号: 720060

冰箱海尔集团，型号：HYC-260

1.3菌种

质控菌株由美国菌种保藏中心 American Type Culture Collection （ATCC）和中国普通微生

物保藏中心 China General Microbiological Culture Collection Center （CGMCC）购得，按照相

应 ATCC和 CGMCC菌种说明书保藏。

本质控流程严格遵照实验室菌种保存规定，采用液氮保藏法保存菌种，对冻存的质控菌株，

每季度定期进行 16S-rRNA分型检序和基因序列数据库比对，并参照《伯杰氏系统细菌学手册》

记录菌落形态及生理生化特征。

2.试验方法

2.1质控菌种准备

2.1.1质控菌活化






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将冰箱冻存的菌株接种到配制好的平板琼脂培养基上，按照 ATCC或者 CGMCC菌种说明

书描述条件活化或者培养。

2.1.2菌悬液制备

挑取培养基上的新鲜培养物加入适量无菌生理盐水混合均匀，制备浓度为 108CFU/mL的

菌悬液原液。

2.2接种培养

2.2.1对于各品牌 PCA和 TSA

对工作菌株菌悬液进行 10倍浓度梯度稀释至 10-8。分别取各稀释度菌悬液 1mL，加入已

制备的培养基平皿中，均匀涂布，每个稀释度三个平行实验，依次对每个菌株进行此操作。于

30℃，培养 72小时。选取菌落数在 30~300 CFU/mL培养基计数。

2.2.2 对于培氏™微生物测试片

对工作菌株菌悬液进行 10倍浓度梯度稀释至 10-8。分别取各稀释度菌悬液 1mL，加入测

试片中，每个稀释度三个平行实验，依次对每个菌株进行此操作。待其自由扩散完全，于 30℃，

培养 72小时。选取菌落数在 30~300 CFU/mL培养基计数。

3.质控检测结果




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表 3对比不同品牌 PCA质控结果

质控菌株1 2 3 4 5

10-6 10-7 10-6 10-7 10-6 10-7 10-6 10-7 10-6 10-7

鼠伤寒沙门氏菌 Salmonella typhimurium ATCC14028 214 23 213 24 230 22 245 24 233 23大肠埃希氏菌 Escherichia coli ATCC25922 253 25 267 26 280 28 285 28 277 27肺炎克雷伯氏菌 Klebsiella pneumoniae ATCC700603 227 23 203 21 239 23 225 22 230 22金黄色葡萄球菌 Staphylococcus aureus ATCC27217 274 26 251 23 268 28 275 27 278 27铜绿假单胞杆菌 Pseudomonas aeruginosa ATCC27853 227 24 209 20 230 22 225 24 229 23表皮葡萄球菌 Staphylococcus epidermidis ATCC12228 229 23 207 29 239 24 235 22 233 22枯草芽孢杆菌 Bacillus subtilis ATCC 6633 219 22 211 24 210 22 215 22 220 21宋内志贺氏菌 Shigella sonnei ATCC9290 226 22 264 22 230 21 245 22 230 27化脓性链球菌 Streptococcus pyogenes ATCC19615 293 29 279 27 293 28 295 29 297 30阴沟肠杆菌 Enterobacter cloacae ATCC13047 228 24 201 23 221 21 215 22 230 22副溶血性弧菌 Vibrio parahemolyticus ATCC17802 237 23 232 24 240 22 247 23 242 22单核细胞增生李斯特氏菌 Listeria monocytogenes ATCC19114 236 24 220 23 246 23 234 24 240 23奇异变形杆菌 Proteus mirabilis ATCC12453 207 24 220 21 240 23 255 23 210 20普通变形杆菌 Proteus vulgaris ATCC33425 207 20 200 19 210 21 209 20 211 21产气肠杆菌 Enterobacter aerogenes ATCC49701 238 21 202 24 226 21 235 28 240 22屎肠球菌 Enterococcus faecium ATCC27270 203 21 221 24 211 23 232 20 213 21粪链球菌 Enterococcus faecalis CGMCC(B)32223 243 24 236 23 224 22 225 20 240 23以上数据均为平均值。






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4.结论

实验结果显示（表 3），各质控菌株在培氏™微生物测试片上生长良好，与在其他材料上的生长无明显差异。各质控菌株在其上的生长率均大于 0.95，完全符合WS/T 232 - 2002.《商业性微生物培养基质量检验规程》，符合 SN/T 1538.2-2007.《培养基制备指南第二部分：培养

基性能测试实用指南》对培养基生长率测试的要求。

参考文献

[1] WS/T 232 - 2002. 中华人民共和国卫生行业标准《商业性微生物培养基质量检验规程》[S].[2] SN/T 1538.2-2007. 中华人民共和国国家标准食品安全国家标准食品微生物学检验菌落

总数测定[S].[3] GB 4789.2-2010. 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准《培养基制备指南第二部分：

培养基性能测试实用指南》[S].[4] 张莉莉, 《细菌总数及大肠菌群快速检测纸片的研究》[D].南昌大学, 2011.[5] George M. Garrity, Julia A. Bell and Timothy G. Lilburn, Taxonomic Outline of Prokaroyotes,Bergey’s Manual of Systematic Bacteriology[Z]. 2010 Second Edition.






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附录二

培氏™ 使用方法卡通连环画

【贮藏】

1、未开封时，冷藏于≤8℃，使用前室温静置 1小时后开封，去除露水。

2、开封后可以用胶带封紧以防受潮，并一个月内用完。

3、请在温度≤25摄氏度和湿度<50％条件下，保存再封的培养基，无需冷藏。

【样品制备】

4、称取（或吸取）样品并以1:10（质量比）或者更高比例用无菌液体稀释，置入适宜的

无菌容器内，如均质袋、稀释

瓶、自封塑料袋或者其他已灭

菌容器内

5、根据需要的稀释比例，添加适合的无菌稀释液包括缓

冲蛋白胨水（Buffered peptoneBuffer）、0.1%的蛋白胶水(ISO方法 6887) 、缓冲蛋白胶水(ISO方法 6579) 、盐溶液(0.85-0.90%)或蒸馏水等，严禁使用含有枸橼酸盐、酸性

亚硫酸盐或硫代硫酸盐的缓

冲液。

6、搅拌或均质样品，使用稀释盐酸或者氢氧化钠调节酸

碱度至 pH6.5－7.2。

【接种】

7、将测试片置于平坦表面处，揭开上层膜。

8、吸取 1毫升样液垂直滴加在测试片的中央处，避免气

泡。

9、允许上层膜直接落下，切勿向下滚动上层膜。






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10、用压板隆起面朝下，放置在上层膜中央处。

11、轻轻的压下，使样液均匀覆盖于圆形的培养面积上，切

勿扭转压板。

12、拿起压板，静置至少 1分钟让培养基凝固。

【培养】【判读】

13、测试片的透明面朝上，最多堆叠至 20片。

14、可目视、用标准菌落计数器或其它的照明放大镜计数，

并可参考《培氏™判读说明》

计算菌落数。

15、可分离菌落作进一步鉴定，即掀起上层膜，由培养胶

上挑取单个菌落。






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培氏™判读说明

图 1菌落总数=152

测试片中含有一种红色指示

染剂可使菌落着色，计算所有

红色菌落(不论其大小和颜色

深浅均计算之)。

图 2菌落总数=0

在培氏™菌落总数测试片上，

很容易解释，图 2测试片上没

有任何菌落生长。


图 3示有不多的菌落。


培氏™菌落总数测试片菌落数

适宜计数范围是 25-250，见图

4。


测试片面积约为 20cm2，当菌

落数超过 250个，如图 5所示，

为了估计菌落数，可选择其中

一个或数个有代表性菌落的

小方格(1cm2)，计算平均菌落

数，再乘以 20可得到整个测

试片上的菌落数。

图 6菌落总数=多不可计（TNTC）

(菌落总数估计值=103)

图 6所示培氏™菌落总数测试

片上菌落太多而无法计数

(TNTC)。






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图 7菌落总数=多不可计(TNTC）


有很多高数量菌落，使整个生

长区变粉色，如图 7所示，你

仅可在生长区边缘观察到单

个菌落，应计录为菌落太多无

法计数(TNTC)。



有时菌落分布出现不均衡，如

图 8所示，这也记录为 TNTC。



在图 9中培氏™菌落总数测试

片上的菌落,最先粗略一看是

可计数的，然而，你密切注意

到生长区边缘，能看到高密度

的菌落，应记录为 TNTC。

图 10菌落总数估计值=160

很少数菌种会液化培氏™菌落

总数测试片上的培养基，如图

10所示。若有这种现象发生，

可选择没有液化区的几个有

代表性菌落的小方格(1cm2)，

计算平均菌落数。不要计数液

化区内的红点。


在培氏™菌落总数测试片上菌

落为红色的。可与不透明的不

规则形状的事物颗粒区分开，

见圆圈 1和 2。



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