CICLO CELULAR. CROMOSSOMOS COMPACTAÇÃO DA CROMATINA.
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CICLO CELULARCICLO CELULAR
CROMOSSOMOSCROMOSSOMOS
COMPACTAÇÃO DA CROMATINACOMPACTAÇÃO DA CROMATINA
NÍVEIS DE COMPACTAÇÃO DA NÍVEIS DE COMPACTAÇÃO DA CROMATINACROMATINA
1ª: NUCLEOSSOMA - octâmero de histonas H2A, H2B, H3 e H4. H1. Redução no tamanho DNA entre 6 a 7 vezes.
2ª: SOLENÓIDE- 6 nucleossomos. 3ª :ALÇAS - solenóide- alças unidas - proteínas
não-histônicas (cromômeros). 4ª CROMOSSOMOS- enrolamento final.
1º NÍVEL: NUCLEOSSOMO1º NÍVEL: NUCLEOSSOMO
SOLENÓIDE
SOLENÓIDE
COMPRIMENTO DO CROMOSSOMO 1COMPRIMENTO DO CROMOSSOMO 1
DNADNA 15cm15cm NUCLEOSSOMANUCLEOSSOMA 1,5cm (1:10)~ 200pb1,5cm (1:10)~ 200pb SOLENÓIDESOLENÓIDE 0,3cm (1:50)~1200pb0,3cm (1:50)~1200pb
10a 100kb10a 100kb PRÓFASEPRÓFASE 5050m (1:3000)m (1:3000) METÁFASEMETÁFASE 1515m (1:10000)m (1:10000) BANDABANDA 10 a 20 milhões pb10 a 20 milhões pb
PRINCIPAIS CONSTITUINTES PRINCIPAIS CONSTITUINTES CROMOSSÔMICOSCROMOSSÔMICOS
Elementos Fundamentais de um Cromossomo:
Origens de Replicação;Origens de Replicação;
Um centrômero;Um centrômero;
Telômeros;Telômeros;
ORIGENS DE REPLICAÇÃO DO ORIGENS DE REPLICAÇÃO DO DNADNA
Cada cromossomos é replicado pelo início simultâneo da replicação em regiões múltiplas dentro do cromossomo Réplicons.
O processo replicação é controlado cada cromossomo será replicado totalmente apenas uma vez na fase S
CENTRÔMEROSCENTRÔMEROS
Constrição Primária seqüências DNA repetitivas + proteínas ( CENP-B).
Cópias seqüências múltiplas com 171 pb = DNA alfa.
Classificação da forma cromossomo. Sítio de ligação das cromátides irmãs.
CENTRÔMEROCENTRÔMERO
CENTRÔMEROCENTRÔMERO Formação cinetócoro= complexo DNA+
proteínas, durante a prófase.
Cinetócoro- interação complexa;
- microtúbulos;
CENTRÔMEROCENTRÔMERO
CLASSIFICAÇÃO CROMOSSÔMICACLASSIFICAÇÃO CROMOSSÔMICA
TELÔMEROSTELÔMEROS
Telômeros extremidades cromossômicas; DNA + proteínas, seqüências repetidas (TTAGGG)n
Função : Integridade cromossômica; estabilidade; evitam a degradação dos cromossomos (nucleases); replicação correta dos telômeros (telomerase).
Telomerase presente células embrionárias e germinativas; células somáticas parecem ter telomerase inativa morte celular por encurtamento telômero antes de ocorrer alteração cromossômica.
Redução : associação ponta a ponta; quebras ; translocações.
Telomerase ativa célula somática poderá indicar condição neoplásica.
SATÉLITESSATÉLITES
Cromossomos Acrocêntricos: 13, 14, 15, 21 e 22.
Ligado ao braço curto: Constrição secundária.
Sítio formação ribossomo (genes RNAr)
Regiões organizadoras nucleolares (RON/NOR)
TIPOS DE CROMATINATIPOS DE CROMATINA
EucromatinaEucromatina : ativa, menos : ativa, menos condensada, replica cedo na fase S.condensada, replica cedo na fase S.
HeterocromatinaHeterocromatina : seqüências : seqüências repetidas, mais condensada, replica repetidas, mais condensada, replica tarde na fase S.tarde na fase S.
H. ConstitutivaH. Constitutiva : sempre inativa : sempre inativa (pericentromérica e braço longo do (pericentromérica e braço longo do cromossomo Y ).cromossomo Y ).
H. FacultativaH. Facultativa : inativa e ativa : inativa e ativa (cromossomo X)(cromossomo X)
CULTURA CELULARCULTURA CELULAR
MEIO DE CULTURA: RPMI 1640, TC 199, HAM F10, dependerá do tipo celular a ser cultivado.
SORO FETAL: Bovino ou humano. Presença de fatores de crescimento celular.
AGENTE MITOGÊNICO: Fito-hemaglutinina, etc ... se for necessário..
AGENTE BLOQUEADOR DA DIVISÃO CELULAR: Inibidores do fuso: Colchicina; vinblastina.
SOLUÇÂO HIPOTÔNICA: Tumefação das células; Solução salina ( KCl; Citrato de sódio; etc...)
Cariótipo - TécnicaCariótipo - Técnica
Sangue perférico (linfócitos); Meio de cultura ( RPMI/199 ,soro, fito-
hemaglutinina) Incubar à 37ª C por 72 horas; Adicionar colchicina; e a solução hipotônica; Fixar o material; Distribuir em lâminas; bandas;
coloração(GIEMSA); Observar em MO; Selecionar, fotografar e montar o
cariótipo; Resultado.
ESQUEMA DO CARIÓTIPO EM SANGUE PERIFÉRICO
METÁFASE HUMANAMETÁFASE HUMANA
BANDAS GBANDAS G
cromossomos submetidos à ação de uma enzima - tripsina que desnatura as proteínas cromossômicas;
coloração posterior com corante de Giemsa;
as bandas G escuras são regiões ricas em AT.
cada cromossomo com padrão típica de regiões claras e escuras.
NOMENCLATURA
NOMENCLATURA DO CARIÓTIPO HUMANO – PADRÃO BG
BANDAS GBANDAS G
CARIÓTIPO FEMININOCARIÓTIPO FEMININO
BANDAS QBANDAS Q
cromossomos corados com corantes fluorescentes (quinacrina-mostarda; DAPI...);
regiões cromossômicas ricas em AT; cromossomos com padrão de bandas
brilhantes e opacas; análise feita em microscópio de
fluorescência (UV); diferenciação longitudinal dos
cromossomos.
BANDAS QBANDAS Q
BANDAS RBANDAS R
cromossomos são desnaturados com o uso de solução salina e calor;
coloração posterior com corante de Giemsa;
cada cromossomo com padrão típica de regiões claras e escuras;
as bandas R escuras são regiões ricas em GC;
padrão inverso das bandas Q e G; diferenciação longitudinal dos
cromossomos.
BANDAS RBANDAS R
COMPOSIÇÃO DAS BANDAS COMPOSIÇÃO DAS BANDAS CROMOSSÔMICASCROMOSSÔMICAS
Padrão de banda BANDAS G/ Q
BANDAS R
Propriedades
Contém DNA rico em AT
(55-60%);Replicação tardia na fase SContém poucos genes;
DNA rico em GC (50-60%)Replicação precoce na fase SContém a maioria dos genes
BANDAS DE ALTA BANDAS DE ALTA RESOLUÇÃORESOLUÇÃO
cromossomos no estágio de pró-metáfase, menos condensados;
técnica de bandas G, Q ou Rcoloração posterior com corante de Giemsa;
maior número de bandas;detecção de alterações cromossômicas estruturais menores.
SÍTIOS FRÁGEISSÍTIOS FRÁGEIS
zonas de instabilidade cromossômicas;
cultura especial com meio pobre em timidina e ácido fólico ou um inibidor da timidina sintetase (metatrexate ou fluordesoxiuridina);
coloração com uso de Giemsa; sítios frágeis visualizados como
falhas ou quebras cromossômicas; regiões susceptíveis a quebras
cromossômicas;
SÍTIO FRÁGIL
BANDAS CBANDAS C
cromossomos submetidos a ação de uma solução de hidróxido de bário;
coloração posterior com corante de Giemsa;
desnaturação da eucromatina e heterocromatina facultativa;
marcação da heterocromatina constitutiva;
regiões centroméricas dos cromossomos e outras regiões que contenham heterocromatina constitutiva (braço longo do Y).
BANDA C
Nomenclatura de Nomenclatura de BandasBandas
HIBRIDIZAÇÃOHIBRIDIZAÇÃO IN SITU IN SITU COM COM FLUORESCÊNCIA (FISH) FLUORESCÊNCIA (FISH) O FISH é a técnica na qual um segmento de O FISH é a técnica na qual um segmento de
DNA cromossômico específico (DNA cromossômico específico (sonda)sonda) é é hibridizado com cromossomos metafásicos, hibridizado com cromossomos metafásicos, profásicos ou interfásicos, e então profásicos ou interfásicos, e então observado com microscopia de observado com microscopia de fluorescência.fluorescência.
Sonda locus específicaSonda locus específica Sonda centroméricaSonda centromérica Sonda para marcar todo o cromossomoSonda para marcar todo o cromossomo
FISH FISH
FISH EM CÉLULA NEOPLÁSICA