Caratteristiche necessarie:Caratteristiche necessarie:• Coltivazione facileColtivazione facile• Basso costoBasso costo• Molto tessuto analizzabileMolto tessuto analizzabile• Possibile conservare i semi per lunghi periodiPossibile conservare i semi per lunghi periodi• Rilevabile prima dei danni all'ecosistemaRilevabile prima dei danni all'ecosistema• Organismi statici ma ambiente scelto dall'uomoOrganismi statici ma ambiente scelto dall'uomo

Vantaggi:Vantaggi:• le dimensioni relativamente le dimensioni relativamente

contenute del suo contenute del suo genomagenoma• le piccole le piccole dimensionidimensioni• il il ciclo di vita ciclo di vita brevebreve• la semplicità con la quale si possono la semplicità con la quale si possono

produrre produrre piante transgenichepiante transgeniche..

Piccola pianta utilizzata come Piccola pianta utilizzata come organismoorganismo modellomodello..

Utilizzato come indicatore per la presenza di Cd, estratto dall’Escherichia coli

viene posto a valle di un promotore dell’Arabidopsis il quale induce la RNA-polimerasi.

In presenza di Cadmio In assenza di Cadmio

la RNA-polimerasi sintetizza la β-glucoronidasi batterica.

La β-glucoronidasi trasforma l’X-Gluc in un dimero insolubile, di colore blu, che da la colorazione della pianta.

Non succede nulla

È presente cadmio nel terreno?È presente cadmio nel terreno?

• DifferenziazioneDifferenziazione eppendorfeppendorf ( + : presenza ( + : presenza cadmio; - : assenza cadmio)cadmio; - : assenza cadmio)

• Dalla Dalla piastra petripiastra petri si prelevano le piantine di si prelevano le piantine di arabidopsis, due coltivate in presenza di cadmio arabidopsis, due coltivate in presenza di cadmio per ogni eppendorf “+” e due, non contaminate, per ogni eppendorf “+” e due, non contaminate, per ogni eppendorf “-” per ogni eppendorf “-”

• aggiunta in ogni eppendorf di una aggiunta in ogni eppendorf di una soluzionesoluzione contenente il colorante X-Gluc contenente il colorante X-Gluc

• Inserimento di 1microlitro di Inserimento di 1microlitro di etanoloetanolo nella soluzione per nella soluzione per decolorare i tessutidecolorare i tessuti

• incubazioneincubazione dell’eppenderorf a 37°dell’eppenderorf a 37°

• Dopo una successiva nuova incubazione, si sottopongono Dopo una successiva nuova incubazione, si sottopongono le eppendorf a diversi le eppendorf a diversi lavaggilavaggi e si osserva la differenza e si osserva la differenza delle piantine con o senza cadmio.delle piantine con o senza cadmio.

Estrazione dell’RNA:Estrazione dell’RNA:• Macerazione di Macerazione di ArabidopsisArabidopsis• Si porta nell’eppendorf a 60° per alcuni minuti e si centrifuga Si porta nell’eppendorf a 60° per alcuni minuti e si centrifuga • Si preleva il surnatante da mettere nella nuova eppendorf. Si preleva il surnatante da mettere nella nuova eppendorf. • Si aggiunge dell’isopropanolo e ammonio acetato e si centrifugaSi aggiunge dell’isopropanolo e ammonio acetato e si centrifuga• Si tiene il pellet attaccato alla eppendorfSi tiene il pellet attaccato alla eppendorf• Si aggiunge etanolo e si centrifugaSi aggiunge etanolo e si centrifuga• Si tiene pellet a 60°Si tiene pellet a 60°• Si immette il pellet in acqua DEPC contenente DNAsi.Si immette il pellet in acqua DEPC contenente DNAsi.

Analisi:Analisi:•SI miscelia l’Rna estratto con il loading dye e si centrifugaSI miscelia l’Rna estratto con il loading dye e si centrifuga•Si trasferisce una quantità di miscela nel gel di agarosioSi trasferisce una quantità di miscela nel gel di agarosio•Comincia la corsa elettroforetica per 30 minComincia la corsa elettroforetica per 30 min

Bioremediation tecnica che utilizza sistemi biologici con l’obiettivo di ridurre l’inquinamento dell’aria, delle acque o del suolo

Una valida alternativa per Una valida alternativa per eliminare le sostanze eliminare le sostanze inquinanti in modo naturale..inquinanti in modo naturale..

Ex situ: Ex situ: prevedono la prevedono la rimozione fisica del rimozione fisica del materiale contaminato materiale contaminato

In situ: In situ: prevedono il prevedono il trattamento del trattamento del materiale sul posto materiale sul posto

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• Degradare moltissimi contaminanti organici, idrocarburi Degradare moltissimi contaminanti organici, idrocarburi

policiclici aromatici, coloranti sintetici, conservanti del policiclici aromatici, coloranti sintetici, conservanti del

legno, rifiuti da esplosivi e polimeri sinteticilegno, rifiuti da esplosivi e polimeri sintetici

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• Trattamento catalizzato da enzimiTrattamento catalizzato da enzimi

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• Ripulire il mare dal petrolio grazie ai batteri Ripulire il mare dal petrolio grazie ai batteri

idrocarburoclasticiidrocarburoclastici

..ha sviluppato biosensori in grado di ..ha sviluppato biosensori in grado di individuareindividuare e e misuraremisurare,, con estrema precisione, la presenza di più inquinanti in un con estrema precisione, la presenza di più inquinanti in un qualsiasi ambientequalsiasi ambiente

Consiste nel programmare il Consiste nel programmare il gene gene reporter reporter in modo che si attivi in in modo che si attivi in presenza di particolari sostanzepresenza di particolari sostanze

la presenza o l’assenza di un determinato la presenza o l’assenza di un determinato contaminante viene tradotta in una contaminante viene tradotta in una proprietà fisica misurabile grazie ad unproprietà fisica misurabile grazie ad un biosensore microbico biosensore microbico (formato da un (formato da un sensore e un trasduttore) sensore e un trasduttore)

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