Avaliação da Atividade In Vitro de Agentes

Antimicrobianos Frente a Cepas de M. massiliense

Envolvidas em Surtos de Infecção Hospitalar no

Brasil

Introdução

Surto de infecção por MCR no Brasil

PA

RJES

RS

GO

PR

Pacientes 511

Procedimentos:

Videocirurgias

Mesoterapias

Hospitais / Clinicas 19

Plano Amostral:

Análise 10% casos / hospital-

região

LACEN-ES

LACEN-RS

Instituto Evandro Chagas - PA

Isolamento

CULTURA

Micobactérias de crescimento rápido acromógenas

Identificação Molecular pelo Método de PRA-Identificação Molecular pelo Método de PRA-hsphsp6565

Spp pertencentes ao Grupo

Mycobacterium abscessus II

(UNIFESP e NDI-UFES)(UNIFESP e NDI-UFES)

Dice (Opt:2.00%) (Tol 2.0%-2.0%) (H>0.0% S>0.0%) [0.0%-100.0%]

HaeIII

100

80

BstEII

50

.00

80

.00

15

0.0

0

20

0.0

0

30

0.0

0

60

0.0

0

10

00

bp

HaeIII

40

.00

50

.00

60

.00

80

.00

10

0.0

0

15

0.0

0

20

0.0

0

25

0.0

0

40

0.0

0

60

0.0

0

10

00

bp

M. abscessus 2

M. abscessus 2

M. abscessus 2

M. abscessus 2

M. abscessus 2

M. abscessus 2

M. abscessus 2

M. abscessus 2

M. abscessus 2

M. abscessus 2

M. abscessus 2

M. abscessus 2

M. abscessus 2

M. abscessus 2

M. abscessus 2

M. abscessus 2

M. abscessus 2

M. abscessus 2

M. abscessus 2

M. abscessus 2

M. abscessus 2

M. abscessus 2

M. chelonae 1

M. abscessus 1

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039160

307826

307654

307828

307671

307685

307797

307809

307798

307724

307750

307792

307756

38978?

307595

307530

307488

307543

307531

307597

MG3-6

ATCC 14472

ATCC 35752

ATCC 19977

.

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Identificação Molecular por Identificação Molecular por

Sequenciamento dos genes Sequenciamento dos genes hsphsp65 e 65 e

rporpoBB

Mycobacterium massiliense

(UNIFESP)(UNIFESP)

Análise de DNA pela Técnica de Eletroforese de Campo PulsadoAnálise de DNA pela Técnica de Eletroforese de Campo Pulsado

Perfil Clonal

Mycobacterium massiliense

(UNIFESP)(UNIFESP)

Dice (Opt:2.50%) (Tol 1.5%-1.5%) (H>0.0% S>0.0%) [14.7%-72.2%]

PFGE

100

8060

PFGE

M. massiliense

M. massiliense

M. massiliense

M. massiliense

M. massiliense

M. massiliense

M. massiliense

M. massiliense

M. massiliense

M. massiliense

M. massiliense

M. massiliense

M. massiliense

M. massiliense

M. massiliense

M. massiliense

M. massiliense

M. massiliense

M. massiliense

M. massiliense

M. massiliense

M. massiliense

M. chelonae

M. bolletii

M. abscessus

Resecção cistos ovarianos

artroscopia de joelho

colecistectomia

colecistectomia

Prótese de mama

colecistectomia

cirurgica bariátrica

cirurgica bariátrica

Correção hernia de hiato

Apendicectomia

laparoscopic surgery

Correção estenose

artroscopia de joelho

colecistectomia

Endometriose

cirurgica bariátrica

laparoscopic surgery

cirurgica bariátrica

hernioplastia

Cirurgia ginecologica

artroscopia de ombro

esgoto tratado

M. chelonae type strain

M. abscessus type strain

Vitória, ES

Vitória, ES

Vitória, ES

Vitória, ES

Vitória, ES

Vitória, ES

Vitória, ES

Vitória, ES

Vitória, ES

Vitória, ES

Vitória, ES

Vitória, ES

Vitória, ES

Vitória, ES

Vitória, ES

Vitória, ES

Vitória, ES

Vitória, ES

Vitória, ES

Vitória, ES

Vitória, ES

Vitória, ES

307828

307825

307792

307809

307826

38978

39160

307530

307543

307531

307597

307654

307595

307687

307750

307724

307797

307798

307756

307671

307488

MG3-6

ATCC 35752

ATCC 14472

ATCC 19977

1

4

3

1

4

2

2

1

2

1

5

1

1

1

1

3

7

6

3

3

1

.

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Avaliação da Atividade In Vitro de Agentes Antimicrobianos Frente a Cepas de M. massiliense

Núcleo de Doenças infecciosas - UFES

Análise de Sinergismo

AntimicrobianoAntimicrobiano ConclusãoConclusão

Etambutol + Amicacina Indiferente

Etambutol + Cicloserina Indiferente

Etambutol + Claritromicina Indiferente

Cicloserina + Claritromicina Indiferente

Análise de Checkerboard Análise de Checkerboard Índice Fracional de Concentração Inibitória Índice Fracional de Concentração Inibitória

FIC = FIC = MIC D1 (combinado)MIC D1 (combinado) + + MIC D2 (combinado)MIC D2 (combinado)

MIC D1 (isolado) MIC D2 (isolado)MIC D1 (isolado) MIC D2 (isolado)

FIC > 2: antagonismo

FIC > 1.0 ≤ 2,0: indiferente

FIC > 0,5 ≤ 1,0: aditivo

FIC ≤0,5: sinergismo

Metodologia

CLSI NDI

Cultivo em ágar Cultivo em Ogawa

Suspensão Mc Farland 0,5

Suspensão Mc Farland 0,5

Diluição e inoculação em microplacas c/ antibióticos diluídos

seriadamente 1:2 em caldo Mueller-Hinton suplementado c/

ions

Diluição e inoculação em microplacas c/ antibióticos

diluídos seriadamente 1:2 em Middlebrook 7H9

Incubação a 30 ± 2°C (ar ambiente)

Incubação a 37°C / 5% CO2

Leitura visual após 72h (turbidez/crescimento)

Adição de Resarzurina após 72h

Leitura visual após 24h (coloração)

Metodologia adaptada do CLSI

Metodologia

• Metodologia adaptada do CLSI:

– Facilidade de leitura (maior sensibilidade)

Interferem na ação dos antimicrobianos ou

na leitura e interpretação dos resultados ?

Antibióticos (Intervalo)

Intervalo Mm S CCUG 50187

Amicacina 1-128 32 32

Cefoxitina 1-128 64 64

Cicloserina 2-256 >256 >256

Ciprofloxacina 0,5-64 16 8

Claritromicina 0,03-4 0,125 0,125

Etambutol 1-128 64 32

Gatifloxacina 0,25-32 32 8

Levofloxacina 0,5-64 32 16

Linezolida 0,25-32 16 32

Minociclina 0,25-32 4 0,5

Moxifloxacino 0,13-64 16 16

Sulfametoxazol 1-128 >128 128

Tigeciclina 0,03-4 0,5 0,5

Tobramicina 1-128 128 64

Cepa de referência CCUG 50187 M. massiliense

Metodologia Recomendada pelo CLSI

Moxifloxacino

Mm (PA)

Perspectivas

• Analisar o perfil de sensibilidade de cepas de M. massiliense frente a fluoroquinolonas em meio

de Mueller Hinton sem suplementação de ions

• Analisar o perfil de sensibilidade de cepas de M. tuberculosis frente a fluoroquinolonas em meio

Middlebrook liquido sem suplementação de ions

• Realizar um estudo multicêntrico para validação do método de microdiluição em placa com revelação por resarzurina

Secretaria do Estado da Saúde do Espírito Santo (CECIH)

Sylvia Cardoso Leão & Cristina Viana-Niero / UNIFESP

Solange A. Vinhas - NDI-UFES

Cynthia M.L. Pinheiro - NDI-UFESCynthia M.L. Pinheiro - NDI-UFES

Maria Luiza - Instituto Evandro Chagas

Marta Osório – LACEN-RS

Rita Lecco – LACEN-ES

Vitória-ES

Rafael Duarte – UFRJ

Cristina Lourenço- FIOCRUZ