DETECCION DE FLAVONOIDES EN EXTRACTO DE LAS HOJAS DE Ginkgo Biloba

L. (Ginkgoaceae) POR CROMATOGRAFIA DE CAPA FINA.

Rodríguez Vargas Andrea; López Zuluaga Katherine*

Programa de Licenciatura en Educación Básica con énfasis en Ciencias Naturales y Educación

Ambiental. Facultad de Ciencias de la Educación. Universidad del Tolima

____________________________________________________________________________

RESUMEN

El ginkgo biloba es la única especie viviente de una familia de plantas llamadas

Ginkgoaceas, tienen una gran importancia a nivel farmacológico ya que se utiliza para

tratar la insuficiencia cerebral, pérdida de memoria y según estudios, podría ser

utilizado en el futuro como medicamento para tratar el Ahlzaimer; esto se debe a la

cantidad de flavonoides que poseen las hojas de esta planta, entre los cuales se

encuentran glucósidos de flavonoles, derivados del kaempferol, derivados de la

quercetina y derivados de la isorhamnetina. Las cantidades de estos compuestos

varían de acuerdo al porcentaje de extracción que se logre. Diversos métodos se han

establecido para determinar la presencia y cantidad de flavonoides en los extractos de

sus hojas, como cromatografía de capa delgada, cromatografía liquida de alto

rendimiento, cromatografía de gases y espectrofotometría de masas entre los cuales la

cromatografía de capa delgada (TLC) se destaca como el método más sencillo para

determinar la presencia de los flavonoides en el ginkgo biloba. El propósito de esta

revisión es determinar un método para extraer flavonoides en extractos de las hojas

de la planta con un buen rendimiento y utilizar la cromatografía de capa delgada para

detectar y clasificar los diferentes compuestos de este tipo.

______________________________________________________________________

ABSTRACT

Ginkgo biloba is the sole specie alive in a vegetal family called Ginkgoaceas, this plant

has a great relevance at pharmacological level due to the use of their leaves to treat

cerebral insufficiency memory loss and following the studies in this field it could be used

as medicine to Ahlzaimer disease. It is due to the amount of flavonoids in the leaves of

ginkgo including flavones glycosides, kaempferol derivates, quercetina derivates and

isorhamnetina. The amounts of these compounds may vary according to the extraction

method. So many methods has been established in order to determinate the presence

and quantity of flavonoides in the extracts of their leaves, like gas chromatography, thin

layer chromatography, high performance chromatography and mass spectrometry. Of

these methods, the thin layer chromatography is the most simple to determinate the

presence of flavonoides. The aim of this review is to determinate a method to the

extraction of flavonoids in the leaves extract with a good recovery and use the thin layer

chromatography to detect and classify this compounds.

Palabras clave: Cromatografía de capa delgada. Flavonoides. Ginkgo Biloba.

INTRODUCCION

El Ginkgo Biloba es un árbol dioico de

aproximadamente 30 metros de altura

posee hojas flabeladas y es el único

sobreviviente de la familia

Ginkgoaceae. Ha adquirido importancia

farmacéutica gracias a sus beneficios

para el tratamiento contra

enfermedades cerebro vasculares2,

comercialmente se encuentra en forma

de suplementos alimenticios ya que no

ha sido aprobado por la FDA como

medicamento1 su efecto en la salud se

debe al contenido de sustancias

químicas derivadas del metabolismo

secundario de la planta, dentro de

dichos compuestos se pueden

encontrar biobalidos, ginkgolidos, y

glucósidos de flavonoides de estos1, el

ultimo ha sido utilizado en muchos

estudios y a este es al que se le

retribuye sus efectos en la salud

humana. De los métodos de detección y

cuantificación, la cromatografía de capa

fina de alto rendimiento (HPTLC) se

presenta como el más sencillo ya que

los reactivos utilizados para ello son de

fácil acceso y no tienen un alto costo

comparado con las demás variedades

de cromatografías. A continuación se

explicaran las técnicas utilizadas para el

estudio del ginkgo biloba, las pruebas

de reconocimiento, la extracción,

purificación y la cuantificación.

PRUEBAS DE RECONOCIMIENTO

La prueba de reconocimiento utilizado

convencionalmente para detectar la

presencia de flavonoides en una

muestra de ginkgo biloba es el ensayo

de Shinoda el cual consiste en hacer

reaccionar una muestra en etanol con

HCl concentrado y agregar magnesio

metálico, la muestra positiva presenta

un color rojizo, debido a que esta

prueba reconoce los núcleos

benzopirona* de algunas veces se

presentan falsos positivos. Debido a

esto, existe otra prueba de

reconocimiento la cual utiliza Zinc en

vez de Magnesio6 y diferencia los

flavononoles que dan una coloración

rojo- violeta de los flavonoles y

flavononas que presentan coloraciones

rosadas débiles.

Kaempferol

Quercetina

EXTRACCION Y PURIFICACION

Se han propuesto diversos métodos

para la extracción de flavonoides

presentes en las hojas de ginkgo biloba;

la mayoría utiliza etanol como solvente

para la extracción, aunque existen

técnicas como la extracción soxhlet la

cual utiliza un compuesto de polaridad

equivalente al analito, en este caso

Flavonoides y la sonicacion que se vale

de la energía del sonido1,2 para separar

partículas de compuestos en una

muestra, existen procedimientos que no

involucran equipo de laboratorio

especifico y que tienen una eficiencia de

extracción que va desde 70% hasta el

92 %2, este ultimo consiste en utilizar un

tamaño de hoja de entre 180 – 425 µm

un solvente de extracción compuesto de

etanol y agua en relación 7: 3, a pH 8 a

70 ºC. Este método de extracción

requiere un mecanismo de purificación

ya que para la cromatografía solo se

necesitan los flavonoides para su

clasificación y cualquier otra sustancia

podría entorpecer los resultados.

En la purificación de los glucósidos de

flavonoides y los flavonoides se han

propuesto diversos mecanismos entre

los cuales se destacan el uso de

enzimas pertenecientes a

microorganismos3 y el uso de camas de

adsorción4 , el inconveniente de estos

procedimientos es que son muy

costosos y necesitan equipos

específicos para desarrollarse, existe un

método de purificación más sencillo el

cual tiene dos procedimientos que son

sensibles para los diferentes tipos de

flavonoides2; el primero de ellos utiliza

polietilenglicol, sulfato de amonio y una

resina gelatinosa, este procedimiento es

especifico para glucósidos de

flavonoides2 y tiene una pureza de 20%

una vez terminado. El otro

procedimiento es especifico para

agliconas, y posee una pureza del 20 %

consiste en una Copolimerizacion de

alilbromuro mas etilenglicol y

dimetacrilato, el cual actúa como un

reticulante.

CLASIFICACION Y CUANTIFICACION

Dentro del estudio del ginkgo biloba se

han hecho grandes esfuerzos por

encontrar un mecanismo de

cuantificación de los flavonoides y

demás componentes de las hojas del

GB, desde cromatografía de capa fina2

hasta cromatografía de fluidos

supercríticos pasando por

espectrofotometría de masas y

cromatografía liquida1. Todos estos

procesos tienen distintos resultados y

distintas efectividades así como también

poseen aspectos que los favorecen y

aspectos en contra y no se ha

propuesto un consenso o un protocolo

que establezca una forma universal de

cuantificar este tipo de compuestos en

el ginkgo biloba. En esta revisión se

pretende implementar un mecanismo de

cuantificación y clasificación utilizando

la cromatografía en capa fina de alto

rendimiento ya que esta, a comparación

de la cromatografía de capa fina, provee

ventajas en cuanto a la detección

selectiva, cantidad de muestra, y

cuantificación2. El proceso de HPTLC en

extractos purificados de Flavonoides

posee diferentes variantes pero una de

la más efectiva es utilizar placas de

silica gel con dimensión 20 x 20 cm de

2 mm de espesor, un desarrollo

ascendente de 9 cm y una fase móvil de

acido fórmico al 5% en metanol – agua

(70: 30)2.

Fig. 2. Placa cromatografica de aliconas

y glicosidos de Flavonoides.

CONCLUSIONES

El ginkgo biloba es una planta

ampliamente estudiada en el campo de

la farmacología ya que posee

características únicas que benefician la

salud humana.

Los flavonoides presentes en la planta

pueden ser identificados por diferentes

métodos que pueden ser simples o muy

complejos y su efectividad varía de

acuerdo a la especificidad que se utilice.

El proceso de extracción establecido en

la revisión es simple y tiene un

rendimiento del 92 %, se presenta como

una alternativa sencilla al momento de

estudiar las propiedades químicas de

los flavonoides.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

1. Development and validation of a gas chromatographic–mass spectrometric method for simultaneous identification and quantification of marker compounds including bilobalide, ginkgolides and flavonoids in Ginkgo biloba L. extract and pharmaceutical preparations. Fengxia Deng, S. William Zito. Journal of Chromatography A, 986 (2003) 121–127.

2. Chemical analysis and quality control of Ginkgo biloba leaves, extracts,and

phytopharmaceutical. Teris A. van Beeka, Paola Montorob. Journal of Chromatography A, 1216 (2009) 2002–2032.

3. Enzyme-assisted extraction of flavonoids from Ginkgo biloba leaves:Improvement effect of flavonol transglycosylation catalyzed

by penicillium decumbens cellulose. Shuo Chena, Xin-Hui Xinga, Jian-Jun Huangb, Ming-Shu Xub. Enzyme and Microbial Technology 48 (2011) 100–105.

4. Use of expanded bed adsorption to purify flavonoids from Ginkgo biloba L. Jing Li

, Howard A. Chase. Journal of∗ Chromatography A, 1216 (2009) 8759–8770

5. High-Performance Thin-Layer Chromatography (HPTCL). ManMohan Srivastava. Editorial Springer. Pgs 3 – 6.

6. Plant Drug Analysis Athin Layer Cromatography Atlas. H .Wagner. S. Bladt. Second Edition.Springer.1996.pg.195-211