土の粒度試験，土の細粒分含有率試験...いたCreagerの方法などがある（表–1参照）。3．土の細粒分含有率試験 3.1 試験概要 試験は、高有機質土以外の土で、かつ、目開き75μm
Ames試験陽性のフォローアップに関するTK遺伝子...
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Ames 試験陽性のフォローアップに関する TK 遺伝子突然変異試験の有用性 の検討： MMS 共同研究の報告 安井学 1 ，鵜飼明子 1 ，福田隆之 2 ，馬庭二郎 3 ，山本春菜 4 ，今村匡志 5 ，藤島沙織 6 ，大谷尚子 7 ，成見香瑞範 8 ， 松﨑香織 9 ，岡田祐樹 10 ，中川宗洋 11 ，上田摩弥 12 ，小川久美子 13 ，本間正充 1 1 国衛研 変異遺伝部， 2 ボゾリサーチセンター， 3 アストラゼネカ， 4 日本たばこ産業， 5 イナリサーチ， 6 CERI， 7 アステラス製薬， 8 ヤクルト本社， 9 中外製薬， 10 帝人ファーマ， 11 LSIメディエンス， 12 安評センター， 13 国衛研 病理部 Ames 試験陽性にも関わらず発がん性試験陰性の化学物質 では，代謝の違いなど，細菌と哺乳類の生物学的な違いが試 験結果に影響している可能性が高い。そのため， Ames 試験 のフォローアップとして，ヒト細胞を用いる変異原性試験が 有用と考えられる。ヒトリンパ芽球細胞TK6 を用いる変異原 性試験は，その標準法が確立されている。そこで本共同研究 では， Ames 試験が陽性，かつ齧歯類の発がん性試験が陰性 である複数の化合物について， TK6 細胞を用いたチミジンキ ナーゼ遺伝子突然変異試験（ TK アッセイ）を実施した。 Ames 試験陽性物質に対して，フォローアップ試験としての 有用性について検討した。 要旨 方法 研究結果 全ての結果はまだ得られていないが（10物質中5物質），TKアッセイの結 果は，5 物質中4 物質が陽性でAmes 試験と一致率が高く，発がん性試験の 結果とは一致しなかった。 暫定的ではあるが，TK アッセイがAmes 試験陽性のフォローアップ試験と して十分かは不確実である。 今後，予定した全ての化合物を評価し，更にコメットアッセイ，γH2AXな どのデータも収集し，本実験データを詳細に分析したい。 結論 謝辞 ＊研究助成 ・厚労科研費 (H30-食品-一般-003) No 共同研究者名 実施施設名 被験物質名 （Ames試験-陽性，かつ齧歯類発がん性試験-陰性） CAS No. 1 今村 匡志 イナリサーチ 4-(Chloroacetyl)-acetanilide 140-49-8 2 橋爪 恒夫 山本 春菜 澁谷 香里 日本たばこ産業 2-(Chloromethyl)pyridine HCl 6959-47-3 3 成見 香瑞範 藤石 洋平 岡田 恵美子 ヤクルト本社 2,6-Diaminotoluene 823-40-5 4 藤島 沙織 CERI 2,5-Diaminotoluene 95-70-5 5 山本 美佳 大谷 尚子 アステラス製薬 HC blue no.2 [AKA ethanol, 2,2'-((4-(2- hydroxyethylamino)-3-nitrophenyl)imino)di-] 33229-34-4 6 福田 隆之 中村 真生 西村 諒一 ボゾリサーチ センター 8-Hydroxyquinoline [AKA 8-quinolinil] 148-24-3 7 上田 摩弥 安評センター Iodoform [AKA methane, triiodo-] 75-47-8 8 三島 雅之 松崎 香織 竹入 章 田中 健司 中外製薬 4-nitroanthranilic acid 619-17-0 9 岡田 祐樹 木本 崇文 帝人ファーマ 1-Nitronaphthalene 86-57-7 10 中川 宗洋 濱田 修一 梶原 昭彦 LSIメディエンス 4-Nitro-o-phenylenediamine 99-56-9 No. 被験物質名 Ames試験-陽性の条件 構造 短時間処理 (-S9 mix) 短時間処理 (+S9 mix) 連続処理 1 4-(Chloroacetyl)-acetanilide 陰性 陰性 陰性 TA1537の±S9で陽性 2 2-(Chloromethyl)pyridine HCl 陽性 陽性 - TA100の±S9で陽性 3 2,6-Diaminotoluene 実験中 実験中 実験中 TA100, TA97, TA98の+S9で陽性 4 2,5-Diaminotoluene 実験中 実験中 実験中 TA98, TA1538の+S9で陽性 5 HC blue no.2 陰性 陰性 陽性 TA98の-S9で陽性 6 8-Hydroxyquinoline 実験中 実験中 実験中 TA100, TA97の+S9で陽性 7 Iodoform 実験中 実験中 実験中 TA100, TA1535, TA1537の+S9, TA98の±S9で陽性 8 4-nitroanthranilic acid 陰性 陰性 陽性 TA100, TA1535の±S9で陽性 9 1-Nitronaphthalene 陰性 陰性 実験中 TA98, TA100の+S9で陽性 10 4-Nitro-o-phenylenediamine 陽性 陰性 陽性 WP2以外の株の±S9で陽性 研究目的 Fig.1 遺伝子変異-発がん性試験の比較（Ames菌株 vs 齧歯類 vs 培養細胞） Ames試験陽性で発がん性試験陰性の化合物に対して，ヒト培養細胞でも変異 原性を示すか？ Table 1 共同研究における試験実施施設および被験物質 Table 2 TKアッセイの結果 Fig.2 バクテリア特異的な反応でAmes試験だけ陽性になる場合 AMP397は，バクテリア特異的なニトロリダクターゼ活性により，Ames試 験だけで陽性になるケースが報告されている(Suter et al., Mutat. Res. 518, 181-194 (2002))。 Fig.3 ヒトリンパ芽球細胞TK6を用いるTKアッセイの概要 OECD TG490を参考に，用量設定試験，本試験の順に実施した。処理細 胞数は20x10 6 細胞，処理時間は4および24時間で行った。TKアッセイ本 試験の陰性対照は２系列，被験物質は１系列で実施した。形質発現期間は ３日間とした。統計解析には大森法(Omori et al., Mutat. Res. 517, 199-208 (2002))を用いた。 (2019年１月作成；禁転載）
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Ames試験陽性のフォローアップに関するTK遺伝子突然変異試験の有用性の検討：MMS共同研究の報告安井学1，鵜飼明子1，福田隆之2，馬庭二郎3，山本春菜4，今村匡志5，藤島沙織6，大谷尚子7，成見香瑞範8，松﨑香織9，岡田祐樹10，中川宗洋11，上田摩弥12，小川久美子13，本間正充1
1国衛研変異遺伝部，2ボゾリサーチセンター，3アストラゼネカ，4日本たばこ産業，5イナリサーチ，6CERI，7アステラス製薬，8ヤクルト本社，9中外製薬，10帝人ファーマ，11 LSIメディエンス，12安評センター，13国衛研病理部
Ames試験陽性にも関わらず発がん性試験陰性の化学物質では，代謝の違いなど，細菌と哺乳類の生物学的な違いが試験結果に影響している可能性が高い。そのため，Ames試験のフォローアップとして，ヒト細胞を用いる変異原性試験が有用と考えられる。ヒトリンパ芽球細胞TK6を用いる変異原性試験は，その標準法が確立されている。そこで本共同研究では，Ames試験が陽性，かつ齧歯類の発がん性試験が陰性である複数の化合物について，TK6細胞を用いたチミジンキナーゼ遺伝子突然変異試験（TKアッセイ）を実施した。Ames試験陽性物質に対して，フォローアップ試験としての有用性について検討した。
要 旨
方法
研究結果
全ての結果はまだ得られていないが（10物質中5物質），TKアッセイの結果は，5物質中4物質が陽性でAmes試験と一致率が高く，発がん性試験の結果とは一致しなかった。
暫定的ではあるが，TKアッセイがAmes試験陽性のフォローアップ試験として十分かは不確実である。
今後，予定した全ての化合物を評価し，更にコメットアッセイ，γH2AXなどのデータも収集し，本実験データを詳細に分析したい。
結 論
謝 辞＊研究助成・厚労科研費 (H30-食品-一般-003)
No 共同研究者名 実施施設名被験物質名
（Ames試験-陽性，かつ齧歯類発がん性試験-陰性） CAS No.
1 今村 匡志 イナリサーチ 4-(Chloroacetyl)-acetanilide 140-49-8
2橋爪 恒夫山本 春菜澁谷 香里
日本たばこ産業 2-(Chloromethyl)pyridine HCl 6959-47-3
3成見 香瑞範藤石 洋平
岡田 恵美子ヤクルト本社 2,6-Diaminotoluene 823-40-5
4 藤島 沙織 CERI 2,5-Diaminotoluene 95-70-5
5 山本 美佳大谷 尚子 アステラス製薬
HC blue no.2 [AKA ethanol, 2,2'-((4-(2-hydroxyethylamino)-3-nitrophenyl)imino)di-] 33229-34-4
6福田 隆之中村 真生西村 諒一
ボゾリサーチセンター
8-Hydroxyquinoline [AKA 8-quinolinil] 148-24-3
7 上田 摩弥 安評センター Iodoform [AKA methane, triiodo-] 75-47-8
8三島 雅之松崎 香織竹入 章田中 健司
中外製薬 4-nitroanthranilic acid 619-17-0
9 岡田 祐樹木本 崇文 帝人ファーマ 1-Nitronaphthalene 86-57-7
10中川 宗洋濱田 修一梶原 昭彦
LSIメディエンス 4-Nitro-o-phenylenediamine 99-56-9
No. 被験物質名Ames試験-陽性の条件
構造 短時間処理(-S9 mix)
短時間処理(+S9 mix) 連続処理
14-(Chloroacetyl)-acetanilide
陰性 陰性 陰性TA1537の±S9で陽性
22-(Chloromethyl)pyridine HCl
陽性 陽性 -TA100の±S9で陽性
32,6-Diaminotoluene
実験中 実験中 実験中TA100, TA97, TA98の+S9で陽性
42,5-Diaminotoluene
実験中 実験中 実験中TA98, TA1538の+S9で陽性
5HC blue no.2 陰性 陰性 陽性TA98の-S9で陽性
68-Hydroxyquinoline
実験中 実験中 実験中TA100, TA97の+S9で陽性
7Iodoform
実験中 実験中 実験中TA100, TA1535, TA1537の+S9,
TA98の±S9で陽性
84-nitroanthranilic acid
陰性 陰性 陽性TA100, TA1535の±S9で陽性
91-Nitronaphthalene
陰性 陰性 実験中TA98, TA100の+S9で陽性
104-Nitro-o-phenylenediamine
陽性 陰性 陽性WP2以外の株の±S9で陽性
研究目的
Fig.1 遺伝子変異-発がん性試験の比較（Ames菌株 vs 齧歯類 vs 培養細胞）
Ames試験陽性で発がん性試験陰性の化合物に対して，ヒト培養細胞でも変異原性を示すか？
Table 1 共同研究における試験実施施設および被験物質
Table 2 TKアッセイの結果
Fig.2 バクテリア特異的な反応でAmes試験だけ陽性になる場合AMP397は，バクテリア特異的なニトロリダクターゼ活性により，Ames試験だけで陽性になるケースが報告されている(Suter et al., Mutat. Res. 518, 181-194 (2002))。
Fig.3 ヒトリンパ芽球細胞TK6を用いるTKアッセイの概要OECD TG490を参考に，用量設定試験，本試験の順に実施した。処理細胞数は20x106細胞，処理時間は4および24時間で行った。TKアッセイ本試験の陰性対照は２系列，被験物質は１系列で実施した。形質発現期間は３日間とした。統計解析には大森法(Omori et al., Mutat. Res. 517, 199-208 (2002))を用いた。
(2019年１月作成；禁転載）
