UNIVERSIDAD CATOLICA DE TEMUCOFACULTAD DE ACUICULTURA Y CIENCIAS VETERINARIASESCUELA DE MEDICINA VETERINARIA

DETERMINACIN DE CIDO LINOLEICO CONJUGADO (CLA) EN LECHE DE BOVINOS DEL SECTOR VILCN, NOVENA REGIN.

Tesis de Grado presentada como parte de los requisitos para optar al grado de Licenciado en Medicina Veterinaria.

MARA DANIELA SANHUEZA GARCA.

TEMUCO CHILE20041

Profesor Gua

Dr. Juan Pablo Avilez, M.V., M.Sc.

_ __________________

Informante interno

Dr. Roberto Matamoros, M.V. M.Sc. Ph D.

_ __________________

Informante externo

Sr. Fernando Garca G. Ingeniero Agrnomo.

__________________

Profesor invitado

Sr. Luis Araneda. Ingeniero Agrnomo.

__________________

Fecha del Examen de Grado:

Temuco,25 de Noviembre 2004.

2

Agradecimientos.A Dios creador del universo y dueo de mi vida, muchas gracias!. A mi padre y madre por el apoyo incondicional a lo largo de mi carrera. A mis hermanos; Cone, Lorena y Francisca por su ayuda, apoyo y comprensin todos estos aos. A Claudio Garcs por ensearme que no hay lmites y lo que me proponga lo puedo lograr. A mi ta Cecilia Garca, por su gran apoyo y cario durante todos estos aos. A mis amigos Estrella Plaza, Sebastin Cuevas y Andrea Parra por su amistad incondicional, consejos, apoyo y por ensearme a enfrentar los obstculos con alegra. A los profesores; Fernando Garca y Juan Pablo Avilez por su predisposicin permanente e incondicional en aclarar mis dudas y por sus substanciales sugerencias durante la redaccin de la Tesis. A Gabriele Vonfabeck por su permanente disposicin y desinteresada ayuda.

3

NDICE DE MATERIAS.

ndice de materias ........................................................................................................4

ndice de tablas ............................................................................................................7

ndice de figuras ..........................................................................................................8

ndice de cuadros .........................................................................................................8

ndice de grficos .......................................................................................................10

Resumen......................................................................................................................12

Summary.....................................................................................................................14

1. Revisin Bibliogrfica ...........................................................................................16 1.1 Introduccin...........................................................................................................16 1.2 Composicin de la grasa de leche y CLA .............................................................18 1.3 Sntesis de cido linoleico conjugado....................................................................19 1.4 Estructura del cido linoleico conjugado..............................................................21 1.5 Ismeros de CLA....................................................................................................23 1.6 Beneficios de CLA en la salud...............................................................................264

1.7 Cuantificacin de CLA presente en la leche..........................................................28 1.8 Situacin mundial..................................................................................................28 1.9 Factores que afectan la produccin del cido linoleico conjugado en las vacas lecheras........................................................................................................................30 1.9.1.1 Factores alimenticios.......................................................................................32 1.9.1.2 Grasas, aceites y semillas oleaginosas............................................................34 1.9.1.3 Efecto de la energa en la concentracin de CLA...........................................37 1.9.1.4 Praderas..........................................................................................................39 1.9.2 Variacin entre individuos.................................................................................44 1.9.3 Raza....................................................................................................................46 1.9.4 Estacionalidad....................................................................................................47 1.9.5 Edad, paricin, periodo de lactancia y estado de salud.....................................48 1.10 Situacin Nacional...............................................................................................50 1.11 Consideraciones al aumentar el contenido de CLA en la leche..........................51 1.12 Contenido de CLA en leche y derivados..............................................................54

2. Objetivos..................................................................................................................57 2.1 Objetivo general....................................................................................................57 2.2 Objetivos especficos.............................................................................................57 3. Material y mtodos..................................................................................................58 3.1 Duracin del estudio .............................................................................................58 3.2 poca y lugar geogrfico......................................................................................585

3.3 Nmero de animales a utilizar...............................................................................58 3.4 Caracterizacin predial.........................................................................................59 3.4.1 Sistema de alimentacin.....................................................................................60 3.5 Caracterizacin de rebaos...................................................................................61 3.6 Muestreo de leche durante la lactancia.................................................................62 3.7 Tcnica de evaluacin de CLA en leche................................................................63 3.8 Anlisis de los alimentos.......................................................................................64 3.9 Anlisis estadstico................................................................................................64

4. Resultados y discusin............................................................................................65 4.1 Resultados y anlisis de la leche de los bovinos del predio A...............................65 4.1.1 Resultados y anlisis del alimento entregado a los bovinos del predio A durante la estacin de verano...................................................................................................70 4.2 Resultados y anlisis de la leche de bovinos del predio B....................................73 4.2.1 Resultados y anlisis del alimento entregado a los bovinos del predio B durante la estacin de verano...................................................................................................77 4.3 Resultados y anlisis de la leche de bovinos del predio C (gran productor) durante la estacin de otoo........................................................................................79 4.3.1 Medicin del alimento entregado a los animales del predio C en otoo...........84 4.4 Resultado y anlisis de la leche de bovinos del predio B (pequeo productor) durante la estacin de otoo.......................................................................................88 4.4.1 Medicin del alimento entregado a los animales del predio B en otoo...........926

4.5 Comparacin entre los predios del estudio en el contenido de cido linoleico conjugado en leche de bovinos, durante la misma estacin. .....................................97 4.5.1 Nivel de cido linoleico conjugado en leche de bovinos durante la estacin de verano..........................................................................................................................97 4.5.2 Nivel de cido linoleico conjugado en leche de bovinos durante la estacin de otoo..........................................................................................................................104 4.6. Diferencias en el nivel de CLA en la grasa de leche bovina en las estaciones de Verano y Otoo..........................................................................................................109 4.7. Anlisis estadstico.............................................................................................113

5. Conclusiones.........................................................................................................119

6. Referencias bibliogrficas....................................................................................121

ndice de tablas. Tabla 1. Diversos ismeros posicionales y geomtricos de CLA, ( % de ismeros totales) y su presencia en muestras de leche. .............................................................24 Tabla 2. Lista de algunos de los efectos benficos de CLA en la salud, informados en estudios biomdicos con modelos animales................................................................27 Tabla 3. Factores que afectan el contenido de cido linoleico conjugado, en la leche y carne de rumiantes..................................................................................................30

7

Tabla 4. Resumen de los factores dietticos que afectan la concentracin de cido linoleico conjugado (CLA) en la grasa de la leche.....................................................33 Tabla 5. El contenido de CLA, (% de grasa) en la leche de vacas, bajo diferentes condiciones dietarias...................................................................................................43

ndice de figuras. Figura 1. Va metablica propuesta para la biosntesis de C 18:2 cis-9, trans-11. (Bauman y Griinari, 2001)..........................................................................................20 Figura 2. Estructura de los isomeros de CLA trans-10, cis-12; cis-9, trans-11 y cido linoleico cis-9, cis-12. (Bauman et al., 2000)....................................................22

ndice de cuadros. Cuadro 1. Registro de la situacin productiva de las vacas del predio A, en Verano....................................................................................................................65 Cuadro 2. Resultados del anlisis de CLA (%p/p) en muestras de leche de vacas del predio A, en verano......................................................................................................67 Cuadro 3. Concentracin de cido linoleico y linolnico presentes en el alimento de vacas del predio A en verano. .....................................................................................70 Cuadro 4. Registro de la situacin productiva de las vacas del predio B, en Verano.....................................................................................................................73 Cuadro 5. Resultados del anlisis de CLA (%p/p) en muestras de leche de vacas del predio B, en verano......................................................................................................748

Cuadro 6. Total de cidos grasos presentes en el alimento de vacas del predio B...................................................................................................................................77 Cuadro 7. Registro de la situacin productiva de las vacas del predio C en

otoo............................................................................................................................79 Cuadro 8. Porcentaje de ismeros de CLA en las muestras de leche en vacas del predio C durante otoo................................................................................................81 Cuadro 9. Anlisis de ismeros de CLA (% p/p) y lpidos totales (%) en alimentos de vacas del predio C.......................................................................................................84 Cuadro 10. Registro de la situacin productiva de las vacas del predio B................88 Cuadro 11. Porcentaje de ismeros de CLA en las muestras de leche en vacas del predio B durante otoo................................................................................................90 Cuadro 12. Anlisis de ismeros de CLA (% p/p) y lpidos totales (%) en alimentos de vacas del predio B...................................................................................................92 Cuadro 13. Registro del nivel de cido linoleico conjugado en leche de bovinos, del predio A y el predio B durante la estacin de Verano, expresado en porcentaje....................................................................................................................97 Cuadro 14. Registro del nivel de cido linoleico conjugado en leche de bovinos, en el predio B y el predio C durante la estacin de otoo, expresado en porcentaje..................................................................................................................104

9

Cuadro 15. Total de ismeros de CLA y total de CLA encontrados en la grasa de la leche bovina, expresados en porcentaje, durante la temporada de verano (predio A y B) y otoo (predio C y B)...........................................................................................109 Cuadro 16. Valores promedios, desviacin estndar (Ds), valores mximos (Mx) y mnimos (Mn) y coeficiente de variacin (CV), para la concentracin de cada ismero, expresado en % respecto al total de grasa lctea presente en muestras de leche bovina en cada predio del estudio, durante la temporada de verano..............113 Cuadro 17. Valores promedios, desviacin estndar (Ds), valores mximos (Mx) y mnimos (Mn) y coeficiente de variacin (C.V.), para la concentracin de cada ismero, expresados en % respecto al total de grasa lctea presente en muestras de leche bovina en cada predio del estudio, durante la temporada de otoo................114 Cuadro 18. Coeficiente de variacin (C.V.) para cada ismero investigado y total de CLA durante verano y otoo, expresado en % respecto al total de materia grasa en leche...........................................................................................................................117 ndice de grficos. Grfico 1. Concentracin de cido linoleico conjugado en la grasa de la leche de bovinos, predio A.........................................................................................................67 Grfico 2. Concentracin de cido linoleico y linolnico (expresado en %), en los alimentos entregados durante la estacin de verano en el predio A...................................................................................................................................70 Grfico 3. Concentracin de cido linoleico conjugado en la grasa de la leche de bovinos, predio B..........................................................................................7310

Grfico 4. Concentracin de cido linoleico y linolnico (%), en los alimentos entregados durante la estacin de verano en el predio B...........................................77 Grfico 5. Ismeros de CLA (% p/p), presentes en la leche de vacas del predio C, durante otoo...............................................................................................................82 Grfico 6. Ilustracin del porcentaje de ismeros de CLA en pradera, silo y concentrado en la estacin de otoo en el predio C...................................................85 Grfico 7. Ismeros de CLA (% p/p), presentes en la leche de vacas del predio B, durante otoo...............................................................................................................91 Grfico 8. Ilustracin del porcentaje de ismeros de CLA en pradera, silo y concentrado en la estacin de otoo en el predio B....................................................92 Grfico 9. Comparacin del nivel de cido linoleico conjugado en leche de bovinos, entre los animales del predio B y predio A durante la estacin de verano........................................................................................................................100 Grfico 10. Comparacin del nivel de cido linoleico conjugado en leche bovinos, entre los animales del predio B y predio C, durante la estacin de Otoo.........................................................................................................................107

11

RESUMEN. Con el objetivo de determinar el nivel de cido linoleico conjugado (CLA) en leche bovina de los sistemas productivos del sector Vilcn de la IX regin de Chile, se analizaron muestras de leche de 21 bovinos de raza Frisn Negro provenientes de predios de pequeos y medianos productores, durante las estaciones de verano y otoo del ao 2004. Dentro del anlisis de la leche mediante cromatografa gaseosa, se determin durante la temporada de verano el nivel de los dos principales ismeros de CLA con funciones biolgicamente activas, el cis-9, trans-11 y el cis-10, trans-12. En otoo, se analizaron los ismeros cis-10, trans-12, el ismero cis-10, cis-12 y una mezcla de ismeros compuesta por cis-9, trans-11; cis-11, trans-9. Adems, se efectu un anlisis de los alimentos entregados a los animales durante ambas estaciones, a travs de cromatografa de gas-lquido, con el objetivo de determinar el nivel de cido linoleico presente en stos y de esta forma relacionarlo con la concentracin de cido linoleico conjugado medido en las muestras de leche en los bovinos del estudio. Obteniendo la mayor concentracin de cido linoleico conjugado, en leche procedente de aquellas vacas que reciban la mayor parte de su alimentacin desde las praderas, no as en los animales que se alimentaban con una menor proporcin de pasturas, por lo tanto, se registr la mayor cantidad de cis-9, trans-11 y cis-12, trans-10 en la grasa de la leche de los animales pertenecientes a los predios de pequeos productores. En ambas estaciones del estudio, el porcentaje de ismero cis-9, trans-11 (1.44% en verano y 1.42% en otoo) fue superior al encontrado para el ismero cis-10, trans-12 (1.07% en verano y 1.04% en otoo) en la grasa de leche bovina. Durante verano se obtuvo12

un valor total de 2.50 % en la grasa de la leche para los ismeros c-9, t-11 y c-12, t10 existiendo una tendencia a disminuir ligeramente en otoo (2.46%), debido a estas pequeas diferencias no se observ un efecto estacional en el sector Vilcn de la novena regin de Chile. Estos resultados demostraron que la alimentacin es el principal determinante en el aumento de CLA en leche siendo, principalmente, las dietas basadas en una mayor proporcin de praderas las que ms incrementan la cantidad de CLA en la grasa de la leche bovina.

Palabras clave: cido linoleico conjugado, leche bovina, alimentacin, praderas.

13

SUMMARY. With the aim to determine the level of conjugated linoleic acid (CLA) in bovine milk of the productive system of Vilcn are in the IX region in Chile, mik samples were analysed from 21 bovine cattle of Frisn Negro race coming from farm from small and medium producers, during summer and fall of the year 2004. Within the analyses of the milk through gas chromatography, it was determined that during the summer season, the level of the main two isomers of CLA with biologically active functions, cis-9, trans-11 and the cis-10, trans-12. In fall, the isomers cis-10, trans-12; cis-10, cis-12 and a blend of isomers composed by cis-9, trans-11; cis-11, trans-9 were analysed. Besides, it was performed an analyses of the food given to the cattle during both seasons through liquid gas chromatography, in order to determine the level of linoleic acid present in these and, this way to relate it with the concentration of CLA in milk coming from cows with the most of their food from the prairies, this not happening in animals fed with less grass. Then, the most important quantity of cis-9, trans-11and cis-12, trans-10 was registered in milk fat coming from the cattle belonging to farms of small landowners. In both seasons of the study, the percentage of the isomers cis-9, trans-11 (1.44% in summer and 1.42% in fall) was higher to the one found in isomer cis-10, trans-12 (1.07% in summer and 1.04% in fall) in the bovine milk fat. In summer, it was a total value of 2.50% in the milk fat for the isomers cis-9, trans-11 and cis-12, trans-10 existing a trend to diminish slightly in fall (2.46%), due to these differences it was not noted a season effect in the Vilcn are in the IX region of Chile.

14

These results showed that food is the main determinant in the increase of CLA in milk, being mainly the diets based on a higher proportion of pasture which increase the most the amount of CLA in the bovine milk fat.

Key words: conjugated linoleic acid, bovine milk, feeding, pasture.

15

1. REVISIN BIBLIOGRFICA.

1.1. INTRODUCCIN.

El cido linoleico conjugado (CLA), es un cido graso de cadena larga poliinsaturada (Pinto et al., 2002) con numerosas propiedades benficas en la salud y es un componente natural derivado de los productos alimenticios de rumiantes (Peterson et al., 2002). En la actualidad se le considera un regulador metablico, con efectos hipocolesterolmicos, antiaterognicos, anticarcinognicos,

antioxidantes, e incluso presenta efectos favorables en la prevencin y/o tratamiento de ciertas alergias alimentarias (Sanhueza et al., 2002). Este cido se encuentra presente en aceites vegetales comunes como; el aceite de soya o de maz y de forma natural en la carne de los rumiantes (vacas, ovejas y cabras), as como en la leche de los mismos, (Gagliostro et al., 2002), lugar donde puede alcanzar hasta 0,65% de los lpidos totales, (Fritsche y Steinhart, 1998).

El cido linoleico conjugado, CLA esta formado por un grupo de compuestos que contienen una mezcla de ismeros posicionales y geomtricos, incluso se han identificado ms de 20 diversos ismeros de este cido, (Beaulieu y Drackley, 1999). Siendo el ismero C18:2 (cis-9, trans-11), cido octadecadienico, producto intermedio de la biohidrogenacin del cido linoleico por la bacteria ruminal Butyrivibrio fibrisolvens (Pinto et al., 2002), el ms abundante en este grupo. Este ismero, encontrado en la grasa lctea, ha sido reconocido por la Academia Nacional de Ciencias, de EE UU, como el nico cido graso que ha presentado16

inequvocamente

la

propiedad

de

inhibir

la

carcinognesis

en

animales

experimentales (Kelly et al., 1998). Otro ismero conjugado importante es el C18:2 (cis-10, trans-12), el cual puede presentar hasta cuatro ismeros geomtricos (Dhiman et al., 1999).

Sehat et al., (1998) seala que el ismero cis-9, trans-11 tendra un efecto anticancergeno y el ismero trans-10, cis-12 actuara en el aumento de la masa muscular y en la disminucin del porcentaje de grasa, pero como el CLA encontrado en carne y los productos lcteos es en su gran mayora el ismero cis-9, trans-11, se indica que las funciones biolgicas especficas del CLA pueden ser debido a la presencia de un solo ismero.

Los altos niveles de CLA en los rumiantes, se deben a que son productos intermediarios en la hidrogenacin ruminal del cido linoleico (cis-9, cis-12 C 18:2) a cido esterico (C 18:0). Resultados recientes sugieren que las clulas mamarias de los rumiantes (y tambin las adiposas) seran capaces de sintetizar el cis-9, trans-11 CLA a partir del cido vacnico y otros ismeros, por accin de la enzima delta-9 desaturasa sobre los trans C18:1 (Bauman et al., 2001). Esta enzima se encuentra en el intestino y glndula mamaria, entre otros tejidos, y acta sobre el cido transvacnico, (trans - 18:1) formando el cido linoleico producido en el rumen por la accin bacteriana, y que posteriormente, forma parte de la grasa de la leche, (Gagliostro et al., 2002).

17

La concentracin de CLA en los productos lcteos es una funcin directa de su concentracin en la leche cruda, la que puede variar ampliamente ante manipulaciones precisas de la dieta en el animal. La formulacin de un concentrado tal vez sea la medida ms efectiva, rpida y de fcil implementacin a fin de modificar la composicin de la grasa butirosa en forma natural. Los resultados extranjeros demuestran un aumento potencial del orden del 300% en el contenido de CLA en leche a travs de manipulaciones precisas en la alimentacin, (Gagliostro et al., 2002). Actualmente, diversos estudios estn modificando la dieta del animal para que la cantidad de CLA en la leche producida se incremente de forma considerable, con el fin de obtener un producto que resulte aun ms beneficioso para la salud humana.

1.2 Composicin de la Grasa de Leche y CLA. Simopoulos et al., (1999) sealan que los cidos grasos constituyen no slo un aporte energtico que duplica al aporte de los carbohidratos y de las protenas, sino que varios de ellos tienen funciones metablicas especficas. Algunos de los cuales se caracterizan por su importancia en la nutricin humana, como es el caso de los cidos grasos omega-6 y omega-3 (Sanhueza et al., 2002). Eastridge y Qiu, (2001) sealan que algunos cidos grasos encontrados en la grasa lctea, incluyen aquellos que son sintetizados de nuevo en la glndula mamaria a partir del acetato y del -hidroxibutirato, extendindose a los cidos grasos de cadena media, de 4 a 16 tomos de carbn. Parte del cido palmtico (16:0) y todos los cidos grasos con 18 tomos en la cadena de carbn se derivan de los lpidos de la sangre, los que son18

predominantemente de origen diettico, con menor importancia (excepto en el periodo de la lactancia temprana, en el cual los cidos grasos endgenos aumentan, www.nutrihelpanimal.com.ar), son movilizados desde el tejido adiposo. Los cidos grasos de carbn 14 y 16 son responsables del concepto de la grasa de leche como grasa saturada, y tambin contribuyen de manera importante a la estructura fsica de la grasa. Sin embargo, un gran nmero de cidos grasos en grasa de leche, est ganando una cantidad creciente de atencin, ya que la mayora se presenta en el metabolismo microbiano rumiante y son as nicos en estos animales. Entre stos se encuentra el CLA (Eastridge y Qiu, 2001), el que debido a su origen ruminal, tambin se le identifica como "cido rumnico" (Kramer et al., 1998).

1.3 Sntesis de cido linoleico conjugado. Los compuestos denominados CLA representan productos que se forman como intermediarios durante la biohidrogenacin ruminal del cido linoleico (cis-9, cis-12 C 18:2) a cido estarico (C 18:0) (Bauman et al., 2001), por la bacteria Butyrivibrio fibrisolvens (Kepler et al., 1966) y otras bacterias del rumen (Kritchevsky, 2000) o de la conversin endgena del cido transvacnico, (t-11 C, 18:1 TVA) por la enzima delta-9 desaturasa en la glndula mamaria, (Corl et al., 2001).

Como se ilustra en la figura 1, la mayor parte de este cido en la grasa de la leche se sintetiza a travs de la va delta 9-desaturasa (D9- d), a partir del cido transvacnico (TVA), un intermediario en la biohidrogenacin ruminal del cido19

linoleico y linolnico (Griinari et al., 2000). El resto del CLA en la grasa de la leche surge directamente del CLA absorbido por el tracto digestivo, para luego ser producido en el rumen como un intermediario en la biohidrogenacin del cido linoleico.

Las clulas mamarias de los rumiantes (y tambin las adiposas) seran capaces de sintetizar el cis-9, trans-11 CLA a partir del TVA y otros ismeros por accin de la enzima delta-9 desaturasa sobre los trans C18:1 (Bauman et al., 2001). La concentracin de esta enzima en la grasa de la leche, es sumamente variable y depender del tiempo durante el cual la vaca est consumiendo pasturas. Las condiciones ptimas para la sntesis de CLA en la leche se producen a partir del aporte de cidos grasos insaturados provenientes de forrajes frescos que aseguran un ambiente ruminal ptimo para la fermentacin, (www.nutrihelpanimal.com.ar).

C18:2 cis-9, cis-12 (cido linoleico) Isomerasa C18:2 cis-9, trans-11 (CLA) Reductasa C18:1 trans-11 (cido vacnico) Reductasa C18:0 (cido esterico)

C18:2 cis-9, cis-12 (cido linoleico) C18:2 cis-9, trans-11 (CLA) D9-d C18:1 trans-11 (cido vacnico)D9-d

C18:0 C18:1 cis-9 (cido esterico) (cido oleico) Glndula mamaria o tejido Adiposo.

Rumen.

Figura 1. Va metablica propuesta para la biosntesis de C18:2 cis-9, trans-11. (Bauman y Griinari, 2001).20

1.4 Estructura del cido linoleico conjugado. La isomera geomtrica de los cidos grasos es importante en trminos nutricionales. La gran mayora de los cidos grasos que se encuentran naturalmente poseen isomera cis, sin embargo en la dieta habitual de los humanos se consume una pequea, pero no despreciable, proporcin (1g a 7 g/da) de cidos grasos con isomera trans (Valenzuela y Mogardo, 1999).

La estructuracin de los dobles enlaces de los cidos grasos naturales obedece a un patrn muy caracterstico y conservador. En un cido graso diinsaturado, ambos enlaces siempre estarn separados por un carbono intermedio que no participa de la estructura de instauracin. Esto es en un cido graso donde los dobles enlaces estn entre los carbonos 9-10 y 12-13, el carbono 11 no participar de la estructura de instauracin. Esta sera una estructura no conjugada y al carbono 11 se le designara como un carbono metilnico intermedio. Este es el caso de la estructura de la mayora de los cidos grasos en su forma natural. Sin embargo, como consecuencia de la manipulacin tecnolgica de las grasas y aceites, o en casos muy particulares, por efecto de la metabolizacin a nivel celular de ciertos cidos grasos, es posible que un doble enlace cambie de posicin, siguiendo el ejemplo anterior, desde la posicin 9-10 a la 10-11 o de la posicin 1213 a la 11-12. En ambos casos desaparecera el carbono metilnico intermedio y el cido graso formado se transformara en una estructura conjugada. La conjugacin de los dobles enlaces puede, adems, ocasionar un cambio en la isomera espacial del cido graso. Esto es, en un cido graso diinsaturado cuyos dobles enlaces

21

tienen isomera cis (c), uno de estos dobles enlaces, o ambos, pueden adoptar la isomera trans (t).

El CLA (cis-9, cis-12), un cido graso omega-6, es muy abundante en el reino vegetal y en la grasa animal. Bauman, (2002) seala adems, que el CLA, est representado por una mezcla de ismeros posicionales y geomtricos de un cido graso de 18 carbonos con dos enlaces dobles. Los pares de enlaces dobles del cido graso poseen, generalmente, un grupo metileno entre ellos, pero el CLA presenta un arreglo conjugado. La presencia de cidos grasos con enlaces dobles conjugados, fue demostrada en 1935 cuando se estudiaba la leche de animales alimentados a pastoreo. Tericamente, muchos ismeros de CLA pueden diferir en las posiciones del enlace doble (por ejemplo, 7-9, 8-10, 9-11, 10-12, y as sucesivamente). Los dos ismeros de CLA, ms estudiados son cis-9, trans-11 y trans-10, cis-12. En la figura 2, sus estructuras se diferencian del cido linoleico, un cido graso diettico esencial que tambin contiene 18 carbonos y 2 enlaces dobles. Diferencias adicionales, entre los ismeros de CLA, pueden existir en la configuracin del doble enlace, como los cis-trans, trans-cis, cis-cis o trans-trans, siendo todos posibles.

22

CLA trans-10, cis-12

CLA cis-9, trans-11

cido linoleico cis-9, cis-12

Figura 2. Estructura de los ismeros de CLA trans-10, cis-12; cis-9, trans-11 y cido linoleico cis-9, cis-12. (Bauman et al., 1999).

1.5 Ismeros de CLA. Los cidos linoleicos conjugados representan una mezcla de ismeros posicionales y geomtricos (tabla 1) (Bauman, 2002).

Este cido (linoleico conjugado) presenta diferentes ismeros; cis-7, trans-9; cis9, trans-11; cis-11, trans-13 principalmente, (Fritsche y Steinhart, 1998), pero, como se indica en la tabla 1, la forma biolgicamente activa y ms importante de los CLA est representada por el ismero cis-9, trans-11 compuesto que representa ms del23

90% de los CLA y constituye el nico cido graso capaz de inhibir la carcinognesis en animales experimentales (Parodi, 1999), en la leche de rumiantes es el ismero ms frecuente, cuyos niveles fluctan en 80%-90% (Chin et al., 1993). No obstante, cis-11, cis-9 recientemente ha sido indicado como un ismero ms efectivo contra clulas cancergenas mamarias (Tanmahasamut et al., 2004), pero su presencia en la leche y carne de rumiantes se ha informado raramente, (Khanal y Olson, 2004).

Aunque biolgicamente activo, el ismero

cis-12, trans-10 se encuentra

presente en cantidades menores al 5% del CLA total y no se ha detectado en muchos casos. Otro ismero de importancia cuantitativa, para el cual su papel biolgico es desconocido es cis-9, trans-7 que comprende el 3 a 16% de CLA total en productos rumiantes (Yurawecz et al., 1998).

Baumgard et al., (2000) demostraron que el ismero de CLA trans-10, cis-12 es un inhibidor potente de la sntesis de la grasa de la leche. Recientemente, las investigaciones que usan los mtodos analticos ms avanzados han revelado que la grasa de leche tiene vestigios de concentraciones de muchos ismeros adicionales de CLA. Por ejemplo, el anlisis de los productos comerciales como el queso demostr contener como ismero predominante (78-84%) al cis-9, trans-11, pero los ismeros adicionales de CLA fueron identificados como siete trans-trans (59%), tres cis/trans (cis-trans o trans-cis) (10-13%) y cinco ismeros cis-cis ( montaa> tierra baja Fresco>conservado Positivo Negativo Mnimo Positivo Positivo, ms que el aceite de semillas asadas Positivo, ms que semillas procesadas Positivo, tan eficiente como las semillas vegetales Positivo, tan eficiente como los aceites vegetales Positivo Positivo >6.0 pH positivo Positivo Positivo Probablemente positivo Probablemente positivo Rumiantes>no-rumiantes Holstein>pardo suizo>Normando>Jersey Mnimo Mnimo

**

Positivo con alta actividad de delta9desaturasa. C. PROCESAMIENTO, GENERAL DE PRODUCTOS LCTEOS. Debatible

** An no se ha determinado el efecto.Modificado de Khanal y Olson, (2004)31

1.9.1. Factores alimenticios. Bauman, (2002) seala que las variaciones en el contenido de CLA en la grasa de leche entre distintas especies de bovinos se deben, principalmente, a la dieta.

Durante los ltimos 5 aos de investigacin se han identificado muchos factores dietticos que afectan el contenido de CLA en la grasa de la leche. Como se resume en la tabla 4, Bauman et al., (2001) seala que estos efectos dietticos se agrupan en categoras concernientes al mecanismo potencial por el cual pueden actuar.

q

La primera categora incluye los factores dietticos que proporcionan

sustratos lpidicos para la biohidrogenacin en el rumen. Los aceites vegetales con alto contenido de cidos linoleicos y linolnicos son particularmente eficaces. stos conducen al aumento de la salida desde el rumen de cido vacnico y en menor grado a los ismeros de CLA.

q

El segundo grupo consiste en los factores dietticos que alteran el ambiente

ruminal de tal modo que afectan las bacterias implicadas en la biohidrogenacin del rumen. El forraje juega un rol importante y puede afectar marcadamente el

ambiente ruminal y la biohidrogenacin en el rumen.

q

El tercer grupo incluye los factores dietticos que implican una combinacin

de sustratos lpidicos y de la modificacin de la poblacin de bacterias en el rumen. El pasto, es un ejemplo, ya que aquellos animales que se alimentan de una pradera exuberante durante la primavera obtendran una proporcin de CLA en la grasa de32

la leche doble o triplemente mayor que aquellas dietas basadas en maz. Sin embargo, cuando el pasto madura esta diferencia en CLA disminuye.

Pero, tambin la grasa de la leche y el contenido de CLA puede ser aumentado agregando suplementos dietticos de CLA. Las ultimas investigaciones han establecido que los suplementos dietticos de CLA tienen como resultado un aumento de la dosis relacionada en la concentracin de CLA en la grasa de leche. Los suplementos han contenido varios ismeros de CLA, principalmente trans-8,cis10 CLA, cis-9, trans-11 CLA, trans-10, cis-12 CLA y cis-11, trans-13 CLA, y los resultados demostraron que todos los ismeros de CLA eran transferidos a la grasa de la leche, (Bauman, 2002).

Tabla 4. Resumen de los factores dietticos que afectan la concentracin de cido linoleico conjugado (CLA) en la grasa de la leche. Primera Categora Sustratos lipdicos Aceites vegetales Semillas oleaginosas Aceite de maz y ensilaje Grasas animales Segunda Categora Alteracin del ambiente ruminal Forraje/ concentrado Nivel de carbohidratos no estructurales Alimentacin restringida Aceite de pescado y aceites en general Algas marinas Ionoforos Dietas buffers Modificado de Bauman, (2002). Tercera Categora Combinacin de ambas Pasturas Etapa de crecimiento del forraje

33

1.9.1.2 Grasas, aceites y semillas oleaginosas. La manipulacin de la dieta animal implica principalmente el suplementar cido linoleico o cidos linolnicos (cis-9, cis-12, cis-15 C18:3, LNA) como sustratos para la biohidrogenacin en el rumen. Dependiendo del tipo de aceite vegetal o de semillas oleaginosas, que posean cido linoleico o cido linolnico (LNA), como las pasturas en las que predomina el LNA y aceite de pescado, el que contiene cidos grasos insaturados de 20 o 22 carbonos, el efecto diettico se relacionaba ms a la composicin de los cidos grasos insaturados de la materia utilizada, que a cualquier otro factor en la alimentacin, (Khanal y Olson, 2004). Santos et al., (2001), estudiaron el efecto de la suplementacin de lpidos en la racin y comprobaron que estos incrementaban los cidos estericos, cido oleico y CLA, contenidos en la leche. La adicin de aceite de soya en la dieta, disminuy el contenido de cido linoleico y cidos grasos saturados, e increment el nivel de CLA y cidos grasos no identificados. En consecuencia, aumentaba el contenido de CLA en la grasa de la leche.

Dhiman et al., (2000), agreg a la racin de vacas semillas oleaginosas asadas y extrudas y demostr que estas presentaban un mayor efecto en el contenido de CLA en la leche que las semillas crudas, lo cual era producto de la baja liberacin de aceite que contienen las semillas crudas en el rumen, comparadas con aquellas semillas que son tratadas con calor. La baja liberacin de aceite, conduca a la biohidrogenacin completa de cido linoleico a cido stearico en el rumen, lo que produca poco o ningn efecto en el contenido de CLA en la grasa de la leche. Adems, los microorganismos responsables de la biohidrogenacin de cidos34

grasos poliinsaturados deben tener acceso al aceite, que probablemente, es muy bajo en semillas crudas, (Khanal y Olson, 2004). Chouinard et al., (1997) administraron soyas procesadas: molidas, micronizadas, asadas, o extrudas y demostraron que al alimentar a las vacas con soyas extrudas el contenido de CLA en leche era ms alto, que aquellas alimentadas con soyas molidas. En otro estudio ms reciente Chouinard et al., (2001) demostraron que las soyas extrudas, micronizadas o asadas producan un incremento doble o triple sobre el contenido de CLA en la leche, lo que no suceda en vacas alimentadas con una dieta control que contena soyas sin procesar. Al respecto Khanal y Olson, (2004) indican que los cidos grasos eran accesibles a los microbios del rumen cuando las semillas oleaginosas eran procesadas y ese tratamiento trmico aumentaba an ms la accesibilidad.

Whitlock et al., (2002) sealaron que el aceite de pescado es tan efectivo en el aumento del contenido de CLA en la leche, como los aceites vegetales o las semillas oleaginosas. Pero, si se administra una gran cantidad de aceite de pescado (200 o 400 ml/d), se reduce generalmente la grasa de la leche, por lo tanto, disminuye el CLA, as como el rendimiento de TVA. Sin embargo, Abu-Ghazaleh et al., (2003) demostraron que era posible aminorar la reduccin de la grasa de la leche combinando el aceite de pescado con otras fuentes de cido linoleico y cidos linolnicos. Por ejemplo, al administrar 1% de aceite de pescado junto a 2% de semillas de girasol que contenan un elevado nivel de cido linolnico, demostraron que se obtena una mayor concentracin y produccin de CLA y TVA, que con 1% de aceite de pescado ms una fuente de grasa del 2% rica en cido esterico.35

Asimismo, en algunos ensayos se lograron tambin altas concentraciones de CLA en grasa de leche de vacas, alimentadas con 1% a 2% de aceite de girasol junto a 3% de aceite de pescado durante la lactancia, estos altos niveles siempre estaban asociados con un elevado contenido de cido vacnico y con una importante sntesis endgena de delta-9 desaturasa en la glndula mamaria, (www.nutrihelpanimal.com.ar).

Abu-Ghazaleh et al., (2002), indicaron que era posible aumentar la concentracin de TVA y CLA desde 91% a 109% cuando se administraba aceite de pescado y extrudo de soya en forma conjunta, pero en forma separada no se observaban efectos significativos. Lo que sugera que el aceite de pescado junto al extrudo de soya aumentaba la produccin de CLA y de TVA ms que otras fuentes dietticas de cido linoleico.

Khanal y Olson, (2004) sin embargo, indican que el mecanismo por el cual la suplementacin con aceite de pescado aumentaba la concentracin de CLA y TVA en la leche an no estn claros. El aceite de pescado es rico en cidos grasos poliinsaturados de cadena larga de 20 y 22 carbonos. Y estos cidos grasos

probablemente, no son capaces de producir CLA y TVA directamente durante la biohidrogenacin en el rumen. Se ha propuesto que las largas cadenas de cidos grasos poliinsaturados de aceite de pescado, inhiben la biohidrogenacin completa de cido linoleico en el rumen, inhibiendo as el crecimiento de bacterias

36

responsables de hidrogenar TVA, o inhibiendo las hidrogenasas, lo que conducira a un gran escape de TVA desde el rumen.

Khanal y Olson, (2004) adems, indican que otra forma de suplementar cidos grasos es la grasa o sebo, la cual es rica en cidos grasos de cadena larga saturada, administrndola de dos formas; protegida o no-protegida. Pero, su efecto en el CLA es mnimo (Chouinard et al., 1998), debido a que el carbono 18 de cido graso insaturado es el que produce CLA o TVA a travs de la biohidrogenacin en el rumen, no as el cido graso saturado que se presenta en grandes cantidades en la grasa. Pantoja et al., (1996) indicaron que aquellas vacas suplementadas con 4% o 5% de sebo en su dieta, presentaban una baja concentracin de TVA (1.6 %) en la grasa de la leche. Al respecto, Chilliard et al., (2001) sealaron que la grasa protegida permite un incremento en el rendimiento de la grasa en la leche, el porcentaje de cido esterico de la leche y cidos oleicos, a partir de la cadena de cidos grasos. Sin embargo, es necesario evaluar las distintas estrategias de alimentacin que podran cambiar otros aspectos de la grasa de la leche, la calidad, el sabor, la estabilidad oxidativa o el valor industrial.

1.9.1.3 Efecto de la energa en la concentracin de CLA. Se ha demostrado que las vacas que han sido alimentadas con menos energa que la requerida, han producido una grasa de leche con disminuciones significativas en las concentraciones de cidos grasos de cadena corta y media pero, producen un aumento de cidos grasos C18:1, comparado con la leche de vacas alimentadas de manera adecuada (Timmen y Patton, 1988). Sin embargo, no es claro cuanto, de37

tal aumento en C18:1 influira en el TVA lo que eventualmente contribuira al CLA de la leche. An se desconoce si las vacas que han presentado una disminucin de energa mientras pastorean, contribuyen al incremento de CLA. Si este fuera el caso, sera interesante saber si el contenido de CLA en la leche podra ser aumentado disminuyendo el contenido de energa de la racin total, (Khanal y Olson, 2004).

Overton, (2002) sugiere una estrategia, con el objetivo de disminuir la alta demanda energtica en las vacas en perodo de transicin y as disminuir la liberacin de reservas corporales y la produccin de cidos grasos no esterificados (AGNE). Esta estrategia consiste en suministrar ismeros de cido linoleico conjugado (CLA), por ser estos unos inhibidores muy fuertes de la sntesis de grasa en la leche. Concluyendo que el CLA, a pesar de no disminuir la liberacin de grasa corporal, causaba un ahorro de energa debido a una menor sntesis de grasa en la leche y esa energa se diriga a la sntesis de lactosa, por lo cual el uso de CLA era una herramienta de manejo alimenticio para incrementar el pico de produccin de leche, (Campabadal, 2002).

Por otro lado, los Ionoforos parecen tener algunos efectos positivos el contenido graso de CLA en la leche (Fellner et al., 1999).

Adems, se deben considerar los efectos positivos que se producen, en CLA y en el contenido de TVA en el rumen, al mantener el pH ruminal en 6.0 o sobre 6.0 (Troegeler-Meynadir et al., 2003). El pH Ruminal podra, probablemente, estar38

ligado al incremento de CLA en la grasa de la leche cuando las vacas se alimentan de dietas con altas proporciones de forraje, pero no cuando estas se alimentan con bajo contenido de este alimento (Jiang et al., 1996). Esto es de gran importancia en el aumento del rendimiento de la leche, (en vacas lecheras) y de la carne (en animales de carne) al incluir grandes cantidades de grano para aumentar la concentracin de energa de la dieta y as disminuir el pH del rumen bajo 6,0. El efecto de aumentar la concentracin de energa de la dieta, sin disminuir el pH del rumen puede tener un significado prctico para aumentar la concentracin de CLA y el rendimiento de la grasa de la leche (Khanal y Olson, 2004).

1.9.1.4 Praderas. Dhiman et al., (1999), indicaron que las vacas que han sido alimentadas permanentemente a pastoreo natural han presentado 500% ms de CLA comparadas con aquellas que se alimentaron con una mezcla de racin total que contena forraje conservado y grano. Y que el heno, en cambio, no influy en el contenido de CLA en la leche. En Ohio durante mayo del ao 2000, Eastridge y Qiu, (2001), realizaron un estudio comprobando que exista una concentracin creciente de CLA en la leche, al disminuir la cantidad de grano en la alimentacin, (o al aumentar la cantidad de forraje consumido). As, la concentracin de CLA en leche parece ser ms alta para las vacas que pastan forraje que para las vacas alimentadas con cualquier otra dieta. Al estudiar el efecto de la administracin de forraje fresco sobre la concentracin del cido linoleico conjugado en la grasa de leche en vacas de lactancia, se demostr que cuando las vacas del grupo tratamiento consuman slo39

forraje, las concentraciones del cido linoleico conjugado en la grasa de leche aumentaban al doble. Entonces, la concentracin del cido linoleico conjugado en la grasa de leche puede ser incrementada con la ingestin del forraje fresco.

Sobre el efecto de los distintos tipos de forraje en la composicin grasa de la leche, cabe destacar que la alimentacin de vacas con pasturas, parece producir un alto contenido de cido linoleico y grasas en la leche, ms que aquellos alimentos de forraje conservado o maz. Pero, la magnitud de esta diferencia es limitada. Las comparaciones indirectas indican que la grasa de la leche en dietas con ensilaje de maz, son ms ricas en cidos grasos de cadena corta y cido linoleico, comparadas con dietas de forraje conservado de pradera. El forraje fresco comparado con el forraje conservado, favorece la cantidad de cido mirstico y cido palmtico, a partir de cidos grasos mono y poliinsaturados, incluyendo el CLA. (Chilliard et al., 2001).

Khanal et al., (2002) Khanal et al., (2003 a) y Kay et al., (2002) suplementaron la alimentacin de vacas en pastoreo sin embargo, no encontraron aumentos en el nivel de CLA en la grasa de la leche comparado con aquellas vacas que se alimentaban slo con praderas. Pero, Kay et al., (2003) demostr recientemente que el contenido de CLA en vacas que pastoreaban se podra aumentar con la suplementacin de aceite de pescado o aceite de pescado junto a aceite de girasol, pero no slo con aceite de girasol. Por otra parte, al agregar aceites vegetales a la dieta de vacas en pastoreo aumentaba generalmente el CLA en leche, sin embargo, no es frecuente que lo haga a una concentracin mayor al 2% o 2,5%. (www.nutrihelpanimal.com.ar)40

Estos resultados sugirieron que la fuente de alimentacin que inhiba la hidrogenacin adicional de TVA a cido esterico realzara el contenido de CLA. Pero, no hay investigaciones que indiquen lo que sucede al suplementar vacas que pastorean con otras fuentes de cido linoleico y cidos linolnicos u otros cidos grasos que inhiban la biohidrogenacin adicional de TVA a cido del esterico, disminuyendo por consiguiente el CLA (Khanal y Olson, 2004).

Al parecer cuando las vacas se alimentan de un pasto fresco de la temporada que posee cadenas de C-3 contiene 50% ms de cidos grasos totales y de cidos linoleicos, lo que aumentara el contenido de CLA en la leche (Dhiman et al., 1999) mucho ms que los pastos de estaciones calurosas, que poseen carbonos-4 y que contienen menos de 40% de cidos grasos totales como de cidos linoleicos (White et al., 2001). Un pasto maduro, tiene las proporciones ms altas de C y C y menos cidos linoleicos, adems no es probable que produzca tanto CLA en la leche como lo hace el pasto que es verde y exuberante pastoreado por las vacas lecheras, (Loor et al., 2002).

Aquellas vacas que reciben toda su alimentacin desde las praderas producen una grasa de leche con el contenido ms alto de CLA, no as las que reciben un tercio o dos tercios de su dieta con pasturas (Dhiman et al., 1999).

41

La diversidad de especies de forrajeras disponibles en el pasto aumentaba tambin el contenido de CLA en la leche (Collomb et al., 2002a), lo mismo ocurra cuando aumentaba la altitud del pasto (Collomb et al., 2002b).

Sin embargo, al administrar una dieta con bajo contenido de forraje (en razn de 30:70 forraje/ concentrado), se reduca el pH del rumen bajo 6.0 lo que produca un efecto negativo en la concentracin de CLA y TVA, (Troegeler-Meynadir et al., 2003).

Como se observa en la tabla 5, resultado de diferentes dietas, es posible apreciar una variacin en el porcentaje de CLA que contiene la grasa de la leche de diferentes especies de bovinos.

42

Tabla 5. El contenido de CLA, (% de grasa) en la leche de vacas, bajo diferentes condiciones dietarias. Raza Holstein Holstein Holstein Holstein Holstein Holstein Holstein Holstein Holstein Holstein Holstein Holstein Holstein Jersey Jersey Pardo Suiza Normando Dieta (mezcla de racin total) TMR Slo Pasturas Slo Pasturas Pasturas + extrudo de soya Pasturas + extrudo de semilla de rap TMR + semillas de canola TMR + semillas roleadas Pasturas + mezcla de granos TMR + 1% aceite de pescado Pasturas + 150 g aceite de pescado TMR + 3.6% aceite de soya TMR + 5.3% aceite de linaza TMR + 5.3% aceite de girasol TMR Pasturas + 5.5 kg concentrado TMR Slo pasturas Porcentaje de CLA. 0.44 2.5 1.7 1.7 2.5 1.4 1.2 0.72 0.73 3.3 2.1 1.67 2.44 0.32 0.59 0.41 1.7

TMR : mezcla total de racin. Modificado de Khanal y Olson, (2004).

43

1. 9.2. Variacin entre individuos. La variacin entre animales es tambin uno de los factores que produce diferencias en el porcentaje de CLA obtenido en la grasa de la leche (Bauman, 2002). La variacin entre los individuos, en el nivel de CLA en la grasa de la leche, parece estar afectada por dos razones. Primero, las vacas parecen tener diferentes producciones ruminales de cido vacnico y CLA, an cuando todos los animales consumen la misma dieta. Esta variacin est probablemente relacionada con diferencias individuales como; el modelo alimenticio y la frecuencia de masticacin, lo que afectara el ambiente ruminal. La segunda razn es que las vacas se diferencian en la actividad de la delta9-desaturasa y en la sntesis endgena de CLA en la glndula mamaria. Probablemente, esta variacin entre individuos reflejara diferencias en la delta9-desaturasa, lo que implicara la regulacin de la expresin de genes, polimorfismo de los genes que afectan la estructura primaria o terciaria de la enzima, modificaciones post-transicionales, o factores que afectaran la interaccin entre enzima y el sustrato o producto (Peterson et al., 2002). Esto claramente, ofrece el potencial para la seleccin gentica y es un rea de futura investigacin (Bauman, 2002). Por otro lado, Kelsey et al., (2003) sealaron que numerosas investigaciones han demostrado que la alimentacin tiene un efecto sustancial en el contenido de CLA en la grasa de la leche, pero los factores fisiolgicos y las variaciones entre individuos no han sido bien estudiadas. La variacin entre individuos incluye las diferencias relacionadas con la biohidrogenacin en el rumen y con la actividad de44

la delta9-desaturasa en la glndula mamaria (Peterson et al., 2002). Muchos estudios han observado que las diferencias sustanciales causan un aumento (Jiang et al., 1996) o una disminucin (Stanton et al., 1997) en el contenido de CLA en la grasa de la leche. Sin embargo, la variacin individual no se ha considerado, y ningn estudio ha examinado, especficamente, la variacin individual sobre el contenido de CLA en la grasa de la leche. Segn Bauman et al., (2001) las diferencias en el contenido de CLA en la grasa de la leche entre vacas que han sido bien alimentadas son de poca o ninguna importancia para explicar la variacin entre individuos y afirma que el contenido de CLA en la leche, ms bien es dependiente de la produccin en el rumen de trans-11 C18:1 y CLA, as como de la actividad de la delta 9-desaturasa en los tejidos. Ms tarde, Peterson et al., (2002) observaron que la variacin sustancial de la leche en el contenido de grasa de CLA entre animales y a travs de dietas era semejante a estudios previos. Demostraron tambin que animales individualmente eran bastante constantes con el tiempo; la jerarqua individual de los animales se mantena, an cundo se administraban diferentes dietas que podran cambiar el contenido de CLA. Esto sugiri que la produccin en el rumen de trans-11 C18:1 y CLA varan entre individuos con la misma dieta, lo cual representara la base de la variacin individual sobre el contenido de CLA en la grasa de la leche. Delta 9desaturasa es una enzima clave en la sntesis endgena de CLA y de la leche. La proporcin grasa de los pares de cidos grasos, que representa los poderes para esta enzima varia tambin, sustancialmente, an entre animales con una misma

45

dieta. As, las diferencias entre individuos en la delta 9-desaturasa contribuyen a la variacin de la leche en el contenido graso de CLA. Eastridge y Qiu, (2001), demostraron que el CLA en la leche podra incrementarse mucho ms mediante la sntesis endgena en la glndula mamaria, que a partir de la biohidrogenacin ruminal. Entonces, mientras la dieta es un determinante mayor de CLA en la grasa de leche, algunos animales poseen un potencial ms grande para responder a un tratamiento diettico que otros, y estas diferencias en la respuesta son consecuentes con el tiempo y a travs de mltiples cambios en la dieta (Peterson et al., 2002).

1. 9.3 Raza. Algunas de las variaciones en el nivel de CLA observado entre vacas se presentan debido a la raza, (Khanal y Olson, 2004).

White et al., (2001) demostraron que dando una misma dieta la raza Holstein presentaba un nivel ms alto de CLA en la grasa de leche que las razas Jersey y Normando.

Kelsey et al., (2003), sin embargo, observaron una variacin secundaria en el contenido graso de CLA en la leche, entre Holstein y Jersey alimentadas con una misma dieta y determinaron que la raza contribua slo a aproximadamente el 1% de la variacin total. Adems, indicaron que la raza Holstein vs. Pardo Suiza, tienen una pequea relacin entre la variacin individual sobre el nivel de CLA y de CLA46

desaturasa, comprobaron que en general, la produccin de leche y la composicin de leche eran caractersticas de cada raza. La raza Holstein tena una gran produccin de leche, mientras la raza Pardo Suiza en promedio, presentaba el contenido ms alto de grasa y protena en la leche. Los rendimientos diarios de la grasa de leche y la protena de la leche eran similares entre las dos razas.

Lawess et al., (1999) compararon cuatro razas, Holstein/ Friesian Irlandesas, Holstein/Friesian Holandesas, Montbeliardes y Normando. Y comprobaron que la raza tiene poco efecto, pero la raza Montbeliardes, promedi cerca de 13% ms contenido de CLA en la grasa de la leche que las otras tres razas.

1.9.4 Estacionalidad. Los Cambios en la composicin de cidos grasos insaturados (FA) y la presencia de dobles enlaces conjugados en la grasa de leche se advirtieron desde 1935 cundo las vacas eran llevadas a pastorear durante el verano. La suma de dobles enlaces conjugados en la grasa de la leche aumentaba desde 0,4 a 0,8%. Durante el invierno cuando las vacas eran confinadas se produca 1,3% y 2,5% durante el verano cuando las vacas se alimentaban con praderas (Kuzdal-Savoie y Kuzdal, 1961).

Riel, (1963) estudi el efecto de la variacin estacional de dobles enlaces conjugados en la leche canadiense y demostr que posean dobles a triples incrementos de estos enlaces en la grasa de la leche durante el verano, cuando las47

vacas pastoreaban. Este autor observ tambin que la concentracin ms baja (0,6%) de dobles enlaces conjugados en la grasa de la leche se presentaba durante marzo, que es ms alto de lo que se observa en la leche actualmente (0,4 a 0,5%) producto de vacas alimentadas con una mezcla de racin total (Khanal y Olson, 2004).

Khanal y Olson, (2004), sealan que posiblemente, esto suceda porque las vacas se alimentaban de una dieta con mayor proporcin de forraje, lo que aumentara el contenido de CLA en la grasa de la leche. La concentracin ms alta de 1,65% en la grasa total de leche se observaba en junio y septiembre. El aumento dramtico en el contenido graso de CLA despus de rotar vacas en pastoreo fueron establecidos, luego de una serie de experimentos por Jahries et al., (1997);

Stanton et al., (1997), Kelly et al., (1998); Lawless et al., (1998); Dhiman et al., (1999) y continan siendo la base de investigacin para aumentar el contenido de CLA en vacas lecheras.

Kuzdal-Savoie y Kuzdal, (1961) indicaron inicialmente, que el abrupto cambio de alimentar en confinamiento ( con ensilaje, heno y remolachas) y luego comenzar a alimentar en pastoreo libre, incrementaba los dobles enlaces conjugados agudamente, hasta que un efecto mximo se podra alcanzar despus de 5 das. Sin embargo, Khanal et al., (2003) indicaron que la grasa de la leche que contiene CLA segua aumentando hasta 23 das despus de que las vacas dejaban de pastorear y se mantendra en 2,54% de grasa de leche, lo cual era 550% ms que el nivel original hasta 29 das, despus de los cuales las vacas se retiraban de la48

pradera. La grasa de la leche y el contenido de TVA siguieron una tendencia semejante. Esto puede ser debido a que es el tiempo requerido para la adaptacin de los microbios del rumen al cambio de dieta, as como tambin a la fisiologa de la grasa de la leche en la sntesis de cidos grasos bsicos, por el tipo y la cantidad de FA suministrados en la dieta. Se demostr tambin, que slo 4 das eran necesarios para retornar al nivel original de CLA y TVA una vez que las vacas se retiraban del pastoreo y se volvan a alimentar con una dieta semejante de TMR (Khanal et al., 2003).

Las vacas que consuman pastos verdes exuberantes parecan producir la grasa de leche con las concentraciones ms altas de CLA. Adems, la suplementacin de vacas que se alimentan a pastoreo con una racin de alto contenido en cido linoleico proporciona una fuente extra de sustratos para CLA y TVA, adems de los cidos linolnicos que proporcionan las praderas. (Khanal y Olson, 2004).

Khanal, (2004) demostr que las vacas lecheras que pastoreaban durante el verano suplementadas con granos, producen 60% o ms de CLA y TVA en alrededor de un ao base, que aquellas vacas que se alimentaron con 10% de DM de pasto fresco cortado durante el verano. La mayora de las vacas (~90 %) en lecheras comerciales de Utah e Idaho, USA, presentaba leche con un contenido graso de CLA entre 0,3 y 0,9%. Este autor observ tambin que la variacin individual entre vacas era ms grande durante el verano que en el invierno, en las lecheras donde las vacas eran alimentadas a pastoreo durante el verano, comparadas con aquellas lecheras que no pastoreaban o que presentaban slo 1/349

de sus vacas pastoreando. Indic que la concentracin de CLA en la grasa de leche era ms baja durante febrero-marzo y ms alta durante agosto-septiembre en los EEUU (Khanal, 2004) y Canad (Riel, 1963).

1. 9.5 Edad, paricin, periodo de lactancia y estado de salud. Kelsey et al., (2003), demostraron que la paricin, tiene una pequea relacin con la variacin individual sobre el nivel de CLA y de CLA desaturasa. Giesy et al., (1999) suministraron 50 gr/ da de una mezcla de ismeros de CLA en una sal de calcio, a partir del da 14 hasta el da 80 posparto y encontraron que se produca un aumento de la produccin de leche y disminucin de la produccin de grasa, el da 35 posparto en adelante. El efecto consista en que al disminuir la sntesis de grasa en la leche, disminua la alta demanda energtica y se movilizaba menos tejido corporal. Sin embargo, no disminua la cantidad de cidos grasos no esterificados, ni el balance energtico, pero la produccin de leche en este estudio y en otro presentado por Bernal-Santos et al., (2003) se incrementaba hasta en 3.2 kg/da.

Recientemente, Moore et al., (2004) han demostrado que la suplementacin con ismeros de CLA 10 a 21 das previos a la paricin, disminuyen la proporcin total de grasas en la leche de una manera dosis-sensible y la produccin de la grasa exhibe el mismo descenso progresivo que se produce normalmente. La suplementacin con ismeros de CLA disminua la proporcin de grasas en la leche, siendo evidente durante la primera semana post parto y llegando a ser altamente significativa durante la semana 2 y 3, perodo durante el cual el50

rendimiento de la grasa de la leche disminua en 49 y 56%. Estos datos indicaron, claramente, que la suplementacin con CLA, puede inducir una marcada disminucin de la grasa de la leche (40 a 50%) inmediatamente post parto, pero sin afectar negativamente otros parmetros de la produccin.

Cuando se suplementan sales de calcio de CLA en vacas durante el periodo de transicin y la etapa temprana de lactancia, no haban diferencias significativas en el contenido de CLA en la grasa de la leche comparado con un suplemento control de cido graso destilado de palma (Bernal-Santos et al., 2003).

La relacin entre el nmero de lactancias y los niveles de CLA en la grasa de la leche fueron comparados por Stanton et al., (1997) e indicaron que habra un efecto sobre los niveles de CLA en la leche debido al nmero de lactancias. Vacas con ms de 4 lactancias producan ms CLA (p7 lactaciones) obtenan un mayor rendimiento en el nivel de CLA que las vacas ms jvenes. Ms tarde Stanton et al., (2000) investigaron las variaciones en el nivel de CLA producidas al comienzo y trmino de la lactancia, y demostraron que el

contenido de CLA en la leche era ms alto al trmino de la lactacin comparada con la leche que se produca durante el inicio de esta. Pero, aunque los niveles de CLA eran mayores, el factor que ms influa sobre el nivel de CLA era, la disponibilidad y la calidad del pasto.

51

Por otro lado, slo un estudio ha demostrado una asociacin positiva entre los niveles de CLA en la grasa de la leche y el incremento en la edad del animal (Lal y Narayanan, 1984).

1.10 Situacin Nacional. Carro, (1999), estudi durante 6 meses la composicin de cidos grasos y triacilglicridos de leche cruda, recepcionada en plantas de la zona sur ( VIII, IX y X regin), identificando un posible efecto estacional y regional en esta zona. Recientemente, se realiz otro estudio por Pinto et al., (2002) durante junio de 1998 a mayo de 1999, en el que fueron analizados los cidos grasos de leche de bovinos como metil steres por Cromatografa de gas lquido, con especial nfasis en los cidos butrico y CLA, por su importancia tecnolgica y de salud pblica. Las muestras de leche cruda eran recolectadas mensualmente durante un ao a nivel de silos en seis plantas, ubicadas en las regiones VIII, IX y X de Chile, enfatizando las variaciones estacionales y regionales.

Pinto et al., (2002) sealan que los cidos grasos de cadena larga (C18:0 a C18:3), no presentaban diferencias significativas entre estaciones; slo a nivel individual, el C18:2 conjugado era significativamente superior en primavera (p