MEDIOS DE CULTIVO

REQUERIMIENTOS DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Requerimientos energéticos y no energéticos

Salvo excepciones, las bacterias son cultivables en medios artificiales de laboratorio de tal forma que el medio de cultivo le proporciona los elementos necesarios para su crecimiento y multiplicación. De acuerdo con esto, siempre se requerirá una fuente de energía y una fuente no energética como son las sales, factores de crecimiento, etc., que sin proporcionar energía son necesarias para su desarrollo.Los requerimientos energéticos son los nutrientes de ese medio de cultivo, que va a ser utilizado por la bacteria para su crecimiento. Van a ser fuentes de energía en un medio de cultivo, al menos, una fuente de carbono y una fuente de nitrógeno, y fuentes no energéticas pueden ser una fuente de fósforo, determinados iones como el hierro, el potasio, el sodio, el zinc, el magnesio, etc.

REQUERIMIENTOS ENERGETICOS

Entre los requerimientos energéticos de los medios de cultivo tenemos:

1. Fuente de Carbono 2. Fuente de Nitrógeno

REQUERIMIENTOS ENERGETICOS

1. Fuentes de carbonoExisten muchos tipos de fuentes de carbono, ya que esto está ligado al metabolismo energético de la especie microbial; por ejemplo: Algunas bacterias son capaces de utilizar sustancias muy sencillas como ácido acético, alcohol, citrato sódico, etc. En otras ocasiones, la mayor parte de los casos, la fuente de carbono corresponde a azúcares en forma de mono o disacáridos, como glucosa, lactosa, maltosa, etc.,Incluso hay microorganismos que pueden utilizar azúcares más complejos para obtener energía, como es el caso del almidón.

REQUERIMIENTOS ENERGETICOS

1. Fuentes de carbonoExisten también bacterias capaces de utilizar el gas carbónico CO2 hecho que es característico de las bacterias fotosintetizantes y quimiolitótrofas.Otros microorganismos pueden crecer a expensas del metano, benceno e, incluso, hidrocarburos como fuente de energía: Ejemplo: Cladosporium. Por último, existen especies como Pseudomonas, que pueden utilizar como fuente de energía un gran número de componentes hidrocarbonados diferentes.En general, conocer el tipo de azúcar utilizado por cada bacteria es muy útil para su identificación bioquímica y consiguiente clasificación taxonómica.

REQUERIMIENTOS ENERGETICOS

2. Fuente de nitrógenoEs una fuente bastante menos energética que la fuente de carbono pero es necesaria para el metabolismo microbiano, produciendo también energía. Esta fuente de nitrógeno la van a formar las proteínas, péptidos o aminoácidos. Pueden presentarse como proteínas completas, que sería el caso de la gelatina cuya presencia sirve para determinar la actividad proteolítica o gelatinasa del microorganismo problema, o incluso proteínas aún más complejas, como es el caso de los extractos de carne, sales de amonio, etc.Es frecuente encontrar peptonas como fuente de nitrógeno que corresponden a péptidos o polipéptidos dependiendo de su complejidad pero en cualquier caso son también proteínas que están parcialmente hidrolizadas, aunque no se las deba considerar como tal.

REQUERIMIENTOS ENERGETICOS

2. Fuente de nitrogenoExisten muchos tipos de peptonas y son excelentes fuentes de nitrógeno. Entre las más frecuentes y conocidas se encuentran los extractos de levadura que son extractos hidrosolubles preparados a partir de un lisado de levadura que se utiliza en muchos medios de cultivo.El bio-Thione, es una denominación comercial correspondiente a una peptona pépsica de carne empleada para la preparación, por ejemplo, del medio líquido Sabouraud. Tiene una alto contenido de azufre y de ahí que en los medios de cultivo que la contengan se pueda utilizar para investigar la producción de sulfuro de hidrógeno (SH2) por parte de la bacteria problema.

REQUERIMIENTOS ENERGETICOS

2. Fuente de nitrogenoLa caseina corresponde a una peptona sometida al proceso de digestión ácida muy utilizada en muchos medios de cultivo, sobre todo, en forma de peptona tripsica de caseina; por ejemplo: para estudiar la formación de indol por parte de la bacteria debido al alto contenido de triptófano que posee este tipo de peptona. También es utilizada para estudiar la reducción de los nitratos e incluso para el cultivo de algunos protozoos.La peptona papaínica de soja, es una fuente de nitrógeno especialmente para hongos y ciertos gérmenes exigentes como en el caso de las Neisserias.Otra fuente de nitrógeno sería la utilización de nitratos, nitrógeno orgánico, amoniaco, sales de amonio, aminoácidos, etc.

REQUERIMIENTOS NO ENERGETICOS

Entre los requerimientos no energéticos de los medios de cultivo tenemos:

1. Fuente de azufre 2. Fuente de fósforo 3. Iones metálicos 4. Factores de crecimiento 5. Factores de arranque 6. Factores inhibidores

REQUERIMIENTOS NO ENERGETICOS

1. Fuente de azufreTodos los microrganismos que utilizan en su metabolismo azufre lo hacen mayoritariamente en forma de sulfatos, a veces en forma de tiosulfatos y en otras ocasiones lo pueden obtener a partir de algún aminoácido, ejemplo: metionina, cisteina, tiamina, etc.Agar SIMAgar TSIAgar XLD

Agar TSI o KIA SIM XLD

REQUERIMIENTOS NO ENERGETICOS

2. Fuente de fósforoEn general, las bacterias que utilizan el fósforo lo suelen hacer en forma de fosfatos.

REQUERIMIENTOS NO ENERGETICOS

3. Iones metálicosSon utilizados por las bacterias bajo la forma de iones a concentraciones muy bajas. Por ej: el Sodio, el Potasio, Magnesio, Hierro,etc. También se encuentra otro tipo de iones metálicos a Cobalto, Molibdeno.Estos iones son esenciales para el crecimiento microbiano y dependiendo de su concentración pueden inhibir el crecimiento de otros, como el caso del sodio que a concentraciones altas inhibe el crecimiento de un tipo de microorganismo y facilita el crecimiento de otros.Agar Manitol Salado contienen 7.5% ClNa permite el crecimiento de Staphylococous.Agar Streptococus KF contiene 6.5% ClNa permite el crecimiento del Enterococus.

REQUERIMIENTOS NO ENERGETICOS DE LOS MEDIOS DE

CULTIVO

4. Factores de CrecimientoNo todas las bacterias son capaces de crecer sobre medios donde se encuentran cubiertas las necesidades elementales. Existen bacterias que aún así no crecen en tales medios o, si lo hacen, es muy lentamente. A este tipo de bacterias les hace falta además una serie de componentes definidos que muchas bacterias no son capaces de fabricar por sí solas para su crecimiento. A este tipo de componentes se denomina factores de crecimiento y van a corresponder a algún tipo de aminoácido de bacterias muy exigentes o incluso vitaminas, bases púricas o pirimidinicas, etc.Agar sangre enriquecido con metionina, ácido glutámico y ácido nicotínico para el crecimiento de Xanthomonas.

HAEMOPHYLLUSEl Agar Chocolate permite el desarrollo de colonias húmedas, lisas y grises del Haemophylus influenzae. Este medio contiene hematina (factor X) y está enriquecido con otros cofactores, como el NAD (factor V), que permite el desarrollo de este microorganismo.

AGAR CHOCOLATE

BORDETELLAAgar Sangre enriquecido con Glicerol - papa (Bordet Gengou) para crecimiento de Bordetella pertusis.Se observa colonias en “gotas de mercurio” brillantes es fácil de apreciar.

AGAR SANGRE

FLAVOBACTERIUM

Agar sangre enriquecido con nitrógeno suplementario y vitaminas del complejo B para el crecimiento del Flavobacterium.

AGAR SANGRE

REQUERIMIENTOS NO ENERGETICOS DE LOS MEDIOS DE

CULTIVO

5. Factores de ArranqueSon sustancias que van a permitir a la bacteria en estudio, salir de su fase de latencia y comenzar su fase de crecimiento exponencial. Son fundamentalmente fuentes de energía ”glucosa” que es utilizado por las bacterias. Un factor de arranque puede ser una fuente no energética como algún ión que estimule el crecimiento.

REQUERIMIENTOS NO ENERGETICOS DE LOS MEDIOS DE

CULTIVO

6. Factores InhibidoresSon componentes que van a impedir el crecimiento de algún tipo de microorganismo por bloqueo de sus procesos metabólicos. Los antibióticos son agentes inhibidores o destructores de la propia bacteria.La azida sódica inhibe el crecimiento de los Gramnegativos.Algunos colorantes : Eosina Azul de metileno impide el crecimiento bacteriano de los Grampositivos.Cristal Violeta impide el crecimiento de los Grampositivos.Las sustancias inhibidoras son muy útiles para la identificación y tipificación de pruebas bioquímicas de las bacterias.Agar Mac Conkey : Agar Eosina Azul de MetilenoAgar Salmonella ShigellaAgar Verde brillante

AGAR MAC CONKEY

TIPO DE COLONIASSuperficie de agar Mac Conkey con desarrollo de colonias a las 24 horas.Se observa colonia rojas fermentadoras de lactosa, el color rojo se debe a que el microorganismo produce grandes cantidades de ácido mixtos.Se observa colonias no fermentadoras de lactosa, son colonias pequeñas y transparentes.

AGAR EOSINA AZUL DE METILENO

El medio EMB contiene Eosina y azul de metileno que son colorantes de anilina y van a inhibir el crecimiento de los microorganismos Grampositivos, permitiendo el crecimiento de todas las Enterobacterias. Las colonias que fermentan la lactosa y/o sacarosa se observan de un color púrpura. Las que no fermentan lactosa ni sacarosa se observan incoloras.La Escherichia coli se observa de color púrpura y con brillo metálico.

CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

PRINCIPALES TIPOS DE MEDIOSDE CULTIVO

Existen muchos tipos distintos de medios de cultivo, así como diferentes clasificaciones. De acuerdo a esto y según criterios se podrían dividir:

1. SEGÚN SU PROPORCION EN AGUA

2. SEGÚN SU USO O UTILIZACIÓN

3. SEGÚN LA COMPOSICIÓN QUE PRESENTEN

4. SEGÚN SU PRESENTACIÓN

MEDIOS DE CULTIVO SEGÚN SU CONSISTENCIA

1. Medios sólidos.

2. Medios líquidos.

3. Medios semisólidos

POR SU CONSISTENCIA

1. MEDIOS SOLIDOS.Corresponden a aquellos medios donde la proporción en agar está siempre por encima del 1.5% . Koch utilizó, en 1881, por primera vez la gelatina para obtener un medio sólido; posteriormente un alumno suyo, Hesse, utilizaría en su lugar agar. En la actualidad, para la solidificación de los medios es el agar el utilizado, ya que la gelatina presenta el inconveniente de fundir a unos 24ºC, además existen en bacteriología numerosas bacterias gelatinasa positiva que destruirían tal medio.La importancia, pues, de los medios sólidos es muy grande, ya que nos permite el aislamiento, purificación y visualización de su crecimiento en colonias, así como su posible identificación a través de medios específicos y diferenciales de caracteres sólidos, elaboración de antibiogramas, etc.

POR SU CONSISTENCIA

1. MEDIOS SOLIDOS.Agar Sangre, observar la morfología de las colonias y el tipo de hemolisis.Agar Mac Conkey, los diferentes tipo de colonias de acuerdo al consumo de lactosa.Agar Mueller Hinton, prueba de susceptibilidad a los antimicrobianos.

AGAR SANGRE

HEMOLISISLos Streptococus se clasifican en base a su propiedades hemoliticas en agar sangre.La hemolisis parcial de los eritrocitos da como un resultado un color verdoso del medio sólido que rodea las colonias (alfa-hemolisis).Los que producen hemolisinas que lisan los eritrocitos, produce un aclaramiento del medio que rodea las colonias (beta-hemolisis).

Cultivo mixto que demuestra la presencia de dos tipos de microorganismos:Un morfotipo de colonias grandes blancas, brillantes y con bordes irregulares pertenecientes a bacilos gramnegativos.El otro morfotipo presenta colonias blancas, pequeñas, enteras, tipicas de un microorganismo grampositivo.

AGAR SANGRE

Cultivo mixto que demuestra la presencia de dos tipos de microorganismos:Un tipo de colonias grandes, blancas pertenecientes a Staphyloccous.El otro tipo de colonias puntiforme pertenecientes a Streptococus.

AGAR SANGRE

AGAR MUELLER HINTON

ANTIBIOGRAMA

Se basa en la difusión del antibiótico sobre el agar, y determinar la sensibilidad (formación de halo alrededor del antibiótico) y/o resistencia (crecimiento alrededor del antibiótico).

POR SU CONSISTENCIA

2. MEDIOS LIQUIDOS.Corresponden a los que también se denominan caldos, no contienen agar y su composición, además de agua suele contener al menos una fuente de carbono, sales minerales, y, en algunas ocasiones según las características del medio, factores de crecimiento, vitaminas, peptonas, ciertos aminoácidos, etc. Son de gran utilidad para la realización de recuentos bacteriológicos por turbidimetría, especialmente útil en levaduras, para la realización de inóculos, para obtener productos metabolitos primarios o secundarios, creados por los propios microorganismos como, por ejemplo, antibióticos, ácidos lácticos, etc.Caldo MRVP, para investigar la ruta utilizada en la degradación de glucosaCaldo Peptona, para investigar la producción de Indol.Caldo Lactosado, para investigar la formación de ácido y gas

La formación de indol a partir del triptofano se indica por un color rojo despues del agregado del reactivo de Kovac.El tubo del la izquierda es negativo.El tubo de la derecha demuestra un halo de color rojo lo que indica la presencia de Indol.

INDOL

POR SU CONSISTENCIA

3. MEDIOS SEMISÓLIDOS.Son medios intermedios entre los medios líquidos y los sólidos donde su proporción en agar suele ser inferior al 0.5% pero siempre suelen presentar una cierta cantidad que le proporcione una consistencia semisólida.Son útiles para ciertas pruebas bioquímicas como por ejemplo, la prueba de oxidación- fermentación, que permiter conocer el tipo de metabolismo oxidativo o fermentativo de la bacteria problema.Agar O-F Hugh LeiffsonAgar SIM, estudiar movilidad, Producción de H2S, Indol.Agar MIO, estudiar movilidad, Producción de Indol y Ornitina.

Tubo con medio para motilidad y producción de ácido sulfihidrico.Los microorganismos móviles muestran desarrollo difuso hacia fuera de la línea de siembra.Los microorganismos inmóviles crecen solamente a lo largo de la linea de siembra por punción exterior. Se observa un color Negro debido a la producción de H2S

SIM

Utilización oxidativa de la glucosa.Dos tubos con el medio O-F.El tubo de la derecha se encuentra abierto a la atmósfera, mientras que el de la izquierda se encuentra cubierto con aceite mineral para evitar la exposiicón con el oxígeno atmosférico. Solo se ve ácido (amarillo) en la porción superior del tubo abierto, indicando que el microorganismo es capaz de oxidar la glucosa, pero no de fermentarla.

O-F (Hugh Leifson)

MEDIOS DE CULTIVO SEGÚN SU PRESENTACION

1. Medios deshidratados o liofilizados.

2. Medios ya preparados: A. Sólidos en placa petri. B. Sólidos en tubo. B.1. Inclinado B.2. Semi-inclinado (pico de flauta) C. Líquidos en tubo. D. Semisólidos en tubo. E. De doble fase en frasco o tubo.

POR SU PRESENTACION

1. MEDIOS DESHIDRATADOSSon medios que se comercializan tal cual y una vez en el laboratorio deben ser preparados adicionando la cantidad de agua correspondiente en condiciones totalmente asépticas o una vez preparados en estas condiciones lo esterilizaríamos en el autoclave. Su composición es muy variable y puede ser de tipo básico o más complejo.

POR SU PRESENTACION

2. MEDIOS YA PREPARADOSSon medios que han sido elaborados por las casas comerciales presentando un determinado control de calidad y características específicas adecuadas a cada tipo de cultivo. Este tipo de medios pueden presentarse en forma de placas, en tubo, como formas sólidas, en frascos, como medios semisólidos o líquidos, en sistemas de doble fase, etc.

POR SU PRESENTACION

A. Medios sólidos en Placa Petri

Son medios sólidos que ocupan una superficie lo suficientemente grande como para poder visualizar perfectamente las colonias microbianas (mucho mejor que en tubo).Estos medios se utilizan mucho para obtener cultivos puros partiendo de una colonia previamente aislada.El sistema en placa es uno de los medios que permite mejor el aislamiento del microorganismos que pueden crecer en él.

POR SU PRESENTACION

B. Medios sólidos en tuboLos medios sólidos en tubo corresponden a tubos:

B.1. Con agar inclinadoEste medio solidficado tiene por finalidad aumentar la superficie donde se va a producir el crecimiento microbiano una vez sembrado.Las siembras se realizarán por estría.Agar Citrato de SimmonsAgar UreaAgar Manitol rojo fenol.

POR SU PRESENTACION

B.2. Con agar semi-inclinado o Pico de flautaEstos tipos de medios son útiles para observar el crecimiento aerobio microbiano si se ha sembrado por estría, el crecimiento anaerobio microbiano si se ha sembrado por picadura (anaerobiosis facultativa).Agar KIAAgar LIATambién es útil para la conservación de cepas, porque la desecación es menor en medios sólidos en tubo que en las placas petri.

POR SU PRESENTACION

C. Medios líquidos en tuboEstos medios no permiten visualizar colonis pero tienen muchas aplicaciones como, por ejemplo, pruebas bioquímicas que permiten:La determinación del Indol.La reducción de nitratos a nitritosLa fermentación de la glucosa, lactosa u otro azúcar, etc. Pueden servir para aumentar la concentración del microorganismo inoculado, es decir, realizar un inóculo, y otras aplicaciones. Estos medios no contienen en ningún caso agar.

POR SU PRESENTACION

D. Medios semisólidos en tuboSe siembran por picadura y corresponden a un término medio entre los líquidos y los sólidos. Se utilizan en ciertas pruebas bioquímicas como:La prueba de la movilidadLa prueba de oxidación-fermentación o de Hugh-Leiffson.

POR SU PRESENTACION

E. Medios de doble fase en frascoSon frascos constituidos por una fase sólida y otra líquida, por ejemplo, para la determinación rápida de microorganismos en sangre. Ambas fases crecen en el mismo medio y pueden tener un carácter aerobio o anaerobio. Suelen contener obturadores de caucho manteniendo completamente aislado el medio.Medio de Ruiz Castañeda para el aislamiento de Brucella.Medio para Hemocultivo

MEDIOS DE CULTIVO SEGÚN SU USO O UTILIZACION

1. Medios para aislamiento. A. Enriquecidos B. Selectivos C. Diferenciales

2. Medios para crecimiento general.

3. Medios para identificación.

4. Medios para mantenimiento de cepas.

POR SU USO O UTILIZACIÓN

1. MEDIOS PARA AISLAMIENTOSon medios muy diversos pero con la particularidad común de poder obtener a partir de ellos colonias aisladas. Estos, según sea su composición, se pueden a su vez dividir en:

A. Medios enriquecidosSon medios a los cuales, como su nombre indica, se les añade ademas de los componentes básicos, uno o varios elementos, como por ejemplo caseína soja, triptófano, etc., que facilitan el crecimiento de algún tipo de microorganismo generalmente exigentes, lo que nos permite aislar el microorganismo que buscamos.

POR SU USO O UTILIZACIÓN

B. Medios selectivosSon medios en cuya composición presentan algún componente o componentes que van a impedir el crecimiento de algún tipo bacteriano, estableciendo con ello una selección en el tipo de microorganismo que sí puede crecer; por ejemplo, el medio Rothe se caracteriza porque en su composición aparece azida sódica confiriendo al medio propiedades selectivas ya que tal componente va impedir el crecimiento de todas las bacterias Gramnegativas, permitiendo el crecimiento de algunas Grampositivas como Streptococus faecalis.Medio Salmonella Shigella, contiene en su composición sales biliares, citrato de sodio y el verde brillante que inhibe a la flora Grampositiva y los hacen con el grupo coliforme.

POR SU USO O UTILIZACIÓN

C. Medios diferencialesCorresponden a aquellos medios que presentan las mismas propiedades que los medios selectivos, es decir, tienen componentes que inhiben el crecimiento de algunas bacterias y, lo que es más característico de este medio, presentan sustancias que al ser utilizadas, o no, por las bacterias que van a crecer en dicho medio, dan una información suplementaria y específica, es decir, diferencial; por ejemplo:El medio Levine (EMB) es te medio presenta en su composición eosina y azul de metileno que inhibe el crecimiento de los Grampositivos y algunas Gramnegativas, facilitando el crecimineto de la enterobacterias, que según utilicen o no la lactosa darán lugar a una coloración característica para cada tipo de microorganismo.Los medios diferenciales suelen ser también selectivos y se usan con fines de aislamiento e identificación.

POR SU USO O UTILIZACIÓN

2. MEDIOS PARA CRECIMIENTO EN GENERALSon medios ya sea en forma liquida o sólida que sirven para el cultivo de la mayor parte de las bacterias. Su composición va a corresponder a una fuente de carbono, una fuente de nitrógeno, sales y agua. Dentro de los medios generales más empleados tendríamos el caldo común, que está compuesto por extracto de carne, peptona, glucosa, cloruro de sódico y agua.

POR SU USO O UTILIZACIÓN

3. MEDIOS PARA IDENTIFICACIÓNSon medios que pueden tener las mismas características que los diferenciales tanto, nos van a servir para identificar el crecimineto y características de algún tipo de microorganismo.También podría corresponder a medios generales más o menos enriquecidos conalgún componente como, por ejemplo, peptona, urea, glucosa, etc., hecho que nos va a servir para visualizar el tipo de metabolismo microbiano, por ejemplo:El caldo peptonado para saber si el microorganismo es indol +.El medio urea para la ureasa +.El caldo glucosado para saber la fermentación de la glucosa.Este tipo de pruebas permite clasificar taxonomicamente el microorganismo.

Permite investigar que ruta metabólica ha utilizado el microorganismo para consumir la glucosa.

Si utiliza la vía de fermentación de los ácidos el pH resultante es menor de 4.4, y el microorganismo será Rojo de metilo (+) el cual se va a evidenciar por el agregado del indicador rojo de metilo y dará un color rojo (+) y amarillo anaranjado (-).

Los microorganismos que utilizan la vía de la acetoina serán Voges Proskauer (+) y se evidencian por un color rojo al cabo de los 10 minutos después de agregar el KOH y el alfa-naftol.

MRVP (CALDO GLUCOSADO)

La formación de indol a partir del triptofano se indica por un color rojo después del agregado del reactivo de Kovac.El tubo del la izquierda es negativo.El tubo de la derecha demuestra un halo de color rojo lo que indica la presencia de Indol.

INDOL

Tres tubos con caldo y con tubos de Durham.El tubo de la izquierda muestra formación de ácido a partir de glucosa (amarillo) y formación de gas..El tubo del centro muestra formación de ácido a partir de glucosa (amarillo).El tubo de la derecha es negativo (rojo).

UTILIZACION DE LA GLUCOSA

AGAR UREAEl tubo de la derecha demuestra un color rojo, lo que indica una reacción positiva.El tubo de la izquierda no presenta viraje de color

El tubo de arriba demuestra un color verde y ausencia de crecimiento.El tubo de abajo muestra un color azul, lo que indica una reacción positiva.

AGAR CITRATO DE SIMMONS

Muestra una serie de reacciones.Pico de color amarillo indica fermentación de lactosa.Fondo de color amarillo indica fermentación de glucosa.Ruptura del agar y/o burbuja, indica formación de CO2.Presencia de un color negro indica producción de H2S.El pico rojo indica que no hay fermentación de lactosa.El Pico rojo y fondo rojo indica que no hay fermentación de glucosa ni lactosa.

AGAR KIA (KLIGER)

POR SU USO O UTILIZACIÓN

4. MEDIOS PARA MANTENIMIENTO DE CEPAS.Son medios que suelen tener los nutrientes necesarios para mantener a las cepas vivas durante períodos de tiempo relativamente largos manteniéndose tales medios generalmente a temperaturas lo suficientemente bajas en cada caso como para impedir su crecimiento. Ejemplo, Leche descremada que congelada se utiliza a menudo para mantener cepas durante meses.

MEDIOS DE CULTIVO SEGÚN LA COMPOSICION QUE PRESENTEN

1. Medios naturales.

2. Medios semisintéticos.

3. Medios sintéticos.

4. Medios complejos.

POR SU COMPOSICIÓN QUE PRESENTAN

2. MEDIOS SEMISINTETICOSSon medios donde parte de su composición corresponde a extractos naturales como levadura, malta, patata, sangre, leche, etc., a los que se añaden constituyentes sintéticos o químicamente definidos para el crecimiento bacteriano.

POR SU COMPOSICIÓN QUE PRESENTAN

1. MEDIOS NATURALESSon aquellos cuyos componentes orgánicos e inorgánicos se encuentran en la naturaleza, se suelen preparar artesanalmente y, en general, pueden estar constituidos por ciertos tejidos, líquidos orgánicos, etc., por ejemplo: la leche, que constituye un medio natural de conservación y cultivo favorable para numerosas bacterias. Se suele utilizar en forma de leche simple descremada, leche tornasolada y leche con azul de metileno. Otros medios naturales son el huevo entero, clara o la yema, o incluso la patata, que es ampliamente utilizada en bacteriología para el aislamiento de muchos hongos.

POR SU COMPOSICIÓN QUE PRESENTAN

3. MEDIOS SINTETICOSCorresponden a estructuras sintéticas más o menos puras y químicamente definidas, que están o pueden estar disueltas en agua destilada en proporciones determinadas de forma que se obtenga una solución adecuada para permitir el crecimiento de microorganismo que se desee.Estos medios sintéticos son los más utilizados en bacteriología y, en general. Su uso puede ser para aislamiento, identificación, crecimiento, determinación, ensayo, mantenimiento, etc. Siempre deberán contener en su composición los siguientes elementos:Una fuente de Carbono o azúcar.Una fuente de nitrógeno en forma inorgánica como iones NO-

3, NH+4, o en forma orgánica, como peptona, aminoácidos, aminas, etc.Compuestos minerales, y entre ellos, oligoelementos.Factores de crecimiento.Todo medio sintético puede presentar una complejidad muy variable de elementos según el germen que se pretenda cultivar y estudiar.

POR SU COMPOSICIÓN QUE PRESENTAN

4. MEDIOS COMPLEJOSSon los primeros que se utilizaron en bacteriología, aunque en la actualidad su uso está más restringido. Sin embargo, en parasitología y virología se utilizan habitualmente. Se preparan de forma compleja a partir de tejidos animales y más raramente de vegetales. Su composición no está exactamente definida como sucede en los medios sintéticos, es decir, no es rigurosamente constante, y sus materias primas suelen ser carne de músculo, de hígado, de corazón, clara o yema de huevo, azúcares, peptonas, etc.Medio de Lowenstein Jenssen. Infusión cerebro corazón (BHI)

1. COMPOSICIONFosfato monopotásico 4.0 gSulfato de magnesio 0.4 gCitrato de magnesio 1.0 gAsparragina 6.0 gGlicerol 20.0 gAgua destilada 1000 ml2. PREPARACIONDisolver los ingredientes y hervir durante 2 horas. Luego añadir 50 g de almidón de papa.Cascar 5 huevos en condiciones asépticas en un matraz y con ayuda de perlas de vidrio.Agregar 50 ml de verde malaquita en solución al 2%Distribuir en condiciones asépticas en tubos con tapa de rosca y dejar solidificar.3. FINALIDADPermitir el crecimiento del Mycobacterium.

MEDIO LOWENSTEIN JENSSEN

1. COMPOSICIONInfusión cerebro de ternera 20.0 gInfusión corazón de res 25.0 gPeptonas 10.0 gFosfato disódico 2.5 gGlucosa 2.0 gCloruro de sodio 5.0 gAgua destilada 1000 ml

2. FINALIDADPermite el crecimiento de microorganismos considerados muy dificiles de cultivar, en él los gérmenes mantienen su virulencia , antigenicidad y otras características serológicas.

INFUSION CEREBRO CORAZON

1. COMPOSICIONPeptona 17.0 gExtracto de carne 3.0 gCloruro de sodio 5.0 gAgar - Agar 12.5 gAgua destilada 1000 ml

2. DESCRIPCION DEL MEDIOA. Requerimiento energético:

B. Requerimiento no energético

C. Según su proporción en agua

D. Según su uso o utilización

E. Según la composición que presenta

F. Según su presentación

AGAR NUTRITIVO

1. COMPOSICIONExtracto de levadura 3.0 g Rojo fenol 0.08 gPeptona o polipeptona 10.0 g Verde brillante 0.0125 gLactosa 10.0 g Agar - Agar 20.0 gSacarosa 10.0 g Agua destilada 1000 mlCloruro de sodio 5.0 g

2. DESCRIPCION DEL MEDIOA. Requerimiento energético:

B. Requerimiento no energético

C. Según su proporción en agua

D. Según su uso o utilización

E. Según la composición que presenta

F. Según su presentación

AGAR VERDE BRILLANTE

1. COMPOSICIONPeptona de caseina 17.0 g Rojo neutro 0.03 gPeptona de carne 3.0 g Cristal violeta 0.001 gLactosa 10.0 g Agar - Agar 12.5 gSales biliares 1.5 g Agua destilada 1000 mlCloruro de sodio 5.0 g

2. DESCRIPCION DEL MEDIOA. Requerimiento energético:

B. Requerimiento no energético

C. Según su proporción en agua

D. Según su uso o utilización

E. Según la composición que presenta

F. Según su presentación

AGAR MAC CONKEY

AGAR MAC CONKEY

TIPO DE COLONIASSuperficie de agar Mac Conkey con desarrollo de colonias a las 24 horas.Se observa colonia rojas fermentadoras de lactosa, el color rojo se debe a que el microorganismo produce grandes cantidades de ácido mixtos.Se observa colonias no fermentadoras de lactosa, son colonias pequeñas y transparentes.

1. COMPOSICIONPeptona de caseina 5.0 g Citrato de sodio 10.0 gPeptona de carne 5.0 Tiosulfato de sodio 10.0 gBilis de buey desecada 5.0 Colato de sodio 3.0 Sacarosa 20.0 Citrato hierro (III) 1.0Cloruro de sodio 10.0 Azul de timol 0.04Agar-agar 14.0 Azul de Bromotimol 0.04

2. DESCRIPCION DEL MEDIOA. Requerimiento energético:

B. Requerimiento no energético

C. Según su proporción en agua

D. Según su uso o utilización

E. Según la composición que presenta

F. Según su presentación

AGAR TCBS

AGAR TCBSLas colonias amarillas, se deben a la utilización del citrato y a la formación de ácido por la utilización de la sacarosa del medio.Vibrio Cholerae.V. AlgynolyticusV. CincinatiensisV.fluvialisV. FurnisiiV. metsnichnikovii

AGAR TCBS (pH del medio 8.6 +/- 0.1)

El pH alcalino inhibe notablemente a las enterobacterias.

AGAR TCBSLas colonias gris verdosa semitranslúcida indica que el microorganismos no utiliza la sacarosa. Vibrio parahaemolyticusV. Mimicus.V. DamselaV. hollisae

1. COMPOSICIONPeptona de caseina 10.0g Eosina amarilla 0.3 gLactosa 5 Azul de metileno 0.065Sacarosa 5 Agar-agar 13.5Fosfato dipotásico 2 Agua destilada 1000 ml

2. DESCRIPCION DEL MEDIOA. Requerimiento energético:

B. Requerimiento no energético

C. Según su proporción en agua

D. Según su uso o utilización

E. Según la composición que presenta

F. Según su presentación

AGAR EOSINA AZUL DE METILENO

Agar Eosina Azul de Metileno (EMB) de

Levine Los colorantes de Eosina y azul de

metileno inhiben a las bacterias Grampositivas y a las Gramnegativas exigentes. También se combinan precipitando a pH ácido, actuando como indicadores de producción de ácidos.

Los fermentadores fuertes de lactosa: Escherichia coli, producen colonias color negro verdoso con brillo metálico. El brillo metálico indica una fuerte producción de ácido con una caída de pH a 4.5 o menos.

Los productores débiles de ácidos, producen colonias violeta, Klebsiella, Enterobacter, Serratia, Hafnia.

Los no fermentadores de lactosa, forman colonias incoloras. Salmonella, Shigella, Proteus..

1. COMPOSICIONExtracto de carne 5.0 g Citrato de fierro amoniacal 1.0 gProteosa peptona 5 Verde brillante 0.0003Lactosa 10 Rojo neutro 0.025Bilis de buey 8.5 Agar-agar 13Citrato de sodio 8.5 Agua destilada 1000 mlTiosulfato de sodio 8.5

2. DESCRIPCION DEL MEDIOA. Requerimiento energético:

B. Requerimiento no energético

C. Según su proporción en agua

D. Según su uso o utilización

E. Según la composición que presenta

F. Según su presentación

AGAR SALMONELLA SHIGELLA

Agar Salmonella Shigella

El agar SS es un medio altamente selectivo, que inhibe el desarrollo de la mayoría de los coliformes y permite el crecimiento de Salmonella y Shigella.La alta concentración de sales biliares y citrato de sodio inhibe a todas las bacterias Grampositivas y muchas Gramnegativas, incluyendo a los coliformes.La lactosa es el único carbohidrato y el rojo neutro detecta la producción de ácido.El tiosulfato de sodio es una fuente de S, permitiendo la detección del H2S por el precipitado negro formado con el citrato férrico.Colonias incoloras, son no fermentadores de lactosa y H2S (-), Salmonella y Shigella.Las Colonias fermentadoras de lactosa se colorean de rojo, Escherichia coli.Colonias incoloras con centro negro, son no fermentadores de lactosa y H2S (+), Proteus, Salmonella.

1. COMPOSICIONExtracto de carne 1.0 g Agua destilada 1000 mlD-Manitol 10 g Agar agar 15 gPeptona 10.0 Rojo fenol 0.025 gCloruro de sodio 75 g2. DESCRIPCION DEL MEDIOA. Requerimiento energético:

B. Requerimiento no energético

C. Según su proporción en agua

D. Según su uso o utilización

E. Según la composición que presenta

F. Según su presentación

AGAR MANITOL SALADO ROJO FENOL

TRIPLE AZUCAR HIERROT.S.I.

A. INTRODUCCION La configuración del medio en pico de flauta (Pico y

Fondo) determina la existencia de 2 compartimientos La porción inclinada, expuesta al oxígeno atmosférico es aerobia.

- La porción inferior llamada fondo esta protegida del aire y es relativamente anaerobia.

La porción expuesta al oxigeno (INCLINADA), tiende a tornarse alcalina por la descarboxilación oxidativa de proteínas, y se desarrolla un pH alcalino y se vuelve rojo.

En el fondo del tubo donde no hay oxígeno , la degradación proteica es mínima y se pueden detectar incluso pequeñas cantidades de ácido por la aparición de un color amarillo.La producción de H2S se manifiesta por la producción de un color negro.La presencia de gas se manifiesta por el resquebrajamiento del medio.La acidez del medio se pone de manifiesto por un color amarillo y se representa por la letra A.La alcalinidad del medio se pone de manifiesto por un color rojo y se representa por la letra K

TRIPLE AZUCAR HIERROT.S.I.

A/A Microorganismo fermentador de lactosa y glucosaEstos microorganismos que degradan lactosa y glucosa producen cantidades grandes ácido por que la concentración de lactosa es de 10/1 con respecto a la glucosa. Esta cantidad de ácido es suficiente para contrarrestar la reacción alcalina producida por la degradación de las proteínas. Dando un color amarillo en todo el medio.CO2: Se observa resquebrajamiento del medio.H2S: Se evidencia la producción de H2S por un precipitado de color negro.

TRIPLE AZUCAR HIERROT.S.I.

INTERPRETACION K/K: Microorganismo no fermentador Son incapaces de producir ácido por fermentación

de la glucosa o lactosa, no hay cambio en el medio.

K/A Microorganismo no fermentador de lactosa

El microorganismo es capaz de utilizar la glucosa pero no a lactosa, por lo cual produce una pequeña cantidad de ácido, ya que la concentración del medio es de 0.1% de glucosa, por lo cual al comenzar a degradarse las proteínas del pico se comienza a liberar aminas lo que da un color rojo en el pico. En el fondo del tubo la degradación proteica es insuficiente para contrarrestar el ácido formado y se mantiene de color rojo.

TRIPLE AZUCAR HIERROT.S.I.INTERPRETACION

K/K: Microorganismo no fermentador Son incapaces de producir ácido por fermentación

de la glucosa o lactosa, no hay cambio en el medio.

K/A Microorganismo no fermentador de lactosa

El microorganismo es capaz de utilizar la glucosa pero no a lactosa, por lo cual produce una pequeña cantidad de ácido, ya que la concentración del medio es de 0.1% de glucosa, por lo cual al comenzar a degradarse las proteínas del pico se comienza a liberar aminas lo que da un color rojo en el pico. En el fondo del tubo la degradación proteica es insuficiente para contrarrestar el ácido formado y se mantiene de color rojo.

A/A Microorganismo fermentador de lactosa y glucosaEstos microorganismos que degradan lactosa y glucosa producen cantidades grandes ácido por que la concentración de lactosa es de 10/1 con respecto a la glucosa. Esta cantidad de ácido es suficiente para contrarrestar la reacción alcalina producida por la degradación de las proteínas. Dando un color amarillo en todo el medio.CO2: Se observa resquebrajamiento del medio.H2S: Se evidencia la producción de H2S por un precipitado de color negro.

TRIPLE AZUCAR HIERROT.S.I.

SIMBOLO:

INTERPRETACION:

Lactosa: Glucosa: CO2 ó Gas: H2S:

1. COMPOSICIONPeptona 3.0 g Tiosulfato de sodio 0.04 gExtracto de levadura 3.0 g Púrpura de bromocresol 0.02gDextrosa 1.0 g Agar - Agar 15.0 gLisina 10.0 g Agua destilada 1000 mlCitrato amonio férrico 0.5g

2. DESCRIPCION DEL MEDIOA. Requerimiento energético:

B. Requerimiento no energético

C. Según su proporción en agua

D. Según su uso o utilización

E. Según la composición que presenta

F. Según su presentación

AGAR LIA

LISINA HIERRO AGARLIA

SIMBOLO:INTERPRETACION: DESCARBOXILACIO

NDESAMINACION LISINA H2S

1. COMPOSICIONPeptona 10.0 gCloruro de sodio 9 gAgua destilada 1000 ml

2. DESCRIPCION DEL MEDIOA. Requerimiento energético:

B. Requerimiento no energético

C. Según su proporción en agua

D. Según su uso o utilización

E. Según la composición que presenta

F. Según su presentación

CALDO PEPTONA

INDOLINTRODUCCION:El indol, un bencilpirrol, es uno de los productos de degradación metabólica del aminoácido triptofáno. Las bacterias que poseen la enzima triptofanasa son capaces de hidrolizar y desaminar el triptofáno con producción de indol, ácido pirúvico y amoniaco. La prueba de indol esta basada en la formación de un complejo rojo cuando el indol reacciona con el grupo del p-dimetilaminobenzaldehido. Este es el principio activo del reactivo de Kovac y Erlich. Debe emplearse un medio rico en triptofáno.COMPOSICION:REACTIVO DE KOVACAlcohol amílico o isoamílico puro 150 mlp-dimetilaminobenzaldehido 10 gHCl concentrado 50 mlTECNICA:Inocular el caldo peptonado e incubar a 37ºC por 24 horas. Luego añadir 5 gotas del reactivo por la pared del tubo.INTERPRETACION:Positivo: El desarrollo de un color rojo fucsia en la interfase del reactivo y el caldo, indica la presencia del indol.

1. COMPOSICIONCitrato de sodio 2.0 g Azul de bromotimol 0.08 gFosfato monoamónico 1.0 g Fosfato dipotásico 1.0 gCloruro de sodio 5.0 g Agar - Agar 12.5 gSulfato de magnesio 0.2 g Agua destilada 1000 ml

2. DESCRIPCION DEL MEDIOA. Requerimiento energético:

B. Requerimiento no energético

C. Según su proporción en agua

D. Según su uso o utilización

E. Según la composición que presenta

F. Según su presentación

AGAR CITRATO SIMMONS

Citrato de Simmons C.S.

INTRODUCCION El citrato de sodio es una sal del ácido cítrico,

un compuesto simple que constituye uno de los metabolitos del ciclo de Krebs . Algunas bacterias pueden obtener energía por vía distinta de la de fermentación de hidratos de carbono, utilizando citrato como única fuente de carbono. La determinación de esta característica importante para la identificación de muchas enterobacterias.TECNICA

Tomar una colonia bien aislada de la superficie de un medio e inocular en una sola ,estría en el pico del agro citrato e incubar a 37ºC por 24 - 48 horas.INTERPRETACION

El desarrollo de un color azul intenso en 24 a 48 horas indica una prueba positiva y revela que el organismo en estudio ha sido capaz de utilizar el citrato contenido en el medio, con la formación de productos alcalinos.

1. COMPOSICIONPeptona de caseina 20.0 gPeptona de carne 6.6 gTiosulfato de sodio 0.2 gCitrato hierro(III) amonio 0.2 gAgar - agar 3.0 gAgua destilada 1000 ml

2. DESCRIPCION DEL MEDIOA. Requerimiento energético:

B. Requerimiento no energético

C. Según su proporción en agua

D. Según su uso o utilización

E. Según la composición que presenta

F. Según su presentación

AGAR SIM

Agar S.I.M.

PRODUCCION DE H2SSe evidencia la formación de ácido sulfihidrico por la formación de un precipitado negro. Esto se logra mediante las siguientes etapas:Liberación de sulfuro a partir del tiosulfato por acción enzimática de la bacteria.Acoplamiento del sulfuro (S-2) con el ion hidrogeno (H+) para formar gas H2S.Detección del gas H2S mediante sales de metales pesados como hierro, logrando la forma de sulfuro del hierro, que es un precipitado negro.

Este medio de cultivo permite comprobar la formación de sulfuro, la producción de indol y observar la movilidad.

Agar S.I.M. MOVILIDADLos medios para detectar movilidad contienen concentraciones de agar de 0.4% o menos. A mayor concentración del gel es demasiado firme como para permitir la diseminación de los organismos.La Motilidad se pone de manifiesto por la turbidez difusa del medio de cultivo alrededor del canal de la picadura.

La no motilidad se caracteriza por el crecimiento producido exclusivamente a lo largo de dicho canal.

INDOLDespués de agregar unas gotas del reactivo de kovacs, si aparece un color rojo-cereza dela capa del reactivo indica la presencia de Indol.

1. COMPOSICIONPeptona de caseina 7.0 gDextrosa 5.0 gFosfato dipotásico 5.0 gAgua destilada 1000 ml

2. DESCRIPCION DEL MEDIOA. Requerimiento energético:

B. Requerimiento no energético

C. Según su proporción en agua

D. Según su uso o utilización

E. Según la composición que presenta

F. Según su presentación

CALDO MRVP

Rojo de Metilo R.M.INTRODUCCIONEl rojo de metilo es un indicador de pH con un intervalo entre 6.0 (amarillo) y 4.4. (rojo). El pH al cual el rojo de metilo detecta ácido es considerablemente menor que el de otros indicadore. A fin de provocar un cambio de color, el organismo en estudio debe producir grandes cantidades de ácido a partir del sustrato hidrocarbonado que emplea.La prueba del R.M. detecta la producción de ácido y requiere de organismos positivos que produzcan ácidos fuertes (láctico, fórmico, acético) a partir de glucosa, por la vía de la fermentación ácida mixta.COMPOSICIONCALDO MRVP: ROJO DE METILO (Indicador)

Rojo de metilo 0.1 g Etanol al 95% 300 ml

Agua destilada 200 ml.TECNICAInocular el caldo MRVP e Incubar a 37ºC por 24 horas, agregar 5 gotas del reactivo rojo de metilo.INTERPRETACIONPositivo: El desarrollo de un color rojo en el medio indica que la producción de ácido es suficiente como para bajar el pH a 4.4.

Voges Proskauer V.P. INTRODUCCIONEl ácido pirúvico, componente fundamental formado en la degradación fermentativa de la glucosa, es metabolizado luego a través de varias vías, de acuerdo con los sistemas enzimáticos que poseen las diferentes bacterias. Una de dichas vías lleva a la producción de acetoína (acetilmetilcarbinol), un subproducto de reacción neutra de la vía Butilenglicol. Los organismos que producen acetoína como principal subproducto del metabolismo de la glucosa y forman cantidades menores de ácidos mixtos. En presencia de oxígeno atmosférico e KOH al 40% , la acetoina se convierte en diacetilo y el alfa naftol actúa como catalizador para revelar un complejo de color rojo.COMPOSICIONALFA-NAFTOL KOHAlfa naftol 5 g KOH 40 gAlcohol etílico absoluto 100 ml Agua 100 mlTECNICAInocular caldo MRVP e incubar a 37ºC por 24 horas. Luego añadir alfa naftol e KOH al 40%. agitar el tubo y dejarlo en reposo por l0 minutos.INTERPRETACIONPositivo: desarrollo de un color rojo a los l0 minutos, revelando la presencia de diacetilo, producto de oxidación de la acetoína.

I.M.V.I.C.

INDOLROJO DE METILOVOGES PROSKAUERCITRATO DE SIMMONS

I.M.V.I.C. Cuando se realizan estas cuatro pruebas simultáneamente,

constituyen las clasicas reacciones IMVIC. Indol: la formación de Indol a partir del triptófano se indica por un

color rojo después del agregado del reactivo Kovacs. Rojo de Metilo: la aparición de un color rojo en el tuno con caldo

MRVP, después de agregar unas gotas del reactivo rojo de metilo indica un descenso del pH a 4.4 o menos, indicativo de la presencia de fuertes fermentadores productores de ácidos mixtos.

Voges Proskauer: la aparición de un color rojo en el tubo con caldo MRVP, después de agregar alfa-naftol e KOH al 40%, indica la presencia de acetoína producida a partir del piruvato por la vía del butilenglicol.

Citrato de Simmons: el viraje del indicador azul de bromotimol a un color azul alcalino indican que el microorganismo puede utilizar el citrato de sodio como única fuente de carbono.

I.M.V.I.C.Indol:Rojo de Metilo:Voges Proskauer:Citrato de Simmons:

Indol:Rojo de Metilo:Voges Proskauer:Citrato de Simmons:

DIFERENCIACION BIOQUIMICA

TSI

LIA

Indol

Rojo de Metilo

Voges Proskauer

1. COMPOSICIONInfusión cerebro de ternera 20.0 g Fosfato disódico 2.5 gInfusión corazón de res 25.0 g Glucosa 2.0 gPeptonas 10.0 g Agua destilada 1000 mlCloruro de sodio 5.0 g

2. DESCRIPCION DEL MEDIOA. Requerimiento energético:

B. Requerimiento no energético

C. Según su proporción en agua

D. Según su uso o utilización

E. Según la composición que presenta

F. Según su presentación

INFUSION CEREBRO CORAZON (BHI)

1. COMPOSICIONPeptona de caseina 17.0 g Rojo neutro 0.03 gPeptona de carne 3.0 g Cristal violeta 0.001 gLactosa 10.0 g Agar - Agar 12.5 gSales biliares 1.5 g Agua destilada 1000 mlCloruro de sodio 5.0 g

2. DESCRIPCION DEL MEDIOA. Requerimiento energético:

B. Requerimiento no energético

C. Según su proporción en agua

D. Según su uso o utilización

E. Según la composición que presenta

F. Según su presentación

AGAR SANGRE

1. COMPOSICIONPeptona de caseina 17.0 g Rojo neutro 0.03 gPeptona de carne 3.0 g Cristal violeta 0.001 gLactosa 10.0 g Agar - Agar 12.5 gSales biliares 1.5 g Agua destilada 1000 mlCloruro de sodio 5.0 g

2. DESCRIPCION DEL MEDIOA. Requerimiento energético:

B. Requerimiento no energético

C. Según su proporción en agua

D. Según su uso o utilización

E. Según la composición que presenta

F. Según su presentación

AGAR CHOCOLATE

1. COMPOSICIONPeptona 10.0 gDextrosa 40.0 gAgar - Agar 12.5 gAgua destilada 1000 ml

2. DESCRIPCION DEL MEDIOA. Requerimiento energético:

B. Requerimiento no energético

C. Según su proporción en agua

D. Según su uso o utilización

E. Según la composición que presenta

F. Según su presentación

AGAR SABAURAUD

Agar Xilosa Lisina Desoxicolato XLD

Agar XLD con colonias de especies de Enterobacterias fermentadoras de lactosa.

Los hidratos de carbono son: Xilosa, Lactosa y Sacarosa.

El indicador es el rojo fenol. Las colonias que fermentan uno o

más de estos hidratos de carbono producen ácido, son de color amarillo claro, debido a que hacen virar el color del agar adyacente del rosa al amarillo.

Los microorganismos como Escherichia coli, Klebsiella y Enterobacter pueden utilizar más de un hidrato de carbono y forman colonias color amarillo brillante.