PRÁCTICA # 5B

“SIEMBRA Y ESTUDIO DE HONGOS”

OBJETIVOS:

Manejar las técnicas básicas para el cultivo e identificación de hongos. Aplicar las técnicas de tinción adecuadas para el estudio microscópico de hongos. Aplicar adecuadamente los términos microbiológicos para hacer la descripción colonial y microscópica

de este tipo de microorganismos. Reconocer y describir las características morfológicas y estructurales de hongos.

INTRODUCCIÓN:

Los hongos son células eucarióticas (con núcleo y demás orgánelos membranosos: aparato de Golgi, mitocondrias, retículo endoplasmático, etc.), carecen de clorofila (son aclorofílicos, no realizan la fotosíntesis, por lo que son heterótrofos y necesitan un aporte de carbono y nitrógeno fijado orgánicamente), tienen una pared celular rígida bien definida de quitina; normalmente son inmóviles, no presentan tallos, ni raíces, ni hojas, ni vasos conductores como presentan las plantas. Pueden ser unicelulares o multicelulares y microscópicas o macroscópicas. Se reproducen asexual o sexualmente. Al carecer de clorofila, deben nutrirse a expensas de materia orgánica.

En la industria farmacéutica cada vez tienen más importancia, ya que a partir de los hongos se fabrican antibióticos, drogas, tonificantes, etc. Son responsables de la desintegración de la materia orgánica, y en simbiosis con determinados árboles producen un mayor crecimiento de estos. También son causantes de determinadas enfermedades en las plantas, (con deterioro de cosechas), en animales y humanos. Por consiguiente, los hongos están íntimamente relacionados con el ser humano, resultando benefactores y perjudiciales para la vida.

Los hongos se nutren de materia vegetal viva o muerta. Según sea el substrato en el que se encuentren se dividen en: Micorrízicos, Parásitos y Saprófitos.

o Hongos Micorricicos: Define una relación simbiótica entre las hifas de ciertos hongos y las raíces de las plantas.

o Hongos Saprófitos: Viven sobre materia orgánica en descomposición, es decir sobre materia muerta, (restos orgánicos de la de plantas y animales que contiene el suelo, partes muertas de la madera de un árbol o excrementos de animales.)

o Hongos Parásitos: Se alojan sobre algún ser vivo que los hospede, viviendo a expensas de éste sin ofrecerle ningún beneficio a cambio.

Los hongos tienen habitats muy diversos , algunos son acuáticos viviendo principalmente en agua dulce , pero también se conocen unos cuantos marinos ; la mayoría son terrestres y habitan en el suelo , sobre materia orgánica muerta (saprofitos ) desempeñando una actividad crucial en la mineralización del carbono orgánico , otros muchos son parásitos de vegetales , ocasionando la mayoría de las enfermedades significativas económicamente de plantas cultivadas , algunos son parasito de animales incluyendo el hombre.

Al cuerpo de lo hongos se les denomina talo y este puede ser unicelular , de forma amiboideo u ovoide , ejemplo , las levaduras , o bien pueden ser pluricelulares con aspecto filamentoso , esponjoso o carnoso , a los filamentos se les conoce como mohos como ejemplo de los carnosos se tiene a las setas y champiñones.

Algunos hongos presentan dimorfismo, es decir bajo ciertas circunstancias ambientales se desarrollan como levaduras, en tanto que cuando se cambia la temperatura o la concentración o tipo de algún nutriente, se desarrollan en forma filamentosa.

En las levaduras el talo unicelular desempeña las funciones vegetativas reproductivas, estas se reproducen asexualmente por bipartición o por gemación y en la reproducción sexual dos células levaduriformes se unen y como resultado forman ascosporas en algunas levaduras la gema o brote formado queda adherido a la célula madre, los brotes sucesivos dan lugar a la formación de un talo de transición ( ni-pluricelular ) denominado pseudomicelio.

La mayoría de los hongos tienen aspecto filamentoso , a los filamentosos individuales se les denomina fías y al conjunto de hifas micelio , este por su posición puede ser profundo y aéreo , el primero se encuentra sumergido en el sustrato desempeñando las funciones de absorción y sostén , también se le conoce como micelio

1

vegetativo . el micelio aéreo emerge del sustrato donde se desarrolla , siendo este el que da lugar alas hifas o cuerpos fructíferos formadoras de esporas por lo que también se le conoce como micelio reproductivo en cada especie de hongo las hifas vegetativas , crecen , se ramifican y entretejen en forma mas o menos constante , lo que determina la formación de colonias con características típicas de la especie , por otra parte algunos hongos rizoides , haustorios , estolones y apresorios , en algunos otros hongos la hifas se agrupan y retuercen formando fibras gruesas ( funículos y rizomorfos ) o un micelio compacto y apretado ( plectenquima ) las hifas reproductivas pueden permanecer diferenciadas ( esporiangoforos , conidioforos ) , al igual que las hifas vegetativas las reproductivas se pueden agrupar en una estructura especializada llamada cuerpo fructífero : en estos , la agrupación de hifas puede quedar directamente expuesta al medio ( coremio ) o protegida dentro de un receptáculo o contenedor ( picnidos , esporodoquios ) o formar parte de un cuerpo altamente diferenciado ( ascocarpos y basidiocarpos ).

Cuando se compara a los hongos con las bacterias , en general estos tienen requerimientos nutricionales muy simples, pero su desarrollo es mas lento , por lo que requieren mayor tiempo de incubación para su cultivo , la diversidad mas notable la presentan en sus propiedades morfológicas y en sus ciclos sexuales siendo estas características los criterios que se emplean en la identificación y clasificación de este grupo las características estructurales incluyen : tipo de talo , morfología microscópica del micelio tanto aéreo como profundo . tipo de hifas diferenciación y disposición o agrupación de las mismas tipo de hifas reproductivas asexuales , estructura y modo de formación del cuerpo fructífero sexual , tipo de espora ( forma , tamaño , aspecto externo , agrupación , tabicacion , color , movilidad , tipo y numero de flagelos ); compocision de la pared celular , además , evaluar otras características fisiológicas y reacciones metabólicas especialmente sobre azucares , de este modo , el estudio de los hongos implica el examen microscópico , la observación del aspecto macroscopico de sus colonias y la determinación de sus propiedades fisiológicas , especialmente su actividad frente a sus diferentes azucares .

Examen microscopio , por lo regular , los hongos se examinan en preparaciones húmedas , para tomar una muestra del micelio partir de un cultivo puro o de un tejido enfermo , se utilizan asas rígidas y ligeramente planas , se pueden emplear un trozo de cinta adhesiva transparente ligeramente adherida al asa o un buen par de pinzas , esta preparación debe hacerse con mucho cuidado para evitar que las esporas y otras estructuras se destruyan , lo que se evita tomando un trozo de agar con el desarrollo del hongo , la muestra se coloca en un portaobjetos , se calienta ligeramente para difundir el agar , se coloca una gota de azul de lactofenol y se tapa con un cubreobjetos , examinándose con los objetivos de 10x y 40x , la observación de hongos también se facilita agregando solución de hidróxido de potasio del 10 al 20 % , esta tiene la propiedad de aclararlos haciéndose mas transparentes , quizás la preparaciones mas adecuadas resultan cuando ala potasa o a una solución salina se le agrega una pequeña cantidad de eosina diluida , el examen microscópico de las levaduras se facilita agregando yodo a la preparación húmeda , con lo que los gránulos de almidón se tiñen de azul.

En el aislamiento y cultivo de la mayoría de los hongos (patógenos o saprofitos) se aprovechan ciertas características especiales de los hongos, tales como, su tolerancia al ph acido, su preferencia por medios de cultivo con gran cantidad de azúcar fermentable, su resistencia a la penicilina y estreptomicina permite usar estos antibióticos, los que al ser agregados a los medios de cultivo, reducen el numero de bacterias contaminantes.

En la preparación de medios de cultivos, los micologos, utilizan frecuencias mezclas de vegetales (agar-papa, agar-harina de maíz, etc...) y otras substancias naturales

Para estudiar a los hongos se dispone de dos tipos especiales de cultivos, el cultivo de portaobjetos o microcultivo y el cultivo en cajas de petri

Los microcultivos se pueden observar directamente día a día, lo que permite hacer el seguimiento del desarrollo del hongo en estudio.

Los cultivos en placa se obtienen sembrando por picadura, el centro de las cajas que contienen diferentes medios, a simple vista .el aspecto de las colonias es a veces tan característico, que permite identificar enseguida el tipo de hongo.

INVESTIGACIÓN:

HONGO CARÁCTERÍSTICAS IMPORTANCIARhizopus

Hongo filamentoso que presenta esporangióforos sin ramificar (de hasta 2 mm x 20 μm), de color pardo oscuro que nacen de un nudo de rizoides bien desarrollados. Están caracterizados por un micelio aseptado, cenocítico, con septos en la base de las

Son los causantes del moho negro del pan. Las esporas de estos hongos no son abundantes en el aire libre, aunque su frecuencia aumenta en lugares donde hay humedad y se acumula vegetación muerta. La exposición a concentraciones elevadas de esporangiosporas de Rhizopus se ha

2

estructuras reproductoras o septos secundarios. El nombre del grupo proviene de la presencia en parte de su ciclo de una zigospora característica. Pero en todo el grupo también es muy importante la reproducción asexual, incluso algunos sistemas clasificación de partes del grupo, están basados en esto. Colonias de crecimiento rápido (cubren prácticamente toda la superficie de la placa en tres días a 25 °C) de aspecto consistente, con denso micelio aéreo, algodonosas, al principio blancas, después gris oscuras (micelio rojizo, grisáceo o marrón). Se reconoce fácilmente por sus espolones hialinos o parduzcos, sus rizoides numerosos y pardos y sus esporangios negros y lustrosos (brillantes).

descrito como causa de alveolitis alérgica extrínseca (pulmón de serrador) en serrerías suecas. Se ha observado una pequeña proporción de pacientes con reactividad cutánea a Rhizopus stolonifer. Puede ser un patógeno oportunista en personas inmunosuprimidas y se han descrito casos de micosis rinocerebrales en diabéticos.

Alternaria El género Alternaria contine especies cosmopolitas que se encuentran en un amplio rango de materiales y productos. Como saprobias pueden deteriorar alimentos y forrajes, produciendo compuestos biológicamente activos tal como micotoxinas. Como patógenas reducen el rendimiento de las cosechas o afectan a los vegetales almacenadosLas características del crecimiento constituyen uno de los criterios para la clasificación. El micelio aéreo es gris verdoso con reverso negro parduzco. Muchas cepas de A. infectoria forman escasos conidios, tienen un micelio algodonoso y el reverso de la colonia es obscuro en el centro rodeado de un anillo anaranjado pálido

Causa la punta negra. Es necesaria una identificación precisa de las especies porque cada nombre entraña un conjunto de características ( preferencias para el crecimiento, patogenicidad, producción de metabolitos secundarios) que permiten predecir el comportamiento del hongo. En Czapek- Levadura A. alternata y A. infectoria producen colonias de tamaño similar (56 - 63 mm de diámetro en 1 semana a 27°C), chatas y ligeramente algodonosas.

Phialophora En el agar de la dextrosa de Sabouraud, las colonias son de crecimiento lento, inicialmente en forma de cúpula, más adelante llegando a ser planas, ante-como y olivaceous a negro en color. Microscópico, las culturas demuestran a tipo típico de Phialophora ontogeny conidial con los phialides bien formados, frasco-formados o elípticos que tienen extensamente señalar por medio de luces distintivo, collarettes pigmentados. Los conidios son elipsoidales, a veces llegando a ser truncados en la base, hyaline, sobre todo 3.0-5.0 x 1.5-3.0 um, pero a veces el llegar a ser más grandes cuando son viejos.

El solo-celled phialoconidia se produce en (el más joven en la base) la sucesión y el agregado basipetal de cabezas fangosas en los ápices del phialide.

Geotrichum Candidium

Características microscópicas: Se observan Arthroconidia y los hyphae verdaderos gruesos. Blastoconidia, los conidiophores y los pseudohyphae están ausentes. Arthroconidia (µm 6-12x3-6) es unicelular, en cadenas, hyaline, y resultado de la fragmentación de undifferentiated los hyphae por la fisión a través de tabiques dobles. Son cualquier rectangulares en forma o redondeados en los extremos que se asemejan a la forma del barril. La formación consecutiva del arthroconidia y la ausencia de las células vacías que hacen fragmentos para lanzar el arthroconidia (“células del disjunctor”) son típicas.

Geotrichum es una levadura encontrada mundial en suelo, agua, aire, y las aguas residuales, así como en las plantas, los cereales, y los productos lácteos. También se encuentra en flora humana normal y se aísla del esputo y de las heces. Las tensiones de Geotrichum producen rápidamente el crecimiento, blanco, seco, polvoriento a las colonias algodonosas, asemejándose al “cristal de tierra.” Cuando está disturbada en la superficie, la colonia se convierte levadura-como o fangoso. La temperatura óptima del crecimiento es 25°C. La mayoría filtra no crece en todos ni no crece débil en 37°C.

3

Penicillium notatum

el órgano especial de reproducción asexuada formado por conidiosporos tiene el aspecto de un pequeño pincel. Se caracteriza este género porque los esterigmas se implantan directamente sobre el conidióforo o sobre órganos alargados en forma de U o V llamados métulas.En el género Penicillium el ¨pincelito¨ o sea el órgano encargado de producir los conidiosporos, está formado por una célula pie o célula basal poco diferenciada de la cual nace el conidióforo y sobre él se implantan células llamadas ramas; de las ramas nacen células llamadas ¨métulas¨en forma de U o V que sostienen una fila de esterigmas de los cuales se forman los conidiosporos.También pertenece a la serie ¨asimétrica-velutina¨, se diferencia del P. chrysogenum por tener conidioporos globosos y de color azul verdoso. El reverso de la colonia es de color amarillento, y exuda abundantes gotitas de líquido dorado en la superficie del medio.

Penicillium notatum es el hongo del que se obtuvo el antibiótico penicilina, descubierto por primera vez por el médico francés Ernest Duchesnepor en 1896, olvidado y redescubierto por Alexander Fleming en 1928. La cepa de Penicillium notatum aislada por A. Fleming producía 2 mg de penicilina por cada litro de cultivo, posteriormente se encontró que otros Penicillium eran mejores productores de penicilina y se eligió a Penicillium chrysogenum como cepa superproductora de este antibiótico. Finalmente, la selección de sucesivos mutantes superproductores y la mejora en las técnicas de fermentación realizadas por la industria biotecnológica han hecho que actualmente se obtengan 20 g/L de penicilina.Esta especie tiene importancia histórica, ya que a partir de ella se obtuvo penicilina por primera vez usando el proceso de cultivo en superficie, en cambio en la actualidad, se emplean razas de P. chysogenum para producir penicilina por cultivo sumergido.

Mucor El Mucor es un hongo filamentoso encontrado en suelo, plantas, frutas que se decaen y vehículos. El género Mucor contiene varias especies. Los mas comunes son amphibiorum del Mucor, circinelloides del Mucor, indicus de mucor hiemalis, del Mucor, racemosus del Mucor, y ramosissimus del Mucor.Las colonias del Mucor crecen rápidamente en 25-30°C y cubren rápidamente la superficie del agar. Su aspecto mullido con una altura de vario centímetro se asemeja al caramelo de algodón. Del frente, el color es blanco inicialmente y se convierte en marrón grisáceo a tiempo. Del revés, es blanco.

Así como ser ubicuo en naturaleza y un contaminante común del laboratorio, Mucor spp. puede causar infecciones en hombre, ranas, anfibios, ganados, y cerdos. La mayor parte de el Mucor spp. no poder crecer en 37°C y las tensiones aisladas de infecciones humanas son generalmente una del poco Mucor thermotolerant spp. El indicus del Mucor es una especie aromática y puede crecer en las temperaturas tan altas como racemosus del Mucor 40°C. y el ramosissimus del Mucor, por otra parte, crece mal o no crece en todos en 37°C.

Ustilago maydis

caracteriza por la inducción inicial de clorosis y/o pigmentación de antocianinas, y la formación de agallas características en losgranos de elote, espiga, hojas de la planta, tallos y raíces de anclaje. U. maydisgeneralmente sobrevive como teliospora en plantas infectadas, en el suelo o en elestiércol si ha sido ingerido.La forma patogénica del hongo Ustilago maydis es un filamento dicariótico (hifa), el cual consiste de una célula cilíndrica alargada separada por septas, en esta etapa del desarrollo, el hongo es capaz de colonizar el tejido e inducir tumores. La infección del huésped por U. maydis es una parte obligada del ciclo de vida y conlleva varios pasos: la formación de tubos de conjugación por las células haploides de diferente loci, la fusión de células para formar el dicarión, y finalmente el crecimiento (hifal) de filamentos del dicarión. Elfilamento dicariótico invade la planta a través

Huitlacoche o cuitlacoche: El Ustilago maydis ataca potencialmente todas las porciones de la planta, pero ocurre con más frecuencia en las mazorcas. Las plantas atacadas desarrollan malformaciones en la forma de agallas abultadas, en un principio de color gris pálido, pero que se oscurecen al aproximar la maduración, y que contienen en su interior esporas reproductivas en un tejido esponjoso de color negro. La difusión de dichas esporas es a través del viento o por contacto. Este hongo es considerado como una plaga por muchos agricultores a lo largo del mundo, debido a que ataca las mazorcas y plantas de maíz e impide su desarrollo y maduración, además de que toda planta parasitada es contagiosa para el resto del cultivo.

4

de aberturas naturales, tales como estomas u órganos florales o por penetración directa. En la naturaleza, el proceso de apareamiento ocurre en la superficie de las hojas. Los tubos de conjugaciónforman hifas dicarióticas ramificadas, las cuales proliferan inter e intracelularmenteiniciando la formación del tumor en diferentes partes de la planta

Claviceps purpurea

Hongo parásito del gineceo de diversas gramíneas, cuyo ovario transforma en una estructura de resistencia llamada esclerocio, que consiste en una masa compacta de hifas fúngicas (plecténquima), en forma de cuernecillo algo curvado de 2-30 mm de longitud, de color negro purpúreo en el exterior y blanco en el interior. Los conidios producidos durante los primeros estadios de desarrollo por su fase anamórfica (= la que produce esporas asexuales y sirve para la propagación vegetativa), llamada Sphacelia, son dispersados por los insectos, que así propagan la infección a otros ovarios y a otras plantas. Una vez maduros (lo que coincide con la maduración del fruto en el huésped), los esclerocios caen al suelo en donde permanecen hasta la primavera siguiente. En primavera, se desarrollan a partir de ellos los estromas, formados también por hifas fúngicas conglutinadas en una masa compacta (plecténquimas), que constan de un pedúnculo pardo-rojizo (1-30 mm de longitud) y una cabezuela globular o algo aplanada (1,5-3 mm), ocre o algo amarillenta, en cuyo interior se forman los ascomas. Éstos son peritecios que producen en su interior ascos delgados y alargados, en cada uno de los cuales se forman 8 ascosporas (meiosporas) unicelulares y filiformes (100-120 x 1 µm). Una vez liberadas, las ascosporas pueden infectar una nueva planta.

Es un hongo parásito del género Claviceps, que consta de más de cincuenta especies pueden afectar a una gran variedad de cereales y hierbas, aunque su anfitrión más común es el centeno

Histoplasma capsulatum

El Histoplasma capsulatum es una levadura que en el estado saprofito crece en forma de micelios. Histoplasma capsulatum es el anamorfo de Ajellomyces capsulatus, Familia Onygenaceae, Orden Onygenales, División Ascomycota. Presenta tres variedades: H. c. var. capsulatum, ureasa+; H. c. var. farciminosum, de crecimiento muy lento y H. c. var duboisii, que es ureasa-.La forma infectante es una microconidia oval lisa o finamente equinulada, de 1-6 μm, que se forma sobre las hifas o sobre cortos pedúnculos. Se puede cultivar a 25-30 ºC en SDA, dando colonias algodonosas, blanquecinas a morenas, que una vez maduras forman también macroconidias esféricas de 8-14 μm pigmentadas, de pared gruesa y aspecto de “mina submarina”.En Agar BHI-Cisteína-Sangre a 37 ºC crece levaduriforme en colonias redondas, mucoides y color crema, con pequeñas blastosporas ovales a esféricas de 2-5 m, con gemación de base estrecha. La forma blastosporada aparece

La fase saprofítica se encuentra en suelos con alto contenido en heces de ave o de murciélago.

5

también en los tejidos infectados, a menudo en grandes números en el citoplasma de histiocitos y macrófagos.El trasporte aéreo de microconidias y de fragmentos miceliares del suelo contaminado da lugar a la deposición alveolar vía la inhalación. La susceptibilidad a la difusión dentro del huésped se aumenta con las defensas celulares deterioradas del anfitrión.La conversión miceliar a la forma patógena de la levadura ocurre de forma intracelular. Las teorías propuestas sugieren que las levaduras pueden producir las proteínas que inhiben la actividad de proteasas lisosomales.

Agaricus bisporus

El champiñón de París o champiñón común (Agaricus bisporus) es una especie de hongos del género Agaricus, cultivado extensamente para su uso en gastronomía. Es la más frecuentemente empleada de las especies comestibles de hongos, prestándose a numerosas formas de consumo.

El champiñón de París tiene un sabor neutro y delicado, con un aroma ligeramente nogado en los ejemplares más maduros. Es popular en gastronomía pese a su escaso rendimiento calórico, conteniendo alrededor de 20 calorías cada 100 gramos. Es relativamente rico en fibra alimentaria, así como en vitamina B6, vitamina C, vitamina D, potasio y niacina

Aspergillus niger

El género Aspergillus por poseer conidiosporos que nacen en cadenas y que se originan en células especializadas llamadas esterigmas o fiálides, los conidioforos poseen célula basal o célula pie bien diferenciadas; el órgano de reproducción asexuada se asemeja a un hisopo o aspersorio de donde deriva la palabra Aspergillus. En el género Aspergilllus, los esterigmas pueden presentarse en una o en dos filas, los esterigmas primarios y secundarios respectivamente; cuando hay dos filas, los esterigmas primarios sirven de sostén a los secundarios y a partir de éstos se originan los conidiosporos; en cambio si hay una sola fila de esterigmas de ella se originan los conidiosporos. Cada esterigma no es más que una célula con un núcleo que se divide en dos; el núcleo que queda hacia la parte externa se rodea de protoplasma y membrana transformándose en conidiosporo. el núcleo que queda en la parte basal del esterigma vuelve a dividirse para formar otro esporo y así sucesivamente mientras el medio sea favorable; por lo tanto las conidias más viejas y maduras de la cadena son las más externas o sea las más alejadas del esterigma que les dio origen.Al germinar un conidiosporo de Aspergillus en un medio favorable produce un micelio vegetativo del cual nacen los conidióforo que terminan en una vesícula aspergilar; de ella se originan una o varias filas de esterigmas y a partir de éstos se forman los conidiosporos (esporos asexuados externos) y que al caer de nuevo al medio reinician el ciclo asexuado.

Son los principales causantes de las micotoxicosis. Hongo que produce un moho negro en vegetales -muy común en la lechuga, el tomate o la acelga-, una de las especies más corrientes del género Aspergillus. El Aspergillus es un género de alrededor de 200 hongos. Se pueden dividir en dos formas morfológicas básicas, levaduras e hifas. Aspergillus niger se cultiva para varios productos químicos: ácido cítrico (E330), ácido glucónico (E574) enzimas: glucoamilasa, galactosidasa, etc

Amanita muscaria

Su sabor, al igual que su olor, no es especialmente intenso.Presenta un elevado grado de toxicidad en todas sus partes y, si bien no resulta necesariamente mortal, puede provocar graves

Es un hongo micorrizógeno muy común, también denominado "matamoscas". El nombre muscaria se refiere a sus propiedades insecticidas, ya que paraliza temporalmente a los insectos,

6

alteraciones neurológicas y gastrointestinales generalmente moscas, que entran en contacto con la seta.

Sacharomyces cereviceae

Es un hongo unicelular, un tipo de levadura. Una levadura haploide es capaz de cambiar de sexo. De tal forma que si una única célula de tipo a o α está en un medio sin la presencia del sexo contrario. Se divide por gemación y puede tener una reproducción asexual cuando se encuentra en su forma haploide, y de manera sexual cuando a partir de un cigoto se forma un asca que contiene cuatro ascosporas haploides.

Utilizado industrialmente en la fabricación de pan, cerveza y vino.

Candida albicans

hongo asexual diploide (una forma de levadura).Hongos están siempre presentes en la piel y en el tracto digestivo de la mayoría de las personas, pero se encuentran controlados por otros microorganismos no patógenos. Cuando se produce un desequilibrio, el aumento desmedido de la población de hongos produce esta u otras micosis. Es el más frecuente. Se puede transmitir por ropas, objetos y también por contacto sexual. afecta normalmente las zonas húmedas y cálidas de la piel y las mucosas, como las axilas, la boca, el glande y la vagina

agente causal de infecciones orales y vaginales en seres humanos. Infecciones fungicidas (fungemias) han emergido como las causas importantes de la morbosidad y de la mortalidad adentro de pacientes inmunodepresivos (trasplante de la médula e.g., del SIDA, de la quimioterapia del cáncer, del órgano o). Además, las infecciones hospital-relacionadas en los pacientes considerados no previamente a riesgo se han convertido en una causa de la preocupación importante de la salud. Los albicans de la C. están entre la flora de la tripa, los muchos organismos que viven en la boca humana y el aparato gastrointestinal. Bajo circunstancias normales, los albicans de la C. viven en el 80% de la población humana sin efectos dañosos, aunque el crecimiento excesivo da lugar a candidiasis. El Candidiasis se observa a menudo adentro de individuos inmunodepresivos tales como pacientes VIH-positivos. El Candidiasis también puede ocurrir en la sangre y en la zona genital.

Pleurotas ostreatus

Esporada: Blanca cremosa. Esporas: De blancas a cremosas, cilíndricas de 8-11 x 3-4/µm., hialinas y lisas. Basidios: Tetraspóricos, claviformes y largos. Otras características: Carece de cistidios en las láminas. La cutícula presenta fíbulas.

Esta especie se desarrolla casi siempre en troncos o tocones de frondosas en fase de descomposición, aunque a veces puede comportarse como parásita. Donde más frecuentemente la hemos encontrado ha sido en hayedos, pero tambien es capaz de colonizar otras especies

dermatophyton Los dermatofitos son hongos filamentosos que afectan a la epidermis y anejos cutáneos. La principal característica de ellos es que invaden las capas superficiales queratinizadas de la piel, pelos y uñas. Algunos atacan la queratina, allá donde esté en la Naturaleza; otros son altamente especializados y, por tanto, restringen su patogenicidad a ciertos huéspedes y tejidos. Producen manifestaciones clínicas muy variables, desde síntomas leves, hasta lesiones supuradas e inflamatorias intensas, que reciben el nombre genérico de dermatofitosis o tiñas.

Hongos que afectan a la piel.

MATERIAL

*cajas de petri, conteniendo: una capa delgada de algodón o un disco de papel filtro, una varilla de vidrio en forma de v o de triangulo quede quedar ajustada a los bordes de la caja y dos portaobjetos (esterilizar el conjunto en horno)

7

1 frasco con agua glicerinada

1 caja de petri con agar-sabouraud

asa micologica

bisturí estéril pinzas cubreobjetos limpios

1 frasco con alcohol del 96 metanol eritrosinaazul de algodón 3 cajas de koplin bálsamo de camadaxilol , alcohol , acetona microscopioDiversos hongos mohos

METODO

1.- En zona aséptica, con el bisturí estéril corte el agar-sabouraud en cuadros de aproximadamente 1cm32.- Colocar en el centro de uno de los portaobjetos contenidos en la caja de petri un cuadrito de agar- sabouraud (o un cuadrito en cada uno de los extremos de 1 porta)3.-Con el asa micologica (o con el asa bacteriológica recta) , inocular cada uno de los lados del cuadrito ( o de los cuadritos )4.-Con ayuda de unas pinzas flameadas, coloque sobre esta preparación el segundo portaobjetos estéril5.-Para mantener la humedad, agregar aproximadamente 10 ml de agua glicerinada, teniendo cuidado de saturar el algodón de papel, evitando la inundación para que el liquido no toque el cultivo6.- Incube durante 7 días7.- En condiciones de asepsia, saque los portaobjetos de la caja8.- Observar el desarrollo del hongo que se presenta alrededor de los cuadros de agar9.-Separe cuidadosamente los portaobjetos10.-Retirar el agar, tratando de no dañar el desarrollo del hongo el que debe quedar adherido el portaobjetos11.- Colocar los cuadros de agar sobre la caja y llevarlos a esterilizar12.- Fijar las preparaciones, agregando 5 a 6 gotas de metanol, eliminar inmediatamente el exceso y dejar secar el aire13.-Cubra la preparación con un pedazo de papel filtro y saturarlo con eritrosina14.- Calentar la preparación, durante 10 minutos teniendo cuidado de no dejar secar la preparación, debiendo adicionar colorante cada ves que sea necesario15.- Decolore con etanol durante 10 segundos16.- Colocar la preparación en una caja de koplin que contiene acetona una mezcla de xilol-acetona y dejar actuar 10 minutos17.- Transferir la preparación a una segunda caja de koplin, la que contiene una mezcla de xilol-acetona y dejar actuar 10 minutos18.- Repetir el procedimiento empleando xilol y dejar actuar 10 minutos19.- Dejar secar a temperatura amiente20.- Coloque una gota de bálsamo de Canadá en el centro de cada una de las preparaciones y tapar con cubreobjetos21.- Dejar secar a temperatura ambiente durante 24 horas y rotular, esta preparación puede mantenerse indefinidamente22.- Observar con los objetivos de 10x y 40x, consultar la guía de observación y hacer esquemas y la descripción correspondiente.

OBTENCION DE COLONIAS Y OBSERVACION MICROSCOPICA

MATERIAL

1.- cajas de petri con agar-sabouraud, medio felpa y agar papa dextrosa2.- solución glicerinada3.- mechero4.- asa micologica5.- gradilla6.- 9 tubos de 16 x 150 con 5ml de agua estéril7.- lápiz graso o marcador8.- cultivos de hongos 9.- microscopio10.- portaobjetos y cubreobjetos11.- lactofenol azul y de algodón

METODO

1.- En condiciones de asepsia tomar una muestra de cultivo de saccharomyces y suspenderla en un tubo que contiene agua estéril y agitar

8

2.- Con la suspensión de levaduras obtenida sombrar por estría una de las cajas que contiene sabouraud y una caja que contiene el medio de felpa y papa dextrosa3.- Repetir el procedimiento con los mohos4.- Repita con los otros hongos filamentosos5.- Con el asa en ángulo recto, tomar una muestra de la suspensión de esporas e inocular por picadura el centro de las placas que contiene sabouraud y czapek6.- Invierta las cajas e incubar a 28c durante 5 a 7 días7.- Observar las características de las colonias de los diferentes hongos desarrollados, consultar la guía de observación y describir los resultados8.- A partir de los cultivos de levaduras, preparar frotes fijos y teñirlos con azul de metileno9.- En un portaobjetos, coloque una gota de lactofenol azul de algodón10.- Colocar el ultimo tercio de asa micologica en un pedacito de diurex de 1.5 cm. de largo, enrollándolo ligeramente11.- En condiciones de asepsia destapar la caja que contiene el cultivo de una fracción de la colonia12.- Depositar la muestra en el portaobjetos con el colorante, extender el diurex y colocar encima de un cubreobjetos13.- Observe al microscopio con los objetivos 40x y 10 x14.- Repita el procedimiento de tinción húmeda con los otros hongos y hacer las observaciones correspondientes

Guía de observación:

o En cada hongo observe las características culturales de los diferentes medios de cultivo.o En las cajas con medio para cultivo compare las características coloniales de hongos levaduriformes y

filamentosos.o Elabore una tabla de registro de resultados. Esta debe incluir la información que permita la comparación

de las características de todos los hongos en estudio.o Observar al microscopio cada uno de los hongos en estudio.o Hacer esquemas.o Comparar los resultados de las observaciones microscópicas observadas efectuadas en las

preparaciones en fresco y en los microcultivos e indicar en donde se logró una mejor observación.

RESULTADOS:

TABLA 1

HONGO (de donde proviene)

CARACTERÍSTICAS DE LOS HONGOS SIN CULTIVAR (CARACTERÍSTICAS MACROSCÓPICAS)

Xoconostle Negro, de aspecto aterciopeladoTortilla Blanco, verde, amarillo y rojo; aterciopelado y algodonoso compactoQueso Verde aterciopeladoPan Verde aterciopeladoMoho de cultivo contaminado

a) Blanco con orillas moradas, algodonoso compacto y algodonoso laxo. B) verde con centro negro aterciopelado

Moho de cultivo contaminado

a) gris algodonoso laxo. B) verde-amarillo aterciopelado.

Moho de cultivo contaminado

Café claro amarillento, algodonoso laxo.

Observaciones al microscopio:

9

OBSERVACIONES AL MICROSCOPIO DE UN HONGO MACROSCÓPICO: CHAMPIÑON (Agaricus bisporus)

TABLA 2: COLONIAS GIGANTES:

MOHO U HONGO CARACTERÍSTICAS MACROSCÓPICAS1) Moho de cultivo contaminado

Algodonoso laxo; micelio superficial: blanco con esporangios negros.; micelio profundo: homogéneo.

2) Xoconostle Por zonas:a) algodonoso laxo blanco sectorialb) aterciopelado verde con centro verde más oscuro por zonas.c) naranja claro homogéneo aterciopelado; modificación del medio con turbiedadd) verde aterciopelado con orillas naranjas; modif. Medio con turbiedad.e) aterciopelado verde casi negro; turbiedad en el medio.

3) Queso Verde azulado aterciopelado, homogéneo. Medio turbio.4) Pan a) algodonoso laxo por zonas con medio amarillo turbio.

b) aterciopelado verde con centro más claro (algodonoso compacto) homogéneo, medio amarillo turbio.

5) Moho contaminado Algodonoso laxo (blanco con esporangios negros en las puntas), homogéneo, medio turbio amarillento.

6) Moho contaminado Lanoso blanco, homogéneo, medio turbio.7) Moho contaminado Por zonas aterciopelado verde, sectorial, medio amarillo turbio.8) Moho contaminado Lanoso cremoso, homogéneo, turbio9) Moho contaminado Lanoso cremoso, sectorial, turbio10) Moho contaminado Algodonoso compacto, sectorial, blanco y verde; muy turbio.11) Moho contaminado Aterciopelado, verde, homogéneo, medio amarillo crema muy oscuro, y muy turbio.12) Moho contaminado a) aterciopelado verde, sectorial con orillas blancas; medio cremoso turbio.

b) verde muy oscuro, algodonosos compacto por zonas, medio negro.

10

TABLA 3: PREPARACIONES PERMANENTES DE MICROCULTIVOS:

DESARROLLO DE LOS HONGOS En microcultivos (CARACTERÍSTICAS MACROSCÓPICAS)Algodonoso laxo con puntas negras; blanco lanoso.Algodonoso laxo, amarillo al centro, blanco con puntos negros en las puntas.Algodonoso laxo aterciopelado, verde.Aterciopelado verdeLanoso blanco; algodonoso compacto negro.Aterciopelado verde; algodonoso compacto amarillento.Amarillento algodonoso laxo.

11

DISCUSIÓN DE RESULTADOS:

Primero se prepararon los medios correspondientes para sembrar los hongos ya fuera en cajas petri o para microcultivos para después de que estos ya estuvieran listos se procediera a sembrar.

Se observaron las características de los mohos que habían contaminado tanto a cultivos como a frutas, pan, queso, etc. Estas se describen en la primera tabla donde se observan las características visuales que permiten saber que se encuentran contaminados. Así mismo, se realizaron preparaciones en fresco para observar sus características microscópicas, que no se lograron observar muy claramente debido a que los mohos que se intentaban observar se juntaban con restos de la comida y se difundían entre si sin permitir observar claramente las características de los mohos como se muestra en los dibujos.

Se realizó la siguiente sesión y se cultivaron los hongos para después observar sus características tanto macroscópicas como microscópicas, que se pueden apreciar en la segunda tabla donde se describen las características macroscópicas de las colonias formadas de mohos y después se muestran los dibujos de las observaciones microscópicas; en estas ya se logra apreciar más claramente algunas de las estructuras de los mohos y se lograron reconocer algunas de las partes de los mohos e incluso a algunas especies.

En la última tabla se muestra el desarrollo de los hongos que se presenta en los microcultivos una vez listos y se puede observar como cambian sus características a comparación de las primeras observaciones debido a que aquí ya se desarrollaron sin la presencia de restos de comida. Se elaboraron preparaciones y se observó al microscopio donde se lograron apreciar claramente las estructuras de los diversos hongos cultivados, sus características y formas.

CONCLUSIONES:

12

Por medio de esta práctica se lograron apreciar distintos tipos de mohos y hongo, se manejaron las técnicas de cultivo e identificación de hongos para su posterior estudio y de esta forma reconocer las características estructurales y morfológicas de los hongos y mohos; así mismo se puede concluir que los microcultivos son la mejor técnica de siembra si se desea observar las estructuras de los hongos de una forma más clara y precisa ya que esta técnica nos permitió tener una mayor claridad de las formas que poseen los hongos y mohos. Por lo tanto es muy importante conocer todas estas técnicas si se desea realizar un estudio adecuado de este tipo de microorganismos.

REFERENCIAS

o http://www.micologia.net/micologia/hongos.htmo http://www.smb.org.mx/Memorias_Bioener2005/Orales/P45.pdfo http://www.unsa.edu.ar/matbib/hongos/07htextoalternaria.pdfo http://es.wikipedia.org/wiki/Penicillium_notatumo http://www.vc.ehu.es/plfarm/01.clpur.htmo http://es.wikipedia.org/wiki/Histoplasma_capsulatumo http://es.wikipedia.org/wiki/Amanita_muscariao http://www.amanitacesarea.com/pleurotus-ostreatus.html

13