คู่มือวิธีการเก็บรักษาจุลินทรีย์โดยวิธีการระเหยแห้งใน...

คมอการเกบรกษาจลนทรย โดยวธการระเหยแหงในสภาวะสญญากาศ

(Liquid-drying)

ศนยชววสดประเทศไทย (Thailand Bioresource Research Center)

ศนยพนธวศวกรรมและเทคโนโลยชวภาพแหงชาต

ส านกงานพฒนาวทยาศาสตรและเทคโนโลยแหงชาต

Copyright 2016 TBRC, BIOTEC, Thailand

การเกบรกษาจลนทรยโดยวธการระเหยแหงฯ

หลกการ

• อาศยหลกการดงน าออกจากเซลลภายใตสภาวะสญญากาศในขณะทตวอยางเปนของเหลว (ระเหย)

• แตกตางจากวธระเหดแหง (Freeze drying) ซงใชหลกการดงน าออกจากเซลลในขณะทน าอยในสภาวะของแขง (ระเหด) ทตองแชแขงตวอยางกอนทาแหง ทาใหการเกบรกษาโดยวธการระเหยแหงใชเวลาการเกบรกษานอยกวาวธระเหดแหง และสามารถใชเกบรกษาจลนทรยทไมสามารถทนสภาวะแชแขงได

ขอด

• สามารถเกบรกษาจลนทรยไดหลายชนด เชน แบคทเรยและยสตสวนใหญ รวมถงราทสรางสปอรหลายกลม

• สามารถเกบรกษาจลนทรยไดนานถง 10 ป หรอมากกวา เมอเกบในทมดอณหภม 4-10C

• สามารถเกบรกษาทอณหภมหองได แตอายการเกบรกษาจะส นลงหากเกบไวทอณหภมสงเปนเวลานาน

Copyright 2016 TBRC, BIOTEC, Thailand 2

การเตรยมอปกรณ และสารปองกนเซลล

จลนทรย

• เตรยมเซลลจลนทรยบมทอณหภมเหมาะสม สาหรบแบคทเรยและยสตอายประมาณ 24-48 ชม. หรอจนจลนทรยเจรญอยในชวง Late log phase

• สาหรบราและแบคทเรยกลมแอคตโนมยสท ใหบมทอณหภมเหมาะสมจนสรางสปอรทเจรญเตมท

สารปองกนเซลล

• เตรยมสารปองกนเซลล (ตารางท 1) 3-4 มล. ใสในหลอด นงฆาเช อทอณหภม 121C นาน 15 นาท

หลอด ampoule

• ลางหลอดโดยแชในกรดไฮโดรคลอรก (HCl) ความเขมขน 2% ขามคน จากน นลางดวยน าสะอาด 2 คร งและน ากลน 1 คร ง แลวอบใหแหง อดปากหลอดดวยจกสาล นงฆาเช อทอณหภม 121C นาน 15 นาท แลวอบใหแหง


สารปองกนเซลล

จลนทรย สวนประกอบของสารปองกนเซลล

แบคทเรยทวไป

sodium L(+)-glutamate monohydrate 3 g, ribitol 1.5 g, L-cystein hydorochloride monohydrate 0.05 g, 0.1 M potassium phosphate buffer (pH 7.0) 100 ml หมายเหต: สาหรบแบคทเรยผลตกรดแลคตก (lactic acid bacteria) ใหเตม activated charcoal 1 g ในสารละลายปองกนเซลล

ยสต A: polyvinylpyrrolidone (K-90) 6 g, lactose 5 g, distilled water 75 ml B: sodium L(+)-glutamate monohydrate 3 g, 1 M potassium phosphate buffer (pH 7.0) 10 ml, trehalose 5 g, distilled water 15 ml sterilized separately by autoclaving, then mix A & B

รา sodium L(+)-glutamate monohydrate 3 g, 0.1 M potassium phosphate buffer (pH 7.0) 100 ml


Source: NBRC, Japan

ตารางท 1 สารปองกนเซลลสาหรบจลนทรยแตละประเภท

4

หมายเหต: สารปองกนเซลลทเหมาะสมส าหรบจลนทรยแตละชนดอาจแตกตางไปจากทระบ และจลนทรยบางชนดอาจมอตราการรอดชวตต า หรอไมรอดชวตเมอใชสารดงกลาว ควรมการศกษาวจยเพมเตมเพอปรบปรงสตรสารปองกนเซลลใหเหมาะสมกบจลนทรยชนดทตองการเกบรกษานนๆ

วธการเกบรกษา

ใชพาสเจอรปเปตถายสารปองกนเซลล 3-4 มล. ใสหลอดจลนทรย แลวผสมใหเขากน

จากน นใชพาสเจอรปเปตแบงสารละลายเซลลใสหลอด Ampoule หลอดละ 0.1-0.2 มล.

ใชกรรไกรตดสวนปลายของสาลอดหลอดออก และใชแทงแกว รปตวแอล (L) ดนสาลใหลกจากปลายหลอดประมาณ 3-4 ซม.

คอดหลอดโดยใชเปลวไฟความรอนสง โดยใหรอยคอดอยบรเวณเหนอจกสาลประมาณ 1 ซม. และใหบรเวณทคอดมเสนผานศนยกลางของ

หลอดประมาณ 1-2 ม.ม.


(มตอ)

5

วธการเกบรกษา (ตอ)

เสยบหลอดทคอดแลวเขากบเครองทาแหง

ทาแหงประมาณ 3-4 ชวโมง

ปดหลอดในสภาวะสญญากาศ

โดยใชเปลวไฟความรอนสงลนบรเวณรอยคอด

นาหลอดไปตรวจความเปนสญญากาศภายในหลอด โดยใชเครอง High-frequency spark tester หลอดทเปนสญญากาศ

จะเหนประกายแสงสน าเงน-มวงภายในหลอด

นาหลอดทมสภาวะเปนสญญากาศเกบในทมดอณหภม 4-10C


การเพาะจลนทรยทเกบรกษาโดยวธระเหยแหง

• ใชอปกรณเปดหลอด Ampoule กรดรอบหลอด บรเวณกงกลางจกสาล

• ใชสาลชบแอลกอฮอลหมาดเชดบรเวณรอบรอยกรด • ใชแผนสาลหนาหมหลอดแลวหกหลอดบรเวณรอยกรด • ใชพาสเจอรปเปตเตมสารทใชเพาะจลนทรย (ตารางท 2) ใสหลอด

จลนทรย ประมาณ 0.3-0.4 มล. • ท งไวประมาณ 2-3 นาทแลวผสมใหเขากน • ถายสวนผสมลงในอาหารเล ยงเช อทเหมาะสม


สารทใชเพาะจลนทรย

จลนทรย สวนประกอบสารทใชเพาะจลนทรย

แบคทเรยทวไป polypeptone 10 g, yeast extract 2 g, MgSO4.7H2O 1 g, distilled water 1 L, pH 7.0

ยสต glucose 10 g, peptone 5 g, yeast extract 3 g, malt extract 3 g, distilled water 1 L, pH 6.0

รา และแบคทเรย กลมแอคตโนมยสท

peptone 5 g, yeast extract 3 g, MgSO4.7H2O 1 g, distilled water 1 L, pH 7.0


ตารางท 2 สารทใชเพาะจลนทรยแตละประเภท

ศนยชววสดประเทศไทย (TBRC) ศนยพนธวศวกรรมและเทคโนโลยชวภาพแหงชาต อาคารกลมนวตกรรม 2 อาคาร B ช น 8 หอง 817 143 อทยานวทยาศาสตรประเทศไทย ถนนพหลโยธน ต. คลองหนง อ. คลองหลวง จ. ปทมธาน 12120 โทร: +66 (0) 2117 8000-1 อเมล: [email protected]

8

สอบถามขอมลเพมเตม

คู่มือวิธีการเก็บรักษาจุลินทรีย์โดยวิธีการระเหยแห้งใน...

Government & Nonprofit

Transcript of คู่มือวิธีการเก็บรักษาจุลินทรีย์โดยวิธีการระเหยแห้งใน...