405.биоэкологические аспекты изучения и использования...
Transcript of 405.биоэкологические аспекты изучения и использования...
МОСКОВСКАЯ ОРДЕНА ЛЕНИНАИ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ
СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ имени К. А. ТИМИРЯЗЕВА
На правах рукописи
ТЕПЛЯКОВА Тамара Владимировна
БИОЭКОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ
ИЗУЧЕНИЯ И ИСПОЛЬЗОВАНИЯХИЩНЫХ ГРИБОВ —ГИФОМИЦЕТОВ
03.00.16— экология
Авторефератдиссертации на соискание ученой степени
доктора биологических наук
МОСКВА 1992
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Работа выполнена во Всесоюзном научно-исследователь-ском институте молекулярной биологии научно произведетвенного объединения «Вектор».
Научный консультант — Мацкевич Н. В., доктор биологи-ческих наук, профессор
Официальные оппоненты Горленко М. В., доктор биологи-ческих наук, член-корр РАН, Шильникова В. К, доктор био-логических наук, профессор; Бурова Л. Г., доктор биологиче-ских наук
Ведущая организация — Новосибирский аграрный универ-ситет, кафедра охраны природы ,-i
Защита диссертации состоится « ^1992 г в «//» часов на заседании специализированного сове-та Д 120 35 08 по присуждению ученой степени доктора на\кв Мослопскон сельскохозяйственной академии им К А Тими-рязева по адресу 127550, Москва 11 550, ул Тимирязевская,49, корп 17.
С диссертацией можно ознакомиться в научной баблиоте-ко академии
Автореферат разослан «с£Ч ^«-Ю-4CiAtX^ . 1992 г.
Ученый секретарьспециализированного совета —
канд Оиол на\к, доцентА. В. Чичев
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
• ' . - . ' В В Е Д Е Н И Е • " " ч
Актуальность проблемы..Увеличение масштабов сельскохозяйст-
венного ' производства и говышение объема применения химических
средств защиты растений приводят к распространению последних во
внешней среде. Ежегодно число отравлений лвдей в мире от пести-
цидов достигает, по данным Всемирной организации здравоохранения,
500 тысяч (Чесноков, 1990). Если загрязнение природы начинает
превосходить возможности ее очищения, человечество оказывается
' на грани "экологического кризиса" (Холл, 1972; Коммонер, 1974;
. Дубинин, 1977). В связи о этим биологическим методам защиты рас-
тений придается особое значение в экологизации сельского хозяйст-
. ва, проблемы которой обсуждались на Всесоюзной конференции "Эко-
логические проблемы охраны живой природы", состоявшейся в Москве
в 1990 году, . - ;-; ' V > / ';.•••"• ' ' ' , • •
. ... В основе новой стратегии борьбы о вредителями, возбудителя-
ми болезней и оорняками лежит интеграция разных.методов, которая
позволяет регулировать численность вредных объектов на хозяйот-
венно неощутимом уровне {Роберте, I9SI; Хейген, IS82; Бондаренко,
1988). В'таких экосистемах, как теплицы, биологические метода за-
,.шты должны доминировать, поскольку условия здесь благоприятны
как для растений, так и вредителей и возбудителей заболеваний. Их
быстрая адаптация к пестицидам приводит к повышению количества
обработок,, увеличению норм расхода химических препаратов, созда-
ет опасность сохранения остатков ядов в продукции, ухудшает сани-
тарно-гигиенические условия труда работглкоз, я^лязгея причиной
.гибели полезных насекомых и загрязнения остатком постгцкдов вод-
ных источников и грунтовых вод.
Особую опасность для растений огурца и томата представляют
гелловыв нематода, вызывавшие в результате ларазптирования опухо-
" ЦЕНТРАЛЬНАЯ.НАУЧНАЯ БИБЛИОТЕКА.;folocK.сель:, охоз. акалвмии
им. К. А.
A
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
- 2 -
ли на корнях и потерю продукции до 50$ и выше (Шиабова, 1977; Са-
гитов, Перевертни, 1937).
Среди природных регуляторов численности нематод определенное
место занимают хищные грибы - гифомицеты, образующие на мицелии
различные приспособления для улавливания нематод и составляющие
оообую экологическую группу (Дурышша, Великанов, 1964). Наиболее
распространены и многочисленны в природе виды с сетчатыми ловуш-
ками рода Arthrobotrys Corda emend Mecht. (Люхтиева, 1979). Мно-
голетние попытки практического использования грибов-кематофагов
не всегда давали положительные результаты, поскольку недостаточно
были изучены закономерности их существования л распространения а
почве, условия и механизмы проявления хищничества, характер взаи-
моотношений с другими организмами, ."«ало внимания уделялось вопро- •
сам изменчивости, селекции, хранения штаммов хищных грибов - про-
дуцентов биопрепарата. Все имеющиеся до сих пор споообы получения
препаратов основаны на поверхностном выращивании и получении спо-
рово-мицелиального комплекоа грибов на сыпучих и твердых субстра-
тах, содержащих органические компоненты (Сопрунов, члгалин, 1963;
Шхтиева, 1969; Косовец, 1972, Desohipna . 1^39; Oayroi, iran-
Icowsici , 1979; кзцкевич и др., I9S0). Однако регламентированное
производство препарата в соответствии со стандартами, принятыми
в микробиологической промышленности, до сих пор не было создано.
Цель и задачи исследований. Основная цель исследований -
поиск штаммов хищных грибов-гифомицетов, перспективных для биоло-
гической защиты растений от галловых нематод, изучение их био-
акологических особенностей и разработка технологий получения и
применения препаратов в условиях защищенною грунта.
Основные задачи:
- поиск перспективных штаммов хищных грибов и изучькие их
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
биологических.особенностей при сапротрофном и биотрофном питании;
- изучение экологических особенностей хищных грибов и при-
способленности их популяций к обитанию в почве;
-выявление некоторых аспектов механизма хищничества грибов
рода Arthrobotrys; . .
- - изучение явления микофилии применительно к хищным грибам-
гифошцетам; •' ,• . '• • .
- разработка принципов и методов отбора, поддержания и
оценки перспективных штаммов хищных грибов; V
- разработка биотехнологии препаратов на основе хищных гри-
бов-ги$омицетов с экологических позиций; *
- испытание в защищенном грунте различных препаративных
форм хищных грибов против галловых нематод..
• ч _ Научная новизна. Впервые охарактеризованы биологические^ ооо- •
бенности и циклы развития ряда видов хищных грибов рода , Arthro-
botrys . при сапротрофном и биотрофном питании, включая характери-
стику их морфолого-культуральных и нематофаговых свойств.
Выявлены механизмы акта хищничества а процессов, обеспечива-
пщих фазу паразитизма: выработка и выделение привлекающих и пара-
лизующих ,нел1атоду веществ; способ внедрения гриба в нематоду пу-
тем перемещения оболочки гриба к плазмалемме клеток нематоды ч е -
рез кутикулу. "_ , __ _ •,. .. . . . ' . , . ;'
•На основе данных рентгеновского микроанализа и электронно-
микроскопических исследований высказано предположение о роли
кальция в сократительных структурах, участвующих в выделении
клейких веществ из ловушек и передвижении гриба через кутикулу
нематоды. ' • • • . [ . ' •
Впервые показано, что чиачо1шость популяцкв хшцных грибов,,
помещенных'в почву, стабилизируется за счет их способности не
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
- 4 -
только выживать, по и размножаться хламидоспорами. Обнаружена пе-
риодичность в формировании ловчих органов хищных грибов в природ-
ных делениях. Выявлены штаммовые различия по их отношению к фу«-
гнетазксу почвы.
Цол^чены новые сведения о роли явления ыикофилии в гшзьэдо-
ятельносп: хшцных грибов л разработаны способы обнаружения Е ОЧИ-
ст1сл штимлоз от грибов-мякофилов пра ах выделении из црирохных
1словий и хранении в коллекциях.
ЕЦделеи из природных уставил штамм * I хищного гриба Arthro-
I lor^ta Mecht. ( а . с . Y45i4j, I _ J O ) , nv.pv^aKHU2 1МК>£ЕЛЬЬ.М
рода Cвp^alo^portun c^rdu ! О5ЛДД<Ш1ЙЙ, нардду с иемато—
свойствами, способностью ир ^дуцироьать ф11брвнолятачвс;'вв
topawiTu. Исолвдогашшмя лорфатого-ч^сш'х ? г^олсгс-Сисха и1 со- *
; zx occrtenHJSTefi этого штеьлла устало are но, что иотзш~<м прояуцои-
тсы гермонтов является не хкдаыЛ гр*:й, а г^иб-микофил.
>ссЕьрленствссаны методы селекции Й сохранэниь в i*ai.-,bKUiifflc
ИГЛИИХ ШТ&МИОВ ХЕЗЦШХ Г р ^ б С В . LiiJDUItmi ,t& L^TC—t.Uf. ' 1 Л 0 1 Г -
осоСош»ости, которые 1/ог;т а^чи'ть ooiraou дгь ссоы о.» лил
ггрие 1л>т> отбора л поддержания стабилькс-аги в.на ыолокснл
кзолгтов. Разработан экспрасо-ыетод ошнки юматофагсасВ з
rsocxji атаымоа хищных грибов.
Газработани способы получения 4°рм биопреп^ата на ссиово
(.порово-мицолиального комплекса в условиях твердо-фазной фврыеп-
тап^ш к на оонове мщ&яхя при глубинном культивировании. Изучены
возрастные изменения мицелия по ряду показателей, включая жизне-
способность и неыатофаговыи эффект. Впервые для контроля за р а з -
витием мицелия и оценки жидких питательных сред использован м е -
тод химического титрования.
иракти-ческая ценность работы. Почучен высокоэффективный
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
" . . • ' - ' ' . - . - 5 - • • • . ' • "
йтамм хищного .гриба A.oligoapora ВКМР-3062Д ( а . с . 1688818,
19SI), снижающий численность нематод в почве на 86»2£. По резуль-
татам тоназшлогических исследований Иркутского мединститута mrasai
ЬКМр-3062Д не. обладает патогенншш свойствами для. теплокровных
животных и может быть использован в качестве продуцента биопрепа-
рата.. Разработаны методы поддержания этого штампа в процессе хра-
нения в получения препарата,
v Цредложены метода контроля и очистки культур от мигофильшх
На основе штамма БКМУ-ЗО62Д разработан регламент производот-•
ва препарата (официальное название - "нематофагин-Ей"),предназна-
ченного для биолабораторий. • \ •
• Получены исходные, данные для разработки оштво-проышпденвого
регла*«ганта производства биопрепарата на основе мицелия глубинюЭ
культуры. Положительные результаты нопытаний партий мицелиальной
массы хищных грабов, произведенных на Ьердшом заводе биопрепара-
тов ..подтвердили перспективность, экономичность и экологическую
. целесообразность этого способа.
Разработаны стратегии борьбы с галловыми нематодами овощных
' культур в защищенном грунте на основе использования разных препа-
ративных |орм хищных грибов; которые обобщены в соответствукинх
методичесжих рехомевдацаях.
: Положения, выносимые на з а щ и т у ; . . " . ' ,
- целесообразность отбора в природных условиях эффективных
штаммов хищных грибоа среда наиболее широко распространенных ви-
дов и.изучения условий г.х жизнедеятельности не тадько в культура,
но и в почве*; ,.» - • " ' • -
- наличие в яяклах развития хищных грибов салротрсфной и ,
СиотрофноЯ $аз развития, а такге жизненной форглы существования
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
- 6 -
в природе в виде хламидоспор;
- роль в акте хищничества химических соединений, а также
клеточных сократительных структур гриба, обеспечивающих выделение
на поверхность ловчих приспособлений и шщвлия токсических ве-
щеотв и проникновение гифы через к}тикулу ьематоды.;
- экологические связи хищных грибов с другими организмами
почвы;
- доказательства явлений микофилии в жизнедеятельности хищ-
ных грибов, а также возможности их контроля и очистки от грибов-
ЫИКОфИЛОВ ;
- экологическое обоснование Оиотехнологачаских возможностей
получения и применения хицных грибов в борьбе о галловыми немато-
дами в защищенном грунте.
Апробапия работы. 1шатериалы диссертационной работы были до-
ложены на Всесоюзных конференциях по Сиологичеоким методам защи-
ты растений (Новосибирск, 1962; Неринга, 1%3; Кишинев, IS84;
Минск, I9d4,ISSO; Рига, 1988; Велегож, ISo»,I9t(0; J-осква, 1Ь91),
советско-французском симпозиуме (Кишинев, 1Ьь2), а также совеща-
ниях для работников защиты растений различ"цх краев и областей
(Кемерово, Красноярск, Новосибирск). В 1Ькх> году материалы по
практическому использованию хищнкт грибов Сыш представлены на
выставке ИНВЕКС-68 и "Советские изобретатели" (ЧССР, города: Брно,
Прага, Кошица), а также на ЕЩНХ СССР в павильонех "оемледвлие" и
"Охрана природы".
Публикации. По теме диссертации опубликовано 32 работы, в
том числе 2 авторских свидетельства «i монография. Эксперименталь-
ные данные, представленные в диссертации,получены лично соискате-
лем и в "соавторстве о сотрудниками, работавшими под йго руковод-
ством, и в процессе творческих контактов.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
• . • / •'"•'• \ ' - , - ' . ' ; . , * : ' - \ , - 7 — ' . " ' •
•ч Структура и объем: диссертационной, работы. Дибсертация изло-
жена на 317; стр. машинописного текста, иллюстрирована 57 рисунка-
ми 0-85 оригинальными фотографиями, 30 таблицами и состоит и з . в в е -
дения , материалов и' методов, семи экспериментальных глав, заключе-
. ния ж выводов. Список литературы включает 385 наименований, в том
числе 160 наименований иностранных авторов. В Приложении предста-
влена научно-техническая документация-по регламенту получения.и
• применения нематофагина-ЕИ; а также акты испытаний препарата. ~. '
; ' , : ; : ' ii .':'- -ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИСОДЕДОВАНИЙ. ; .-,. ,. •• •'...-..' ,i.;! . .
. . / " Работа была начата в 1978 г . в Сибирсиом НИИ земледелия и '
химизации" сельского хозяйства СО ВАСХШШ (г.Новосибирск), затем
продолжалась во Всесоюзном НИИ биологических методов защиты р а с -
тений (г.КЕшшев, 1983-1986 г г . ) : и в настоящее время ведется во
Всесоюзном НИИ молекулярной биологии НПО "Вектор" (г.Новосибирск).
• • ." Объекта исследований - вида и штаммы хищных.грибов-ги$омице-
• ' тов,' выделенные в основном на территории Новосибирской области, а4 ' также насколько штаммов из Молдовы и Казахстана, относящиеся по
, классификации Н.А.Мехтиевои (1979) к родам : Arthrobotrye Corda '
emend Meoht., Daatylariopsis Kaoht,, Golovinia Meoht. '.
: '-.' *" Кроме того,''. объектами исследований были штамм Arthrobotrya
• .'oligoapora XIX 4/27, селекции ВИГИО:(Мацкевич, Удалова, 1970),.
"штаммы ВКМ1 2461Д (а.с,-1264393;* IS83) и ВКМг-ЗО62Д (а.с.1688818,
IS9I) того же вида,*, а также штамм * I Aiionga (з.с.74593, 1980),
/" Зйщннвгрибы выделяли методом З.Ф.Сопрунова (1958): образда
' почвы раскладывали на.поверхности голодного агара в чашки Петра •
• и добавляли лабораторную.культуру нематоды кикробофага•Panagrel- '
lua rcdlvivuo (L.) Guddey, культивируемую на толокне. При появ-
лииии ионииального спороиошенкя.яекато$аговне грибы.пересевали '
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
- 8 -
на питательную среду.
Хищные грибы культивировали на пвптокно-кукурузноы агаре
(Маикевич к др., 1969), среда Чапека, картофельно—глюкозном агара,
нсчвеяном агаре (ижельчеяяая в ступке плодородная почва - ISO т ,
агар - 20 г, вода - до I л ) .
При глубинном культивировании /сподьзовали пивное сусло,
разбавленное водой в 3 и 5 раз, среду Чапека (без агара), среду
& 19, содержащую мелассу и кукурузный экстракт.
Циклы развития и жизненные форм» хишшх грибов изучали на
питательных средах в поверхностной и глубинной культуре, в сус-
пензии немагод, а также в природных условиях (почве).
Нематофаговый аффект определял*! по показателям хзяцкостп
(среднее число ловчих приспособлений в саде зреная u*njpoci'cna пр*'.
увеличении 9x10) и активности (галкчество уьерщвяеиннх немагод, в
грсцентах) по методике Н.В.Мацкевич с соавторами (1969) z (..А.Агу-
лина (1969). В качестве тест-объектор использовали культуру *,г—
dixivua, л также паразЕтические нек^тоды „'eloiuogine inctbnit i
(Xofoid et rfhito) Chitvood, K.hapla Oliitwo^d.
Лля опе!1ки нематофаговой эффектгхьост. лспользоваяк т^л J » .
ьамк разработанную,новую методику, ссновакную па спосо01.остл XEL<-
шх гриСсв образовывать аттрактивные г токсэтескне соедкчекия.
Поддеряшаппнй (стабилиаирукщий.) отбор шташов-продуцонтов
в лабораторной культуре проводили по общепринятой и модифициро-
ванной набей методике клопового анализа, а такяа методом воспроиз-
ведения культур из фрагментов мицаяья (Теплякова, IS77; Тепляко-
ва и др., ISS3).
Лдя изучения способов длительного сохранения культур
грибов в коллекциях применяли лиофиллзацию, хранение под
ним маолом я в стерильной почве (Бе.тяьоай .' др., 19ь6).
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
' • • • • • "' - . Q «•
'Для изучения механизма хищничества использовали рэшшет с
бромной водой и водным раствором нврманганата калия на двойные
связи, а таюю гиотохшичесяую окраску Либермана-Бурхарда в моди-
фикации Шульца (Пиро, 1962). - .
- Содержание'в мицелии.и ловчих щшгспособлениях кремния, сэры,
фосфора, калия,,кальция определяли о помощью сканирующем мзкро-
скопа ISH-35 • о.рентгеновским детектором (Тешшкова и др., 1977;
Кононова. Теплякова,' I960; Тешшкова и др. ,1985) . При трансмис-
оиоиной.электронной микроскопии фиксацию-образцов проводили по
методу Сабатиш И ДР/ ( Sabatini et a l . ,1963; Caulfield, 1957).
]йатериал заливали в эпон-312 и алесь эпон-аралдат.Срэзн получали
на ультратоыах LKB "Heiohert". Дополнительное контрастированиэ
образцов, осуществляли по Рейнолыгсу (Reynolds , 1963) и проалат-
ривали под электронными микроскопами УЭМВ-1ОО-В (СССР) и Н-600-
(Hitachi, Япония)•при ускорявшем еапрязении 75 кв.
•" Для сканирующей южроскошга ооразод фшссировала 2 ч на холо-
де в 5^-ом растворе глутарового альдегида на ОД-моляр^оа кшсода-
латном буфере tpH-7,3), затем обрабатывали спиртом, ацетоном и
раствором амилацетата. После напыления золотей образцы просматри-
вали в сканирующем микроскопе Ш-2ДHitachi , Япоздш). Ери подго-
товке образцов для1 рентгеновского микроанализа, Здасахщю иатерка-
ла проводили жидким азотом по. разработанной нами мзгоддкз»
Токсические свойства культуральноЗ жидкости грибоэ-нематофа-
гов оценивали по методике Л.А.Курт (1973). В ряде других охзлоз
изучали проду1{ты матаболиауа хншых грибов, дт^Куидирупцие из
культуры гриба чераз ползкеирсницаемую.мембрану - езллофгн. Дей-
ствие содержимого клеток мотелкя- хящшх грибов на нвматод изуча-
ли пссло 1'.з!.!ельчония биомассы гркба с помощью стерильного пэска.
5кстрса<ты й;:ологя'шски активных,веществ.патучата из мкцелля' и
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
- тп -
культуральной ЖИДКОСТИ О ПОМОЩЬЮ органических растворителей; хло-
роформа, хлориотого метилена, гексана.
Поведение хищных грибов в почве исследовали путем прямого
микроскопирования, а также о помощью мембранных кшер (Муромцев и
др., 1977). Взаимоотношения хищных грибов с почвенными антагони-
стами изучали методом О.Л.Рудакова (Ibdl). Изучение фунгистати-
ческого действия почвы на хищные грибы проводили по методике Дико
(Dix • 19Ь7). Характер отношений хищшх грибов о микогельминтами
определяли по методу Н.В.Ыацкевич и др. иУь2).
Наличие мшофильных грибов в культурах хищных гифомицетов
выявляли путем глазомерной ревизии колоний на наличие секторов
или пятен мицелия, отличающихся от основной культуры, с последую-
щим микроскопированнем и выявлением микофнла внутри или на повер-
хности гиф хищного гриба.
При разработке регламента получения препарата на основе хищ-
ных грибов для биолабораторий испытывали разные способы получе-
ния маточных культур. Б качестве субстратов использовали зерно,
подсолнечную лузгу, солому, торф, £ля подбора жидкой среды приглубинном культивировании проводили предварительное изучение вли-
яния источников азота и углерода на продуктивность хищных грибов
по методике В.Н.Максимова и др. (1%9, 1ЪсО).
Возрастные изменения хищного гриоа ВКМЬ-ЗОбЗД определяли пу-
тем прижизненной окраски мицелия глубинной культуры нейтральным
красным (Беккер, I9t>3). Для вышеназванного штамма была такжо раз-
работана оригинальная методика определения возрастной фазы на ос-
нове способности гриба образовывать ловушки в погруженной куль-
туре.
При цитокариологическтс исследованиях грибы культивировали
на предметных стеклах, фиксировали уксуснокислым алкогольм (1:3)
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
• • и окрашивали по методу Романовского-Лшза в нашей модификации :
\ (Ь5апкевич, Тепляков.а,.1974);•. у . .' ;-' : • .• - . .
Вегетационные и производственные опыты по испытанию препара-
тивных форм хшцных грибов проводили в условиях защищенного грунта
на растениях огурца и томата* .Оценку эффективности действия пре-
паратов, осуществляли по;показателям интенсивности поражения рас-
, тений мелойдогинозом и распространенности заволевания (Методичес-
кие указания по выявлений учету, мерам борьбы о галловыми нема-
• . .тодами и оценке нематодоустойчивых сортов овощных культур в защи-
щенном грунте, 1982), а также по урожаю овощей.
• •'Количество личинок нематод в почвенных* образцах определяли
вороночным методом Бермана (Кирьянова"и др«," 1969).
••••. • , : , • " ' Р Е З У Л Ь Т А Т Ы И С С З Д Е Д О В А Н Й Й •< " ••'/.•-
,-, л - I . Биологические особенности хищных грябов-гифомицатов
. . . . Г при сапротрофном я биотрофном питании • ,
, < • - Наибольшее количество•выделенных.нами штаммов относитоя к -
роду Arthrobotrye• Corda enmna Mecht. .'-• (Теплякова, 1977). Хищные
V. грибы этого рода характеризуются хорошим ростом на питательных
; •;; средах, наличием крупных грушевидных» конических, яйцевидных*
- двуклеточных конидийi, собранных в головки на простых или ветвя-
• ищхся- конидиеносцах» а -также ловчих приспособлений в виде петель,
к о л е ц и . и х с п л е т е н и й » ; * • • ' • » • \ \ ~ ' ' • . • ! ' • •->--i'•''•'/'•;•• •
]• '• • • • • Среди грибов этого рода наиболее распространен в природе вид
...•'. irthrobotryo oJlgospora Ргеэ/ (Сопрунов, 1958; Кондакова,- I960;
•:. ва1Гоп,.1£77;;;Мехтивва, 1979; ta t su i , IS85). Hai/и выделентеами
; 'J A.ollgos'pdra ВЮ№-ЗО62Д (а. с. 16Б8818, ТешякОва к др.,-1991),
'< его отлк°ктёльная особенность - способность • образования ловчих
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
— т ? —
iOE спонтанно (без присутствия аематсд) при рооти на ггаркзо-
средах.
По ср^гнены) о выделенными н^ми прадотаваталяш рода vr thro-
yj , и х-ьле видами других родов (, U u i ' v i n i a I u^toty la
ii.~.) -echt., Dactylariopaia tr >ct jpa, i (Lracha.) l-e-ht.)
3 5 р р у р сяо-
, нсматсх^£ГОЕоа эф^кч^шностыа г ст^Олшьностьх) морфоло-
тс-1,'ЗиагС1.нчйолах признаков.
Up«i ^чвитяи хшщых грибсЕ рода i r t n o b o t r y s ьа шхг^лельных
средах в гоьартсносткой и гл^гс5я1шол ^дьтУ1<- , в оуспвизи нематод,
п тли) s гхирод1шх условиях (по-ш1) в их жцзаанно»^ цикла сыявта-
IL. а г ( гу»тщ-1б онтогенетические форма!: jutiitimfi, конидии, ло^уь-ьи,
х ^ uiocnoj^ . UO^HO считать, что Гсигйальи взаимосвязан, 1/еяду со—
к
Iif t c^..puTjoif«ioM питаяяк (Счз i f J^TOS) ь-бявдд*>тся ь ^
С "гОГв1 Ou XHTUOiX Г1ЛбОЕ, SHDECi.bJ. ^KZ j ^^.a1 iIBaeiOi,. ^ Lp
jt" xi4 t nucvort- аьта npoiiucoiEi ; c j ; t ; o k a i i j b ая
i n I .. i . teOTt-oiiibfl cjoco5, mibitiVt ^ i u . ] .
rj- о n MU-OJIT его внедрения в льматоду о^еилахоя п-с^о уыер<4-
г.ч1Г° i астедкей ьа сапготрофный. JTC СШЮ доказано с па«!с«цью tai-
^^л.'rlгыкк'>cцeaтнoгo анализа Р.ш.^1хья-оада (х-37) и цэдтвьредено
1жи ца ультраструктураом уровне (Тепляковс, РясЗчикова, 1Ь91).
Наличие в онтогенеза гинуп"" гриоов хдслищоспор (аоглиодахся
структур) объясняет причину, по которой они практически ье ш д е -
.тягтся из гочвы обычными ыакробиологкчес!^!»^ методами с исполь-
Еованием питательных сред. Дня выделения хищных грибов солзатедьг-
но присутствие нематод-индуктора прорчсташш хлашдоспор.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Хищные грибы при салротрофноы питании могут усваивать разные
источники углерода и азота,' но наилучший рост в глубинной культу-
ре отмечен при использовании комплексных источников этих соедине-
ний - мелассы^ кукурузного экстракта. На основе последних и была
нодобрана питательная среда для глубинного культивирования штамма
ЕКМ^-ЗОбЗД, позволяющая получать 15 г/л биомассы по сухому веще-
ству. ; ,• -' ' '• •' ' ' _.
Разработанная нами методика определения неыатофаговой эф$эк-
тивности хиящых грибов позволяет учитывать их аттрактивную и ток-
сическую способности (Шатрова и др.," 1989) и избавляет от трудо-
емкого процесса подсчета улавливапцкх приспособлений ('Сопрунов,
1958; Акулин, 1969; Мапкевич, Удалова, 1970)» Суть методики сво-
дится к помещению высечки культуры одного диаметра (3 мм) в сус-
' пензию некатод, содержащую 100±10 особей P.redivivua и подсчета
живых нематод в свободном от гриба пространстве через I сутки.
Нематофаговнй эффект определяется.по формуле; ,
, где Нэ г нематофаговая эффективность,% -. ••
• J^ ,** число яивых нематод до внесения гриба
• Кт — число\живнх особей после внесения гриба через I.сутки
;:' Kg'г'Число гювых особей в контроле до внесения гриба
; K g — число живых особей в контроле после внесения гриба че-
• ' р е 3 - 1 ; с у т к и . ' " ;'.: ..'•..';', ' ' • • . ' * > . • _ ; ,•• •• • _ •.•'•.,.• '
• .• В случав глубинной культуры в суспензию некатод вносят 20 мг
мицелиальной массы*- Тестирование проводят на часовых или предмет-*
ных стеклах с пара$иновыми:колы'лмиюш в маленьких чшпках Петри.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
- Г4 -
2. Экологические особенности хищных грибов и приспособ-
ленность их популяций к обиташш в почве
Методами прямого микроокопировавия и мембранных камер уста-
новлено, что при помещении в почву конидий или мицелия хищных
грибов рода Arthrobotrya на 2-3-и сутки формируются хламидоспо-
ра - визненная форма существования этих грибов в*природных усло-
виях.
Под влиянием конкурентной микрофлоры кошщии и минелий под-
варгаютоя деградации, тогда как хлаыидоспоры и ловушки разрушают-
ся значительно медленнее. Это объясняется тем, что хлаыидоспоры
ишют мощную меланизированную оболочку, а ловушки покрыты клейким
веществом с растворенными в нем токсинами (Ееккер, I97ii; Тепля-
кова, Рябчикова, IS»I).
Для жизнедеятельности хищных гвфошщетов в вочве характерна
периодичность в формировании ловчих органов. Первый пик активнос-
ти (число ловушек) наблюдается на 3-й сутки, второй - на 14-е су-
тки* после интродукции кокидий в почву (см. рис.)» Появление пиков
не зависит от колебаний температуры воздуха и влажности почвы.
Максимум ловушек у всох штампов, помещенных в почву в виде кони-
дий, наблюдается на 14-е сутки. Б этот ае период продолжается к
формирование хлашдоспор.
Хотя в лабораторных условиях все исследованные штаммы прояв-
ляли высокий нематодаговый аффект и хороший роот на питательных
средах, наиболее активными по численности ловушек и хлашдоспор
оказались штаоды A.oligospora ВКМ1^-30о2Д и ВКМВ-.2461Д. У неакти-
вных в почве штаммов (4/27-33, К-9, Ш-<2) коаидаи быстро лизирова-
лнсь; мицелий,ловушки к хламидоопоры выявлялись в небольших коли-
чествах.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
- Т5 -
' Коя-во ловушек на фильтре, иг.
I30
Сутки
•.•[ -.Ркс' Лйяаивка •чпсленности ловушек у некоторых штаммов •v
: " . ."v хищных грибов рода' Arthrobotrys • в почв& ' •-.,
; ; г ; - ' К - 9 ; , 2 ^ 1 Е ^ ; . 3 : - 4^27-33;4 ; ' -
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
- Г6 -
Высокий уровень численности хломидоспор через ыешй* после
помещения хищных грибов в почву свидетельствует и их приспособлен-
ности к существованию в этих условиях (Кожевин, 19Ь5, 1&аЭ).
Различия в проявлении жизнеспособности и нематофаговой эф-
фективности разных штаммов хищных грибов, помещаемых в почву,
свидетельствуют о необходимости скрининга штаммов но только в ла-
бораторных, но и природных условиях.
Характер взаимодействия хищных грибов о почвенными грибами
ИЗ рОДОВ Trichoderma, Rnizopus, Aapersiilua, Penlcillium, JUaa-
?ium как в условиях почвы, так и на питательных средах не одина-
1'СВ. Так, A.aiger, P.expaosum, Р.сЬг1иаьепиш, J.solanl ПрвКра—
1д ив развиваться в местах контакта с хищными грибами. В сравнении
с этим R.uigricana, T.iignorum, f.cjciopiura на»присутствие хищ-
ных грибов не реагировали и продолжали расти.
В местах соприкосновения культур виднн многочисленные хлами-
доспоры, а у некоторых штаммов и улавливапцио приспособления.
Если для штамма Кир—4 и 2д формирование спонтанных ловушек
отмечалось впервые, а кольца были немногочисленш, то у шта&ша
ЕККР-Хь2Д, которому это явление присуще, отмечалась массовость
их образования.
Через 2-3 недели на колониях A.amavori некоторые штаммы
хацных грибов разрастались в виде тонкого белого паутинистого ми-
целия, на котором формировались структуры, похожие на хламиде—
споры.
Представляет интерес поведение активного штамма ВКЫв<ЗО62Д,
ВОТОрыИ В совместной культуре С Trichoderma sp. В СуСПеНЗИП Н6-
иатод и почве образует большое число улавливахюк приспособлений,
несмотря на присутствие многочисленных спор гриба-антагониота.
Зто подтвердцает возможность совместного лепользовышя препаратов
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
на основе лшщых грибов и тркходер*в для задган овощных культур
от нематод и корневых гнилей (Гущин к др., 1982).
Существование oooooiV экологэтеокой шшм, в которой хвдныэ
грибы трофически связаны:с нематодами, делает их малоуазвидами а
для КЕКОгельмингов. Езди в лабораторных условиях нами было пока-
зано размножение нематод-мшофагов Aphelenohoides spk, Aph.sapro-
phillua franklin, Aph.besseyiChristie, Aphelenchus avenas Baatt-
«i-на культурах хищных грябов (Мавдсевя ,' Твшшкова а др., I98IJI,
то в условиях' iK>4sa их чисдешшеть под действием эффективных штам-
мов :грибов-нематофагов снижалась вдвое и больше (Шлапэтака, ГЛац-
кевяч,'Тегомкова, 1992). ." . • • . ' .
;*; 3. Некоторнв аспекты механизма хищничвотва гриОов-гифо-
мкцетов
; Установлено {Теянякова а др.» I9ffi), чяо мбель нематод
r . r e i i v i w a под ьоадайствяем xysirypaaiaoa яедкоета хиданх грж-
бов составляет не выше 24^, что согласуется с результатами а дру-
гих асследоьатеяёа (Сидорова,, 1967; ]Со-Ван-Кыу, 1968). В рвзуаь-
тате изучения действия метаболитов культуры хищных грабов A.oil-
•'goapora i двффувдируниш через в&яжофаа а прояаляззких токсячаскай
для наматод эффекту бкао ycraHoasew, чп хйвиа гряба лродудару-
»т то»;ожчесйае двии нематод веществ», одво »» оьойств аоторах-
. слабая раогворимость э вод© (Гущяя, Ивавов, Тэхшпсова, 1983). .'
Воэдействаеаа нв1«атод содержяааш ies«era^ глуб!шной культуры •: ...
втанамов Б1^?-246Д и ВКМР-3062Д показало, что ьнутряжяеточвке ме-
таболаты,трлбов вривхвка»г нематод p.redivivua и оказывав» та»-
же, как'.-и даффувдаруюиие через цадлофан *ютаболиты, токопавкв!
эффект.. Чераз 2-е суток содерхамое Евматода станоакяось
т ы м . -": г ' • > " . •* " ' . • • • • • ' • =
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
- Т8 -
Представление об участии в механизме хищничества нематофаго-
вых грибов токсинов, растворенных но в воде, а а клейкой веществе
типа латекса (Раджабова, 1971; Беккер, 1972) было подтверждено
нами о поыощыа сканирующей и трансьшссионной электронной шкроско-
шш (Теплякова и др., I9tt5; Теплякова, Рябчикова, 1991). в скани-
рующем иикроокопе на ловушках и мицелии видны многочисленные кап-
ли и НИТИ выделенных клейких веществ, на срезах ори исследовании
о помощью трансмиссионного электронного микроскопа эти вещества
представлены в виде глыбок или нитей на поверхности клеточкой
стенки.
Испытание экстрактов поверхностных и глубинных культур агсам-
ма ВКМВ-ЗО62Д, полученных о поыощыа органических растворителей -
хлороформа и хлористого метилена, показали их аттрактивный и ток-
сический эффекты, что также свидетельствует о присутствии как в
мицелии, так и в культуральной жидкости токсических метаболитов.
Изучение на ультратонких срезах механизма взаимодействия
ВК14У-ЗО62Д о нематодой f.redivivua , особи которой были добавлены
к недельной культуре хищного гриба на пептонно—кукурузном агаре,
показало, что ухе через 2,5 ч выявляется большое количество амор-
фного вещества средней электронной плотности ("клея"), формирую-
щегося в виде нитей или глыбчатых скоплений на поверхности лову-
шек и вегетативных гиф. Основная масса этого вещества связана о
ловушками, отложения его на вегетативных гифах незначительны, диа-
лиз образцов показывает, что предшественником этого вещества
("клея") является электронно-прозрачное содержимое вакуолей лову-
шек гриба.
Выброо "клея" ловушками, по-видимому, осуществляется черев
отверстия при слиянии плазмахеммы о оболочкой вакуоли, аналогично
процессу экструзии гранул секреторными клетками млекопитающих. В
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
пользу данного предположения свидетельствует отсутствие мелкихандоцитозных пузырьков и появление длинных нитей "клея" в среде,
- Через 2,5 ч на препаратах наблюдаются разные стадии.проник-новения гриба в нематоду/что свидетельствует о. значительной ско-рости втого процесса. Процесс проникновения гифы в нематоду не..связан с лизисом ее покровов, так как не наблвдаетоя растворения
- кутикулы, нет признаков выделения гидролитических ферментов. ~. Контахт гриба о поверхностью тела нематоды осуществляете*. ,
; при участки своеобразного мостика, названного нами "клещей нож-кой", образованной тонкогранулярным вешеством более высокой плот-ности, чем "алей", выделяемый ловушками.;Этот мостик образуетсвоеобразный овязупций слой между грибом и нематодой. На частисрезов в нем видны тонкие 5жбраллы, ориентированные верпендику- .
. жирно поверхности нематоды. На срезах проолеживаотоя также учаот-кх нарушения четкой границы между свяауппш веществом я кутику- .лой, где проиоходит олияние кутикулы » ввдалонного грибом вещеот-ва. В зовз контакта, в проотранотве под плазмалеммой гряба, обна-руживаются редкие мелкие гранулы о содержимым высокой и средней
( М Ю К Т р О В Н О Й П Л О Т Н О С Т И . . v ;.". ; ; ' 1 ( : , - ; ' ' V , ,:•-. ; . • ; : ' ; • • • ; ' _..\ : / •.•-
J. Начальные стадиж пенетрации кутикулы нематоды грибом, по-ви-
димому, происходят очень быстро. - Удалось зарегистрировать лишь .
моменты, когда клетки гриба частично находятся уже в теле немато-
ды. Анализ таких оревов свидетельствует о своеобразном раздвига-
нии гвфой клеток хутжку.ты нематода, вместе с которой проникает и
связующее вещество.В процессе проникаовенжя гряба происходит,
по-видимому ••; слияние его оболочка с аяаэмаявмюй клеток нематоды;
благодаря че.уу клетка гриба^ оказывается внутри хштоплазмы клетки
нематода^; Оболочке гриба,, очевидно^.врйнадлвжят важная роль в
процессе" проншаювения гриба через •кутикулу»: 06 этом свидетель-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
- РО -
ствует появление в ней фибриллярных структур в зоне пенетрации.
BUG ЭТОЙ области фибрилл нет. осыиофильное вещество оболочки об-
разует тонкую сетку.
Кроме фибриллярных структур, сввдетельствуших о наличии
процессов, обеспечивающих иеханизмы движения микрорентгеновокш
анализом установлено повышенное содержание кальция в мицелии и
ловушках хщккх грибов, форшрушцихся в присутствии некатод (Теп-
лякоиа и др., 19в5). По сравнению с сапротрофным мицелием содвр-
яакие калысвд в ловчих кольцах увеличивается в 38 раз.
Осуществление двигателышг <£ункгай у хищных грибов может,
как и у JEHBCTHUX (Болдырев, IS77) ос>ществляться при ПОИОЩЕ оо-
1гатительного белка-актомиозина о участием кальция.
Н*ишчие иихрофнлаивнтов и повышенное содерхание кальция в
лсвушках СЕИдетельствуют о роли сократительных структур, которые
участвуют в активном я бистром выдавливании кнея на поверхность
колец а сероизщекии оболочки гриба к плагмадедше кдетос нематоды
хщ П1.ч>2£икьоввкии гриба чероз ее кутикулу.
Ъ нематоде гриб локализуется, как указано выше, внутри цито-
клазму, тс есть по сути является внутриклеточным паразитом. На
шпадышх этаоах в клетках нематоды заметных изменений не реги-
стрируется, затеи вачинавтея деструктивные изыенеаия: прооветле-
tice цитопдазматического иатрикса, разбухание митохондрий , разру-
грает. Эти изыенания захватывают все клетки нематода. Воа-
J^JT грнба нат зоны лизиса, что указывает на отсутотвие вцдаленик
SSK ГЕДрол^тЕческих феркентов. Переход гриба, к сшфотро<£ноыу пита-
ксп сезвршаотся без каких-либо дополнительных изь:енеш1й в лшзно-двЕтельноотг.
4. Явление микофилии в жиаведеятельности ХЕЩЫЕС
грибов-гкфомицетов
В колониях разных шташов хищных грибов на агаризовашшх
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
- 21 -
средах ПОЯВЛЯЕТСЯ сектора или пятна более светлого ИЛИ бодоа пу-
шистого шщелвл с одноклеточными конидиями размером 3-5 тки, наз-
ванными нами "шкроконщщями", формирующимися lia конусовидных ко-
шадианосцах или простых ответвлениях мицелия. Данное явление рас-
сматривалось сначала нами (Ыацкевич, Андреева и др., 1973; Тошш-
кова, Гущин, I9d3) как фактор выщешшния сапротрофной формы нвы*-
тофаговнх гриоов, потерявшей способность к хищничеству. Однако
при более детальном изучении этого явления было установлено при~
оутотвие в культурах *т*жкнх немааофагов шкофильных грибов.
Иногда гифы микофида обвивала мицелий гриба-нематофага лва.
находились в его юютках. Ьшсофкл аайшодаяся и при прорасташш
конидий. В атом случае гифы к кошщии хищного гриба вследствие
пара оптирования в HEX кшко^ила лишаются своего содержимого, что
подтверждается и при электронно-микроскопической псслвдоваяии
(Теплякова, Рябчикова, L9yl).
Полного уничтожения культур хнщнкх грлбов шткофильныАШ гри-
бами на происходит при хранении таюас смешанных культур даже в
течение ^-5 лет без пересевов. В то же время контроль на наличие
микроконидай не всегда дает Е^-'РШХНОСТЬ обпарухить микофил, так
как он гожет присутствовать а Ь1льтуре только в мицелиальной <1ор-
При пересевах долго хранившихся к;л.отур грибов-нв*»атофагов
кикофЕлыше грибы иногда получают преимущества в развитии и пол-
ностыз вытесняют хищные грибы.
Чаще всего выделенные микофшхьныэ грибы принадлежали к родам
Cephaloaporium, Yerticiiiiujo, РаесНощ'свз. Разделение хлвдого
гифоыицета и мдсофцда гриба происходило при определенных услови-
ях. При пересева на агаризованную среду могли возшкнуть, как
"ys-азцвалось выше, секторы шш пятна с исцеляем, отличаицнмся от
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
основной культуры морфологическими особенностями. Б других случа-
ях ыногократныа пасоажи на агаризованиых спадах не выявляли такте
изменений» но.а случае глубинного культивирования,наряду о нали-
чием характерных для гримов рода Arthrobotrye широких гиф мице-
лия, развитие получал и длительно маскировавшийся микофил.
, Соответственно, для обнаружения микофяльных грибов в культу-
рах хищных гифомидатов предлагаетоя проводить глубинное культиви-
рование, при котором может происходить размножение микофила одно-
клеточными конидиями или в виде тонкого мицелия, а также его фра-
гментов, в то время как для-хищных грибов в глубинной культуре
характерец только нитчатый рост. Необходимтакже мякроскопичеохий
контроль .культур, оообенно длительно хранившихся грабов-ыематофа-
гов,ва наличка хокидий в г и ф михофильных грибов. ,; г : .• • *
; Изучение морфологических и физиолого-биохимических особенно-
стей штамма Л.1 A.longa ( а . с . 74593, 1980), выделенного Н»яи В •
Новооибярско! облаоти я используемого в лаборатории антибиотиков
МГУ в качестве продуцента фибрянолитяческих ферментов показало» •'
что данный свойством обладает не хащкый гриб, а михофильный_граб
cepiiaioeporitiai ер. г •, цриоутствуоций в /его - клетках. •. •• . >' .• . -->. •- -
':"'.'.. При оцвЕша вновь ввделешшх из ХИЩН1Я гифомисетов микофиль-.
вше грибов показано,-что гриба обладают виоокой:протволитячвохой• .-
* , в'частности, фибринолитичвекой ахтявиостыв, что дозволяет, ре-,••-
хоыендовать проведение деяенавравлввного отбора среди та. штамов-
-продуцентов этих ферментов^ ••...-•.;•; ч t ; ;> 'o ' • ^"-V.v •..,-/••'.f;---
, На основания изучения харахтера взаимодействия аятивного ->' : "
нтамм&ВКи»-3062Д и некоторых штаммов эятоиопатогенных грибов «в .
тех я» родов,, что к микофилн ( Cephalosporiwi^. Jaecllofflyoee-Vyc--. :
тановяено» что,как в условиях культуры, так /t почве эятомопато- •
генные грибе могут размножаться .за' счет мипелня и конидий хшдних.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
грнбйв-
Таким образом, микофилыше грибы могут не являтьоя спвцаалн-
зированными паразитами лзняны.с грибов. Это могут быть грибы разли-
чных экологических грушг, а тры числе и грибы энтоыопатогены, д м
которых клетки, хищных гнфомииетов при отсутствии насегомых явдя-
стоя источником дитаняд»
5. Принципы и метода отбора, поддержания и оценки
перспективных штаммов хищных грибов
На основании исследований микроморфадогических и наркологи-
ческих особенностей активного и относительно стабильного штамма
ВКМ1*-ли62Д (Теюшкова и др., I9S9) сделали вывод, что данный
штамм предотавляет ообой гомотип (Мацкевич, liitsO) и для сохране-
ния его исходных признаков к нему необходимо применять ыонокони-
диальный отбор по ооноввому морфологическому типу колоний с тща-
тельной выбраковкой всех отличающихся вариантов. Наличие у штам-
ыа ВКМР-3062Д спонтанных ловчих приспоооолений позволяет контро-
лировать его активность при рассеве. При этом предпочтение сле-
дует отдавать вариантам, у которых ловушки активно образуются
непосредственно на проростках конидий.
Селекционный штамм ВКМР-ЗД61Д (Удалова, Ыацкевич и др.,
ISd2) следует поддерживать также путем *оноконидиального отбора
активных вариантов, которые тестируют только в суспензии нематод,
так как данный штамм редко образует в культуре спонтанные ловуш-
ки. Однако, цоскольху основная масса конидий этого штамма форми-
руется из многоядерных гетерокариотических базальных клеток с
ядрами, различающимися по величине и форме (Андреева, Мацхевич,
1976; Теплякова, 1977) к нему может быть применен метод рассева
фрагментами мицелия. То же относится и к штамму XIX 4/27 - исход-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
яому по отношению к.штамму ВКМ&-2461Д. , \
, ;: Пассирование.через питательные среды дало возможность уста-
новить, что среди изолятов штамма XII 4/27, полученных путем фра~
шентацга М Щ Й Л Я Я , могут быть отобраны,культуры, характеризующие-
ся высоко* лпцноотью, стабильно сохраняющиеся в течение несколь-
и о переоевов (Твплякова к др., 1989). -•••.• :
: Оценку ввделенных культур и штаммов-нрбдуцонтов необходимо ••
проводить не только в лабораторных условиях^ но и в условиях,поч-
ва на нематофаговую эффективность, устойчивость к фунгиотазиоу и
пряспособленность сущаствования в ней. ... . ' ,. • г; - "•' • .
. Сопоставление" ряда штаммов позволяло установить, что наи-
большей нематофаговой эффективность», учитаваемой на.14-а оутяи
о ваысщьв мембранных ааиер,.обладает штамм ВКМР-ЗО62Д, который .•;
образовал 920 ловушек. В сравнения с ним штамм БКМ£-246ХД я XIX
4/27-33 в тех ае условиях образовали 546 а 51 ловушку соответст-'
веняо (см. рис). Штамм ЕКМг-3032Д характеризуется я большей '
устойчивостью ж фунгистатичности почвы. Относительно большое ко-
личество хаамвдоспор, характервхх для «ото штамма, сввдетельст- *
аует о его лучшей адаптация х условиям почвы и праятаемостж в
» « . , . - • • • .;; •' • . . • ; • ? . . . .•-. ; .••. . v - - 4 '
: • . . ' • ; • . ••••'> '
; ;- ' " .
Для длительного хранения активных штаммов можно рекоыеядо-
вать способ лиофалязапии и хранения в стерильной почвеi Повшюние
нематод аховой эффежгавности культур после хранения в почве возмо-
жно связало о наличием большого количэотва хламвдоспбр,формирую-
явхоя в этих условкях из клеток мицзлия и коЕИдий. Способность .
хлажвдоснор формировать многочисленные ловчие приспособленая объ-;
ясняет и усиление нематофагсвоЗ эффективностикультур после даж-
тедьаого хранения в холодильнике, где набдадается активное обра-
эование хламидоспор. Вовиожно, в этом случае происходит как ut
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
- ?5 -
условий, в которых гриб существует толь-
ко s виде хламидоспор.
6. Разработка биотехнологии препаратов на основе
грибов-гифомицетов с экологических позиций
С учетом имэщегося оборудования и сырьевых ресурсов в раз-
ных регионах страны нами разработан технологический регламент ао-
лучения в условиях биолаборатории препарата "нематофагин Ш", про-
дуцентами которого служат штаммы ВКМЗ*-ЗО62Д и ВШЕ-2461Д (Техно-
логический регламент на производство иематофагяна-Б1, Ы., 1ЬУО).
Согласно этому регламент} процесс производства нематофаги-
на-ЕИ осуществляется поверхностным способом. В качестве посевно-
го материала использует поверхностные или глубишша маточных ку-
льтуры, в качестве субстратов - подсолнечную лузгу, торф, солому,
биоперегной я другие. Препарат может быть получен за 12—15 суток,
срок его хранения составляет не менее 0,5 г. при комнатной темпе-
ратуре и до I г. в условиях полаженной температуры. Яейств>П4ИМ
началом препарата являются споры и шцелин.
На основании екологичеегаэс исследований, свидетельствующих
о приживаемости в почве хшцнкх грибов, вносимых в нее не только
в виде конидий, но и мицелия, было выдвинуто продподоаенше о воз-
можности получения препарата хищных грисов на основе мицелия глу-
бинной культуры.
Экспериментально установлено, что в развитии хищных грибов
на примере шташа ВКЦ»-306ЭД при глубинном культивировании наблр-
дается 2 этапа развития, которые легко различаются по морфологи-
ческим особенностям мицелия. Каждый этап соответств>ет определен-
ному физиологическому состоянию культуры.
Разработан, экопрасс-метод определения динамики развития три-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
ба, позволяющий оценивать пригодность различных питательных сред
для биотехнологии препаратов на оонове хиаиых гифошщетов.1 Метод;
Ьонованный на химическом титровании и определении вещеотв-восста-\
новиталей в средах, подтвердил полученные ранее данные об оптима-j
льных овойствах оредн.Л 19 (см. выше),как наиболее доступной по. |.
составу и экономически выгодной для производства препарата. • ;
Оценка жизнеспособности и ншатофаговой эффективности сухих, :'
пастоойразных и жидких препаративных форм на оонове глубинного . j
шшелия показала, что.лучшей сохранностью обладают сухие провара- t
тивные формы, хранящиеся. при пониженной температуре.' Хорошую жиз-
неспособность в нематофаговый эффект после 5 мес хранения показа-
ли образцы, полученные с помощью каолина. Через 6 сут в суспензии ,
'нематод наблвдалась 100^-ная гибель, на 4-6 сут появилооь опороно-^
ш е н и е . • , ' - •;'• ; • , , ' ,' ..' •- "" . .; • :
. '- • " t
- Заслуживает внимания относительно длительный срок хранения ..
мицелия глубинного культивирования в условиях холодильника (до 5
мео> и при хомнатной температуре (1-2 мес). •/ "' ';.'.' •;••-'.
> В условиях промышленного производства получение жидкой формы-
препарата целесообразно .не только о экономической, но и экологи- .;
ческой точки зрения, так как исключаются затраты энергии на про- '.
Песо сушки и уменьшается выбрею отходов в окружающую ореду.'
. 7 . Испытание в защищенном грунте различных препаративных
.•..-. . форм хидннх грибов против галловых нематод ••..*: *.\ \- ,'
чИоянтания различных препаративных форм хищных'-грибов.1 дали;.;
возможность eawnaTb.заключение об их эффективности^в отношения .j"
галловых нематод. Интенсивность поражения растений снижалась - - в -'
. 1,5-3 раза в зависимости от дозы, срока применения и качества -.
препарата. Обяая чиолевнооть лематод-,в' почве под действием препа-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
- Г? -
рата уменьшалась на 4б-86#, галловых нематод втрое и больше (Шта-
потено, Мацкевич, Теплякова, 1ЪЭ2). Урожайность огурца при этом
повышалась не манее, чем на и,Ь кг/м .
Большое практическое значение имеют шташовые особенности
хищных грибов - продуцентов биопрепарата. При равных дозах препа-
рат на основе штамма ШМр-3062Д превзошел по снижению интенсивно-
сти поражения растений огурца галловыми нематодами препарат на
основе штамма ШМР-2461Д на 0,4 балла и на <&,ti-35,4£ по снижению
общей численности нематод в почве (см. табл.).Таблица
Влияние препарата хищник грибов на общую численностьнематод в почве
Вариант
(Средняя .Числон- {Числен^{Снижение численности.числен- }ность не-,ность не-, номатод ( в %)Юность но-|Матод по | гатод по } 1:матод в .отношению!отношешш.по отноше-jno отноше-{ 1 г м З - -J.JK чистому.к чистому шло к чис-|нию к чио-t mi- ^ f к о н т р о л ю , контролю тому кон- .тому кон-: ши \ %г {с гетеро- тролю тролю с г е -| . ,(1осом, % } |терофосом
Препаратна основештаммаВКМР-2461Д
Препаратна основештаммаВКМВ-ЗО64Д
Контроль(чистый)
Контроль(с гетерофо-сом)
71,3 40,ь &3,5 59,4 46,5
24,2 13,й Id,I oo,2 ol,9
176,8 IuO.u iJl.d О
133,4 ?5,с 100,L U4.2 О
иптималышми дозами сухого биопрепарата на отходах сальско-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
хозяйственного производства ЯВЛЯЕТСЯ I0G-I50 г/м^, что согласует-
,оя с резуяьтаташ испытаний аналогичного препарата хвдаых грибов
во Франции (Cayrol , 1983). ' :
Дробное внесение препарата не уменьшает дозы при первом, оо-
новном внесении, которое необходимо проводить не менее, чем за 3
неделя до высадки рассады. •
Зйидкая форма препарата ва основе мицелия глубинной культуры
оказалась эффективной для уничтожения нематод в почве- При ее
внесении в дозе 2 кг на I м^ общее количество нематод в почве
снижается в 13 раз по сравнению с контролем и в 3 раза по сравне-
нию с формой препарата на основе соломы и торфа. Это свидетельст-
вует о перспективности предлагаемой нами мипелиальной формы, вы-
пуск которой может быть налажен на заводах, выпускающих биологи-
ческие средства защиты растений. . . >
,. , Эффект последействия препарата на основе хищных грибов поз-
воляет эффективно использовать его в нескольких культурооборотах
овощных культур защищенного грунта. Снижение количества препара-
та в борьбе с галловыми,нематодами при одновременно высокой эф- -
фективности его применения может быть достигнуто и при внесении
препарата в сосуда о рассадой. За время роста рассады хищный •'
гриб адаптируется к почвенным условиям, происходит его размноже-
ние за счет хламидослор. ' ••"...*. > . - ; •. .
;'/•. Особенности выращивания растений в каждом конкретном хозяй-.
стае Ссостав грунта, сроки а вады прсфишктаческях работ, плодо-
смен, способы получения рассады ж др.•); должна быть учтены при
планирований технологии получения и применения препарата на. ооно- ;
в е х и щ н ы х , г р и б о в . ' • '•.•.,' .••',-: '.-• • - Я ' \- ' '• •.. .. "••• • • •••
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
.! „
ютроч'лчосков ухудьеш t J ! "иогич^кой слтуацим вызывает
заыеы/ хотя б«! • условиях защищенного грунта широ-
ко прашкяегасс в заците 1 астсь. л пестицидов.
Развитие и совер^енствов^шие отологических методов Оорьбы о
водителями и возбудителями баловней растений рассматривался как
один из ЕСПЫИОБ охрани огрузагце.. среды, чгто относится и к мик-
^ооиологкческочу методу защити ^етишы о^ нематод при
хз-лдшх грпбов-ГЕ^о^шцетов, изучо u*a которцх всо Оатьшв
р^ется.
С чачдыи д?(е" з проиаг_:! . ic ОВО^ЙЕОДСТВС возрастает pwv™b
иного гпнта, где DIS^/^Г г i отллч л«-сл п.-сокой ст'.б.и'ьао-
CTJMCcntx л aci от.'ч^с „tx ivroroj. (ик IKO cirчтоприлулые
к& Taib't! >шя р^ст. .i»:, ..J .• :к арс^»?а.аи z воабудителвИ
и UJ3II,IICT IUOOXCSP -с.ь Ci отчч^тл1 »СьЗ£ S^JISITJ TOI_ 1'чиых
улыур от fj i Am** орг и uc^iu
I его п > «. ) 1 i ui.rjjo^ajt.ut на пе"атод JC
a, I'-oo), HJ аалсаль.1и н. ояо
..Tai.1lH4GCrIJC J0H3X, ЧТО ~f .Ucrt -bCTBJLIC iiH ТОЛЬКО О .ВС КОСЛОПО-
латизьо, но и оа-.ьаой э*одог леско». рол^ в утпл^зец^л огромной
Cue 'ассы нематод, птаулих в поиьз л чл^иа широко распространенных
( Gray, lbt£; »ritach and Ьуьы , c-dd).
Пркспосойлвнность гопу.-яи.'*. л.дннх гри(5ов к существованию в
природных условлях за счет хлахядоспор и способность продуциро-
вать биологически активнее матаоаглты обусловллзают ироцессы хищ-
ничества и определяют усго!члвость этих грлбов к иочвонному tlya-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
. . . . . = • , ; > : ; • . ' ' •-.. '• \ - з о - , • .•/ / : : • " • '• . • • • : . ' /
гиотаэиеу,' грибам-антагонистам и микогельминтам! . . " .
j • Знание биоэкологических особенностей хищных грибов делает '
возможным разработку стратегии производства и применения их пре-
паративных форм-в практика защиты растений от вредонооннх фито- .
гельминтов. Эта стратегия включает необходимость. наличия стабиль-
но-активных штампов-продуцентов, знание особенностей их.поддержа-
ния и сохранения, питательных потребностей и оптимальных условий
культивирования. * ' ' , : • , •
• Направление борьбы с фстондматодами о'использованием хищных
грис5ов-гифомицетов долаио складываться из реальных условий (нали-
чиянеобходимого количества биопрепаратаj организационных и агро- •
техничеоюсс возможностей хозяйства и др.)» которые могут быть ин-
дивидуальными в к&дцом конкретном случае.'. ', • » ; « .-'.' ..
",,.( •Полученные в,настоящем исследовании результаты можно пред-
ставить^ в виде следующих, выводов. ."•' ' v' '•*'
",;";-1» Из природных популяций выделено'свыше 70 штаммов ХИЩНЫХ :
Грйбов-гифомицвтов, ОТНОСЯЩИХСЯ К родам Arthrobotrys Corda emeni ;
Meoht., Daotylariopeia Meoht., Golovinia Meoht. Из ШОС при spo-
'вврке на нематофаговую эффективность отобрав и рекомендован'для—
Производства штамм Arthrobotryaoligospora BKJ№-3062fi ( a . c , ;
I6888I8, 1991), отличащийся от других штаммов этого вида отаби- .
льно-активными свойствами в способностью формировать улавливающие
приспособления спонтанно., ; \ ;•'"•; ; ' . - . . ' "•"-, , '.,* •' ,
•.: .2.'Проведены биоэкологичйские исследования ряда штаммов'хищ-.
них Грибов, относящихся к роду*; Arthrobotryai '", •'•-._ .'" .; . • , - '_
•' •;' • 2.1.. * Установлено* что хищные •• грибьг яри внесении' в почву не •• •
только выживают в ней, но и^размножаются за счет хламидоспор^.ко—";
торыв являются «язвенной формой существоваяия этих грибов в ;при-' -."
рода. ': '. •- -'•••• '••- * ' ' *'. " v с ; - . у У : ; - Ч г ; \ О " - : : ' . . - ; . : : ' ••
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
- ЗТ -
4.2. Обнаружена периодичность в формировании ловчих колец
хищных грибов и разница между штаммами по их нематофаговой эффек-
•ьтности и устойчивости к фуигистазису почвы.
•J.J. Тропические связи пагоду хищными грибами и нематодами
определяют в условиях почвы их устойчивость к грибам-антагонио-
там, в том числе и рода Trichouarma , широко применяемого в за—
дите растений, а также нематофаговый эффект в отношении АШКО-^
гельминтов, которые в культуре могут питаться их мицелием и кони-
диями.
3. Изучены циклы развития хищных грибов рода Arthrobotrys
при сапротрофном и биотрофном гатании, а электронномикроокошгчео-
кими исследованиями в сочотаь.ш с рентгеновским микроанализом вы-
явлены некоторые аопекты механизма хищничества.
3,1. остановлено, что большую роль в ывханиаме хищничеотва
играют аттрактивные вещества и токсины, слабо растворимые в воде,
а в теле нематоды гриб проходит биотрофную и сапротрофную стадии
развития.
3.<;. Впервые показано, что проникновение хищного гифомицета
в тело нематоды происходит путем раздвигания гифальным отростком
клеток кутикулы о участием в этом процесса фибриллярных структур
оболочки гриба.
3.3. наличие микрофнламентов и повь-анное содержание кальция
в ловчих приспособлениях свидетельствуют о их роли в механизмах
клеточных сокращений, направленных на выделение токсических клей-
ких веществ и на перемещение оболочки гриба х плазмалемме клеток
нематоды.
4. Изучение явления шгеофилии позволило разработать методы
обнаружения очистки культур Het атофаговых грибов от грибов-мико-
. Iij or>~ • л*роскопического контроля и пассирования через не-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
матод, рекомендуется обязательное проведение глубинного культиви-
рования, провоцирующего размножение шкофияьных грибов, находя-,
шизеся в клетках хищных гнфомицетов. :
5. Данными цито—кариалогяческих исследований и усовершенст-
вованием методов оценки Обоснованы и разработаны приемы отбора к
длительного подаеркания активных свойств штаммов - продуцентов
биопрепарата.
6 .1 . ШвокогидналыщЯ • отбор в сочетании о приемами хранения
при помощи лиофшгазакии пли в стерильной почве обеспечивают ста-
бильность культур.
5.2. Для сщеаки.неыатсфаговой эффективности предложены про-
стые методики, основанные на взаимодействии нематод с метаболита-
ми эавдннх грибов. • . * ,
6. Обоснованы о экологических позиций пути создания препара-
тивных фора хищных грибов на основе поверхностной и глубжнной
культур: , ' '. .
- твердо-фазная ферментация, при которой используется отходы
производства (сояозаа, подсолнечная лузга и другие продукты бвокон-
версшО предназначена дяя биолабораторий при тешшчных комбинатах
и станциях заидты растенжй; •
- глубинная культура» которая может быть использована для
получения препарата в врог«ышдашшх масштабах на заводах, выпуска-
ицше биологичесяиа ерэдетва зашиты растений.
6 . 1 . Разработан для биолабораторий технологический регламент
производства препарата ("нематофагин-ЕЯ") на основе спорово-шде-
лиального комплекса эффективных-штагдаов БКИ?-Э362Д и НШР-2461Д.
6.2. Получены леходные данные для разработки регламента по-
лучения биопрепарата на основе *зэделия глубинной культуры. Для
контроля за развитием гриба и оценки зкидгапс питательных сред раз-
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
~а.ботан метод, основанный ua "oaartecitoM титровании.
7. Лроведено испытание различных Гфепаративкых форм хищных
грибов на галловых и других почвенных нематодах в условиях лабо-
раторных и вегетационных опытов, а также производственной культу-
"ры огурца и томата в защищенном грунте.
Установлено, что интенсивность поражения растений мелоцдого-
позом может снижаться в 1,5-2 раза в зависимости от дозы и каче-
ства препарата.
Оощая численность нематод в почве под действием препарата
хищных грибов уменьшается на 46-<зо£, число галловых нематод -
втрое и больше.
.~авболее ол^шгалышмя *азс/ш оттого препарата, полученного
«а отходах сатьскохозяйспенгого производства, являщся ICO-IEO
./ч" , яшсою (миделиальной магск) - *.кгУм".
3. Ча осаованяи проведонгаа лспнтакгй разрайотаиа стратегия
:~имслеикя препсратов хишгасс грнбс^ з 7сх.-овнях защищенного грунта
цютап галловых кемотод, зораз^д^ис оЕсгцае растения.
Lo тьме диссертации onju. п-ог ITJ слодуищиа работк
1. п. с. ft 74a94J, Ouwi-. TOwM (.rtliroDotrya longa UscbtJ t -
продуцент [ибринохитлческах SiAirthTCB ЦЧлЗ.Аядреешсо, i'.A. *«акси-
УОЕ»1, Т.п.О^рейрчкова, л.а.Силавз, 1.С.]»лркова, С.л.Гаврилов,
п.С.к'урааова л Т.В.Теплякова): ^^лмево Лв.0Ь.76 № -i6Cd4Q7.j у -.
u7.u7.dO, Бол. й 25.
2. А.С. » Kbfidie, СССР, ктамм Arthroboti"jB oligoopora
/гоч. для получения препарата против галловьсх нематод Оэпля-
кова 1.В., .яцкевич ri.B., и£.трсза Г.Л. :* н хяенина Л.Л.): заявле-
но .u.Cffi.cc S «CJ4I32, ОП><5л.1-7Л1.Ь1, сод. .'* 41.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
. 3. Мацкевич H.B., ТеошюваТ.В., Приходько B.C.. Стабилиза-
ция нематофоговых свойств хищных грибов" при их развитии в культу-
ре // Микробиологические методы,борьбы о вредителями;раотений. ~
Новосибирск. - 1980;/-Вып.2. - С-25-29. ,•• ;. •„ , . ; . . . :
;
• ^ ,4 . Гулий B.Bi,: Теплякова Т.В., Иванов Г.М. Микроорганизмы,
полезные для биометода. - Новосибирск : Наука, Сибирское.отдёле-
н и о , I S 8 I . - 2 7 0 о . . . „ , ; ; : . - ; " • . ; . • • • .
•••' , 5 . Теплякова Т . В . , Ьйшегов С В . Морфологические и цитологи-
ческие, оообеннооти фаа,развития гриба Artbrobotryв o l igospora
Free, при глубинном культивировании / / Гиикроорганизмы в защите •'
растений. - Н о в о с и б и р с к . : - 1 9 8 1 . - С . al~84i: • . . '
. '. . . 6 . Мацкевич Н.В.,,Теплякова Т.В. , Шестеперов А.А; Характер:
поведения нематод-микофагов на различных по активности и возрас-
ту культурах хищных грибов / / Микроорганизмы в зашита растений. -;•
Новосибирск.".^ I S 8 I . , - с . 7 7 - e i . ;. • • • ; . ; , . ' • -У,:.',--'.
'•;•-'. ' 7 . Тешшкова Т . В . , Гущин Ф.Л. Изменчивость хищных грибов.//
Использование микроорганизмов в.сельском хозяйстве и промышленно-
сти. - Новосибирск.^- 1982. - С. 65-90. , . ; ; '/ , . ; •
.; ..'• ' 8 . Теплякова Т . В . , Гущин Ф.Л., - Бадин Д.Ш Испытание препа-
рата хищных грибов против галловой нематода / А г р о б и о л о г и ч е с к а я
задата растений в Сибири. - Новосибирск. - 1982. - С.',31-35..- .
' ' 9. Гущин Ф.Л.,'Иванов Г.И. t > Теплякова Т.В. Токсико'обрааую- -
дая способность хшдаого гриба Arthrobotrya o l igoepora Рг . / / Си-
бирский BUCTH.c.rXw науки. - Новосибирск. - 1983. - & 2,' -,С. • IC0-
I C 2 . " . . . • : 1 , - • • . ; . ' • . . , • • • ' • : ; ' . . ' - . '•••; - . \ ; ч - . ; " ' - . ' : У / ' ' ' . - . - . . . ' . • ; . S . . - •.'-- .'
. : 10. Теплякова Т.В., .Гущин.Ф.Л. Изменчивость хищных грибов •.
рода- Arthrobotrys •• по типу спороношения / / Интегрированная защита
растений от вредных организмов. - Новосибирск. —1903. - , С , , И 2 - .
1 2 4 . • .- v - • . • • " . ' . • • ' ' • •"' "• •'.' '••':'.•• ч ' \ . • •
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
- 3 5 ~
I I . Тешшкова Т.В* Возмо-ьосте и состояние биологической
борьбы с галловыми нематодами р заиленном грунте J/ йиологичео-
клл метод защиты* растений от, г.редлтелеи и болеадеИ и охрана окру-
жающей среды. - Кишинев, - ' i - o l . - С. 4«2-45.
12.Теш1якова 1.Ь. Пути использования хищных грибов-гифошще-
тов в борьбе с галловы&ш негатодами // Биологический матод защи-
ты растений. - UIHCK. - Ibd4. - 0. 122,
. 3 . Гущин v.Ji., Теплякова Т.В. Взаимодействие хищных грибов
с некоторыми антагонистами почвенной микофлоры // 1!нтегрированная
зацдта растений о™ болезней и врвдитолек в Сибири. - йовос55бирск.
- ii«o5. - С. 15d-bl .
14. Теплякова Г.В., «зккар ^ . 3 . , Сухоруков А.А. Исследование
ловчих качец хлщного гриб«. Arti.robotrys oligoapora, штамма XIX
1/ 7 методами рентгеновского андллза и электронной микроскопии //
-жроорганизАш в защите растений. - Кишинев. - Штиинца. - ±Уво. -
(-. 24-о1.
1о. .шологическая защита овошкых ку!ьтур в защищенном грун-
те // -етодические рекомендации. - Ь, - 1ъаЗ. - У! С.
1о. Культивирование л пр-и пение грибов против вредна елей
и болезней в защищенном rpjHTe // • етодические рекомендащш. -
Кишинев. - Ibk-5. - tt> с,
17. Тешшкова Т.В., Гущин *.JI. Ирс'иемы в использовании хищ-
ных грибов-гифомицетов против галловых нематод // Лнформ.окт.ШС
..ОБЕ, Л., 1900. - * 12. - С. о*.-Ь5.
18. Максимова Р.А,, Шаркова Т . С , Теплякова Т.В. Физиологи-
ческие особенности хищного гриба rtrthrot>otrya longa, штамма J6 I
при образовании протеолитических «рерментов о фибрцнолитичвскш.]
действием // естественные враги насекомых-фитофагов. - Кишинев.
• - илилнца. - 19о6, - С.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
- :• •; "• - з е - . . •' ' ' '• ч - ' ' •
. 19» ТешигеоваТ.В. Микробиологические средства зашиты расте-
ний от $ютодаразитичбских нематод / / Биологическая регуляция чис-
ленности вредных организмов. - Ы.: Агроцромиадат. - 1966. -
С. 178-Ш?. - '
.; , 20. Шаркова Т.С., Максимова Р.А., Тепяякова Т.В.' Фяэиологп-" ;
ческие особенности Arthrobotrys longa Mecht. в связи с образо-
ванием' фЕбринолитических ферментов J/ Микология и фитопатология* •
- 1 9 8 8 . - Т.22, & 2. - C.I49-I52. . . ' . '
• 21. Кальвит Т.К., Теплякова Т.В., Шоргашова Л.П. Особенноо-
ти развития энтомопатоге!шых и хищных грибов в почве // Пхюйлеш
создания в применения микробиологических средств защиты растений. :
- М..- I9S9. - С. 207.
22. Теплякова Т.В., Шорникова Л.П. Скрининг штаммов хшашес
грибов-гифомицетов // Тез.докл. I I симпозиума стран - членов СЭВ
по шкробнш пестицидам. - Ы. - 1990..- С. 202.
• .' 23. Тешшкова Т.В., Степанова Е.В., Кальвиш Т.К. Селекция
я поддержание активных а стабильных штампов нематофаговше гря<5ов
// Микробйодогачесвив исследования в Западной Сибири. -Новоси-
бирск. - Наука. - Сибирское отделение. - 1989, - C.7I-74.
."-' 24. Шатрова ГЛ.» Кодухарь Г .Г,, Тэплякова Т.В., Ыахскевич •
й.В., Гладкова И.А., Ротару С.П. Бвделешгз и отбор стабильных и
высокоэфф8ктивнюс штаммов нематофаговых грибов // Микробиологи-
ческий метод защиты растений от вредителей, болезней и сорняков.
- Кишинев; - Штиинца; -1989 . - С . 3-12.
•25.-Таплякова Т.В;, Зелепкэв В.Н., Солодкий В.В., Зодоиас
СИ. Возмояяости получения.Ерепарата хищных грибов на основе ми-
целия // Тез;докл. I I Симпозиума стргн-членов СЭВ по микробввм
пестицидам. - М. - 1990. - С. _147. " ', •. ^ •
26. Шатрова Г Л . . Теплякова Т.В;,;Кояухарь Г.Г. Получение
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
слопрвнарата i сматофагошд на ч.~!оз<з ^г^6-* Р°да .rthrobotrye
// Гез.дскл. I I Симпозиума с-А~„» -члшюв СЗЗ но млкройщм аести-
Цтам. .'«. - I9H). - С. I4b.
-7. Мацкевич И.в,, Косовец B.C., Иосселиани Д.А., Карпштян
Д.А., Пряходько В.П., Удалова j . E . , Теилякова Т.З. Характсраота-
vu немзтофаговых свойств бдопг&парата хищных грабов, полученного
опитко-промшыешшм способом // Utuwmrna и фитопатология. - T.24,v
Я I . - 1990. - С. 22-i.6.
23. Налспяла Л.Н., 5^а1р..влч ! ! .В., Кожухарь Г,Г., Тепдякова
Т.В. йикрие гпа.ш-'ыих способов хранения aa жианедвятельность нв-
матс4агопьа эапсих грлсов // !.-п-1логия к <£итоиатология. - 1990. -
Т.С4, 3 : . - С. JI2-3T4.
ZZ. . плл ов . ?..>,, .i1* 1,п ;„а Г,И. л*сзниз гглЛа - i лфсмшты
// .-«-«ита растекиа. - 11. - I&9I, -
л/. Чаты и Т.К., Г'лпкко i -".3., .Cj пп.оал Л.П. Ыанедояталь-
/о- ь jii.-4,rcraToroWiHx ! i оьит^1 u^tbJt г^лб^п в цочьа / / 'Дп-оло-
„ ш и 4ктггатил^гик. - *bjt.. - Г. .$, & 6. - С. 403-501.
CI. i^wiuTi на Х.'.А., 'ijp uLxin j '«3., Тицллксза Т.В. (^иЫи'.телъ-
нал kat-ui4TtirKCTпса всчдойстьш! x.saumx гр^оов и квматкцидов на по-
ЧВеЯНЫО нематода// i.^\,a raraJitoXo^tca Utvunioa. - 1992. -
32. tSaokevio K.V. , Tepljaiov» T.V, Conneotion ot morphologi-
cal and physiological variabi l i ty o£ some imperfect fungi in their
microevolution / / International jympoeiuai " involution and. Environ-
ment " ( Brno, 17-22 , VIII ,ГэсЯ ) Abstracts of commuiUcations . -
t-raha , 1981,- p. 224 .
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
О'>ьем 2". п л Заказ 1ь29 Тлрал 100
1ип«'"ри-5-1 я V\o ковскои с х академии им К A TJ'MI рязева1С7С50 Москва И 550 THV, p а е ^ к з я ^л , 44
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»