1 Envelope (130-240 nm) a forma di proiettile Capside elicoidale Lyssavirus virus della rabbia...
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Envelope (130-240 nm)a forma di proiettile
Capside elicoidale
Lyssavirus virus della rabbia mammiferi-uomo
*Virus della Stomatite Vescicolare
Vesiculovirus VSV * mammiferi-uomo-insetti
GENERE SPECIE OSPITE
Genoma a RNAss di polarita’ negativa
2
N P(NS) M G L
VIRUS della STOMATITE VESCICOLARE (VSV)
3
VSV
4
Per vedere questa immagineoccorre QuickTime™ e un
decompressore GIF.
MORFOLOGIA: allungata “U” o “6”Nucleocapside: elicoidale (50 nm, d)Involucro: si
DIMENSIONI: L = oltre 1 micron D = 80 nm.
GENOMA: 1 molecola di RNAss lineare (-) 18.9 kb - 7 geni
FAMIGLIA: Filoviridae
Generi: EBOLA Zaire ( > 80% m.) EBOLA Sudan ( 70% m.) EBOLA Reston
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Recettori: IgnotiMeccanismo di penetrazione: IgnotoReplicazione: nel citoplasma
simile ai RhabdovirusMeccanismo di maturazione: Gemmazione
CPE: vescicole intracitoplasmaticherigonfiamento dei mitocondrilisi degli organelli
corpi inclusi citoplasmatici
FATTORE di RISCHIO: 4STABILITA’: stabile a temperatura amb.INATTIVAZIONE : 60° C per 30 min
radiazioni UV raggi X solventi dei lipidi
6
Influenza A - 8 segmenti. Infetta l’uomo e diversi animali
Influenza B - 8 segmenti. Infetta solo l’uomo.
Influenza C - 7 segmenti. Infetta solo l’uomo.
Genoma: RNAss (-) segmentato
(80-120 nm)
7
Virus dell’Influenza: Strategia di un virus a RNA(-) segmentato
Replica nel nucleo
Utilizza i meccanismi di splicing della cellula ospite
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Modello di RNP.Le sfere blu rappresentano i monomeri di proteina NP associati al vRNA (linea nera). Il singolo filamento di vRNA è ripiegato e forma una struttura “hairpin” a doppia elica (sequenze 5´ e 3´ complementari ) che costiruisce il sito di legame per il complesso eterotrimerico della RNA polimerasi RNA-dependente (PB1-PB2-PA).
Organizzazione strutturale dei complessi RNP de virus influenzale
PB2
PA
PB1
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La sequenza cap rappresenta il primers per la sintesi degli mRNA virali da parte di PB1
Ulteriore vantaggio : Inibizione della sintesi degli mRNA cellulari
Il complesso della RNA polimerasi RNA-dipendente del virus dell’Influenza A
PB2 “ruba” le sequenze 5’-cap agli mRNA della cellula ospite
il complesso RpRd non ha attività di metiltransferasi per la sintesi del cap
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Virus Influenzale: passaggio dalla trascrizione degli mRNA alla replicazione del genoma
From Flint et al. Principles of Virology (2000), ASM Press
I livelli di NP neosintetizzata determinano la transizione della fase
Bassi livelli di NP, sintesi di mRNARichiesta di PB2 per legare il cap
Assenza di funzione di PA
Alti livelli di NP, replicazione del genoma
La polimerasi virale acquisisce la capacità di iniziare la sintesi di RNA senza “primer”
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I segmenti genomici e gli mRNAs differiscono per le estremità
RNA genomico
mRNA : estremità 5’ (10-13 nts) non corrispondono alle sequenze genomicheestremità 3’ mancanza di 15-22 nts rispetto al 5’ di RNA genomico
antigenoma sintetizzato in assenza di “primers”.
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virus a RNAds
REOVIRUS
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Respiratory Enteric Orphan Virus (150 tipi)
Genoma segmentato (10-11)
Capside icosaedrico doppio (70-75 nm) -
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Reovirus: strategia dei virus dsRNA
la trascrizione dei segmenti avviene all’interno delle particelle “core”
nel lisosoma proteolisi dei 2 rivestimenti proteiciattivazione della RNA polimerasi virale contenuta nel core
raggiungono il citoplasma mediante canali posti in asse di simmetria 5 della particella subvirale
nel citoplasma gli mRNA:
‘core’
sintesi di trascritti primari [mRNA] provvisti di Cap ma mancanti di polyA
RdRP: proteina 1
- traduzione delle proteine
- impacchettamento nelle particelle subvirali neoformate. Vengono utilizzati come stampo per la sintesi di nuovi genomi a dsRNA
‘ISVP’
‘VP’nel RE
I virioni maturano nel RE dove acquisiscono il capside più esterno
14
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RETROVIRUS
LTR = Long Terminal Repeats
(80-120 nm)
Capside a forma tronco-conica con involucro
Genoma diploide (9-10 Kb)RNAss a polarita’ positiva
HIV
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Genoma dei Retrovirus
From Flint et al. Principles of Virology (2000), ASM Press
7-10 kb/copia
Diploide: 2 copie/virione
il genoma dei Retrovirus: RNA(+)
alto grado di ricombinazione
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Replicazione dei Retrovirus
provirus
complesso di preintegrazione
From Flint et al. Principles of Virology (2000), ASM Press
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La stupefacente azione della RT Iniziazione
From Flint et al. Principles of Virology (2000), ASM Press
RT sintetizza una copia di DNA a partire da un primer di tRNA all’estremità 5’ del genoma virale
L’attività di RNasi H della RT degrada l’estremità 5’ della molecola di RNA ( genoma virale)
La molecola di DNA neosintetizzata può appaiarsi con l’estremità 3’ del genoma virale (1° scambio di templato)
18From Flint et al. Principles of Virology (2000), ASM Press
la molecola neosintetizzata di DNA(-) si appaia con RNA virale
Sintesi di DNA (-) fino alla regione PBS all’estremità 5’ dello stampo di RNA
RNasi H degrada la molecola di vRNA.PPT viene riconosciuto come primer per la sintesi del DNA (+)
tRNA e PPT degradatida RNasi H
l’estremità 3’- del DNA(+) si appaia alla seqenza PBS presente al 3’ della molecola di DNA(-)
La stupefacente azione della RT: 1° scambio di templato
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RT ha scarsa attività di proof-reading alto grado di mutazioni (10-4 – 10-6)1 mutazione/genoma/ciclo di replicazione
DNA circolare con estremità 5’ (U3-R-U5) appaiate
RT (attività di elicasi?) svolge il DNA appaiato e continua la sintesi fino alle due estremità 3’
La stupefacente azione della RT: 2° scambio di templato
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PBS (tRNA binding site)
DIS (dimer linkage site)
packaging site (
PPT (2nd strand primer site)
gag pol env RU5 U3cap A nR
HIV-1 RNA
HIV-1 DNA
gag pol env RU3 U5R U3U5
PBS (tRNA binding site)
DIS (dimer linkage site)
packaging site (
PPT
LTR LTR
Replicazione dei Retrovirus
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Processamento: le estremità del DNA virale vengono riconosciute da IN e tagliate per formare idonee estremità 3’ (avviene nel citoplasma).
Sintesi di riparo (enzimi dell’ospite)Formazione di intermedi “gapped”
Integrazione: la rottura e l’inserimento sono coordinatirottura dei legami fosfodiesterici nel DNA dell’ospite (4-6 bp)Inserimento delle estremità 3’virali (clivate)
Fasi del processo di integrazione del DNA retrovirale
L’integrazione è sito specifica per il genoma virale (estremità), ma casuale nel genoma della cellula ospite
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Integrasi virale (IN)
taglia DNA viralee cellulare
DNA virale integrato(provirus) 4 coppie
di basi piu’ corto del DNA circolare non
integrato
gli mRNA di Gag, Pol e Env sono tradotti come poliproteine chevengono processate dalla proteasi virale