ヒト核内受容体を介する作用物質を探索ヒト核内受容体を介する作用物質を探索

するための遺伝子組み換え酵母の樹立するための遺伝子組み換え酵母の樹立

産学官連携機構・先端科学イノベーションセンター 八木孝司E-mail： yagi-t＠ riast.osakafu-u.ac.jp　　 TEL： 072-254-9862　

　 FAX： 072-254-9938

ＳＰＳＰ１６１６

大阪府立大学

特　許 有

無共同研究先 有

無技術段階 研究段階

実用化段階

関連分野環境アセスメント、環境測定、医薬品、食品化学など

への要望ﾊﾟｰﾄﾅｰ環境試料を用いた実証試験をしてくださることを希望します

ダイオキシン類や環境ホルモン物質などがヒト細胞に入ると特定の核内受容体に結合し、それが下流の遺伝子を発現させます。この機構に基づいて、物質が作用すると色が変わる酵母アッセイ系を、遺伝子組み換え技術によって樹立しました。この酵母を用いて環境中の人体影響物質を簡便迅速に探索できます。生理活性物質の探索にも利用できます。

アッセイ結果の一例

今後、種々のヒト核内受容体を組み込んだレポーター酵母を逐次開発していく予定です。

ヒト核内受容体を介する作用物質を探索ヒト核内受容体を介する作用物質を探索

するための遺伝子組み換え酵母の樹立するための遺伝子組み換え酵母の樹立

P1P1１６１６

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ARNT AHR

GAL1,10 BIDIRECTIONAL PROMOTER

lacZ

CYC1A1 PROMOTER

5x XRE

Reporter plasmid pTXRE5-Z chromosome

S. cerevisiae W303a

被験物質 1L 酵母菌液 5L

ガラクトース培地 200L

培養液 10L 発色基質 50L

30℃ 18hrsOD595測定

37℃ 1hrOD405測定

溶菌バッファー　140 L

リガンド（化学物質）

受容体Hsp90

SRC1CBP

SP1 TFIIDRNA Pol II

mRNA

核膜

細胞膜

XRE GC Box TATA

転写

図２．アッセイ酵母（ダイオキシン類測定用酵母の場合）

図３．測定方法

図１．リガンドー受容体の細胞内挙動

長瀬産業（株）で発売されているキット：図４ ( 左 ) ． ChromisTMERα （エストロゲン類分析用）図４ ( 右 ) ． ChromisTMAhR （ダイオキシン類分析用）担当：西本幸史

このアッセイ法の特長： 簡便な操作で、分析時間はオーバーナイトですみます。（特許出願中） 同時に多検体を処理できます。

低濃度で検出可能です。汎用のマイクロプレートリーダーで測定できます。

ヒト核内受容体を介する作用物質を探索ヒト核内受容体を介する作用物質を探索

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P2P2１６１６

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Testosterone 濃度 (log M)

Fold

Induction Fold

Induction

0

5

10

15

20

25

30

35

CT -9 -8 -7 -6

C AR Assay yeast

SRC1 + SRC1 -

Fold

Induction

5

10

15

20

25

-8 -7 -6 -5

Dexamethazone 濃度 (log M)

A

0 0

GR Assay Yeast

0

2

4

6

8

10

12

-9 -8 -7 -6

9-cis Retinoic acid 濃度(log M)

B

0

RXRα Assay Yeast

SRC1 + SRC1 -

SRC1 + SRC1 -

図５． ERα レポーター酵母を用いた各種リガンドに対する応答

図６． AhR レポーター酵母を用いた各種リガンドに対する応答

アッセイの応用例図７（左）．ＥＲ α レポーター酵母を用いた石津川の水の活性測定図７（右）． AhR レポーター酵母を用いた石津川の水の活性測定

環境分野以外にも医薬品分野、食品分野など広く応用可能です。

新たな受容体レポーター酵母の開発とコアクチベーター導入による高感度化図８（左）．グルココルチコイドホルモン受容体レポーター酵母のリガンド応答図８（中）．レチノイド X 受容体 α レポーター酵母のリガンド応答図８（右）．アンドロゲンレポーター酵母のリガンド応答