Раздел 3 ВЕКТОРЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕВ ... · 2017-10-05 ·...
Transcript of Раздел 3 ВЕКТОРЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕВ ... · 2017-10-05 ·...
![Page 1: Раздел 3 ВЕКТОРЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕВ ... · 2017-10-05 · Плазмидные векторы Вектор Копийность оri Группа несовмести-мости](https://reader034.fdocuments.net/reader034/viewer/2022042412/5f2c0b77aedb327ea26f7d0b/html5/thumbnails/1.jpg)
Раздел 3
ВЕКТОРЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ ВГЕНЕТИЧЕСКОЙ ИНЖЕНЕРИИ И ИХ
ОСНОВНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
![Page 2: Раздел 3 ВЕКТОРЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕВ ... · 2017-10-05 · Плазмидные векторы Вектор Копийность оri Группа несовмести-мости](https://reader034.fdocuments.net/reader034/viewer/2022042412/5f2c0b77aedb327ea26f7d0b/html5/thumbnails/2.jpg)
Cвойства векторных молекул
• Способность к автономной репликации
• Наличие участка начала репликации(ori)
• Уникальные сайты рестрикции (MCS, полилинкер)
• Небольшой размер
• Структурная и сегрегационнаястабильность
![Page 3: Раздел 3 ВЕКТОРЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕВ ... · 2017-10-05 · Плазмидные векторы Вектор Копийность оri Группа несовмести-мости](https://reader034.fdocuments.net/reader034/viewer/2022042412/5f2c0b77aedb327ea26f7d0b/html5/thumbnails/3.jpg)
Вектор Применение Максимальный размер вставки, т.п.н.
Примеры
Плазмиды Рутинные манипуляции с ДНК 10-20 pBR322, pUC18
Фагмиды Рутинные манипуляции с ДНК Мутагенез in vitro
10-20 pBluescript
M13 Мутагенез in vitro 8-9 M13mp18 λ (вектора внедрения)
Конструирование библиотек кДНК ~10 Λgt11
λ (вектора замещения)
Конструирование геномных библиотек ~23 λZAP, EMBL4
Космиды Конструирование геномных библиотек ~44 pJB8 BAC Конструирование геномных библиотек 130-150 pBAC108L PAC Конструирование геномных библиотек 75-120 pCYPAC YAC Конструирование геномных библиотек 1000-2000 pYAC4
addgene.com
![Page 4: Раздел 3 ВЕКТОРЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕВ ... · 2017-10-05 · Плазмидные векторы Вектор Копийность оri Группа несовмести-мости](https://reader034.fdocuments.net/reader034/viewer/2022042412/5f2c0b77aedb327ea26f7d0b/html5/thumbnails/4.jpg)
Плазмидные векторы
Вектор Копийность оri Группа
несовмести-мости
Контроль
pColE1 ~15-20 ColE1 A Ослабленный
pBluescript ~300-500 ColE1 (производное) и F1
A Ослабленный
pBR322 ~15-20 pMB1 A Ослабленный pUC ~500-700 pMB1 (производное) A Ослабленный pGEM ~300-500 pUC и F1 A Ослабленный pET ~15-20 pBR322 A Ослабленный pGEX ~15-20 pBR322 A Ослабленный
pR6K ~15-20 R6K (+ необходим ген pir)
B Строгий
pACYC ~10 p15A B Ослабленный pSC101 ~5 pSC101 B Строгий
addgene.com
![Page 5: Раздел 3 ВЕКТОРЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕВ ... · 2017-10-05 · Плазмидные векторы Вектор Копийность оri Группа несовмести-мости](https://reader034.fdocuments.net/reader034/viewer/2022042412/5f2c0b77aedb327ea26f7d0b/html5/thumbnails/5.jpg)
Селективные маркеры
• Устойчивость к антибиотикам (Ap, Kan, Tc, Cm, Gen)
• Устойчивость к другим токсичным веществам
Отбор рекДНК и контр-селекция:
• lacZ
• Гены, в присутствии которых синтезируютсятоксичные вещества (sacB)
![Page 6: Раздел 3 ВЕКТОРЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕВ ... · 2017-10-05 · Плазмидные векторы Вектор Копийность оri Группа несовмести-мости](https://reader034.fdocuments.net/reader034/viewer/2022042412/5f2c0b77aedb327ea26f7d0b/html5/thumbnails/6.jpg)
pBR322
Глик Б., Пастернак Дж., 2002
![Page 7: Раздел 3 ВЕКТОРЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕВ ... · 2017-10-05 · Плазмидные векторы Вектор Копийность оri Группа несовмести-мости](https://reader034.fdocuments.net/reader034/viewer/2022042412/5f2c0b77aedb327ea26f7d0b/html5/thumbnails/7.jpg)
pUC18/19
Глик Б., Пастернак Дж., 2002
![Page 8: Раздел 3 ВЕКТОРЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕВ ... · 2017-10-05 · Плазмидные векторы Вектор Копийность оri Группа несовмести-мости](https://reader034.fdocuments.net/reader034/viewer/2022042412/5f2c0b77aedb327ea26f7d0b/html5/thumbnails/8.jpg)
Нитевидные фаги M13, f1, fd
• Удобно заражать клетки – инфекция (F-пили) и трансфекция
• Репликативная форма: ~ 6,5 т.п.н. кольцевая двуцеп. ДНК в клетке
• В вирионе: ~ 6,5 т.н. одноцеп. ДНК
• Получение гибридизационныхзондов, секвенирование и мутагенез.
![Page 9: Раздел 3 ВЕКТОРЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕВ ... · 2017-10-05 · Плазмидные векторы Вектор Копийность оri Группа несовмести-мости](https://reader034.fdocuments.net/reader034/viewer/2022042412/5f2c0b77aedb327ea26f7d0b/html5/thumbnails/9.jpg)
Щелкунов С.Н. 2004
![Page 10: Раздел 3 ВЕКТОРЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕВ ... · 2017-10-05 · Плазмидные векторы Вектор Копийность оri Группа несовмести-мости](https://reader034.fdocuments.net/reader034/viewer/2022042412/5f2c0b77aedb327ea26f7d0b/html5/thumbnails/10.jpg)
Векторы на основе ДНК фага λ
Щелкунов С.Н. 2004
![Page 11: Раздел 3 ВЕКТОРЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕВ ... · 2017-10-05 · Плазмидные векторы Вектор Копийность оri Группа несовмести-мости](https://reader034.fdocuments.net/reader034/viewer/2022042412/5f2c0b77aedb327ea26f7d0b/html5/thumbnails/11.jpg)
Вектора внедрения и замещения
Уилсон К., Уолкер Дж., 2013
![Page 12: Раздел 3 ВЕКТОРЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕВ ... · 2017-10-05 · Плазмидные векторы Вектор Копийность оri Группа несовмести-мости](https://reader034.fdocuments.net/reader034/viewer/2022042412/5f2c0b77aedb327ea26f7d0b/html5/thumbnails/12.jpg)
Космиды
Глик Б., Пастернак Дж., 2002
![Page 13: Раздел 3 ВЕКТОРЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕВ ... · 2017-10-05 · Плазмидные векторы Вектор Копийность оri Группа несовмести-мости](https://reader034.fdocuments.net/reader034/viewer/2022042412/5f2c0b77aedb327ea26f7d0b/html5/thumbnails/13.jpg)
BAC – вектора на основерепликона F-плазмиды E.coli
Щелкунов С.Н. 2004
![Page 14: Раздел 3 ВЕКТОРЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕВ ... · 2017-10-05 · Плазмидные векторы Вектор Копийность оri Группа несовмести-мости](https://reader034.fdocuments.net/reader034/viewer/2022042412/5f2c0b77aedb327ea26f7d0b/html5/thumbnails/14.jpg)
Искусственная дрожжевая хромосома (YAC)
Уилсон К., Уолкер Дж., 2013
![Page 15: Раздел 3 ВЕКТОРЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕВ ... · 2017-10-05 · Плазмидные векторы Вектор Копийность оri Группа несовмести-мости](https://reader034.fdocuments.net/reader034/viewer/2022042412/5f2c0b77aedb327ea26f7d0b/html5/thumbnails/15.jpg)
Системы экспрессии в клеткахнасекомых
• Культивируемые линии клеток куколки кукурузной лиственнойсовки (Spodoptera frugiperda)
• Вирус полиэдроза калифорнийской совки (Autographa californicamultiple-enveloped nuclear polyhedrosis virus) (AcMNPV)
• Белок полиэдрин
Глик Б., Пастернак Дж., 2002
![Page 16: Раздел 3 ВЕКТОРЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕВ ... · 2017-10-05 · Плазмидные векторы Вектор Копийность оri Группа несовмести-мости](https://reader034.fdocuments.net/reader034/viewer/2022042412/5f2c0b77aedb327ea26f7d0b/html5/thumbnails/16.jpg)
Глик Б., Пастернак Дж., 2002
![Page 17: Раздел 3 ВЕКТОРЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕВ ... · 2017-10-05 · Плазмидные векторы Вектор Копийность оri Группа несовмести-мости](https://reader034.fdocuments.net/reader034/viewer/2022042412/5f2c0b77aedb327ea26f7d0b/html5/thumbnails/17.jpg)
Челночные плазмидные векторадля клеток млекопитающих
Патрушев Л., 2004
![Page 18: Раздел 3 ВЕКТОРЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕВ ... · 2017-10-05 · Плазмидные векторы Вектор Копийность оri Группа несовмести-мости](https://reader034.fdocuments.net/reader034/viewer/2022042412/5f2c0b77aedb327ea26f7d0b/html5/thumbnails/18.jpg)
Системы переноса генов наоснове ретровирусов
Глик Б., Пастернак Дж., 2002
![Page 19: Раздел 3 ВЕКТОРЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕВ ... · 2017-10-05 · Плазмидные векторы Вектор Копийность оri Группа несовмести-мости](https://reader034.fdocuments.net/reader034/viewer/2022042412/5f2c0b77aedb327ea26f7d0b/html5/thumbnails/19.jpg)
Глик Б., Пастернак Дж., 2002
![Page 20: Раздел 3 ВЕКТОРЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕВ ... · 2017-10-05 · Плазмидные векторы Вектор Копийность оri Группа несовмести-мости](https://reader034.fdocuments.net/reader034/viewer/2022042412/5f2c0b77aedb327ea26f7d0b/html5/thumbnails/20.jpg)
Аденовирусныйвектор
Глик Б., Пастернак Дж., 2002
![Page 21: Раздел 3 ВЕКТОРЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕВ ... · 2017-10-05 · Плазмидные векторы Вектор Копийность оri Группа несовмести-мости](https://reader034.fdocuments.net/reader034/viewer/2022042412/5f2c0b77aedb327ea26f7d0b/html5/thumbnails/21.jpg)
Система переноса генов наоснове вируса осповакцины
Щелкунов С.Н. 2004
![Page 22: Раздел 3 ВЕКТОРЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕВ ... · 2017-10-05 · Плазмидные векторы Вектор Копийность оri Группа несовмести-мости](https://reader034.fdocuments.net/reader034/viewer/2022042412/5f2c0b77aedb327ea26f7d0b/html5/thumbnails/22.jpg)
Строение Ti- и Ri-плазмид (около 200 т.п.н.)
Глик Б., Пастернак Дж., 2002
![Page 23: Раздел 3 ВЕКТОРЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕВ ... · 2017-10-05 · Плазмидные векторы Вектор Копийность оri Группа несовмести-мости](https://reader034.fdocuments.net/reader034/viewer/2022042412/5f2c0b77aedb327ea26f7d0b/html5/thumbnails/23.jpg)
Механизм переноса Т-ДНК
Щелкунов С.Н. 2004
![Page 24: Раздел 3 ВЕКТОРЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕВ ... · 2017-10-05 · Плазмидные векторы Вектор Копийность оri Группа несовмести-мости](https://reader034.fdocuments.net/reader034/viewer/2022042412/5f2c0b77aedb327ea26f7d0b/html5/thumbnails/24.jpg)
Коинтегративные и
бинарныевекторныесистемы
Глик Б., Пастернак Дж., 2002
![Page 25: Раздел 3 ВЕКТОРЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕВ ... · 2017-10-05 · Плазмидные векторы Вектор Копийность оri Группа несовмести-мости](https://reader034.fdocuments.net/reader034/viewer/2022042412/5f2c0b77aedb327ea26f7d0b/html5/thumbnails/25.jpg)
Альбертс Б., 2013
![Page 26: Раздел 3 ВЕКТОРЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕВ ... · 2017-10-05 · Плазмидные векторы Вектор Копийность оri Группа несовмести-мости](https://reader034.fdocuments.net/reader034/viewer/2022042412/5f2c0b77aedb327ea26f7d0b/html5/thumbnails/26.jpg)
Альбертс Б., 2013