Post on 24-Mar-2020
Di r ecci ó n:Di r ecci ó n: Biblioteca Central Dr. Luis F. Leloir, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, Universidad de Buenos Aires. Intendente Güiraldes 2160 - C1428EGA - Tel. (++54 +11) 4789-9293
Co nta cto :Co nta cto : digital@bl.fcen.uba.ar
Tesis de Posgrado
Uso de ácidos biliares comoUso de ácidos biliares comoprecursores sintéticos de pregnanosprecursores sintéticos de pregnanos
con aplicación en el estudio delcon aplicación en el estudio delmecanismo de hidroxilaciónmecanismo de hidroxilaciónbiológica en Carbono 14 debiológica en Carbono 14 de
cardenólidoscardenólidos
Deluca, Mónica Eva
1985
Tesis presentada para obtener el grado de Doctor en CienciasQuímicas de la Universidad de Buenos Aires
Este documento forma parte de la colección de tesis doctorales y de maestría de la BibliotecaCentral Dr. Luis Federico Leloir, disponible en digital.bl.fcen.uba.ar. Su utilización debe seracompañada por la cita bibliográfica con reconocimiento de la fuente.
This document is part of the doctoral theses collection of the Central Library Dr. Luis FedericoLeloir, available in digital.bl.fcen.uba.ar. It should be used accompanied by the correspondingcitation acknowledging the source.
Cita tipo APA:
Deluca, Mónica Eva. (1985). Uso de ácidos biliares como precursores sintéticos de pregnanoscon aplicación en el estudio del mecanismo de hidroxilación biológica en Carbono 14 decardenólidos. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.http://digital.bl.fcen.uba.ar/Download/Tesis/Tesis_1905_Deluca.pdfCita tipo Chicago:
Deluca, Mónica Eva. "Uso de ácidos biliares como precursores sintéticos de pregnanos conaplicación en el estudio del mecanismo de hidroxilación biológica en Carbono 14 decardenólidos". Tesis de Doctor. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad deBuenos Aires. 1985. http://digital.bl.fcen.uba.ar/Download/Tesis/Tesis_1905_Deluca.pdf
UNIVERSIDAD DE BUENOS AIRES
FACULTAD DE CIENCIAS EXACTAS Y NATURALES
"USO DE ACIDOS BILIARES COMO PRECURSORES SINTETICOS DE
PREGNANOS CON APLICACION EN EL ESTUDIO DEL MECANISMO DE
HIDROXILACION BIOLOGICA EN CARBONO 14 DE CARDENOLIDOS"
Directora de Tesis
Dra. ATicia M. Seres
Lugar de Trabajo
Departamento de Química Orgánica
MONICA EVA DELUCA
Tesis presentada para optar a1 títuTo de
DOCTOR EN QUIMICA
- 1985
(:1QC\
Para Hugo y mis padres
con profundo cariño
y cada día por más razones
Deseo expresar mi gratitud
a 1a Dra. A1icia M. Seïdes, directora de
esta tesis, por su empeñoen mi formación
científica y su permanenteafecto.
Agradezco además:
A UMYMFOR(CONICET-FCEN)por 1a reaïización de las determinaciones instru
mentaïes:
Dr. Gerardo Burton y Sr. Carlos G. Arabehety por 105 espectros de
RMN-lH y RMN-13C.
Sr. Jorge A. Aznárez por ios espectros de masa.
Lic. Juan B. Rodriguez por 1as cromatografias1iquido-1iquido de aita
resoiución.
A1 Dr. Eduardo G. Gros y a1 Dr. Gerardo Burton por e] apoyo brindado.
A1 Dr. Carios P. Lantos (Dto. Quimica Biológica, FCEN, UBA)por e] uso de]
contador de centeiïeo liquido Tracor Anaiytic Mark III.
A] Dr. I. Mizrahi (INTA, Casteiar), por las semi11as de D; purpurea.
A los Licenciados Dario Dolïer, Enrique Hughes y Jorge Pa1ermo por su amis
tad, confianza y desinteresada c01aboraci6n.
A mis compañeros de laboratorio: Dra. Marta Maier, Lic. Marta Romero, Lic.
Patricia Eisenberg, Srta. Aiicia Arenaza y Lic. Jorge Pa1ermopor sus buenos
consejos y su ayuda diaria.
A mis compañeros del Departamento de Quimica Orgánica por su constante
cordiaiidad.
INDICE
pág.
Introducción . . . . . . . . . . . . ...... . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ..1
Objetivos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ..28
Descripción de la labor realizada.
Sintesis de |21-14CI 3B-hidroxi-SB-pregn-8(l4)-en-20-ona y de
|21-14CI 3B-hidroxi-SB-pregnan-ZO-ona a partir de ácidos biliares . . . . ..37
Inoculación de los productos radiactivos a plantas de D. purpurea . . . . ..91
Espectroscopia de Resonancia Magnética Nuclear de 13€ aplicada a
derivados 56-esteroidales . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ..96
Descripción y discusión de los resultados obtenidos en los estudios
biosintéticos.....s . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ..103
Descripción y discusión de los resultados obtenidos en RMN-13€. . . . . . . . . . . ..115
Experimental . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ..150
Resumen . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ..204
Bibliografia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ..206
Indice de figuras...... . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ..213
Indice de tablas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ..213
ABREVIATURAS USADAS
Ac : acetilo
CAB : cuarteto AB
CL : cadena lateral
DMF: dimetiïformamida
Hz : hertz
NLED: N-1itioeti1endiamína
Suc : succiniïo
Ts : p-toluensu1foni10
C1Ts : c1orur0 de p-toïuensuïfonilo
TsOH: ácido p-toïuensuïfonico
INTRODUCCION
Los esteroides que en humanosy animaies tienen 1a propiedad de ejercer
una acción especifica y eficaz sobre e] müscuio cardiaco se describen comoprin
cipios cardioactivos o cardiotónicos. En ciertos casos de enfermedades cardiacas
una muy pequeña cantidad puede producir una estimuiación beneficiosa pues aumen
ta 1a contractibilidad de] müscuio y disminuye 1a frecuencia de dichas contrac
ciones, 10 que se traduce en una mayor eficiencia. Sin embargo una dosis excesi
va causa 1a muerte.
La mayoria de ios miembros de] grupo son giicósidos de origen vegeta]. Una
hidróiisis separa ia porción giicosidica y iibera 1a genina o agiicona esteroi
da].
Las geninas pueden ser de dos tipos conocidos como cardenóiidos y bufadie
nóiidos.
Los cardenóiidos, comopor ejempio 1a digitoxina (1), son esteroides de
veintitrés átomos de carbono que tienen comocadena laterai un aniiio 1act6nico
de cinco miembrosa,B-insaturado (aniiio butenóiido)
La estereoquimica de] sistema de aniiios corresponde invariabiemente a 1a
de un ácido biliar en ios carbonos 8, 9, 10, 13 y 17 pero con unión cis entre
ios aniiios C y D y una función oxigenada en carbono 14 con orientación B (hi
droxiio o epóxido). Se han aisiado también 5a y AS-derivadosl.
Los bufadienóiidos son esteroides de veinticuatro átomos de carbono cuya
cadena 1atera1 es un aniiio 1actónico de seis miembros dobiemente insaturado
(a-pirona). Estos compuestos, comopor ejemplo 1a bufaiina (2), también tienen
un hidroxiio en posición 14 o un epóxido entre 10s carbonos 14 y 15, en ambos
casos con configuración B,y Una unión cis entre ios aniiios A y B.
H H 2
Todos ios cardenóiidos existen comogiicósidos vegetaies, pero ios bufadie
nóiidos son productos que se encuentran tanto en ei reino vegeta] comoanima] y
se presentan en forma giicosïdica o bien comoagiiconas.
Aunque1a actividad bioiógica descripta de un giicósido reside en 1a agii<
cona, e] hidrato de carbono ie confiere mayor soiubiiidad en agua y una mayor
difusión a través de membranassemipermeabies. Es por eiio que 1as agiiconas ii
bres son menos potentes que sus derivados giicosidados. Esto no ocurre con ios
venenos de sapos, donde ias geninas esteroidaies 1ibres son más potentes que
cuando se las encuentra comoésteres de 1a suberiiarginina.
Las piantas de] género Digitalis, particuiarmente 1a D. purpurea, se usó
para 1a preparación de veneno para ias pruebas medievaies de ordalia. E1 empieo
de preparados de Digitalis en 1a terapia cardiaca fue introducido en 1785 por
Wiiiiam Nithering con un éxito espectacuiar.
Las Digitalis son piantas bianuaies de uno a dos metros de a1tura, que
pertenecen a 1a famiiia de 1as Escrofulariáceas. Sus fiores se disponen en es
pigas que en aigunos casos miden más de 50 cm de 1argo. Debido a 1a semejanza
de ias fiores con ios dedaies que se utiiiZan para coser se las conoce vuigar
mente con e] nombre de "dedaiera". Se encuentran principaimente en Europa cen
tra] y en e] área de] Mediterráneo. En nuestro pais se puede ubicar 1a D pur
purea en 1a zona cordiiierana comprendida entre e] lago Nahuei Huapi y e] 1ago
Argentino y procede de ios cuitivos hechos por ios jesuitas a fines de] sigio
XVII. Esta planta y 1a D. Zanata son ias utiiizadas casi exciusivamente para
1a obtención de ios giicósidos puros para usos medicinales.
Las investigaciones químicas de 1as sustancias cardioactivas de D. purpu
rea comenzaron en Francia en e] siglo XIX. Recién en 1869 NativeHe2 obtuvo un
compuesto cristaiino que 1uego se conoció comodigitoxina. Su estudio quimico
y farmacoiógico se inició en e1 sigio XXpor Cioetta3 y Windaus4. Una hidróli
sis ácida de digitoxina rindió 1a agiicona digitoxigenina (3) y tres molécuias
de digitoxosa (2,6-didesoxi-D-ribo-hexosa)(4).
(PHOCH2
OH
OH
H H
H H 3 CH3 4
6Posteriormente, Nindaus5 y Kraft aisiaron gitoxina (5) de D. purpurea y
en 1930 Smith7 obtuvo digoxina (6) de D. Zanata.
H
H
R H
R=A 5 R=A 6
R=H a R=H 7
H H H
A ¡1
Los tres giicósidos (digitoxina, digoxina y gitoxina) tienen estructura anu
1ar simi1ar y están unidos a un trisacárido constituido por tres moïécuias de di
gitoxosa a través de] carbono 3 de ias respectivas agiiconas (digitoxigenina (5),
digoxigenina (7) y gitoxigenina (8)).
Si bien estos tres g1icósidos descriptos resuïtan ser 105 mayoritarios en
piantas de Digitalis, posteriormente fueron aisïados de ias mismasotros com
o a o 8 g g .puestos cardiotonicos minoritarios.
BIOSINTESIS DE CARDENOLIDOS. ANTECEDENTES.
La biosintesis de cardenóïidos ha sido investigada uti1izando piantas de]
género Digitalis, en particuiar D. Zanata y D. purpurea. Se rea1izaron además
aïgunos estudios comp1ementarios en Strophantus kombé.
La estructura esteroida] de Ios cardenóiidos sugiere que su biogénesis pue
de estar intimamente re1acionada con 1a de 10s esteroïes, existiendo una dife
rencia estructuraï importante entre ambosy que consiste en que 1a cadena 1ate
ra] aiifática de 105 esteroles ha sido reemp1azada por un grupo butenóiido.
Dado que e] ácido mevaiónico (9) ha sido reconocido como precursor de] co
1estero] (10)g en experiencias reaiizadas con tejido anima], Ramstadt y Bea]10
iniciaron los estudios intentando estabiecer si en e] caso de compuestoseste
roidaies de origen vegeta] e] camino biosintético era simi1ar a1 encontrado en
animaies. Para eilo probaron 1a función que podria tener e] ácido mevaiónico en
1a biosintesis de gïicósidos cardiotónicos suministrando |2-14CI ácido mevaióni
co a plantas de D. Zanata. Después de un periodo de tiempo adecuado, Ios autores
aisiaron un g1icósido radiactivo cuya hidróiisis producía digitoxigenina (3) ra
diactiva e hidratos de carbono no radiactivos. Io que confirmaba e] carácter pre
cursor de] ácido mevalónico de 1a porción esteroida] de estos compuestos.
Debido a que en animaies estaba bien estabiecido que e] coiesteroi se for
maba por ciciación de] escuaieno (11) y que éste derivaba de seis moiécuias de
ácido mevaïónico, Leete y coiaboradoresu’12 asumieron comohipótesis de trabajo
que ios cardenóiidos se podrian formar en ias piantas por una secuencia anáioga
de reacciones. De ser asi, e] |2-14CI ácido mevaiónico produciría digitoxigeni
na marcada en ios carbonos 1, 7, 15 y 22 (esquema 1), considerando que e] aniiio
butenóiido derivara de 1a cadena 1atera1 de un esteroide o triterpeno estrecha
mente reiacionado con ei coiesteroi, por ruptura de 1a mismaentre ios carbonos
23 y 24.
a ' 4 *CH3C02H —-—-> --—-—->
14
Esguema1: Hipótesis sobre 1a distribución de 1a marcación en digitoxigenina
a partir de ácido mevaiónico.o ácido acético.
Para comprobar esta hipótesis fueron inocuiados ejempiares de D. purpurea
con [2-14C! ácido mevaiónico, aisiando posteriormente ia digitoxina provenien
te de 1a experiencia. E1 giicósido fue hidroiizado y acetiiado obteniéndose
acetiidigitoxigenina (12) que fue sometida a una ozonólisis reductiva y poste
rior degradación ta] como se indica en e] esquema 2.
23 *122
20 21
-—-—->
H
A“: ¡1 12
H 1
+ 533.
l02HÁa??? HCHO+ co2
(C-ZZ) C-23H ( >
Ac H13
Esguema2: Degradación de] ani110 butenólido de 1a digitoxigenina.
It
H
Coneste procedimiento los autores pudieron verificar que e] ácido 3B-ace
toxi-14B-hidroxi-5s-androstán—17B-carboxi1ico (13)presentaba 1a mismaactividad
especifica que 1a aceti] digitoxigenina de partida, 10 que indicó que Ios carbo
nos 21, 22 y 23 que forman parte de] aniiio butenóiido no poseían radiactividad.
La reacción de Schmidt sobre e] ácido etiánico anterior (13) rindió dióxido de
carbono no radiactivo, 10 cua] indicó que no habia actividad en e] carbono 20.
Este resuitado hizo resurgir dos antiguas teoriasl3’14 que sugerian que e]
aniiio butenóiido se formaba a partir de una o dos moiécuias de ácido acético,
probabiemente activadas como aceti] coenzima A, según se indica en e] esquema 3.
C)2P1
¡1
' AcS-CoA IE
H 10 a b ‘
O H2 02H
AcS-CoA
Esguema3: Teorias sobre 1a formación dei aniiio butenóiido.
——{> Teoria A —’ Teoria B
Teoria A: ruptura de 1a cadena 1atera1 de] coiesteroi entre ios carbonos 20 y 22
para dar un 20-ceto derivado (a) que reaccionaria con una moiécuia de
acetato dando un B-hidroxiácido (b).
)Teoria B: ruptura de 1a cadena iaterai de] coiesteroi entre ios carbonos 17 y 20
dando un ácido etiánico (c) que con una moiécuia de acetato daria un
B-cetoácido (d) que por descarboxiiación formaría un 20-ceto pregnano
10
(a) que reaccionaria comose indicó anteriormente.
Por e110 Leete y coïaboradores12 inocuïaron [1-14CI acetato de sodio (14)
a p1antas de D. purpurea y aislaron digitoxina radiactiva (ver esquema 1) que
degradaron como se indica en e] esquema 2. En este caso e] aniiio butenóïido pre
sentaba un significativo valor de radiactividad que estaba 10ca1izada en 10s car
bonos 20 y 23, mientras que Ios carbonos 21 y 22 resuitaron esenciaimente inac
tivos.
Sin embargo e] origen de] aniïïo 1act6nico no estaba aün aciarado pues e]
resuïtado anterior no permitía descartar ninguna de 1as dos teorias antes pro
puestas. Para 11egar a esclarecer cuá] de ios dos caminos era e] que rea1mente
seguia e] proceso biosintético inyectaron piantas de D. purpurea con |3'-14C|
ácido mevaïónico. Un pregnano formado a partir de este ácido resu1taria marcado
soiamente en 1as posiciones 18, 19 y 21 (indicado con ú-en ias fórmuias de] es
quema 1). Comoera previsibIe 1a digitoxina aisiada dos semanas después era ra
diactiva. Los estudios de degradación indicaron que 1a tercera parte de 1a acti
vidad estaba 10caïizada en e] carbono 21,10 que descartaba ¡a posibiïidad de un
ácido etiánico comointermediario en e] proceso en estudio. De esta manera que
daba e1iminada 1a teoria que postuïaba 1a ruptura entre 105 carbonos 17 y 20 de]
coïesteroï.
15Finalmente Gros y Leete degradaron compietamente 1a digitoxigenina ais1a
da 1uego de una incubación con |2-14Cl ácido meva16nico en piantas de D. purpu
11
rea. Encontraron que ias marcaciones estaban exciusivamente iocaiizadas en ios
carbonos 1, 7 y 15 (ver esquema 1) y que 1a radiactividad estaba igualmente di
vidida entre esos carbonos.
Estos resuitados 11evaron a proponer que ios esteroides de plantas se bio
sintetizan a partir de escuaieno siguiendo 1a mismaserie de reacciones metabó-'
iicas que aqueiias que conducen a esteroides animaies comoe] coiestero].
Las conciusiones anteriores se confirmaron por una parte con 1a experiencia
realizada por Tschesche y Lih'enweiss16 quienes administraron e] 3B-giucósido de
1a |21-14CI 3B-hidroxipregn-S-en-ZO-ona (pregnenoiona) (15)* a piantas de D. Za
nata. Estos investigadores encontraron que ei 6%de 1a actividad suministrada
estaba en ios giicósidos cardenóiidos digitoxina, gitoxina, digoxina y xysmaio
na (16).
OHH R
* Los compuestos mencionados 11evan un número correspondiente a su estructura
sin marcación isotópica. La mismase indica en cada caso en particuiar.
12
Por otro iado, Reichstein y coiaboradores17 rociaron |3-14CI ácido mevaióni
co en hojas de D. Zanata. La digitoxina aisiada de ias mismas se hidroiizó y 1a
agiicona se degradó según un esquema similar a1 esquema 2, resultando marcada en
e] carbono 20 además dei sistema esteroida]. Finaimente Tschesche y Brassat18
determinaron que |21-14CI pregnenoiona presentaba incorporación en ios cardenó
1idos.
En 1966 Caspi y coiaboradores19 inyectaron |4-14CI coiesteroi a piantas de
D. Zanata y aisiaron entre ios metaboiitos pregnenoiona radiactiva, demostran
do asi 1a capacidad de ias piantas de metaboiizar coiesteroi.
En ese momento, uno de ios mecanismos que faitaba esciarecer era e] de ia
hidrogenación estereoespecifica de] dobie en1ace de 1a posición 5 conducente a
un sistema A/B cis. Una idea expuesta por Caspi y Lewis20 sugeria que 1a satu
ración de1 alcohoi homoaiiiico (3B-hidroxi-A5) para rendir SB-pregnanoiona po
dia proceder mediante una oxidación e isomerización a una A4-3-cetona que pos
teriormente se reduciría mediante una cis adición de hidrógeno por 1a cara a dei
sistema. La evidencia en 1a que se apoyaban era que dado que e] coiestero] se
transformaba en pregnenoiona, esta üitima debia tener en 1a biosintesis de gii
cósidos cardiotónicos en piantas un ro] anáiogo a1 que tiene en 1a formación de
hormonasesteroidaies en animaies. Por eiio Heftmanny coiaboradoresu’22 hicie
ron un estudio de los metaboiitos radiactivos aisiados 1uego de 1a incubación de
|4-14C| pregnenoiona en piantas de D. Zanata pudiendo identificar pregn-4-en
3,20-diona (progesterona)(17) y SB-pregnan-3,20-diona (18) radiactivas.
17 18
Este resuitado ios 11evó a suministrar |4-14CI progesterona, encontrando
con este compuesto una incorporación en cardenóiidos diez veces mayor que en e]
caso anterior. Estos resuitados demostraban que 1a progesterona era un precur
sor más avanzado en e] camino biosintético hacia los giicósidos cardiotónicos.
A1 igua] que en 1a oportunidad anterior en este caso también se aisió SB-preg—
nan-3,20-diona radiactiva.
Para compietar ei problema de 1a saturación de] dobie eniace Caspi y
Hornby23 rociaron hojas de D. Zanata con |3a-3H, 4-14CI pregnenoiona. La digi
toxina radiactiva aisiada no contenía tritio io que permitió conciuir que un
3-ceto derivado era intermediario en 1a ruta biosintética de pregnenoiona a
cardenóiidos.
Posteriormente Tschesche y coiaboradores24 demostraron que 1a 3B-hidroxi
SB-pregnan-ZO-ona (19) y 1a SB-pregnan-3,20-diona eran precursores de digitoxi
na, digoxina y gitoxina en piantas de D. Zanata
En 1967 Tschesche, Huipke y Schoïten25 trataron de acotar 1a etapa de] ca
mino biosintético en que se produce 1a hidroxiiación. Supusieron que podria
14
realizarse sobre esteroides de] tipo 20-ceto pregnano, pero también existia 1a
posibiiidad de que fuese posterior a 1a construcción de] aniiio iactónico. Para
aclarar este punto suministraron [15,16-3HZI3B,14B-dihidroxi-SB-pregnan-ZO-ona
(20) a hojas cortadas de D. Zanata y aisiaron de ias mismas digitoxina radiac
tiva. Este hecho permitió deducir que 1a hidroxiiación en carbono 14 ocurre an
tes que 1a formación de] aniiio butenóiido.
H H H H19 20
Una vez aciarada esta etapa se sospechó que para 1a unión de ios dos átomos
de carbono requeridos para 1a construcción de] aniiio 1act6nico era necesaria
una hidroxiiación en carbono 21. Con e] fin de comprobarlo Tschesche, Becker y
6Hombach2 sintetizaron |3-3HI 38,146,21-trihidroxi-SB-pregnan-ZO-ona (21) y pro
baron su comportamiento como precursor de cardenóïidos en piantas de D. Zanata.
H
HO H
21 22
15
En esta experiencia aisiaron cardenóiidos radiactivos, quedandode esta ma
nera confirmada su participación comoprecursor.
Por otro 1ado, teniendo en cuenta e] contenido radiactivo de ias agïiconas
esteroidaies aisiadas 1uegode 1a inocuiación con |22-14C| digitoxigenina se de
terminó que esta última se hidroxiiaba en posición 128 para rendir digoxigeni
na, pero 1a hidroxiiación en carbono 16 para formar gitoxigenina se producía en
pequeña proporción.
En experiencias posteriores27 se demostró que por administración de 14B
hidroxiprogesterona (22) a piantas de D. Zanata se obtiene un a1to rendimiento
de gitoxigenina pero bajo de digoxigenina.
Este conjunto de datos permitió suponer que 1a digoxigenina se forma pri
mordiaimente por hidroxiiación de digitoxigenina. Por otro 1ado gitoxigenina se
biosintetiza mediante dos caminos alternativos: uno por hidroxiiación en carbo
no 16 de digitoxigenina y e] otro a través de 1a hidroxiiación en carbono 16 de
un pregnano .
Paraieiamente con estas experiencias Heftmanny coiaboradores28 estudiaron
1a biosintesis de giicósidos cardiotónicos en piantas de] género Strophanthus
cuyos cardenóiidos difieren de 105 encontrados en Digitalis por presentar fun
ciones oxigenadas en 1a posición 5.
E1 objetivo inicia] fue determinar si ios primeros pasos de] camino biosin
, . . . . . 14tetico eran ios mismosen ias dos espec1es. Para e110 administraron |4- Cl pro
16
gesterona (17) a hojas de S. kombéy aisiaron Iuego de una hidrólisis peripioge
nina (23), estrofantidina (24) y estrofantidoi (25) radiactivas.
OH
H H
H HH 23 24
H
H
HH 25
Dado que, en animaies 1a transformación de AS-esteroides en anáiogos satu
rados 5a o 58 procede via un A4-3-ceto intermediario, no resultaba sorprendente
que progesterona fuese intermediario en 1a biosintesis de cardenóiidos en pian
tas de Digitalis. Pero ios cardenóiidos de Strophanthus son esteroides SB-hidro
xiiados que no se presentan en animaies. Según 10s autores, este resuitado in
dica que una A4-3-cetona, en este caso progesterona, es también un intermedia
rio obiigatorio de 3,5-di01es. Deeiio conciuyeron que 1a biosintesis de estos
giicósidos en Digitalis y en Strophanthus procede aparentemente a través de ios
17
mismos intermediarios hasta 1a saturación de] dobie eniace.
En experiencias posterioreszg’30 utilizando e] mismoprecursor, |4-14CI
progesterona, aisiaron SB-pregnan-3,20-diona (18), 3B-hidroxi-Sa-pregnan-ZO-ona
(26), 36,58-dihidroxipregnan-ZO-ona (27) y 3B-hidroxi-53-pregnan-20-ona (19) ra
diactivas.
26 27
Resuitó especiaimente sorprendente encontrar esteroides 5a en S. kombéya
que estos no se habian detectado anteriormente. Es por eiio que ios autores su
ministraron [4-14CI 33-hidroxi-5a—pregnan-20-ona (26) y |4-14CI 38,58-dihidroxi
pregnan-ZO-ona (27) a piantas de esa especie. Asi aisiaron varios productos ra
diactivos, pero ninguno de eiios en cantidades apreciabies. E1 ünico que pudie
ron identificar fue ei cardenóiido uzarigenina (28) que no habia sido identifi
cado previamente en S. kombéy se encontraba raramente en otras especies de
Strophanthusla.
De esta manera se demostró 1a presencia de un cardenóiido con un hidrógeno
5a en esta especie.
18
Los aspectos más importantes de 1a hidroxiiación enzimática de carbonos se
cundarios no activados en nücieos esteroidaies eran conocidos desde hacia varios
años. En tejidos animaies31, microorganismos32 y piantas33 e] hidroxiio entrante
asumia 1a estereoquimica de] hidrógeno saiiente.
En contraste con esto, e1 mecanismode hidroxiiación de carbonos terciarios
no activados no estaba ciaro y en aigunos casos 1a hidroxiiación ocurria con re
tención y en otros con inversión de 1a configuración.
De este modo, 1a conversión de coiesteroi (10) en 20(S)-c01est-5-en-3B,20
34 y 1a 14a-hidroxi1aci6n de estedio] (ZOa-hidroxicoiesteroi) en tejido adrenai
roides de 19 y 21 átomos de carbono por microorganismos35 son ejempios de hidro
xiiación con retención de configuración.
En cambio, 1a introducción de] hidroxiio 145 en cardenóiidos procede .con
inversión de configuración pues coiestero], pregnenoiona y progesterona, que son
precursores en su biosintesis, presentan una unión trans entre 105 aniiios C y D
(H-14a). En consecuencia, teniendo en cuenta este factor, si 1a hidroxiiación
19
ocurriera por ias vias conocidas deberia esperarse un producto con un hidroxiio
14a en 1ugar de 143. Dado que ios resuitados obtenidos no respondían a un camino
de hidroxiiación bioiógica norma], varios investigadores intentaron aciarario.
Caspi y coiaboradores36 propusieron mecanismos que podrian expiicar dicha
hidroxiiación (esquema 4). Su teoria se basaba en una hidroxiiación inicia] por
e] procedimiento convenciona] que introduciria un hidroxilo 14a (a). La posibi
iidad de esta reacción se veía apoyada por e] aisiamiento de esteroides 14u-hi
droxiiados de origen vegeta137’38.
E1 hidroxiio 14a se transformaria en un a1coh01 143 por un camino que se
podría explicar por conceptos quimicos. Propusieron para eilo dos mecanismos,
uno iónico y otro radica1ario.
E1 mecanismoiónico consistía en 1a deshidratación de] a1coho] terciario
con formación de un dobie eniace 14(15) (b) que debido a una oxidación por 1a
cara B de 1a moiécuia produciría un epóxido 148,153 (c). La presencia de epó
xidos 146,153 en bufadienóiidos respaidaria indirectamente este punto de vista.
Finaimente 1a apertura reductiva de] epóxido por ataque a1 carbono 15 da
ria e] aicohoi 146 (d).
Si 1a deshidratación de] a1coho] 14a (a) conduce a1 dobie eniace en posi
ción 8(14) en 1ugar de 14(15) se podria apiicar ei mismo razonamiento.
E1 segundo mecanismoera via radicaies iibres y resuitaba iguaimente pro
babie teniendo en cuenta que 1a biosintesis de cardenóiidos ocurre en ias “ho
J.aslfi,18,20.
20
Esguema 4: Teoría de Caspi sobre 1a hidroxí1ación 148.
R- R
HIDROXILACION————-—>. BIOLOGICA NORMALH OH
a
R R
b e).
1B R/1R\RQ? ¿Emi-W?
1 \lR/“/«<PÉ%
e
MECANISMO MECANISMO POR
IONICO RADICALES LIBRES
21
Bajo la influencia de la luz solar, el alcohol 14a podria producir un oxi
radical (e). Se sabe que estos radicales se reordenan dando ceto-radicales39
de distinto tipo (f3 g, h). El nuevo cierre del anillo podria ocurrir con in 7
versión, para dar el oxi-radical 14s (i) y finalmente el alcohol (d).
La hidroxilación inicial no estaria limitada al carbono 14 y podria ocu
rrir en los carbonos 8 y 15. Estos compuestos se transformarian por mecanismos
similares al descripto.
Para analizar las posibilidades planteadas se administró |1—3H|14a-hidro
xi-53-pregnan-3,20-diona (14a-hidroxiprogesterona) (29) junto con |4-l4cl pro
gesterona (17) a plantas de D. Zanata, tratando de establecer si ambos isótopos
0 solamente el 14€ se incorporaban en digitoxina.
29
Una vez finalizado el ensayo la digitoxigenina aislada contenía 14€ pero
no tritio, lo que indicó que el sustrato propuesto (29) no era intermediario.
De todas formas los autores pensaron que otro 14a-hidroxi intermediario po
dria estar involucrado en la formación de cardenólidos, por ejemplo en alguna
etapa posterior de la biosintesis.
22
En 1970 Tschesche voivió a piantear 1a posibiiidad de un intermediario con
un dobie eniace en posición 1424. Esta idea habia sido anaiizada por Caspi a]
proponer su mecanismo iónico, pero Tschesche supuso que 1a no incorporación de
14a-hidroxiprogesterona (29) 5610 descartaba una primera etapa de hidroxiiación
norma], pero no 1a participación de 1a mencionada oiefina.
Suministro ¡16,17-3H2| 3s-hidroxi-58-pregn-14-en-20-ona (30) a piantas de
D. Zanata, pero e] compuesto cardenóiido aislado de ias mismas no presentó ra
diactividad.
30
Este resuitado compiementóei trabajo reaiizado por Caspi.
Finaimente, Canónica y colaboradores40 reaiizaron una experiencia que ter
minó de definir 1a no participación de] carbono 15 en e] proceso de hidroxiia
ción. Administraron ¡ZR-3H, 2-14CI ácido mevaiónico (9) a piantas de D. Zanata.
Este compuesto debia originar en 1a pianta un\intermediario 15a-tritio comoase
indica en e] esquema 5. E1 hidrógeno 158 de] 1anoster01 (31) se retiene en 1a
eiiminación de] metiio 14a (j) y se invierte en 1a hidrogenación de] doble en
1ace (k). Por 10 tanto ei último precursor debia originar en 1a pianta progeste
rona o derivados de ésta con tritio en 1a posición 15a.
23
02H
H3C ._.__....2H4OH
._._> ————) —-> CARDENOLIDOS
., . . . 3 . .Esguema 5: Formac1on de] intermediario 15a- H en organismos V1VOS.
E1 ácido mevaiónico inyectado tenia una reiación 3H/14C de 8,04 y 1a digi
toxigenina aisiada de 6,34. Cuandose transformó 1a digitoxigenina (3) en 3e
acetoxi-lS-oxodigitoxigenina (32) (esquema 6) dicha relación disminuyó a 4,18
indicando que e] tritio proveniente dei ácido mevaiónico se retenia durante 1a
conversión en cardenóiidos. Sin embargo 1a reiación era menor que en ei sustrato
iniciai, pero si se tiene en cuenta que e] colesteroi biosintetizado por 1a
pianta tenia una reiación de 6,64 , se puede atribuir 1a disminución observada
a 1a siguiente isomerización enzimática reversibie:
—9isopentenii pirofosfato dimetiiaii] pirofosfato
24
1) Ac20/C5H5N
+1 2) SOC12/C5H5N
H H AC H
Ac H
Esguema6: Transformación de digitoxigenina (3) en 33-acetoxi-15-oxodigitoxi
genina (32).
Para estudiar 1a posibie participación de] hidrógeno 158 se administró
[153-3H, 4-14CI progesterona a plantas de D. Zanata. A1 aislarse 1a digitoxige
nina se encontró que se mantenía 1a reiación entre ios isótopos y que por trans
formación en 38-acetoxi-15-oxodigitoxigenina (esquema6), se perdia e] tritio
casi totaimente. Esto indica que e1 hidrógeno 158 no participa en e] proceso de
hidroxilación en e] carbono 14 a partir de progesterona.
25
Por último para confirmar los resultados suministraron a D. Zanata
|15a,158,21,21,21-3H5, 4-14CI pregnenolona. Dicho precursor administrado se
equilibró con hidróxido de sodio en metanol acuoso para eliminar el tritio del
carbono 21. El producto resultante presentó una relación 3H/14Cde 9,52.
La digitoxigenina aislada se degradó para obtener el ácido etiánico co
rrespondiente que presentó una relación 3H/14Cde 9,52.
En consecuencia se puede concluir que los hidrógenos del carbono 15 no in
tervienen en el mecanismo de hidroxilación en el carbono 14 lo que excluye la
participación de intermediarios con un hidroxilo, epóxido o doble enlace que
involucre el carbono 15.
Posteriormente Caspi y colaboradores41 estudiaron la posible participación
de una olefina (u olefinas) alrededor del carbono 8 y para ello suministraron
|8-3H, 4-14CI colesterol a plantas de D. Zanata.
Los autores aislaron digitoxigenina y digoxigenina con la mismarelación
isotópica del precursor suministrado. Deello dedujeron que la introducción del
hidroxilo ocurre sin pérdida del hidrógeno de carbono 8 de colesterol, quedando
eliminadas con esta observación las olefinas planteadas comointermediarios,
conclusión que es válida sólo si no hay migración de átomos de tritio durante
el proceso biosintético.
Sin embargo, paralelamente con estos trabajos Tschesche y Kleff42 supusie
ron que en el proceso de hidroxilación 148 podria participar un doble enlace
8(14).
26
Administraron |7-3Hl SB-pregn-8(14)-en-3,20-diona (33), |7—3H| pregneno
iona y |6-3H| 7-dehidroprogesterona (34) a piantas de D. Zanata.
33 34
E1 aisiamiento de ios metabolitos de 1a pianta y 1a caracterización de 10s
mismos indicó que 53-pregn—8(14)—en—3;20-dionay pregnenoiona son precursores
de digitoxina mientras que 1a 7-dehidroprogesterona no lo es.
Los autores se preguntaron cómo podia e] compuesto 33 transformarse en ei
derivado hidroxilado. Supusieron que una posibilidad era a través de un epóxido
en posición 8(14). Esta suposición se veia respaidada porque 1a adinerigenina
(35) (agiicona de un cardenóiido minoritario de Nerium oZeander L.) da por hi
drogenación cataiitica 1a dihidrodigitoxigenina (36).
*1 ii ii ¡135 36
27
De esta forma se produce una hidroxi1acíón 14s a partir de un epóxido
8(14) por un camino químico.
Comoconsecuencia de] dato obtenido de incorporación de] compuesto 33
Tschesche43 desarroïïó 1a síntesis de1 epóxído 37 a fin de confirmar su teoría,
pero hasta e] momentono han aparecido pub11caciones sobre 105 resuïtados obte
nidos por inocu1ación de] mismo.
37
OBJETIVOS
28
Los objetivos de] presente trabajo fueron:
- ESTUDIO DE 3B-HIDROXI-58-PREGN-8(14)-EN-20-ONA COMOPRECURSORBIOSINTETICO
DE GLICOSIDOS CARDENOLIDOS.
- SINTESIS DE ¡21-14c| 3B-HIDROXI-SB-PREGN-8(14)-EN-20-0NA Y DE ¡21-14cl
3B-HIDROXI-SB-PREGNAN-ZO-ONA A PARTIR DE ACIDOS BILIARES.
- ANALISIS DE LOS DATOS OBTENIDOS POR ESPECTROSCOPIA DE RESONANCIA MAGNETICA
NUCLEAR DE 13€ PARA DIFERENTES DERIVADOS SB-ESTEROIDALES.
29
De acuerdo a los resuitados descriptos anteriormente, 1a secuencia confir
mada hasta e] momentopara e] camino biosintético de ios cardenóiidos en pian
tas de] género Digitalis es 1a presentada en e] esquema 7.
409Una vez descartada 1a participación de ios hidrógenos de 1a posición 15
los intentos de determinar e] camino de hidroxiiación en posición 14 con orien
tación B se basaron en 1a participación de un dobie eniace 8(14).
Ta] comose pianteó, 10s trabajos reaiizados sobre este tema introdujeron
resuitados contradictorios. Por un 1ado, Caspi y coiaboradores41 dedujeron que
1a hidroxiiación ocurre sin 1a pérdida de] hidrógeno de carbono 8 de coiesteroi,
con 10 que se eiiminaria 1a oiefina pianteada. Por otro 1ado, casi simu1tanea
mente, Tschesche y Kieff42 aseguraron que SB-pregn-8(14)-en-3,20-diona (33) es
precursor de digitoxina.
Es decir que, con Ios datos existentes hasta e] momento, no sóio no era po
sibie aclarar e] mecanismobiosintético de 1a hidroxiiación 14s, sino que ade
más no estaba asegurada 1a participación de] dob1e eniace 8(14). Por eiio e]
primer objetivo de] presente trabajo fue e1ucidar 1a posibie incorporación en
e] proceso biosintético de un intermediario con un doble eniace 8(14) y asi po
der aciarar 1a disyuntiva pianteada.
Para eiio se sintetizó |21-14CI 3B-hidroxi—58-pregn-8(14)-en-20-ona (38).
A diferencia dei compuesto ensayado por Tschesche y Kleff (33) este producto
presenta una estructura esteroida] que se encuentra más próxima a 1a de 10s
cardenóiidos ya que, ta] como se puede observar en e] esquema 7, seria e] in
Esguema7: Intermediarios conocidos de 1a biosïntesis de carden61idos
30
31
termediario inciuido entre ios compuestos 19 y 20.
Por otra parte se utilizó comocompuesto testigo |21-14CI 3B-hidroxi-56
pregnan-ZO-ona.(19).
La inocuiación de ios dos sustratos (19 y 58) se efectuó en forma paraieia,
a1 igual que 1a extracción y procesamiento de ios cardenóiidos. De esta manera
1a correcta incorporación de] intermediario biosintético 19 resuitaria un ava]
para ios resuitados obtenidos con e] supuesto precursor 38.
32
Ta] comose pianteó previamente el segundo objetivo de] presente trabajo
era 1a sintesis de [21-14C| 3B-hidroxi-56-pregn-8(14)-en-20-ona (38) y de
|21-14cl 3s-hidroxi-SB-pregnan-ZO-ona (19).
Si bien existían varias posibiiidades para 1a elección de] materiai de
partida, se optó por desarroiiar ios caminossintéticos usando ácidos biiiares
comoprecursores.
Estos compuestos presentan un sistema tetraciciico esteroidai con unión
de aniiios A/B cis. Los cinco carbonos de 1a cadena 1atera1 corresponden en es
tructura y en configuración de} carbono 20 a ios cinco primeros átomos de car
bono de 1a cadena laterai de] coiesteroi. Todos ios ácidos biiiares naturaies
tienen un grupo hidroxiio en carbono 3 que está orientado hacia ei 1ado a de 1a
molécula. Tienen 1a misma orientación de 1a cadena 1atera1 y de 10s metiios an
guiares que e] coiesteroi y también 1a misma fusión de aniiios B/C y C/D(trans).
Dentro de ios más comunes se encuentran los siguientes:
H HQ 02H 9 02H
H
ácido cóiico (39) ácido desoxicóiico (40)
33
02 H 02H
HO’ H “OH Hor H
ácido quenodesoxicólico (41) ácido litocólico (42)
De acuerdo a lo descripto se deduce que los ácidos biliares presentan:
a) La misma estereoquimica en carbono 5 (58) que los compuestos a sintetizar.
b) Una cadena lateral que podia ser degradada a la de un ácido etiánico por un
camino que involucrara como intermediario a un 20-ceto pregnan derivado.
ÓV El hidroxilo de carbono 3 cuya configuración podia ser invertida.
Q. V En el caso del ácido quenodesoxicólico (41), un hidroxilo en carbono 7 cuya
deshidratación podia originar el doble enlace 8(14) buscado.
Por un lado todos estos factores permitían preveer el desarrollo de inte
resantes caminos sintéticos. Por otro lado, y también comofactor de decisión,
eran compuestos fácilmente accesibles en cantidad y cuyo costo permitía en este
caso el desarrollo de la labor planteada.
Teniendo en cuenta todo ello, se eligió el ácido quenodesoxicólico como
producto de partida para el compuesto 38 y el ácido litocólico (42) como pro —
ducto de partida para el 19.
Tal comose discutirá posteriormente,interesó desarrollar dichas sintesis
34
introduciendo 1a marcación isotópica en e] carbono 21 en ios pasos finaies de
las mismas. Esto impiicó una degradación de 1a cadena iaterai de] ácido biiiar
hasta una de] tipo ácido etiánico.
Interesaba también, por ios motivos expuestos en 1a página 114, desarro
11ar ios caminos sintéticos a través de un intermediario con cadena 1atera1
de] tipo 20-ceto pregnano (anterior en 1a degradación a1 ácido etiánico) que
permitiera en un futuro trabajo 1a eiongación de 1a misma.
Las modificaciones a introducir sobre ios ácidos 41 y 42 se resumen en e]
esquema 8.
35
N T N02H«DEGRADACION Y co s RUCCIO
DE LA CADENA LATERAL
INVERSIONDELA fl
CONFIGURACION HO" H “OH
‘ 4113
DESHI DRATACI ON E ISOMERI ZACION
DEL DOBLE ENLACE FORMADO
H H
38
02H ‘ lDEGRADACION Y CONSTRUCCION
DE LA CADENA LATERAL
INVERSIONDE LA H
CONFIGURACION HO" H
z 42
H H
1.9
Esguema 8: Esteroides de partida para 1a síntesis de 105 compuestos 19 y 38.
36
Los compuestos de partida, intermediarios y finaies utiiizados y obtenidos
en e] presente trabajo (saivo pocas excepciones) tenian 1a caracteristica comün
de ser derivados esteroidaies con fusión de aniiios A/Bcis. Debido a que estos
compuestos no son tan comunes en 1a naturaieza como sus isómeros A/B trans, no
se encontraban en 1iteratura demasiados datos de anáiisis por espectroscopia de
resonancia magnética nuciear de 13C. Es por eiio que, como una contribución que
en ese sentido se podia aportar, se asignaron ios espectros obtenidos para cada
uno de eiios. La necesidad en muchos casos de tener vaiores de asignación fide
dignos correspondientes a espectros de compuestos patrones, requirió 1a sinte
sis de aigunos derivados que no eran accesibles comerciaimente.
La correiación de ios datos obtenidos permitió e] anáiisis de 1a infiuen
cia de diferentes configuraciones en e] carbono 3; 1a infiuencia de distintas
cadenas 1atera1es sobre e] sistema anuiar; ias diferencias en distintos deriva
dos por 1a introducción de un sustituyente en e] carbono 7 y de un dobie eniace
en 1a posición 8(14). Dicho anáiisis permitió también 1a predicción de] confór
mero favorecido para los ácidos biiiares en soiución.
DESCRIPCION DE LA
LABOR REALIZADA
SINTESIS DE
¡21-14c| 3B—HIDROXI-SB-PREGN-8(14)-EN-20-0NA
v DE ¡21-14| 3B-HIDROXI-SB-PREGNAN-ZO-ONA
A PARTIR DE ACIDOS BILIARES.
37
A continuación se discuten ios métodos sintéticos empïeados para ias si
guientes secuencias:
A
E
F
Ensayos reaiizados para 1a degradación de 1a cadena 1atera1 de] ácido bi
iiar a una cadena 1atera1 de] tipo ácido etiánico. Dichos ensayos se efec
tuaron utiiizando comosustrato de partida e] ácido quenodesoxicóiico y se
apiicaron sin mayoresmodificaciones a] ácido iitocóiico.
Ensayos reaiizados para 1a inversión de 1a configuración de] carbono 3. Por
1as razones expuestas en 1a página 48 , se efectuaron sobre ios ésteres me
tiiicos de ios ácidos litocólico o quenodesoxicóiico según e] caso.
Ensayos realizados para 1a deshidratación de] hidroxiio de carbono 7 e iso
merización de] dobie eniace formado a 1a posición 8(14). Dichas pruebas se
efectuaron sobre e] ácido quenodesoxicóiico.
Ensayos reaiizados para 1a construcción de 1a cadena laterai de] tipo 20
ceto pregnano a partir de 1a cadena de] tipo ácido etiánico obtenida segün
A. Dicho procedimiento, que debia permitir e] uso de pequeñas cantidades de
esteroide y reactivo, seria e] empieado para e] armado de 1a cadena iaterai
de ios dos productos (19 y 38) a utiiizar en 10s estudios biosintéticos.
Los ensayos se efectuaron sobre e] ácido 3B-hidroxiandrost-5-en-17B-carbo
xiiico (75) dado que era un producto comerciaimente disponibie.
Sintesis totai de |21-I4C| 3B-hidroxi-SB-pregn-8(14)-en-20-ona (38).
Sintesis tota] de |21-14C| 33-hidroxi-SB-pregnan-ZO-ona (19).
38
A - DEGRADACION DE LA CADENA LATERAL
El objetivo de esta etapa era transformar la cadena lateral de un ácido bi
liar en la cadena de los ácidos etiánicos (17B-C02H)pasando por una cadena in
termediaria del tipo 20-ceto pregnano.
A1 - DEGRADACION DEL ACIDO BILIAR AL 20-CETO PREGNANO
La primera degradación de la cadena lateral de un ácido biliar apareció en
literatura en 192644y se basa en sucesivas oxidaciones de los carbinoles que
se obtienen por reacciones de Grignard a partir de los ésteres de ácidos colá
nicos (a) y de sus homólogos inferiores (b) (esquema 9).
02CH3 02H
<-— <— <—b
Esguema9: Degradación-de Wieland de los ésteres de ácidos colánicos.
En 1970 Tschesche y colaboradore524, usando algunos datos anteriores45, mo
dificaron favorablemente el esquema anterior y presentaron una nueva degradación
39
que fue apïicada, en ese caso, a un derivado de] ácido desoxicóïico (40).
Los estudios se iniciaron probando esta üïtíma variante sobre quenodeso
xico1at0 de meti1o (43) (esquema 10).
02C H3
HO" H ‘OH 43
ÑÏMQCGHS
\Ac20/ACOH6H5
44 ' 45
NBS
AcO" H ‘OAc AcO' H ‘OAc46' 47
40
E1 rendimiento tota] obtenido sóio a1canzó 1,3 %. Si bien este vaior podia
eievarse mejorando ias condiciones de reacción en aigunos pasos, antes de ha
cerio se decidió probar una tercera aiternativa (esquema 11). Este ensayo se
efectuó modificando ios grupos protectores indicados en 1a técnica origina]46
con e] fin de simp1ificar1a, adecuandoia a ias necesidades de] presente trabajo.)
02H 02H
ACZO
HC]
HO' H ‘oH Acor' H ‘oAc 4841
Pb(AcO)4 , CuSO4 , CSHSN
z’ ‘s
NLED
H0 H ‘OH 50 AcO" H “OAc49
Ac20/H61
1'
03 reactivo
' de JonesAcO’ H ‘OAC AcO' H ‘OAc
51 47
41
Esta üitima secuencia es 1a que finaimente se adoptó pues su rendimiento
tota] resuitó ser muy superior a1 de 1a anterior (aproximadamente 30%).
Se discuten a continuación ias adaptaciones reaiizadas.
- Obtención dei ácido 3a,7a-diacetoxi-58-coian-24-oico (_Q).
Se intentó efectuar 1a acetiiación de] ácido quenodesoxicóiico con ias téc
nicas tradicionaies, usando anhídrido acético y piridina o mezcias de ácido acé
tico y anhídrido acético. Sin embargoios resuitados no fueron satisfactorios
pues aün modificando en amboscasos ia temperatura y/o ias cantidades reiativas
de ios reactivos no se lograba acetiiar completamente e] hidroxiio de carbono 7.
Esto puso en evidencia 1a marcada diferencia estructura] que existe entre
ios dos hidroxiios de] ácido quenodesoxicóiico, ya que si bien ios dos grupos
tienen orientación a, debido a 1a reiación cie entre ios aniiios A y B, ei que
está unido a carbono 3 es ecuatoriai y expuesto mientras que e] unido a carbono
7 es axiai y queda semiprotegido.
42
Por e110, para iograr 1a acetiiación comp1eta se necesitó un medio más
enérgico de reacción. Se e1igi6 una mezcia de anhídrido acético y ácido cïorhi
drico a ebu11ici6n con 1a que se iogró un e1evado rendimiento en e] producto
buscado.
- Obtención de] diacetato de 24-nor-58-c01-22-eno-3a,7a-di01 (g_).
La descarboxiiación oxidativa de ácidos carboxilicos por acción de] tetra
acetato de piomo permite obtener una variedad de compuestos dependiendo de ias
. . . , _ 47 . .cond1c1ones experimentaies y de 1a estructura de] ac1do . Las cond1c1ones des
criptas por ios autores indicaban e] empleo de benceno comosoivente en una
reacción cataiizada por: i) acetato de cobre, en cuya presencia ios ácidos car
boxiiicos primarios se descarboxiian para formar a1quenos comoproducto prin
cipai y ii) piridina que aceiera ei proceso de descarboxiiación.
Comoe] rendimiento obtenido en ias condiciones especificadas por los au
tores no superó ei 42%, se variaron ias mismas para mejorario tai como se deta
11a a continuación.
Dado que existían evidencias postuiando para esta reacción un mecanismo
en cadena por radicaies 1ibres, se repitió 1a experiencia en ias mismascondi
ciones pero en 1a oscuridad, suponiendo que 1a 1uz podria afectar su desarroiio.
Sin embargoesta modificación no varió ios resultados obtenidos.
En 1a siguiente prueba se dup1ic6 1a cantidad de tetraacetato de piomouti
1izado, agregándoio en porciones pequeñas y separadas por intervaios de aproxi
43
madamente una hora. Este cambio se introdujo pensando que ta] vez e1 tiempo de
vida media de ios radicaiesintervinientes era menor que e] tiempo de reacción.
Con e110 se iogró modificar favorabiemente ei resuïtado obtenido.
En 1as siguientes pruebas se anaiizaron 1a temperatura y e] tiempo de reac
ción. Los métodos presentados en iiteratura recomiendan en genera] para estas
reacciones usar 1a menor temperatura posibie con e] fin de evitar posteriores
oxidaciones de ios productos obtenidos, por acción de] tetraacetato de piomo.
Comoen este caso dichas reacciones 1atera1es no se presentaban, se descartó 1a
posibiïidad de usar soiventes de menor temperatura de ebu11ici6n. Por e] con
trario, en intentos para acrecentar e] rendimiento, se e1ev6 1a temperatura de
81°C a 110°C usando toiueno anhidro en 1ugar de benceno. Este cambio no intro
dujo variaciones en los resu1tados anteriores.
Por otro 1ado, se ana1izó 1a posibiïidad de cambiar el tiempo de reacción
proiongando e] calentamiento después de haber finaïizado e] agregado de] reac
tivo. Se comprobó de esta manera por ccd que 1a reacción avanzaba formando pro
ducto hasta un determinado momentoa partir de] cua] se ilegaba a un equiïi
brio.
Por üitimo, se probó continuar con e] caientamiento y e] agregado de por
ciones de reactivo durante varias horas. Se observó entonces por ccd que se 11e
gaba a una cierta etapa a partir de 1a cua] frente a un importante agregado de
tetraacetato de piomo 5610 se producía una pequeña variación en 1a cantidad de
a1queno.
44
La introducción en 1a técnica origina] de ias modificaciones mencionadas
permitieron e1evar ei rendimiento a 60%.
E1 producto de 1a reacción estaba formado por una mezcia de 1a oiefina bus
cada (49) y e] ácido de partida (48) que no habia reaccionado. Estos se separa
ron por cromatografía en columna.
Los datos espectroscópicos dei a1queno coincidieron con ios de 1a iiteratu
ra46 aunque ei punto de fusión de] producto puro resuitó superior.
- Obtención de] 24-nor-58-coi-20(22)-eno-3a,7a-dioi (gg).
La N-1itioeti1endiamina funciona comoun cataiizador en reacciones de iso
merización de oiefinas. Beioeii y Fétizon46 usaron este reactivo para isomerizar
dobles eniaces de esteroides, de posición 22 a 20(22) y 10 hicieron segün un mé
todo descripto previamente por Naru1a48’49.
Para 1a preparación de] reactivo se probaron dos técnicas. En un primer en
sayo se agregó una soiución de butii iitio en hexano (previamente vaiorada) so
bre etiiendiamina (secada primero con hidróxido de potasio y iuego con fiitros
moiecuiares), en atmósfera de nitrógeno. Cone] reactivo preparado de esta mane
ra no se obtuvo e] resuitado deseado, ya que 1a reacción no ocurrió.
Dado que una de ias causas de] fracaso podia ser e] secado deficiente de 1a
etiiendiamina, notabiemente difici] de reaiizar, y teniendo en cuenta que 1a
reacción de 1a etiiendiamina con sodio es muylenta, se efectuó su secado por
tratamiento con sodio y caientamiento a refiujoso.
45
Por otro lado se decidió usar iitio metáiico en iugar de butii iitio para
preparar e] reactivo.
Con 1a N-1itioeti1endiamina sintetizada en ias nuevas condiciones se iogró
1a isomerización buscada con excelentes rendimientos.
- Obtención de diacetato de 24-nor-58-coi-20(22)-eno-3a,7a-dioi (¿1) x_ge
3a,7a-diacetoxi-SB-pregnan-20-ona (gg).
En ias condiciones fuertemente básicas de 1a reacción anterior se produce
1a saponificación de ios acetatos de ios carbonos 3 y 7. Por 10 tanto, una vez
aislado ei producto de 1a isomerización se voivieron a acetiiar ios hidroxiios
usando 1a técnica descripta para 1a obtención de] compuesto 48.
La ozonóiisis de] dobie eniace de 1a posición 20(22) de] esteroide rindió
1a cetona 47. Los resuitados iogrados efectuando e] ensayo a -60°C fueron ios
mismos que se consiguieron a 1a temperatura de un baño de hieio y sai (-12°C).
Tampocose observó diferencia entre ias dos técnicas probadas para 1a rup
tura dei ozónido ya que tanto con agua oxigenada como con ei reactivo de Jones
ios rendimientos fueron ios mismos. Se eiigió entonces ei empleo dei reactivo
de Jones porque permitía una más rápida obtención de] producto fina].
46
A2 - DEGRADACION DEL 20-CETO PREGNANO AL ACIDO ETIANICO
La secuencia sintética desarroïïada se indica en e] esquema 12.
CtSjÉ PMACOM_—_>
AcO" '
Ac
¡1 (JIKC: Au:()' ¡1 ‘Í3flü:47 52
EtOH/H2504l02H
NaIO4<__H0" H "OR HO' H "OR
= H 55 R = H 53
= AC 56 R = AC 54
lKOH
CHZN2
l ÉÉ()2(:Ï13
HO' H ‘OH
47
La funcionaiización en carbono 21 de 1a cetona 47 se 11ev6 a cabo con te
traacetato de piomoen una reacción cataiizada con trifiuoruro de boro en éter
y metano]51 para dar e] compuesto 52.
La ruptura de] eniace entre ios carbonos 20 y 21 se efectuó por tratamien
to con periodato de sodiosz, previa iiberación de] hidroxiio de carbono 21. Pa
ra eiio se reaiizó una hidrólisis ácida, comprobándose1uego dei tratamiento 1a
presencia de dos productos de reacción (53 y 54) que se separaron por cromato
grafía en coiumna. E1 anáiisis por espectroscopia de RMN-lHdemostró que los
productos eran 3a,7a,21-trihidroxi-SB-pregnan-ZO-ona (53) y 7a-acetoxi-3a,21
dihidroxi-SB-pregnan-ZO-ona (54) en una reiación de 1:16 respectivamente.
Dado que ios compuestos de 1a mezcla tenian 1ibre e] hidroxiio de carbono
21 y que e] grupo acetato de carbono 7 presente en uno de eiios no interferia
en 1a reacción de corte de 1a cadena 1atera1 con periodato, se procedió a efec
tuar 1a misma sobre 1a mezcia ta] cua].
Se obtuvieron de esta manera Ios ácidos etiánicos 55 y 56. La saponifica
ción de esta nueva mezcia y una posterior reacción de metiiación dió comoünico
producto e] éster 57.
48
B - INVERSION DE LA CONFIGURACION DEL CARBONO 3
Las sintesis de los compuestos 19 y 38 a partir de los ácidos litocólico
y quenodesoxicólico requería la inversión de la configuración del carbono 3 del
esteroide de partida. Existen varios métodos para realizar dicha inversión. En
tre ellos se consideraron:
Bl - Inversión por oxidación y reducción
BZ- Inversión directa con azodicarboxilato de etilo
B3 - Inversión por una reacción de sustitución
Se analizarán a continuación los resultados obtenidos con cada uno de estos
métodos.
Bl - INVERSION POR OXIDACION Y REDUCCION
Involucra la reducción de 3-ceto derivados para obtener los alcoholes axia
les correspondientes, usando un catalizador apropiado.
Esta técnica ha sido empleada con éxito en varios esteroidess3’54 pero pre
senta como inconveniente que el rendimiento en el epimero 3B a partir del 3-ceto
' derivado depende del númeroy la posición de los otros grupos hidroxilo presen
tes en la molécula. Por ejemplo, la proporción de los epimeros axiales formados,
54en general, disminuye cuando aumenta el número de hidroxilos
El ácido quenodesoxicólico tiene dos hidroxilos, en los carbonos 3 y 7, pero
en los proyectos preliminares de la sintesis se consideró que si se adoptaba este
método se podria realizar la deshidratación del hidroxilo de carbono 7 antes de
49
inversión de 1a configuración de] carbono 3. Teniendo en cuenta este detaiie se
decidió usar ácido 1itoc61ico como compuesto modeio ya que permitía tener con
diciones similares a ias que se presentarian en 1a sintesis fina].
Los pasos seguidos fueron ios representados en ei esquema 13.
CHZN2 reactivode Jones
¡1CÏ’ ¡1 f1 5942
¿(//:í , PtO2 , AcOH
02CH3 02CH3
+
Ac H AcO" H
61 60
Esquema 13: Inversión por oxidación y reducción.
E1 ácido 1itoc61ico (42) se trató con diazometano para obtener e] éster me
tiiico correspondiente (58) que posteriormente se oxidó con e] reactivo de Jones.
La cetona resultante (59) se redujo por hidrogenación cataiitica, pues es cono
55cido que 1a reducción de 3-ceto derivados de 58-esteroides con hidruros, con
duce a1 a1coho] con orientación a.
50
E1 anáiisis de] producto de 1a hidrogenación por ccd indicó 1a presencia
de una ünica mancha de Rf mayor que e] de 1a cetona de partida. E1 espectro IR
de] mismono presentó ias señaies correspondientes a hidroxiios iibres y fina]
mente e] espectro de RMN-lHpermitió determinar que dicho producto era una mez
cia de ios derivados 3a y 38 acetiiados (60 y 61) de] esteroide inicia] (58).
Pese a que ios autores obtenían ios aicohoies, en este caso 1a técnica condujo
a 1a mezcia de acetatos, que se formaron por reacción de] a1coh01 con e] soi
vente de 1a reacción de hidrogenación (ácido acético y gotas de ácido ciorhí
drico).
E1 estudio de 1a reiación de ios metiios anguiares en e] espectro de RMN-lH
permitió iiegar a 1a conciusión de que 1a reducción de 1a cetona dió una mezcla
prácticamente equimoiecuiar de ios dos epímeros, ios cuaies no pudieron ser se
parados por cromatografía inciuso empieandodistintos sistemas de soiventes.
De todas maneras e] resuitado obtenido descartaba 1a posibiiidad de uso de]
método debido a que disminuía notoriamente e] rendimiento de 1a secuencia sinté
tica.
BZ - INVERSION DIRECTA CON AZODICARBOXILATO DE ETILO
Esta segunda técnica probada permitía 1a inversión de configuración en un
soio paso de síntesis. Según Bose y coiaboradores56 ei uso de azodicarboxiiato
de etiio en presencia de ácido fórmico conducía,en aigunas horas y con buen ren
dimiento, a 1a formación de un formi] derivado estéricamente puro cuya saponifi
51
cación rendia e1 epimero de] aicohoi inicia].
Estos autores encontraron, sobre 1a base de pruebas hechas con varios sus
tratos, que ios factores estéricos juegan un ro] importante en e] éxito de 1a
reacción. Cuandolos ésteres metiiicos de ios ácidos c61ico (39) y desoxicóiico
(40) se trataron en ias condiciones discutidas, 1a formiiación ocurrió 5610 en
carbono 3 con inversión de configuración, mientras que los grupos hidroxiio de
carbono 7 y 12 no se modificaron. Teniendo en cuenta este resuitado, se decidió
hacer 1a prueba sobre quenodesoxicoiato de meti10,ya que e] hidroxiio de carbo
no 7 no interferiria en 1a reacción (esquema 14).
02CH3 02CH3
EtOzC-N=N-C0 Et2—————>HO. H .OH HC02H HC 2 H .OH
43 62
Esguema14: Inversión directa con azodicarboxiiato de etiio.
E1 método consiste en e] tratamiento a temperatura ambiente de una mezcia
de] aicohoi esteroidai, trifeniifosfina y azodicarboxilato de etiio en tetrahi
drofurano, con un ácido como fórmico (ei usado en este caso) o benzoico.
Luego de repetir varias veces 1a reacción se pudo comprobar que e] rendi
miento fina] en e] producto esperado no superaba e] 20%. Esto se debia a dos
52
factores. Por un 1ado, pese a modificaciones introducidas, Quedabagran parte
de] producto de partida sin reaccionar. Por otra parte, debido a 1a gran canti
dad de óxido de trifeniïfosfina formado durante 1a reacción, 1a separación cro
matográfica resuitaba muyengorrosa, dando comoresuitado pérdidas de] producto
buscado que contribuian a disminuir e] bajo rendimiento a1canzado.
En 1979 Chang57 señaió que sus intentos de hacer uso de esta reacción fue
ron desafortunados. Por ejempio, 11evánd01a a cabo con co1ato de metiio (63) y
ácido fórmico,pudo obtener e] 3B-formi1 derivado luego de una tediosa separación
cromatográfica con 561o 15%de rendimiento. La apiicación dei método sobre ei
7a-acetoxi-3a,12a-dihidroxi-53-coian-24-oato de metiio (64)con ácido fórmico y
sobre e] 7a-acetoxi-3a-hidroxi-12-oxo-58-c01an—24-oato de metilo (65) con ácido
fórmico o ácido benzoico no dieron e] aicohoi invertido deseado.
H0' 02CH3 ozCH3
R10" H a0'32 H0" H “CAC
R1 = TSO R2 = H 66
Teniendo en cuenta estos resu1tados, se pensó en probar ios métodos ciási
cos que efectúan 1a inversión por desplazamiento de un grupo tosiiatosg.
B3 - INVERSION POR UNA REACCION DE SUSTITUCION
Con e] fin de evaiuar 10s diversos procedimientos conocidos de este tipo,
Chang ios comparó, efectuando ias reacciones correspondientes sobre e] 3a-tosi
1oxi-7a,12a-dihidroxi-SB-coian-24-oato de metiio (66). Asi conciuyó que, de ios
métodos anaiizados, e] más satisfactorio era e] que usaba dimetilformamida, por
ia simpiicidad ya sea de ios reactivos comode ias condiciones de reacción, ade
más de 1a faciiidad de aisiamiento de] producto de 1a reacción y de] buen ren
dimiento. E1 único inconveniente era 1a veiocidad de reacción.
Esta ha sido 1a tercera técnica probada. Se empieó comosustrato ei iitoco
1ato de metiio y ios pasos desarroiiados figuran en e] siguiente esquema.
o20"‘¡3 02CH3
HC H T30" H
02CH3
Esguema15: Inversión por una reacción de sustitución.
54
I
Los factores que contribuyen a1 éxito de] proceso de inversión son:
—contro] apropiado de 1a temperatura,
- pureza de] tosi] derivado de] esteroide de partida,
- pureza de 1a N,N-dimetiiformamida.
En varias pubiicacioness7’58’59 consideran 1a temperatura óptima para 1a
reacción entre 77 y 81°C. Temperaturas mayores favorecen 1a formación de oiefi
nas.
En io que respecta a1 grado de pureza de] reactivo, se indicó que 1a N,N
dimetiiformamida Fisher con un contenido de agua de 0,08% era efectiva sin nece
sidad de un secado previo sobre fiitros moiecuiares. En e] presente caso se des
tiló 1a N,N-dimetiiformamida con benceno previamente secado sobre sodio, reco
giéndose 1a fracción correspondiente a1 punto de ebu11ición de 1a misma. Esta
fracción se secó sobre tamices moiecuiares.
Comoalgunos autores aseguran que e] porcentaje de agua infiuye en ei tiem
po de reacción, se hicieron dos pruebas simuitáneas: una con N,N-dimetiiformami
da purificada como se indicó en e] párrafo precedente y otra con esa misma N,N
dimetiiformamida a 1a que se agregó 1%de agua. Los resuitados de estas dos prue
bas no indicaron diferencia iuego de] tiempo recomendadoen 1iteratura (80 hs).
Con ei objeto de determinar si ese tiempo de reacción recomendado era e]
adecuado se decidió efectuar aigunos ensayos cuyos resultados se resumen a con
tinuación:
72 hs de reacción: desaparición de] tosi] derivado de partida
55
—> reacción completa
61 hs de reacción: desaparición de] tosii derivado de partida
—> reacción compieta
48 hs de reacción: desaparición de] tosii derivado de partida
—> reacción compieta
38 hs de reacción: presencia de] tosii derivado de partida
—> reacción incompleta
En todos ios casos se observó por ccd 1a presencia de dos manchas, una con
e] mismo Rf que e] reactivo de partida y otra con un Rf mayor. Estos productos
se separaron por cromatografía en coiumna de siiicagei y se anaiizaron por IR y
RMN-lH.Se conciuyó que 1a mancha superior era e] producto de eiiminación y 1a
mancha inferior e] tosi] derivado de partida o e] formi] derivado producto o una
mezcia de ambos ya que no se separaban. En este üitimo caso, en e] espectro de
RMN-lHse pudo ver rápida y fáciimente 1a presencia de ios grupos aromáticos,
1a seña] correspondiente a1 hidrógeno de] grupo formiio y 1as distintas señaies
correspondientes a ios metiios angulares de ambos compuestos.
Además,tomando como patrón e] espectro UVde] cioruro de p-toiuensuifoniio
y e] de] tosi1 derivado de partida,también se pudo monitorear por esta técnica
e] avance de 1a reacción.
Finaimente se determinó que una vez desaparecido e] tosiïato de partida,e1
formii derivado y 1a oiefina formados como productos de 1a reacción se encon
traban en una reiación aproximada de 2:1.
56
Considerando 1os resuïtados obtenidos y 1os datos recopi1ados, e] ü1timo
de los métodos se consideró e] más conveniente.
57
C - DESHIDRATACION DEL HIDROXILO DE CARBONO 7 E ISOMERIZACION DEL DOBLE
ENLACE FORMADOA LA POSICION 8(14)
LAC, ¡1 \()P‘ LiCÏ' f1
Las pruebas se hicieron sobre ácido quenodesoxicóiico (41) ya que, saivo 1a
cadena iatera], presentaba ias mismascondiciones estructuraies que podria pre
sentar e] futuro intermediario de 1a sintesis tota].
Las condiciones de deshidratación de 58-esteroides hidroxiiados en carbono
7 es un tema engorroso cuyo estudio se inició con ias primeras reacciones de
Bodecker en 192060. A partir de esa época y por varios años los investigadores
dedicados a1 tema dispusieron de técnicas poco adecuadas e insuficientes para
asegurar una correcta identificación de ios distintos productos obtenidos. Du
rante mucho tiempo ios datos de puntos de fusión, de poderes rotatorios o de
microanálisis no permitieron aciarar ias dudas sobre 1a iocaiización de ios do
b1es eniaces presentes en 1a moiécuia. Sumadoa este hecho, e] uso de sustratos
con dos o más hidroxiios iibres introducia una complicación adiciona] para 1a
caracterización de ios compuestosfinales.
58
Se presenta a continuación un breve resumen de 1a información bibiiográfi
ca ana1izada antes de comenzar ios ensayos de deshidratación e isomerización,
con e] fin de mostrar 1a disparidad de criterios existente en e] momentode co
menzar ias pruebas.
ANTECEDENTES BIBLIOGRAFICOS PARA AMBOS PASOS SINTETICOS
En 1935 Yamasaki61 estudió 1a deshidratación de] ácido cóiico (39) por tra
tamiento con ácido ciorhidrico. Conciuyó que e1 producto obtenido en 1a deshi
dratación presentaba un dob1e en1ace en 1a posición 7 y que éste se intercon
vertia en ios isómeros con e] dob1e en1ace en 1as posiciones 8(9) y 8(14) por
acción de] ácido ciorhidrico en ácido acético a temperatura ambiente. Sus con
ciusiones se basaron en una comparación de puntos de fusión con Ios de compues
tos patrones, iuego de una aparentemente efectiva separación de ios isómeros por
maceración de] producto crudo con a1coho]. No deja de iiamar 1a atención 1a ni
tidez en ios puntos de fusión que abarcaban intervaios pequeños (en generai 1°C)
y se asemejaban a ios vaiores verdaderos.
Posteriormente se describió en 1iteratura un estudio sobre 1a deshidrata
ción de] ácido quenodesoxicóiico 11evado a cabo por e] mismo autor62.1ndicó que
se formaban en 1a reacción dos productos, uno de ios cuaies identificó comoe]
isómero con e] dobie en1ace en posición 7. Para confirmario hidrogenó este a1
queno de punto de fusión 185°C y obtuvo un producto de punto de fusión 193°C
que consideró que era ácido iitocóiico (p.f. Ht62 185°C).
59
Ante este hecho cabe preguntar por qué e] autor caracterizó e] producto hi
drogenado comoácido 1itoc61ico si existia entre éste y e] ácido iitocóïico 1a
misma diferencia de punto de fusión que entre dicho compuesto y e] esteroide de
partida. Además, e] autor no indicaba 1a cantidad de hidrógeno absorbido.
Respecto de] otro producto de 1a reacción, a1 que 11amó ácido apoquenodeso
xicóiico, informó no haber determinado con exactitud 1a posición de] dob1e en1a
ce.
En 1946 Devor y coiaboradores63,uti1izando ácido cóiico comomateria] de
partida, efectuaron 1a deshidratación con cioruro de zinc comoagente deshidra
tante y ana1izaron e] soivente y 1a temperatura de reacción. Comoresu1tado de]
anáïisis cambiaron e] soïvente de 1a técnica origina] que era ácido acético por
acetona y consideraron e] método senciiio y efectivo. Según informaron, tanto
con ácido acético como con acetona obtenían ios mismos productos, aunque en rea
Iidad desconocian cuáies eran. La ünica confirmación que hicieron fue que e]
producto obtenido só1o tenia un dob1e en1ace, conciusión a 1a que 11egaron ba
sándose en e] va10r de] equivaiente de neutraiización.
Simuitaneamente con ios trabajos de deshidratación descriptos surgieron
una serie de investigaciones tendientes a isomerizar los dobies enïaces a otras
posiciones con 1a idea de ac1arar 1as estructuras de 10s compuestos obtenidos.
Reichstein y coiaboradores64 hidrogenaron 3a-acetoxi-12a-hidroxi-53-co1-7-en
24-oato de metiio (69) usando p1atino comocataiizador y señaiaron que el trata
miento isomerizaba e] esteroide de partida pasando de] isómero con e1 dob1e en
60
1ace en posición 7 a1 que 10 tiene en posición 8(14). Para confirmario compara
ron ios vaiores de punto de fusión y de poder rotatorio, observando para ios mis
mosdatos diferentes.
H9 3I\CÍ)J ¡1 69
También apreciaron que no disminuia e] punto de fusión mezcia dei isómero
A8(14) (a1 que 11amaron ácido apocóïico) con un estándar de dicho compuesto.
Este resultado se contrapone con 10 encontrado por Yamasaki62. Tai como se
indicó anteriormente, éste obtuvo ácido iitocóiico por deshidratación de] hidro
xilo de carbono 7 de] ácido quenodesoxicóiico e hidrogenación de] A7 derivado
obtenido. Por 10 tanto, ias mismas condiciones de hidrogenación condujeron en un
caso a una isomerización de] dobie eniace formado y en otro a su hidrogenación.
Posteriormente Barton65 determinó que ios vaiores de poder óptico rotatorio
en ei campode ios ácidos biiiares insaturados permitían aciarar datos conflicti
vos y aciarar 1a estructura de varias sustancias. Comoparte de sus conciusiones
señaió que en 1a serie de ios aiocoianos (5a) ia única dobie iigadura de 1a mo
iécuia que resistía 1a hidrogenación cataiitica, en ácido acético y a temperatu
ra ambiente, eraia correspondiente a1 isómero A8(14). En cambio en 1a serie de
ios coianos (58) era diferente; Ios A7 derivados se reordenaban en pequeña propor
ción a A (14)con este procedimiento. Según Barton, ios ácidos que figuraban en
61
7) 8(9)). , . ' . , 7
1a iiteratura comoy (A coienicos, son mezclas de ios isomeros Ay 6 (A
y A8(14).
Los conocimientos de] tema se ampiiaron en 1956 cuando Casteiis y Meakins66
desarroiiaron una técnica de oxidación de 10s dobies eniaces y estudio de ios
productos obtenidos por espectroscopia IR. Con este método se obtenían compues
tos con caracteristicas espectroscópicas fáciimente reconocibies. Para logrario
trataban ei esteroide (con ios hidroxiios protegidos por benciiación) con tetró
xido de osmio; e] compuesto resuitante se convertía en ei correspondiente dio]
por reacción.con hidruro de iitio y aluminio y finalmente se 10 oxidaba a1 com
puesto carboniiico con tetraacetato de piomo. Asi,por ejempio, pudieron diferen
ciar los siguientes esteroides teniendo en cuenta ias distintas señaies que pre
sentaban en e] espectro IR ios derivados obtenidos.
ESTEROIDE INICIAL PRODUCTO FINAL BANDAS IR DEL PRODUCTO
9H19 9H19
2700 (d) 1725 (f)
«1705 (f)
I?
tiC)
8H17 8H17
1705 (f)
F2
62
ESTEROIDE INICIAL PRODUCTO FINAL BANDAS IR DEL PRODUCTO
9H19 9H19
1712 (f)
1735 (f)
R
Pianteado esquemáticamente e] confuso panoramaexistente en 1a iiteratura,
se describen a continuación ios ensayos iievados a cabo para iograr ambos pasos
sintéticos.
C1 - DESHIDRATACION DEL HIDROXILO DE CARBONO 7
Luego de 1a consideración de ios datos expuestos, se iniciaron ias pruebas
de deshidratación de] ácido quenodesoxicóiico utiiizando comoagente deshidratan
te cioruro de zinc en acetona.
Cuando se anaiizaron ios productos de ia reacción por ccd se observaron va
rias manchas de intensidad simiiar, entre ias que se encontraba 1a de] reactivo
de partida. Ante 1a compiejidad de 1a mezcia de productos obtenida y previendo
que e] hidroxiio de carbono 3 podria interferir en 1a reacción, se decidió pro
tegerio con e] fin de evitar su posible deshidratación (esquema 16).
Ta] comose pianteó anteriormente, e] hidroxiio axiai de carbono 7 se en
cuentra estéricamente impedido para 1a entrada de sustituyentes voiuminosos,
mientras que e] grupo hidroxiio ecuatoriai de carbono 3 se encuentra más expues—
to. Esta diferencia estructura] permite 1a protección seiectiva de este üitimo.
63
OzCH3 02CH3
Suc20 CHZNZ
HO" H “OH SucU' H “OH
ZnC]2 , acetona
02CH3 02CH3
SucO' H SucO" H
Esguema 16: Deshidratación de] hidroxiio de carbono 7
La protección buscada se realizó por esterificación con anhídrido succi
nic067. De esta forma se iogró una apreciabie mejora en e] rendimiento de 1a
reacción de deshidratación.
Finaimente se modificó 1a técnica origina] de deshidratación para iograr
1a conversión compieta de] a1coh01 de partida. Para eiio se incluyó una secuen
cia de destiiaciones, efectuadas luego de] agregado de sucesivas porciones de
acetona, ta] comose indica en 1a parte experimenta] (pág. 172).
E1 anáiisis dei producto fina] por IR demostró 1a ausencia de hidroxiios
64
iibres. E1 espectro de RMN-IHde] mismo, presentó ias señales correspondientes
a dos pares de metiios anguiares cuyos valores de despiazamiento quimico coin
cidian con ios indicados en tabias68 para 10s isómeros A7 y A8(14). Se observa
ba también 1a seña] de] hidrógeno oiefinico de carbono 7. Estos datos corrobo
raban 1a presencia de una mezcia de 10s dos aiquenos mencionados como producto
de 1a reacción.
Ademásde 1a técnica de deshidratación con cioruro de zinc, se probó 1a que
. , . . . , . , . 62 .empiea comoreactivo ac1do ciorhidrico en ac1do acetico . Esta variante se des
cartó debido a su bajo rendimiento.
C2 — ISOMERIZACION DEL DOBLE ENLACE FORMADO DE POSICION 7 A 8(14)
'lll ()2(IPL3 ()2(:rt3CU fiSucO” H SUCU H
71 + 72 72
Se iievaron a cabo varios ensayos a fin de encontrar ias condiciones ópti
mas para 1a isomerización de] dobie eniace de posición 7 a posición 8(14) dado
que, ta] comose describió anteriormente, ios resuitados obtenidos por otros au
tores eran totaimente contradictorios.
65
Se efectuó 1a hidrogenación de 1a mezcia de 71 y 72 en diversas condiciones
surgidas de combinar ios dos tipos de cataiizadores recomendadosen diferentes
soiventes (ácido acético, acetato de etilo, mezclas de éstos, metanoi) y con di
ferentes tiempos de reacción. Sin embargoe] tratamiento fue ineficaz en todos
ios casos ya que a] finaiizar la hidrogenación se obtenia 1a mezcla de isómeros
inicia].
Frente a estos resuitados se decidió buscar una técnica alternativa. Wilson
y coiaboradores69 encontraron que por tratamiento con dióxido de azufre iiquido
ocurre 1a migración de dobies eniaces en esteroides insaturados. En sus experi
mentos, e] derivado acetiiado dei esteroide y e] dióxido de azufre iiquido se in
troducian en tubos que iuego se se11aban, sin necesidad de una rigurosa exciu
sión de 1a humedad. Estos se dejaban durante varias horas a una temperatura ade
cuada.
Bajo ias condiciones descriptas pudieron comprobar que ios dobies eniaces
aisiados de cadena 1atera] y e] dobie eniace anuiar entre ios carbonos 5 y 6
eran estabies, en cambio ios que estaban entre ios carbonos 7 y 8 migraban a 1a
posición 8(14).
Se probó esta técnica iográndose resuitados satisfactorios. Sin embargo
fue necesario optimizar e] tiempo de reacción que para e] derivado de] ácido que
nodesoxicóiico resuitó ser de 24 horas.
E1 espectro de RMN-lHde] producto indicó una compieta desaparición de]
. , 7 . .. - . . .isomero A (desapar1c1on de ias senaies de] hidrogeno oiefinico y de ios metiios
66
8(14) (angu1ares correspondientes) y 1a presencia de] isómero A vaïores de des
p1azamiento químico de Ios metiïos anguïares coincidentes con 105 indicados en
tablasós).
67
D - OBTENCION DEL 20-CETO PREGNANO A PARTIR DEL ACIDO ETIANICO
Ta] comose p1anteó anteriormente, e] objetivo de esta etapa era 1a cons
trucción de una cadena 1atera1 de] tipo 20-ceto pregnano a partir de] ácido
etiánico resuitante de] proceso de degradación. Durante esta modificación se in
troduciría 1a marcación isotópica que finaimente quedaría localizada en e] car
bono 21 de 1a moiécuia.
Esta conversión puede reaiizarse de varias formas diferentes. Una de ias
primeras que se anaiizó consistía en 1a reacción de] ácido etiánico correspon
diente con meti] iitio70, pero no se tenía 1a certeza de poder usar condiciones
equimolecuiares de ácido a meti] iitio por 10 que en principio fue dejada de
1ado.
En trabajos más recientes, Cahiez y colaboradoresn’72 mostraron 1a utiii
dad de 10s reactivos organomanganesianos en 1a síntesis de cetonas a partir de
haiuros de ácido, con 1a ventaja de empiear una reiación 1:1 de monoaiquiiman
ganesiano (RMnI)a sustrato. Estos autores apiicaron 1a técnica en e] campo de
los esteroides73 y segün sus comentarios 1a reacción conducía a] producto con
rendimientos mejores que 10s obtenidos con métodos que usaban otros metaies co
mo cadmio, zinc, aiuminio o mercurio. Además, e] reactivo ioduro de aiquiimanga
neso era estabie a temperatura ambiente y comparado con ios compuestos aiquii
iíticos o aiquiimagnésicos era más selectivo; 1a moiécuia de] sustrato podía te
ner grupos formiioxi, acetoxi o carboníiicos que no eran atacados por e] reacti
vo. Este üitimo hecho permitía, por ejempio, una acetiiación comoreacción de
68
protección de] hidroxiio de carbono 3.
Independientemente de estos comentarios,también se tuvo en cuenta que Mac
74Philiamy y Schoiz sintetizaron |21-14CI 3B-acetoxipregn-5-en-20-ona (76) con
e] método genera] para 1a preparación de cetonas desarroiiado por Giiman y Ne]
son75 que empiea derivados organocádmicos. Este método se habia apiicado con
éxito en 1a sintesis de esteroides76 pero usando un gran exceso de reactivo de
Grignard. Los autores mejoraron 1a técnica y obtuvieron e] compuesto 76 con 50%
de rendimiento, empieando cantidades equimoiecuiares de ioduro de metiio y cio
ruro de ácido.
Si bien esta adaptación podia servir a ios fines buscados en e] sentido que
1a relación esteroidezreactivo iograda era 1:1, ias cantidades con ias que tra
bajaron ios autores y ias disponibles en e] presente trabajo diferian, por lo
menos, en un factor de 10.
Por otro 1ado, se debe tener en cuenta que los precursores a sintetizar
iban a ser utiiizados en estudios biosintéticos en los que interesa empiear com
puestos con una e1evada actividad eSpecifica,10 que impiicaba 1a menor di1ución
posibie de] reactivo marcado.
Además,en especia] en 1a sintesis a partir de ácido quenodesoxicólico, e]
número de pasos impedía 11egar a1 ácido etiánico con una masa e1evada de produc
to. Por io tanto era necesario condicionar ios procedimientos usados por ios au
tores a ias necesidades de 1a presente sintesis.
Resumiendoestos datos se decidió probar ios dos üitimos métodos:
69
- Reacción con un monoaiquiimanganesiano
- Reacción con un diaiquiicadmio
Tai comose indicó anteriormente, se decidió usar para ios ensayos previos
un ácido comerciai. Se eiigió e] ácido 38-hidroxiandrost-5-en-17B-carboxiiico
(73) que sóio diferia de ios ácidos etiánicos a sintetizar en e] dobie eniace
de 1a posición 5 y en 1a ausencia de] dobie eniace de 1a posición 8(14), consi
derándose que estas caracteristicas estructuraies no interferirian en ei desa
rrollo de 1a reacción.
Para hacer cuaiquiera de ias dos pruebas eran necesarias dos etapas pre
vias: 1a protección de] aicohoi y 1a formación dei cioruro de ácido.
La serie de pasos ensayados figuran en ei siguiente esquema.
02H 02H
AcOH———>
H Ac73 74
c12(c0)2
OCI
Cd(CH3)2<_—Ac Ac
76' 75
Esguema17: Obtención de] 20-ceto pregnano a partir de] ácido etiánico.
- Obtención de] ácido 38-acetoxiandrost-5-en-17B-carboxí1ico (Zé)
Debido a que e] hidroxiío de carbono 3 no presentaba impedimento estérico
se utilizó una técnica de acetiiación senciiia. Se empieó una mezcla de anhídri
do acético y piridina (1:1) y se desarroíió 1a reacción a temperatura ambiente.
Sin embargo no se obtuvo e] resuitado esperado ya que además de 1a esterifica
ción, se formó ei anhídrido mixto (77) con e] grupo carboxiío de carbono 17.
Ac77
Ante este hecho se varió 1a proporción de 1a mezcía de reactivos, disminu
yendo ía cantidad de anhídrido acético. E1 anáíisis por ccd indicó 1a presencia
de mezclas de productos entre ios que se encontraba, en aígunos casos, e] ácido
de partida.
Se cambió e] medio de reacción efectuando ía acetiíación con anhídrido acé
tico y catáiisis de ácido clorhídrico, pero e] resuítado fue ei mismo.
Dado que e] anhídrido se obtenía muy fáciímente, se trató de reaíizar su
hidróíisis en condiciones suaves, empieando piridina acuosa a 90°C. Sin embargo
e110 no condujo a1 derivado necesario para 1a síntesis.
71
Finaimente se sometió e] compuesto 73 a un tratamiento con ácido acético
a refiujo durante 72 horas, iuego de ias cuaies se iogró 1a compieta transfor
mación dei esteroide de partida en e] producto acetiiado 74.
- Obtención de] cioruro de 3B-acetoxiandrost-5-en-17B-carboxiiiio (Zé).
Para este paso se eiigió comohaiogenuro de ácido e] cioruro de oxaiiio.
Luego de suspender e] ácido etiánico en benceno anhidro, se agregó e] c10
ruro de oxa1i10. Se obtuvo rápida y fáciimente e] cioruro de] ácido etiánico
con muy buen rendimiento.
E1 compuesto se usó sin purificación previa.
- thención de 3B-acetoxi-pregn-5-en-20-ona (3Q).
- Reacción con un monoaiguiimanganesiano.
Preparación de] reactivo:
CH3I + Mg ——-- CH3MgI
CH3MgI + MnI2 -—— CH3MnI + MgI2
E1 primer paso consistió en 1a preparación de] ioduro manganoso por reac
ción directa de] iodo con manganeso en éter anhidro. Luego se preparó e] reacti
vo de Grignard usando ioduro de metilo y iimaduras de magnesio en éter.
La reacción de intercambio de meta] se efectuó mezciando un equivaïente de
ioduro manganoso con un equivaiente de] reactivo de Grignard. La mezcia se rea
1izó a -20°C apreciándose 1a aparición de una suspensión amariiia de ioduro de
72
metiimanganeso.
Desarroiio de 1a reacción:
La reacción se inició por agregado de una soiu
ción bencénica de] cioruro de ácido a 1a suspensión etérea de ioduro de meti]
manganeso.
Se hicieron varias pruebas, pero ios resuïtados no fueron Ios esperados ya
que 1a conversión a metiicetona dio rendimientos muy bajos. Estos no mejoraron
proiongando e] tiempo de reacción.
- Reacción con un diaiguiicadmio.
CH3I + Mg -—-— CH3MgI
2 CH3MgI+ CdC]2 -- Cd(CH3) + CIIMg2
Se preparó e] reactivo de Grignard con ioduro de metiio y iimaduras de mag
nesio en éter anhidro. Luego de 2 horas de reacción, cuando 1a formación de]
reactivo se compietó, se agregó e] cioruro de cadmio finamente pulverizado y an
hidro.
E] ioduro de metiio radiactivo se provee comerciaimente en tubos de vidrio
de aproximadamente 20 cm de iargo, divididos por 1a mitad con una débi] pared de
vidrio que se rompe en e] momento de 1a reacción. De esta manera se 1ibera e]
compuesto. Teniendo en cuenta e] condicionamiento que presentaba no sóio e] pe
queño voiumen de ioduro de metiio sino también 1as caracteristicas particuiares
de] envase que lo contenía, 1a reacción se probó usando dos procedimientos dife
rentes.
73
En un primer intento se preparó e] reactivo de Grignard en un tubo de di
mensiones simiiares a ias de aquéiios en ios que se provee e] ioduro de metiio
radiactivo, pero sin 1a división en 1a mitad (figura lb). Se hizo esta prueba
con 1a idea de reaiizar 1a experiencia definitiva en e] mismorecipiente donde
venia envasado e] compuesto marcado. Una vez finaiizada 1a formación de] reac
tivo, se 10 trasvasó con una jeringa a un baión que contenía e] cioruro de cad
mio. En ese mismo baión, que estaba cerrado con un tapón de iátex, se inyectó
posteriormente e] cioruro de ácido esteroida].
Para 1a segunda prueba se diseñó e] equipo que se indica en 1a figura la.
La reacción de Grignard se desarroiió en ei tubo kitasato y durante e] trans
curso de 1a misma se liberaria e] ioduro de metiio radiactivo encerrado en e]
tubo invertido. Debido a que durante ias pruebas no se empieó e] compuesto iso
tópicamente marcado,se usó e] mismoequipo pero con un tubo invertido sin divi
sión (figura lb). Una vez que se compietó 1a formación de] ioduro de metilmag
nesio y actuando en atmósfera de nitrógeno, se sacó ei tubo invertido, se agre
gó e] cioruro de cadmio y se tapó e] tubo kitasato con un tapón de vidrio. La
suspensión fina] se agitó para formar e] compuesto organocádmico y una vez for
madose agregó e] cioruro de ácido esteroida] inyectándoio a través de] tapón
de 1átex de 1a saiida lateral de] tubo kitasato.
Este procedimiento es ei que finaimente se adoptó por e] rendimiento de
1a reacción con e] compuesto organocádmico y por 1a comodidad de] procedimien
to empieado.
74
Figura 1! Equipo empleado para 1a preparación de 20-ceto pregnanos a partir
de los cïoruros de ácidos correspondientes.
75
La diferencia entre estas pruebas y los ensayos definitivos radicaba en
1a necesidad de iiberar e] ioduro de metiio radiactivo durante e] transcurso
de 1a reacción de Grignard. Por e110 en 1a siguiente experiencia se inició 1a
formación de] reactivo con 1a mitad de] haiogenuro de a1qui10 a usar. Despues
de media hora de iniciada 1a reacción, se enfrió 1a parte inferior de] tubo
kitasato a 1a temperatura de] aire iiquido y se agregó e] resto de] ioduro de
metiio. Se dejó que subiera 1a temperatura hasta aicanzar 1a ambiente y se con
tinuó con 1a agitación. De esta manera se comprobó que e] resuitado era e] mis
mo que ei que se habia obtenido cuando no se habia disminuido 1a temperatura
de] medio. Por 10 tanto, se podia usar este cambio de temperatura para faci1i—
tar e] contacto de] ioduro de metiio radiactivo con 1a mezcia de reacción sin
que se afectara e] resuitado fina] de] proceso.
Esta técnica se probó usando cantidades equiva1entes a ias que se empiea
rian para ias sintesis de ias metiicetonas 19 y 38 iográndose rendimientos má
sicos prácticamente iguaïes.
E - SINTESIS TOTAL DE I21-14CI 3B-HIDROXI-SB-PREGN-8(14)-EN-20-0NA
Sobre 1a base de ios datos anteriormente obtenidos 1a secuencia sintética
elegida fue 1a siguiente:
- Degradación de 1a cadena 1atera1 de] ácido biiiar a una cadena iaterai de]
tipo ácido etiánico.
Deshidratación de] hidroxiio de carbono 7 e isomerización de] dobie en1ace
formado a 1a posición 8(14).
Inversión de 1a configuración de] carbono 3.
Construcción de 1a nueva cadena 1atera1 de] tipo 20-ceto pregnano.
La primer etapa seria 1a degradación de 1a cadena iaterai para ilegar a 1a
de] ácido etiánico. La protección seiectiva de] hidroxiio de carbono 3 en pre
sencia de] de carbono 7 es factible debido a1 impedimento estérico que presenta
este üitimo para 1a entrada de sustituyentes voiuminosos. Comoesa protección se
1ectiva se habia probado previamente con e] hidroxiio de carbono 3 orientado ha
cia e] 1ado a de 1a moiécuia, resuitaba conveniente deshidratar ei hidroxiio de
carbono 7 antes de invertir 1a configuración de] carbono 3. E1 último paso seria
e] armado de 1a cadena de tipo pregnano, con 1a consecuente introducción de 1a
marcación isotópica.
La secuencia sintética discutida anteriormente fue e1egida luego de reaii
zar dos ensayos para ver si existia 1a posibiiidad de acortar ei camino sinté
tico. E1 primero consistia en deshidratar e] hidroxiio de carbono 7 protegiendo
e] de carbono 3 con un grupo tosiiato. Esto evitaria 1a succiniiación, hidróii
77
sis de] grupo succiniio iuego de deshidratar y posterior tosiiación en carbono
Pese a que ei grupo tosiio resulta ser un muybuen grupo saiiehte, se in
tentó verificar 1a apiicabiiidad de esta variante. Se iievaron a cabo ias trans
formaciones indicadas en ei siguiente esquema
02CH3 02CH3
CiTs
FiCÏ" ¡1 ‘ÏDÏi 135€), ¡1 .ÏJFJ
45
ZnCi2
acetona
02CH3
Esguema 18: Uso de un tosiiato como grupo protector para ia reacción de deshi
dratación.
La tosiiación de] quenodesoxicoiato de metiio (43) se realizó con ia misma
técnica usada previamente para ei 1itocoiato de metiio (pág. 53 ) y con un ren
dimiento iguaimente satisfactorio. La deshidratación posterior se hizo con cio
ruro de zinc en ias condiciones determinadas anteriormente para ei compuesto
78
70 (pág. 63 ).
E1 espectro de RMN-lHdei producto fina] obtenido no presentaba 1a seña]
correspondiente a1 hidrógeno 7B pero tampoco presentaba 1as señaïes correspon
dientes a hidrógenos sobre carbonos aromáticos o a1 hidrógeno de carbono 3 uni
do a un hidroxiio ecuatoria]. En cambio se vieron varias señaies oïefinicas com
piejas a 5,1 , 5,3 y 5,6 ppm. Por otro 1ado e] espectro IR no era e] de un este
roide ni con hidroxilos 1ibres ni con grupos aromáticos.
Estos hechos permitieron confirmar que durante e] transcurso de 1a reacción
no sólo se habia deshidratado e] hidroxiio de carbono 7 sino que además se habia
e1iminado e] tosiiato, 10 que descartaba 1a posibi1idad de usario comogrupo
protector.
La otra variante consistía en invertir 1a configuración de] carbono 3 y em
plear e] esteroide con e] hidroxilo con orientación B, protegido comoformil de
rivado, comosustrato para 1a deshidratación.
Para analizar esta aiternativa se trató e] 3B-formoxi-58-c01an-24-oatode
metiïo (68) con c1oruro de zinc en acetona, en 1as condiciones de 1a reacción
de deshidratación (pág.63 ). E1 producto aisiado 1uego de dos horas de trata
miento se anaïizó por ccd, comprobándose que e] reactivo de partida habia desa
parecido y observándose fundamentaimente una mancha de Rf mayor. Esta mancha
coincidia con 1a de] producto 1atera1 de 1a reacción de inversión de configura
ción (producto de 1a eïiminación de] grupo tosiiato) en distintos sistemas cro
matográficos probados. Su espectro de RMN-13€no presentó 1a seña] de] carbono
79
3 sustituido en e con un formiato, pero en cambio tenia señaies de carbonos oie
finicos a 156,17 , 132,32 , 128,65 y 124,22 ppm.
Este compuesto se hidrolizó con hidróxido de potasio en etano] a refïujo du
rante dos horas y e] hidroiizado se metiió con diazometano. E1 espectro IR de]
esteroide sometido a este tratamiento no presentaba señaies de hidroxiios Iibres
y además e] análisis por ccd demostró que su Rf era e] mismo que ei de] compues
to sin tratar.
Estos resuitados permitieron conciuir que e] grupo formiato no soportaba
ias condiciones de deshidratación.
Descartada 1a posibiiidad de introducir 1as dos modificaciones discutidas,
se comenzóe] trabajo de sintesis tota]. Se apiicaron ias reacciones que previa
mente se habian probado sobre ios sustratos modeio (ácido quenodesoxicóiico y
ácido iitocóiico) encadenándose en 1a secuencia indicada en 1a página 76. Se dis
cuten a continuación ias experiencias 11evadas a cabo para obtener 1a cetona 38.
E1 - DEGRADACION DEL ACIDO BILIAR AL ACIDO ETIANICO
Esta primera etapa de 1a sintesis se rea1izó ta] comose habia efectuado en
ios ensayos de degradación ya que tanto e] producto de partida comoe] fina]
eran ios mismos. Se obtuvo asi e] 3a,7a-dihidroxi-5B-androstan-17B-carboxi1ato
de metilo (57).
80
O CH02H 2 3
—->'—>'—>
E2 - DESHIDRATACION DEL HIDROXILO DE CARBONO 7 E ISOMERIZACION DEL DOBLE
ENLACE FORMADOA LA POSICION 8(14)
O2CH3 02CH3
Suc 0
HO' H OH SucO" H OH78
ZnC12 , acetona
O2CH3 02CH3
SucO' H SucO H80 79 + 80
81
La succinilación se realizó en las mismas condiciones que se habian usado
previamente y con rendimientos similares, pero en cambio la reacción de deshi
dratación con cloruro de zinc no dio resultados satisfactorios. Su aplicación,
tal como se habia descripto para el compuesto 70, dejaba la mayor parte del al
cohol sin reaccionar. Paulatinamente se fue aumentando la cantidad de agente
deshidratante y el tiempo de calentamiento. La evolución de la reacción se si
guió por ccd observándose la aparición de dos manchas principales, una de mayor
y otra de menor Rf que el esteroide de partida. Cuando se comprobó la desapari
ción de este último se consideró finalizada la reacción, extrayéndose los pro
ductos de la misma. Se metiló la mezcla extraída y se determinó por IR y ccd
que se había producido una hidrólisis parcial de los grupos éster presentes, de
bido a que el aumento de la cantidad de cloruro de zinc aumentó la basicidad del
medio de reacción lo suficiente comopara producir la hidrólisis mencionada.
Ademásse verificó que la reacción no habia concluido ya que parte del alcohol
de partida aün no se habia deshidratado.
Se repitió el proceso para determinar la cantidad de cloruro de zinc nece
saria para realizar la deshidratación en el caso del ácido etiánico, que resultó
ser muchomayor que la necesaria para deshidratar el derivado del ácido biliar
(70).
Una vez optimizadas las condiciones para este nuevo sustrato, la mezcla de
productos aislada se metiló por tratamiento con diazometano. Estos productos,
tal comoocurrió en los ensayos previos, resultaron ser una mezcla de las ole
82
finas con e] dobie eniace en ias posiciones 7 (79) y 8(14) (80). Fue necesario
por 10 tanto hacer 1a isomerización para transformar e] compuesto 79 en 80.
La técnica eiegida en ias etapas previas consistía en un caientamiento de
1a mezcia con dióxido de azufre (pág. 65). Sin embargo, un importante riesgo de
esta reacción radica en 1a expiosión dei tubo a1 ser ca1entado, con 1a conse
cuente pérdida de 1a muestra. Es por esto que, pensando en 1a trabajosa prepa
ración de] esteroide, se decidió separar ias oiefinas para someter a 1a reacción
de isomerización soiamente e] compuesto insaturado en posición 7, minimizando de
esta forma ias posibies pérdidas. Comono se pudieron separar por ccd se recu
rrió a 1a cromatografía iiquida de aita resoiución con 1a que se iogró ei obje
tivo buscado.
En 10 que respecta a 1a reacción de isomerización, se debió modificar e]
tiempo de caientamiento ya que, segün pudo comprobarse por RMN-lH,un tratamien
to de 24 horas como e] usado para e] derivado de] ácido quenodesoxicóiico (71)
resuitó insuficiente. La isomerización de] dobie eniace se compietó en 36 horas
con e] consecuente aumento en 1a cantidad de productos aiquitranosos obtenidos
como subproductos de 1a reacción. Este hecho ya habia sido informado en 1a iite
ratura previamente.
E3 - INVERSION DE LA CONFIGURACION DEL CARBONO 3
OQCHg 02CH3
02CH3
E1 compuesto 80 se sometió a una reacción de saponificación con 1a cua] se
iiberó ei hidroxiio de carbono 3 que, 1uego de una metiiación con diazometano,
se tosiió con cioruro de p-toiuensuifoniio. E1 tratamiento con N,N-dimetiiforma
mida invirtió 1a configuración de ese centro asimétrico. Para ios dos üitimos
pasos ias técnicas usadas fueron ias mismas que ias elegidas en ias pruebas pre
vias (pág.53 ).
E1 producto resuitante de 1a reacción de inversión debió purificarse por
recristaiización, ya que por cromatografía de adsorción en siiicagei se producía
1a hidróliSis casi compieta de] éster de] ácido fórmico. Este fue e] resuitado
84
obtenido cuando se purificó e] formi] derivado (83) usando una columna cromato
gráfica con e] adsorbente indicado y cioroformo comosolvente de eiución. E1 es
teroide tratado de esta manera presentó en e] espectro IR una banda de tensión
o-n a 3400 cm'1 . Por otro 1ado, en ei espectro de RMN-lHno se observó 1a seña]
de] hidrógeno de] formiio a 8,07 ppm, pero se encontró 1a de] éster metiiico de]
ácido etiánico a 3,68 ppmindicando que este üitimo no se afectó por ei mencio
nado procedimiento.
Teniendo en cuenta este resuitado, cuando se repitió este paso de sintesis
se purificó e] producto por recristaiización de metano].
E4 - OBTENCION DEL 20-CETO PREGNANO A PARTIR DEL ACIDO ETIANICO
02H
ACOH
¡XCF1 85
c12(co)2
Cd(EH
ÏOQH
H H84
ak l at
H2504/EtOH<5__________
F‘ ¡1 Au:87 86
li
85
E1 compuesto 83 se saponificó y e] ácido resuitante 84 se acetiió con ácido
acético a refiujo, tai comose habia determinado en ios ensayos previos.
La cantidad fina] de ácido acetiiado sóio alcanzó a 15 mg (0,04 mmoies) ios
que se sometieron a 1a reacción con dimetiicadmio.
Debido a 1a baja cantidad de ácido obtenida se desarroiió solamente 1a sin
tesis radiactiva. Luego de 1a purificación de] producto crudo de reacción se se
pararon 5 mg de 1a metiicetona 86 con una actividad especifica de 2,25x107 dpm/mg
u 8,05x109dpm/mm01 6 3,66 mCi/mmo].
E1 compuesto 86 se hidroïizó y e] aicohoi resuitante, iuego de 1a purifica
ción correspondiente, mantuvo 1a actividad especifica anterior: 2,54x107 dpm/mg
u 8,02x109dpm/mm01.Este era e] producto fina] de una de ias sintesis y uno de
los esteroides a usar en los ensayos de inocuiación. Se indica a continuación e]
esquema completo para su preparación.
86Esguema 19:
COZH
‘ 41H0 H OH
O
SucÜ
COZCH3 COZCH3 OZCH3
::j:f;:Ï:Ï] + ::!Ïí;j:ij e' 7.9 .— 0 x s.H SucO 8 78
SucU' H SucU
87
F - SINTESIS TOTAL DE BB-HIDROXI-SB-PREGNAN-ZO-ONA
Para 1a sintesis de [21-14C| 3B-hidroxi-SB-pregnan-ZO-ona (19) se reaiizó,
a partir de] ácido 1itocóiico (42),una secuencia de reacciones anáioga a 1a des
cripta para 1a sintesis de1 derivado de] ácido quenodesoxicóiico.
Los resuitados y rendimientos obtenidos fueron simiiares.
En todos ios casos en que 1os reactivos usados fueron ios mismos, 1a reia
ción estequiométrica empieada se mantuvo aproximadamente igua].
E1 esquema de 1a sintesis compieta se encuentra en 1a página 90.
F1 - DEGRADACION DEL ACIDO BILIAR AL ACIDO ETIANICO
E1 ácido iitocóiico sóïo presenta un hidroxiio en carbono 3 y su protección
se pudo reaïizar en condiciones más suaves que 1as usadas previamente. Para e110
se trató e] esteroide con una mezcia de anhídrido acético y piridina durante 24
horas, a temperatura ambiente, Iográndose con este método una acetiiación com
p1eta.
La descarboxiïación oxidativa se efectuó con tetraacetato de piomo y 1a mis
ma catáiisis empIeada previamente (acetato de cobre y piridina). Esto condujo a1
acetato de 24-nor-58-c01-22-en-3u-01 (89).
E1 tratamiento con N-1itioeti1endiamina permitió isomerizar e] dobie en1a
ce de 1a posición 22 a 1a 20(22). Comoera previsible, además de] despïazamiento
de] dob1e en1ace, e] medio básico de esta reacción hidr01izó e] éster de carbo
no 3. Por este motivo se repitió 1a acetilación procediéndose nuevamente de 1a
88
manera indicada para ei caso de1 ácido iitocóiico y aislándose e] acetato de
24-nor-58-c01-20(22)-en-3a-01 (91) con óptimos rendimientos. La ozonóiisis de
1a oiefina rindió 1a 3a-acetoxi-SB-pregnan-20-ona (92).
En 1a etapa siguiente por acetoxiiación de 1a cetona con tetraacetato de
pïomo se obtuvo 1a 3a,21-diacetoxi-56-pregnan-20-ona (93) y una hidrólisis áci
da condujo a 1a 3a,21-dihidroxi-SB-pregnan-ZO-ona (94).
En 1a sintesis descripta a partir de] ácido quenodesoxic61ico, 1a hidróii
sis ácida conducía a una mezcia de compuestos, ya que e1 hidroxiio de carbono 7
se iiberaba sóio en una muypequeña proporción. Esto ob1igaba a reaiizar ios dos
pasos siguientes con ios dos productos (7a-hidroxi y 7a-acetoxi derivados) si
muitaneamente. Ya que e] sustrato homóiogode esta sintesis no tenia 1a sustitu
ción en carbono 7, esta dificuitad no se presentó y en ias condiciones de 1a hi
dróiisis se obtuvo unicamente 1a a-hidroxicetona 94.
E1 tratamiento con periodato de sodio y una posterior metiiación con diazo
metano permitió separar e] 3a-hidroxi-5B-androstan-17B-carboxi1ato de metiïo
(95) con e] que finalizaba 1a secuencia de degradación.
F2 - INVERSION DE LA CONFIGURACION DEL CARBONO 3
Por reacción de] compuesto 95 con cioruro de p-toïuensuifoniio se preparó
e] 3a-tosi1oxi-58-androstan-17B-carboxi1ato de metiio (96). E1 despiazamiento
de] grupo tosiiato de] carbono 3 con N,N-dimeti1formamida invirtió 1a configura
ción de ese centro asimétrico formándose e] 36-formiioxi-58-androstan-17B-carbo
89
xiïato de metiio (97).
E1 paso siguiente consistió en 1a saponificación de] compuesto 97 con e]
fin de iiberar e] ácido. Comosimuïtáneamente se desprotegió e] hidroxiio de
carbono 3, se procedió a reacetilar usando ácido acético a refiujo de acuerdo
con e] método e1egido en ios ensayos previos. Asi se obtuvo e] ácido 38-acetoxi
5B-androstan-17e-carboxi1ico (99).
F3 - OBTENCION DEL 20-CETO PREGNANO A PARTIR DEL ACIDO ETIANICO
Se reprodujeron exactamente ias mismas condiciones usadas con una masa
equivalente de] reactivo de prueba (74) Iográndose en este caso un resuitado
simiiar. De esta manera se preparó primero 1a 3B-acetoxi-58-pregnan-20-ona (100)
y posteriormente e] mismo producto marcado en carbono 21 con 14€. E1 rendimien
to fina] de ambas preparaciones fue similar. E1 compuesto radiactivo presentó
1a siguiente actividad especifica: 8,72x106 dpm/mgó 3,14x109dpm/mm016 1,42
mCi/mmo].
La hidróiisis ácida de estas cetonas condujo a 1a 3B-hidroxi-SB-pregnan
20-ona (19) y 1a [21-14cl 3B-hidroxi-53-pregnan-20-ona cuya actividad especifi
ca resuitó ser 10,12x106 dpm/mgó 3,22x109 dpm/mmoia 1,46 mCi/mmo]. Esta üiti
ma fue usada en los ensayos de inocuiación.
90
\COZH 02H
———————e> -———————>
f Acd' H 89
H0" H 42 ACO 83 i0 // z/
e——— <—-—-—
H0, H 90AGO” H 92 C0” H 91
AcU'
HOCH2
A
ACOCH 0
H 93 HO/ H 94
02CH3 OZCH3 OZCH3
<+———————— <————-—-—
T30" H 96 H0, H 95HCOZ H 97
02H 02H o
———-—+ ———->
HO H 98 AcO H 99 ACO H 100
OfiaífifiAcO H H0 H 19
Esguema 20: Síntesis tota] de 3B-hidroxi-Ss-pregnan—20-ona
INOCULACION DE LOS PRODUCTOS RADIACTIVOS
A PLANTAS DE D. PURPUREA.
91
CRECIMIENTO DE LAS PLANTAS
Las semiiias se sembraron en almácigos que se mantuvieron húmedos constan
temente. Después de 1a aparición de los cotiiedones, ias p1anticu1as se coioca
ron en otro aimácigo para aisiarias de ias semiiias sin germinar y ubicarias
con una separación de 5 cm entre cada una.
Hasta ios 45 dias ias p1antas_recibieron 501 a través de un vidrio y en ese
momentose transpiantaron a macetas. E1 resto de] crecimiento se desarroiió a1
aire 1ibre.
ADMINISTRACION DE LOS PREGNANOS RADIACTIVOS (COMPUESTOS 19 Y 38).
Se usaron seis piantas de D. purpurea de tres meses. Cada pianta tenia en
tre cuatro y seis hojas y en todas se observaban hojas pequeñas en etapa de cre
cimiento.
Se eiiminó 1a tierra de 1a superficie de ias hojas con agua. Después que e]
agua se habia evaporado se 1impiaron ias hojas con un aigodón embebido en aceto
na.
Se disoivieron 2 mg de |21-14CI 3B-hidroxi-SB-pregnan-ZO-ona (19) de acti
vidad especifica 10,12x106 dpm/mg en 25 m1 de etano]. Se tomó 0,1 m1 de esa so
iución para medir radiactividad y 1 m1 de 1a misma para inocular. Este üitimo se
evaporó a sequedad y e] residuo se disoivió en 600 u] de etanoi. Esta soiución
más concentrada se apiicó con un tubo capiïar de vidrio sobre 1a superficie de
ias hojas de tres piantas, tratando de distribuiria equitativamente y en forma
92
preferencia] sobre ias hojas más tiernas. E1 recipiente se 1av6 dos veces con
200 u] de etano] cada una, agregando 1as soiuciones de 1avado sobre 1a superfi
cie de ias hojas de ias mismas piantas y en 1a misma forma.
Se pesó 1 mg de ¡21-14cl 3B-hidroxi-SB-pregn-8(14)-en-20-ona (38) de acti
vidad especïfica 25,40x106 dpm/mgy se disoivió en 10 m1 de etano]. Se separaron
50 u] de esa soiución para medir radiactividad y 1 m1 de 1a misma se evaporó a
sequedad. E1 residuo obtenido se redisoivió en 400 u] de etano] y se ap1ic6 so
bre 1a superficie de ias hojas de otras tres piantas en forma simiiar a1 caso
anterior. También se iavó e] recipiente dos veces con 200 u] de etano] cada vez,
agregando ias soiuciones de 1avado a 1a superficie de ias hojas de 1as piantas
inocuiadas con este precursor.
Los datos se encuentran resumidos en 1a tabia 1 de 1a página 103.
DURACION DE LAS EXPERIENCIAS
Las piantas inocuiadas fueron mantenidas a1 aire 1ibre, evitando que se mo
jaran 1as hojas.
Los períodos de cada experiencia fueron de 4, 9 y 14 días.
A1 finaiizar cada periodo se extrajo 1a parte aérea de una de ias tres
piantas inocuïadas con |21-I4CI 3B-hidroxi-SB-pregnan-ZO-ona y de una de ias
tres inocuiadas con [21-14CI 3B-hidroxi-SB-pregn-8(14)-en-20-ona.
93
EXTRACCIONDEL MATERIALVEGETAL (Procedimiento generaT)
Una vez compIetado eI periodo correspondiente, se cortaron las hojas y se
Iavaron con etanoI en forma abundante. La soïución resuTtante de] Iavado de Ias
hojas de cada planta se coIocó en un matraz aforado de 100 m1 y se compIetó e]
vqumen con etanoI. Se tomó 1 m1 de esa squción para medir radiactividad.
Las hojas de Ia pIanta en estudio se cortaron en trozos pequeños y se tri
turaron en un mortero. EI materia] vegeta] se extrajo seis veces con 15 m1 de
etanoI cada una, obteniéndose finaTmente un residuo fibroso de coIor pardo c1a
ro. La soTución aicohólica se evaporó a sequedad y e] extracto se redisoIvió en
etanoI y se coiocó en un matraz aforado de 10 mI. Una vez compTetado e] vqumen
de] matraz , se tomó 0,5 m1 de Ia squción para medir radiactividad y eI resto
se concentró para su tratamiento posterior.
AISLAMIENTODE LOS CARDENOLIDOS(Procedimiento generaI)
A1 extracto vegeta] concentrado de cada pIanta se agregaron 4 mg de digito
xina, 2 mg de digoxina y 2 mg de gitoxina.
La nueva mecha se purificó por ccd preparativa de siIicageI, usando para
eI desarroIIo de Ia misma una mecha de cIoroformo-etanoi (93:7). En estas condi
ciones se separa Ia digitoxina con Rf=0,5 y Ia mezcia de digoxina y gitoxina con
Rf=Ó,3.
Se eIuyeron Ias dos zonas mencionadas de 1a pIaca y Ias dos soluciones re
suitantes se coIocaron en dos matraces aforados de 25 m1 cada uno, enrasando a
94
v01umen con etano]. De cada uno de eïios se tomó una aiícuota de 3 m1 para medir
radiactividad.
Un voiumen medido de] resto de 1a soïución de] matraz que contenía 1a digi
toxina se evaporó a sequedad y a1 residuo se agregó una cantidad adiciona] cono
cida de digitoxina (ver tabïas 3 y 6 de 1as páginas 104 y 106).
La mezc1aasí preparada se recristaiizó con etano] acuoso hasta actividad
constante.
SEPARACIONDE DIGOXINAY GITOXINA (Procedimiento generai)
La soiución a1coh61ica que contenía 1a mezc1a de digoxina y gitoxina, obte
nida Iuego del aislamiento de ios cardenóiidos radiactivos, se evaporó a seque
dad. E1 extracto se rediso1vi6 en una pequeña cantidad de a1coh01 y se separó
por ccd preparativa usando c1oroformo-etan01 (85:5) comosoivente de desarroiïo.
Se e1uyeron 1as zonas de 1a pïaca que contenían ios giicósidos y ias soiu
ciones se coiocaron en matraces aforados de 10 m1. Luego de enrasar con etano]
se tomó 1 m1 de cada uno para medir radiactividad.
Las soluciones se evaporaron a sequedad y a cada extracto se agregó una
cantidad conocida de] cardenóiido correspondiente (ver tabia 8 de 1a página 107).
Las dos mezc1as resuitantes se recristaiizaron de etanoi acuoso hasta acti
vidad constante.
OBTENCION DE DIGITOXIGENINA
Se disoïvieron 26 mg de digitoxina (masa aisiada de 1a p1anta + masa agre
95
gada para diiuir) en 10 m1 de metano]. Se agregaron 0,03 m1 de ácido suifürico
(c) y se caientó a reflujo durante 20 minutos.
E1 desarroiio de 1a reacción se siguió por ccd (solvente de desarrollo:
cloroformo-etanoi 95:5) observándose a ios 20 minutos 1a desaparición de digi
toxina y 1a presencia de digitoxigenina comoproducto principa].
E1 extracto metanóiico se voicó sobre 20 m1 de agua y se extrajo con ace
tato de etilo (2x40 mi). La fase orgánica se 1avó con 10 m1 de agua. Las solu
ciones acuosas de lavado se reunieron y se separó 1a mitad para medir radiac
tividad.
E1 extracto orgánico se secó, se utilizaron 8 m] para medir radiactividad
y e] resto se evaporó. E1 residuo obtenido se recristaiizó de etanoi acuoso
hasta actividad constante.
ESPECTROSCOPIA DE
RESONANCIA MAGNETICA NUCLEAR DE 13€
APLICADA A DERIVADOS SB-ESTEROIDALES
96
. . . . 13 .La espectroscopia de resonanc1a magnetica nuciear de C resuita una tec
nica de muchautilidad para 1a eiucidación estructura] de compuestos orgánicos.
En especia] en e] campo de ios esteroides, un gran número de trabajos avaian
. . , . 77-85 . . . .dicha hipote51s . Sin embargo, es necesaria una con51derab1e cantidad de co
rreiaciones entre vaiores de despiazamiento quimico antes de que sea posibie
predecir e] espectro de 13C de una dada estructura esteroidai, y es en ese sen
tido que 1a comparación con anáiogos esteroidaies resuita de muchovaior.
En e] curso dei presente trabajo de sintesis de SB-pregnanos a partir de
ácidos biiiares, se efectuaron ios espectros de RMN-13C de ios compuestos sin
tetizados. Comoios derivados 58-esteroida1es no son naturaies, en iiteratura
no existen demasiados datos para ellos. Por este motivo se consideró importante
1a contribución que se pudiera hacer, y orientado hacia este objetivo, fue ne
cesaria 1a asignación de compuestos modelo aigunos deios cuaies resuitaron dis
ponibies comerciaimente mientras que otros debieron ser sintetizados ta] como
se describe en 1a página 151.
Conestos compuestosestructuraimente relacionados fue posible efectuar
asignaciones satisfactorias de casi todos ios despiazamientos quimicos de ios
carbonos de ios compuestos estudiados.
La correiación de los datos obtenidos permitió anaiizar ei efecto produci
do por cambios configuracionaies y funcionaies en carbono 3, por 1a introduc
ción de un dob1e eniace en 1a posición 8(14) y por 1a presencia de diferentes
cadenas iateraies. Por otro 1ado, se pudo predecir ei confórmero favorecido que
97
adoptan en soiución ios ácidos biiiares.
Los datos de despiazamiento quimico para ios carbonos de ios productos es
tudiados se presentan en 1as tabias 9 y 10. Las asignaciones correspondientes a
cada carbono se confirmaron por ei anáiisis de ios respectivos espectros de desa
copie seiectivo fuera de resonancia, por 1a técnica de ecos de spin con desaco
pie aiternado (denominado comunmenteAPT: test de protones vecinales), por com
paración con datos de compuestos modelo y por comparación con vaiores calcuïados
considerando ias regias semiempiricas de Beierbeck, Saunders y Ap Simon86. Estos
autores estabiecieron parámetros para 1a determinación de ios despiazamientos
quimicos en e] caso de hidrocarburos saturados, aicohoïes, aminas, cetonas y 019
finas, ap1icab1es a moiécuias ciciicas que existen en conformaciones rígidas fo;
mando ánguios diedros de 60°.
A continuación se indican ios parámetros usados en e] presente anáiisis y
1a forma en que, según Beierbeck y coiaboradores, deben ca1cu1arse ios vaiores
de despiazamiento quimico para cada carbono.
La resonancia de ios carbonos de] etano, de] carbono secundario de] propano,
de] carbono terciario de] isobutano y de] carbono cuaternario de] neopentano si;
ven comoreferencia para ios carbonos primarios, secundarios, terciarios y cua
ternarios respectivamente.
Vaiores base: carbono primario: 5,9 ppm
carbono secundario: 16,1 ppm
98
carbono terciario: 25,2 ppm
carbono cuaternario: 27,9 ppm
A estos vaiores de referencia se adicionan incrementos que están asociados
con diferentes interacciones presentes en 1a molécuia y que se representan por
10 UI distintos parámetros que se definen a continuación.
Parámetros utiiizados para hidrocarburos
QE: interacciones sesgadas carbono-hidrógeno. Expresa 1as interacciones entre
hidrógenos 1,3-dipara1eios. Se ias nombróasi porque, en 1a práctica, esas
interacciones se presentan cuando existe una reiación sesgada entre e] hidró
geno unido a1 carbono anaiizado y e] carbono B a éste, que a su vez está uni
do a] segundo hidrógeno en cuestión.
Ó Ó interacciones sesgadas carbono-carbono. Indica ias interacciones entre hidró
genos unidos a un carbono a y a un carbono B a] carbono estudiado y que se
encuentran eniazados en una secuencia como1a siguiente: H(a)-C1(a)-C-C2(a)
C2(B)-H(B). E1 requerimiento necesario para ubicar fáciimente esta interac
ción es que exista una reïación sesgada carbono-carbono entre ios carbonos
C1(a) y C2(B) y que dichos carbonos no pertenezcan a1 mismo cicio.
|o, .. expresa 1a interacción que se produce cuando existe una reiación 1,3-dipara
1e1a entre e] carbono estudiado y otro carbono de 1a moiécula, con 1a condi
ción de que ambos no pertenezcan a1 mismo cicio.
Las siguientes figuras contribuyen a aciarar ias interacciones mencionadas,
indicándose con un punto e] carbono afectado. E1 cáicuio teórico de su despiaza
99
miento quimico surge de incrementar su vaior base en 1a magnitud que se indica
en cada caso.
.>
H H H3 H H3 CH3
CH = 4,55 ppm CC = 1,85 ppm 6 = 2,56 ppm
Parámetros utiiizados para moiécuias con grupos hidroxiio.
Los parámetros debidos a 1a presencia de un grupo hidroxiio en 1a moiécuia
sóio se apiican en e] caso de aicohoies secundarios. E1 vaior base para e] caicu
10 teórico de] despiazamiento quimico de] carbono unido a1 hidroxilo es:
T.= 66,99 ppm , reempiazando éste a1 valor base antes mencionado.
QQ_: interacciones sesgadas oxigeno-carbono. Representa 1a interacción que apa
rece cuando existe una reiación sesgada entre e] oxigeno y un carbono en
B a1 mismo.
flQ_YQQ_: interacciones sesgadas hidrógeno-oxigeno y carbono-oxigeno. Indica ias
interacciones que surgen comoconsecuencia de una reiación sesgada entre un
hidrógeno o un carbono unidos a1 carbono estudiado y e] oxigeno unido a un
carbono vecino.
XLQEL: señaia ias interacciones que se presentan cuando hay una relación y ses
gada o Y anti entre e] carbono en estudio y e] oxigeno.
6(0H) : corresponde a ias interacciones que se deben a una reiación 6 sin-diaxia]
100
entre e] carbono anaiizado y ei oxigeno.
Las figuras siguientes muestran ios distintos casos junto con ei vaior co
rrespondiente a cada interacción. Las iineas punteadas indican interacciones se;
gadas.
H H H H
H
T = 60,99 ppm 0C = 1,97 ppm H0 = 4,41 ppm
HMH WH
CO = 2528 ppm y(OH) = -1,28 ppm 6(0H) = 2,86 ppm
Parámetros utiiizados para moiécuias con grgpos carboniio.
Las figuras representan ios parámetros a utiiizar por ia presencia de gru
pos carboniio en 1a moiécuia. E1 parámetro C = 212,19 ppm es e] vaior base que
se empiea para 1a determinación de] despiazamiento quimico dei carbono unido di
rectamente a1 oxigeno. Las cantidades indicadas son ios incrementos de ios vaio
res teóricos de ios despiazamientos de ios carbonos señaiados con un punto.
101
C = 212,19 ppm 8(CO) = 14,70 ppm
M?ysyn = -0,22 ppm Yanti = 5,15 ppm
Parámetros utilizados para molécu1as con dobïes en1aces.
Los parámetros T y Q son los va1ores base para e] cá1cu10 teórico de] des
p1azamiento químico de 1os carbonos o1efïnicos terciarios y cuaternarios respeg
tivamente. E1 parámetro R es una corrección que se suma a1 va10r base T o Q si
e] segundo de 1os carbonos sp2 es cuaternario. Los parámetros B(01ef.) y y(o1ef)
se emplean para 1a determinación de 1os va1ores correspondientes a 1os carbonos
a1ï1icos y homoalïïicos respectivamente y no se usan si esos carbonos son sp3
cuaternarios o sp2.
Ü Í) JDT = 125,99 ppm Q = 137,80 ppm R = -8,47 ppm
ÜB(01ef.) = 3,86 ppm
Üy(oïef. syn) = 1,41 ppm
y(01ef. anti) = 5,23 ppm
102
DESCRIPCION Y DISCUSION
DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS
EN LOS ESTUDIOS BIOSlNTETICOS
Tabïa 1. Precursores administrados a p1antas de D. purpurea
COMPUESTO NUMERO ACTIVIDAD TOTAL MASA TOTAL
ADMINISTRADO DE PLANTAS ADMINISTRADA ADMINISTRADA
USADAS
¡21-14C| 3B-hidroxi-58- 3 8,19x105 dpm 81 ug
pregnan-ZO-ona
¡21-14c| 3B-hidroxi-5B- 3 26,00x105 dpm 102 ug
pregn-8(14)—en-20-ona
RESULTADOS OBTENIDOS EN LOS ENSAYOS DE ADMINISTRACION DE
131714cl 3B-HIDROXI-5B-PREGNAN-20-ONA
Tab1a 2. Aisïamiento de Ios cardenó1idos.
DURACION ACTIVIDAD RECUPERADA EXTRACTO AISLAMIENTO POR CCD (dpm)
DE LA POR LAVADO DE LAS ETEREO
EXPERIENCIA HOJAS (dpm) (dpm) DIGITOXINA DIGOXINA + GITOXINA
a) 4 días 2,03x105 5,49x104 2075 818
b) 9 días 1,89x105 5,22x1O4 1187 524
c) 14 días 2,25x105 6,92xIO4 1381 640
Tabla 3. RecristaTización de digitoxína hasta actividad constante.
104
DURACION MASA TOTAL ACTIVIDAD ACTIVIDAD ACTIVIDAD ESPECIFICA
DE LA DE TOTAL ESPECIFICA
EXPERIENCIA DIGITOXINA* CALCULADA' 1° REC. 2° REC. 3° REC.
días mg dpm dpm/mg dpm/mg
a) 4 54 1250 23,2 18,2 20,5 20,7
b) 9 60 880 14,7 12,0 13,6 13,5
c) 14 54 700 12,9 10,9 11,3 11,4
* MASATOTAL DE DIGITOXINA: masa de digitoxina aÍSTada de Ta pTanta +
masa de digitoxina agregada (ver página 109).
° ACTIVIDADESPECIFICA CALCULADA:1a actividad específica se caTcuTÓ te
niendo en cuenta Ta masa tota] de digitoxina
(ver página 109).
RESULTADOS OBTENIDOS EN LOS ENSAYOS DE ADMINISTRACION DE
¡21-14cl 38-HIDROXI-SB-PREGN-8(14)-EN-20-0NA
Tabïa 4. Aisïamiento de 105 carden61idos.
105
DURACION ACTIVIDAD RECUPERADA EXTRACTO AISLAMIENTO POR CCD (dpm)
DE LA POR LAVADO DE LAS ETEREO
EXPERIENCIA HOJAS (dpm) (dpm) DIGITOXINA DIGOXINA + GITOXINA
d) 4 días 7,76x105 8,2Ox1o4 780 412
e) 9 días 7,40x105 9,64x104 683 459
f) 14 días 6,79x105 12,07x104 468 241
Tabïa 5. Separación de digoxina y gitoxina.
DURACION DE LA DIGOXINA GITOXINA
EXPERIENCIA AISLADA POR CCD AISLADA POR CCD
días dpm dpm
d) 4 169 188
e) 9 185 211
f) 14 107 98
106
TabIa 6. RecristaTización de digitoxina hasta actividad constante.
DURACION MASA TOTAL ACTIVIDAD ACTIVIDAD ACTIVIDAD ESPECIFICA
DE LA DE TOTAL ESPECIFICA
EXPERIENCIA DIGITOXINA* CALCULADA' 1° REC. 2° REC.
dias mg dpm dpm/mg dpm/mg
d) 4 35 686 19,6 13,7 O
e) 9 33 601 18,2 12,9 O
f) 14 34 412 12,1 8,1 0
* MASATOTALDE DIGITOXINA: masa de digitoxina aisIada de 1a pTanta +
masa de digitoxina agregada (ver página 109).
° ACTIVIDADESPECIFICA CALCULADA:Ta actividad especifica se caIcuIó te
niendo en cuenta Ia masa tota] de digitoxina
(ver página 109).
TabIa 7. HidróIisis de Ia digitoxina groveniente de 1a experiencia d).
EXTRACCION DE LA DIGITOXIGENINA ACTIVIDAD ACTIVIDAD
ESPECIFICA ESPECIFICA
EXTRACTO ACUOSO EXTRACTO ORGANICO CALCULADA' 1° REC.
38 dpm 465 dpm 36,6 dpm/mg 0 dpm/mg
Tabia8.Recrista1izacióndedigoxinaygitoxinahastaactividadconstante.
DURACION
DELA
EXPERIENCIA
MASATOTAL
ACTIVIDADTOTAL
ACTIVIDADESPECIFICA
CALCULADA'
ACTIVIDADESPECIFICA
1°REC.
DIGOXINA*
DIGOXINA
GITOXINA
DIGOXINAGITOXINA
DIGOXINA
GITOXINA
m9
dpm
dpm/mg
dpm/mg
25 30 20
152 16696
169 19088
6,16,8 5,57,6 4,84,9
*MASATOTALDEDIGOXINAYGITOXINA:masadedigoxinaogitoxinaaisTadadeTapianta+masadedigoxina' ACTIVIDADESPECIFICACALCULADA:1aactividadespecificasecaicuióteniendoencuentaIamasatota]de
ogitoxinaagregada(verpágina109). digoxinaogitoxina(verpágina109).
¡_¡ O \1
108
DISCUSION DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS
De acuerdo a ios datos de Evans y Cowiey87 1a concentración de cardenóiidos
en piantas de D. purpurea presenta un incremento de 14,1 a 115,6 ug/g de pianta
fresca, durante ios primeros siete meses de crecimiento. Estos mismosautores in
dicaron que e] aumento es más pronunciado entre e] tercer y el cuarto mes de de
sarr0110. Es por este motivo que se eiigió trabajar con p1antas comprendidas en
ese estadio para ias que 1a concentración de cardenóiidos varia, en esa etapa,
de 0,04 a 0,1 mg/g de pianta fresca. Las plantas preparadas para 1a experiencia
tenian un peso promedio de 5 g.
Por otra parte, se conoce que 1a época de mayor actividad metabóïica de 1as
piantas es 1a temporada estiva]. En nuestro caso, ias experiencias fueron reaii
zadas en e] mes de mayo. Si bien no es e] periodo óptimo de producción de ios
giicósidos, Ios datos obtenidos de 1a inocuiación de |21-14CI 3B-hidroxi-58-preg
nan-20-ona (19) permiten deducir que este factor no impidió 1a correcta incorpo
ración de] compuesto utiiizado comopatrón para ios ensayos, en ios 1apsos de
tiempo indicados.
Aunque se conocian 1as condiciones de germinación de ias semi11as y de cre
cimiento de las piantas, se presentaron diferentes inconvenientes. Unode eiios
derivó de] bajo porcentaje de germinación de 1as semiïias, pese a 1as distintas
condiciones ensayadas para la misma y pudo deberse a que éstas tenian un tiempo
re1ativamente Iargo de almacenamiento. Por otro 1ado, no resuitó simpie mantener
todas las p1antas en estado óptimo de desarroiio. Muchas de e11as se marchitaban
109
a ios dos o tres meses de crecimiento, probabiemente a causa de que e] ciima en
e] que se estaban desarroiiando no era e] característico de ias zonas frias don
de se ias encuentra naturalmente.
Los factores comentados condicionaron e] trabajo con un bajo número de pian
tas.
Dadoque 1a cantidad de giicósidos aisiada de cada experiencia era escasa
comopara proceder a recristaiizar, se diluyó con ios correspondientes cardenó
lidos fríos y se efectuaron ias recristaiizaciones hasta actividad constante con
un vaior de actividad específica calcuiado, diferente de] verdadero. Empieando
este dato se pudo determinar 1a posibie participación de 10s precursores adminis
trados en e] camino metabóiico de ios giicósidos cardiotónicos. Por 10 tanto, de
acuerdo con 10 que se acaba de exponer, ios vaiores de actividad especifica cai
cuiada que figuran en ias tabias 3, 6, 7 y 8 se establecieron usando 1a masa
agregada ya que ia proveniente de 1a planta es de un orden muy inferior.
Ta] como se observa en 1a tabla 3, se pudo 11egar a actividad constante por
recristaiización de 1a digitoxina proveniente de piantas inocuiadas con |21-I4CI
3B-hidroxi-56-pregnan-20-ona (19). Este hecho era previsibie ya que Tschesche y
coiaboradores24 habían demostrado su participación comoprecursor.
Comose ha indicado en 1a tabia 4, e] extracto etéreo proveniente de 1as
piantas inocuiadas con |21-14CI 3B-hidroxi-58-pregn-8(14)-en-20-ona (38) preseg
taba radiactividad. Las zonas cromatográficas correspondientes a digitoxina, di
goxina y gitoxina separadas por ccd, con e] mismométodo que en e] caso anterior,
110
también tenian actividad.
De 1a misma forma en que se habia procedido con e] estándar, en este caso,
se recristaiizaron ios giicósidos tratando de obtener un vaior de actividad es
pecifica constante. Pero, ta] comose muestra en ias tabias 6 y 8, ios valores
descendieron rápidamente a cero, 10 que demuestra 1a pérdida tota] de actividad
de ios cardenóiidos extraídos a ios 4, 9 y 14 dias.
Para confirmar este dato negativo, se hidrOIizó 1a digitoxina, para determi
nar 1a radiactividad presente en 1a porción esteroida]. Los datos correspondien
tes, 1uego de 1a recristaïización de 1a agiicona, se encuentran en 1a tabia 7 y
demuestran una pérdida rápida de actividad.
La coincidencia de ambosresuïtados permitió conciuir que 1a radiactividad
de 1a fracción separada por ccd se encontraba asociada con otro producto presen
te en e] extracto y que no correspondía a ios gïicósidos en estudio.
En consecuencia se puede conciuir que ios gïicósidos cardenóiidos digitoxi
na, digoxina y gitoxina aisïados de las piantas inocuïadas con e] precursor pro
puesto (38) no resuitaron activos. E110 significa un acuerdo con ios resultados
obtenidos por Caspi y coiaboradores41 que sostenían que un dobïe en1ace en ias
posiciones 7, 8(9) u 8(14) no eran 1a caracteristica estructura] precursora de
1a introducción de un hidroxiïo 148 en 1a moiécuia. Ademásindica una contrapo
sición con Ïos resuitados de Tschesche42 que obtuvo una incorporación positiva
con un precursor que tenia un dob1e en1ace en 1a posición 8(14).
Caspi administró a piantas de D. Zanata una mezcïa de |8-3H| colestero] y
111
[4-14Cl coiesteroi cuya reiación 3H/MC era 12,1. A1 cabo de 1a experiencia pro
cesó ias piantas y aisió digitoxigenina y digoxigenina que fueron diluidas con
compuestosauténticos y recrista1izadas hasta actividad especifica constante de
14 3 14C y reiación constante de H/ C. Los resuitados demostraron que 1a reiación
3H/MC de] coiesteroi de partida (12,5) se mantenía perfectamente 1uego de tres
recristaiizaciones de 1a digitoxigenina obtenida (12,5) y de una recristaiiza
ción de 1a digoxigenina (13,1). Esto ios 11ev6 a conciuir que 1a conversión bio
sintética de |8-3HI coiesteroi en digitoxigenina y digoxigenina no invoiucraba
1a pérdida de] tritio de 1a posición 8. Por 10 tanto, 1a introducción dei hidro
xilo 146 de ios cardenóiidos procedía sin pérdida de] hidrógeno de carbono 8 de
coiestero], 10 cuai exciuia 1a posibiiidad de participación de dob1es eniaces
centrados en esa posición.
En e] trabajo de Tschesche42 ios resuitados no aportan datos tan exactos
comoen e] anterior. Los autores afectüan tres ensayos:
1) coinyección de |7-3H| 53-pregn-8(14)-en-3,20-diona y I4-14C| progesterona.
2) coinyección de |7a-3HI pregnenoiona y [4-14CI pregnenolona
3) coinyección de |6-3H| A7-progesterona y |4-14CI progesterona.
Los autores informaron una pérdida dei 50%de actividad en tritio en ios
glicósidos aisiados 1uego de ias experiencias 1 y 2. Es evidente que no existe
en este caso una justificación rigurosa para esta pérdida, ya que eiios mismos
piantean que, si bien no pueden expiicaria, podria deberse a una diferente in
corporación de los precursores o a errores en e] método de administración o de
112
trabajo. Lo que resuïta cierto es que Tschesche obtuvo una cierta incorporación
en contraposición a1 resuitado de] presente trabajo, donde 1a incorporación es
nu1a.
Noparece factibie que 1a diferencia en 1a estructura esteroida] de] aniïio
A entre ei precursor utiiizado por Tschesche (33) y e] compuesto administrado en
este caso (38) justifique ios resuitados. Si eiio fuera asi, cabría pensar que
e] precursor ensayado por Tschesche participa de un camino biosintético aiterna
tivo. Dicho precursor, se encontraría pasos más atrás que e] empieado en las pre
sentes pruebas, dado que contiene e] grupo cetónico en carbono 3 que deberia ser
reducido a un 3B-hidroxi derivado. La participación en dicho camino a1ternativo,
que hasta e] momentose desconoce, permitiría expiicar en parte 1a pérdida de
tritio que tuvieron 10s autores en 1a experiencia 1. No ocurre 10 mismo con 1a
pérdida de tritio de 1a experiencia 2, dado que pregnenoiona se encuentra en e]
caminoprincipa]. Este último dato apoyaria factores o errores intervinientes de
otro tipo.
Tai comose ha planteado, estos caminos a1ternativos son factibles. Por
ejemplo, en e] caso de 1a biosintesis de gitoxina en piantas de Digitalis, hay
dos a1ternativas posibies, en una de e11as procede directamente a partir de un
pregnano y en 1a otra a partir de digitoxina.
Por otro lado, 11ama 1a atención que en ias sintesis de 10s compuestos 33
42,43y 37 descriptas por Tschesche se utiiice comométodo para 1a isomerización
de] doble en1ace de 1a posición 7 a 1a 8(14) una hidrogenación cataiitica con
113
paiadio en ácido acético, ya que anteriormente habia sido anaiizado por Barton65
que,en 1a serie de 10s derivados 58-esteroida1es,este tratamiento conducía a un
muy bajo porcentaje de isomerización. Los autores describen un 83,5% de rendi
miento para e] mismo. Estas son ias condiciones que se intentaron en ei presen
te trabajo para 1a isomerización de] A7 derivado (71) a1 A8(14) ( 72) y, ta] como
se aciaró anteriormente, no se pudo producir 1a reacción, inciuso variando con
diciones de solvente y cataiizador.
. . 88 .En e] trabaJo efectuado por Maier , intentando esciarecer e] proceso de
construcción de] aniiio 1actónico en 1a biosintesis de ios giicósidos cardiotó
nicos en estas mismaspiantas, se demostró 1a participación de intermediarios
con cadena laterai dei tipo B-hidroxiácido (n) y de ácido a,B-no saturado (o)
en un camino biosintético alternativo.
02H
02H
Es decir que se pianteó una ruta a1ternativa de ácidos norcoiánicos frente
a 1a de ios pregnanos demoStrada por diferentes autores y diagramada en e] esqug
ma 7, para 1a transformación in vivo de pregnenoiona en cardenóiidos.
En función de estos resuitados es que no se descarta ia posibiiidad de in
ciusión, en esa ruta aiternativa, de un intermediario con un dobie eniace 8(14)
y con una cadena 1atera1 ya preparada para ciciar (compuesto 101).
114
02H
101
La síntesis de un compuesto de este tipo, cuyo posib1e pape] en esa ruta
a1ternatíva es de interés estudiar, es factíb1e por reacción de Reformatsky con
bromoacetato de etilo sobre un 20-ceto pregnano convenientemente sustituido. E1
camino desarro11ado en este trabajo para 1a degradación de 1a cadena 1atera1 de]
ácido bi1iar se realizó, por este motivo, obteniendo en los pasos intermedios
un derivado con una cadena 1atera1 preparada para esta reacción (compuesto 47).
DESCRIPCION Y DISCUSION
DE LOS RESULTADOS
OBTENIDOS EN RMN-13o
13
Figura2:CompuestoscuyosdatosdedesplazamientoquímicodeRMN-:Cseencuentrandeta11adosen1atabïa9.
O2CH3R4
¡R25_
¿a?
IX
No
ESTRUCTURAR1
1023B-hidroxi-58-co1an-24—oat0demetiïo
38-acetoxi-58-c01an—24-oatodemetiïo
61AOAcH
33-formi1oxi-58-co1an-24—oatodemet110
68AOCOHH 58AHOH3a-hidroxi-Ss-coïan-24-oat0demetiïo 60AHOAc3a—acetoxi-58-c01an-24-oatodemetilo
3a-tosi1oxí-SB-co1an-24-oatodemeti1o
67AHOTs
3a-formi10xi-58-co1an-24-oatodemetiïo
110AHOCOH
CH(CH3)(CH2)2C02CH33-oxo-58-co1an—24—oatodemet11o
115
N°ESTRUCTURA
100B 103B92B
104B 108B94B 93B
105C 109C97C 95C 96C
107D
OHOAc
OHOAC
OHOAc OCOH
R OHOAc
OHOAc
OHOTs
OHOAc
OHOAc
COCH COCH
3 3
3B—hidroxi-SB-pregnan-ZO-ona 38-acet0xi-56-pregnan-20—ona 3a-h1droxí-Ss-pregnan-20—ona 3u-acet0xi-58-pregnan-20—onaSB-pregnan—3,20-díona
38,21-dihidroxi-SB-pregnan-ZO-ona 3B,21-diacetoxi-SB-pregnan-ZO-ona 3a,21-d1hidroxi-5B—pregnan-20—ona 3a,21-d1acetoxi-58-pregnan—20—ona Ss-hidroxi-58—androstan-17s—carboxi1atodemet11o 38-acetoxi-SB-androstan—17B-carboxílatodemetí1o 38-formi1oxí-58-androstan-176-carboxi1atodemeti1o 3a-h1droxi-58-androstan-17B-carboxi1atodemetilo 3a-tosi1oxi-53-androstan—175-carboxiIatodemetiïo 3-oxo-58-androstan-17B-carboxi1atodemetiïo
¡.4 ¡.4 01
117Tab1a 9:
COMPUESTO
CARBONO 102 61 68 58 60 67
1 29,97 (30,69) 30,59 35,31 34,98 35,20
2 27,91 25,06 25,05 30,45 26,29 26,13
3 67.06 70,72 70,87 71,58 74,29 82,87
4 33,60 (30,78) 30,59 36,36 32,19 33,015 36,60 37,38 37,26 42,06 41,82 41,96
6 26,29 26,18 26,14 27,18 26,98 27,46
7 26,69 26,55 26,46 26,39 26,56 26,76
8 35,70 35,72 35,68 35,81 35,72 35,58
9 40,28 40,22 40,17 40,39 40,36 40,25
10 35,13 34,89 34,84 34,52 34,51 34,89
11 21,13 21,14 21,11 20,79 21,39 20,71
12 39,82 39,96 40,00 40,13 40,09 39,94
13 42,78 42,79 42,74 42,66 42,68 42,58
14 56,63 56,55 56,54 56,40 56,39 56,27
15 24,18 24,20 24,15 24,16 24,13 24,08
16 28,17 28,16 28,14 28,12 28,09 28,05
17 56,05 56,02 56,02 55,90 55,89 55,80
18 12,09 12,09 '12,08 12,00 12,01 11,97
19 23,87 23,84 23,77 23,35 23,29 23,03
20 35,35 35,36 35,31 35,31 35,24 35,58
21 18,28 18,30 18,29 18,24 18,23 18,19
22 31,08 31,09 31,04 30,99 (30,98) (30,89)
23 31,08 31,09 31,04 30,99 (30,72) (30,88)
24 174,38 174,41 174,31 174,50 174,07 174,19
CH3QOO 170,40 170,43
QH3COO 21,46 20,81
COOQH3 51,31 51,34 51,28 51,35 51,34 51,25HQOO 160,44
H3C-26H4-502- L 127,30 129,49134,62 144,00
118Tab1a 9.
COMPUESTO
CARBONO 110 59 19 100 105 92
1 34,36 36,89 30,00 (30,42) 35,72 35,15
2 26,19 36,81 27,92 24,83 30,83 26,30
3 73,76 212,12 66,86 70,31 71,62 74,38
4 32,06 42,06 33,46 (30,58) 36,73 32,36
5 41,72 44,06 36,36 37,11 42,39 42,15
6 26,85 25,61 26,00 25,99 27,48 27,09
7 26,49 26,47 26,32 25,26 26,72 26,76
8 35,62 35,11 35,70 35,48 35,96 35,50
9 40,27 40,48 39,82 39,70 40,72 40,84
10 34,81 34,64 35,70 34,73 34,86 34,72
11 20,71 21,04 21,00 20,94 21,18 21,50
12 39,95 39,85 39,29 39,06 39,52 39,45
13 42,51 42,54 44,36 44,11 44,38 44,06
14 56,26 56,18 56,78 56,55 56,88 56,52
15 24,04 23,99 24,52 24,25 24,73 24,49
16 27,98 27,95 22,89 22,73 22,86 23,40
17 55,81 55,76 63,99 63,61 64,05 64,20
18 11,87 11,90 13,52 13,28 13,36 13,52
19 23,14 22,46 23,87 23,63 23,43 23,45
20 35,14 35,32 209,62 208,80 209,72 209,70
21 18,09 18,10 31,49 31,31 31,55 31,62
22 (30,76) 30,75
23 (30,69) 30,75
24 173,72 173,94
CH3QOO 170,14 170,39
QH3COO 21,30 20,59
COOQH3 51,01 51,12
HQDO 160,01
119Tabla 9.
COMPUESTO
CARBONO 106 104 108 94 93 105
1 37,02 29,92 (30,55) 35,27 35,02 30,04
2 36,86 27,78 24,97 30,44 26,34 27,92
3 212,35 66,91 70,48 71,55 74,11 67,03
4 42,16 33,43 (30,71) 36,28 32,22 33,62
5 44,08 36,43 37,19 41,91 41,75 36,58
6 25,66 26,31 26,10 27,01 26,90 26,37
7 26,46 26,53 26,35 26,38 26,63 26,62
8 35,43 35,64 35,64 35,80 35,78 35,88
9 40,59 39,72 39,82 40,35 40,35 39,90
lO 34,83 35,17 34,89 34,56 34,60 35,26
11 21,11 21,02 20,43 20,70 21,40 20,99
12 38,98 39,00 38,91 38,90 38,85 38,69
13 44,08 45,08 44,96 44,99 44,91 44,32
14 56,44 56,88 56,86 56,74 56,80 56,13
15 24,32 24,55 24,49 24,50 24,51 24,52
16 22,84 23,02 22,88 22,99 22,89 23,86
17 63,55 59,40 59,38 59,33 59,33 55,44
18 13,35 13,56 13,29 13,50 13,26 13,56
19 22,53 23,81 23,74 23,26 23,26 23,86
20 208,79 210,21 203,49 210,04' 203,39 174,35
21 31,39 69,30 69,04 69,30 69,07
CH3QOO 169,99 169,91
170,43 170,23
QH3C00 21,06 20,4421,13 20,82
coogH3 51,07Hgoo
120
Tabïa 9.
COMPUESTO
CARBONO 109 97 95 96 107
1 (30,50) 30,56 35,47 35,09 37,09
2 24,92 24,98 30,62 26,29 36,97
3 70,61 70,74 71,76 83,09 212,61
4 (30,70) 30,56 36,54 33,15 42,235 37,20 37,15 42,15 42,10 44,15
6 26,13 26,13 27,19 27,61 25,81
7 26,34 26,29 26,55 26,82 26,52
8 35,73 35,73 36,09 35,89 35,66
9 39,85 39,94 40,62 40,46 40,80
10 34,83 34,88 34,72 34,46 34,89
11 20,86 20,87 20,76 20,69 21,01
12 38,30 38,52 38,67 38,51 38,45
13 44,27 44,20 44,31 44,20 44,15
14 56,00 55,90 56,04 55,85 55,7915 24,40 24,44 24,60 24,51 24,44
16 23,75 23,69 23,83 23,77 23,68
17 55,19 55,27 55,43 55,85 55,24
18 13,29 13,49 13,60 13,56 13,51
19 23,42 23,69 23,39 23,13 22,58
20 174,30 174,24 174,37 174,34 174,12
CH3QOO 170,54
QH3COO 21,39
COOQH3 51,06 51,10 51,10 51,16 51,13Hgoo 160,50
H3C-96H4-502- 126,92 130,19134,67 144,31
H3g—06H4—soz— 21,84
Figura3:Compuestoscuyosdatosdedespïazamiento
4.40
ESTRUCTURA
R1
químicodeRMN
13C seencuentrandeta11adosen1atabïa10.
R1
02CH3
'OAc
49 50 51 47 52 57 78
OAC22OH20(22)
OAc20(22) OAc
OHOHOSucOH
díacetatode24-nor-58-c01-22-eno-3a,7a-d101 24-nor-SB-c01-20(22)—eno-3a,7a-dío1 diacetatode24-nor-5B—c01—20(22)-eno-3a,7a-d101 3a,7a-diacetoxi-53-pregnan-20-ona 3a,7a,21—triacetoxí-53-pregnan-20-ona 3a,7a-díh1drox1-53-androstan-17B—carboxi1at0demetíïo 7a—h1droxi—3a-metí1succínoxi—5B-androstan-17s-carboxi1a
todemetilo
H N ¡_¡
No 80 81 82 83
ESTRUCTURA
OSuc
OHOTs OCOH
3a-met11succinoxi-SB-androst-8(14)-en-17B-carboxi1ato
demet110
3a-hidroxi-SB-androst-8(14)—en-17B-carboxi1atode me
tilo
3a-tosi1oxi-53-androst-8(14)-en-17B-carbox11atode me
ti1o
38-form11oxí-55-androst-8(14)—en-17B—carboxi1at0de
meti1o
122
12912.19.
COMPUESTO
CARBONO 49 50 51 47 52 57
1 (34,92) (35,39) (34,98) (34,81) (34,81) (35,41)2 26,81 30,66 26,82 26,78 26,74 30,71
3 74,11 71,94 74,08 73,94 73,94 71,81
4 (34,65) 39,77 (34,68) (34,60) (34,58) 39,635 41,08 41,56 41,06 40,87 40,81 41,53
6 31,34 34,59 31,33 31,24 31,19 34,93
7 71,18 68,52 71,15 70,99 71,00 68,33
8 37,92 39,87 37,97 37,86 37,86 39,84
9 34,13 33,13 34,37 34,09 34,03 32,99
10 (34,82) (35,13) (34,68) (34,90) (34,81) (35,14)11 20,66 20,59 20,67 20,65 21,39 20,50
12 39,40 38,55 38,42 38,53 38,20 38,15
13 42,62 43,73 43,74 44,10 44,70 44,16
14 50,41 49,93 50,68 50,61 50,77 50,00
15 23,59 23,70 23,58 23,78 23,85 (23,97)16 28,28 24,75 24,70 22,61 22,56 (23,77)
17 55,47 58,89 58,92 63,46 59,09 55,27
18 11,90 12,79 12,72 13,03 12,88 12,23
19 22,70 22,80 22,71 22,89 22,83 22,71
20 40,98 135,07 134,84 208,80 203,29 174,24
21 20,11 17,59 17,51 31,41 170,00
22 144,82 119,02 119,14
23 111,60 13,47 13,45
0H3902- 170,16 170,03 169,94 170,00170,37 170,24 170,26 170,33
003002— 21,50 21,41 21,48 20,4321,51 20,60
-0026H3 51,06
124
Tabïa 10.
COMPUESTO
CARBONO 78 80 81 82
1 (35,10) (35,89) (36,34) (35,73)2 26,67 26,92 30,91 26,91
3 74,64 74,36 71,40 82,76
4 (35,02) 31,77 . (36,00) 32,715 41,26 41,95 42,21 42,08
6 34,70 27,10 27,39 27,85
7 68,20 24,76 24,94 24,61
8 39,57 128,21 128,57 127,73
9 32,95 36,20 36,00 36,00
10 (35,25) (36,33) (36,34) (36,09)11 20,49 19,31 19,36 19,23
12 38,04 34,22 34,63 34,18
13 44,12 43,24 43,32 43,16
14 49,95 138,85 138,62 139,16
15 (23,95) 25,59 25,61 25,55
16 (23,75) 23,75 23,84 23,7217 55,20 56,26 56,29 56,17
18 13,22 19,74 19,77 19,69
19 22,64 23,48 23,62 23,25
20 174.15 173,83 174,06 173,78
—OZQ(CH2)ZQOZCH3 171,47 172,46 171,47 172,53
-OZC(QH2)2COZCH3 29,05 29,55 28,99 29,48
-02C(CH2)2COZQH3 51,61 51,65
4:0ng3 51,03 51,09 51,09
CH3-26H4-SOZ— 127,34 129,59
134,51 144,25
Tabïa 10.
COMPUESTO
CARBONO 83
1 (30,31)
2 25,66
3 70,72
4 (29,98)5 37,36
6 26,59
7 24,57
8 128,21
9 35,95
1o 36,59
11 19,65
12 35,66
13 43,32
14 138,99
15 25,66
16 24,04
17 56,34
18 19,76
19 23,83
20 173,96
-C02QH3 51,18
ngo- 160,56
125
126
ANALISIS DE LOS DATOS OBTENIDOS PARA DERIVADOS SB-ESTEROIDALES
SUSTITUIDOS EN CARBONO 3 Y CON DIFERENTES CADENAS LATERALES (TABLA 9).
Comoera previsibie, un cambio funciona] o configuracionai en carbono 3
mantiene prácticamente invariabie e] despIazamiento quimico de Ios carbonos de
10s anillos C y D y de 1a cadena Iaterai y modifica en e] orden de 2 a 6 ppm e]
de los carbonos 1 a 5.
A - INVERSION DE CONFIGURACION
Se estudió 1a infïuencia de] cambio de configuración de] carbono 3 por com
paración de Ios datos obtenidos para Ios siguientes pares de compuestos:
- 3a-.y3B-hidroxi-SB-coïan-24-oato de metiio (58 y 102)
- 3a-y'3B-hidroxi-SB-pregnan-ZO-ona (103 y 19)
- 3a-yv36,21-dihidroxi-SB-pregnan-ZO-ona (94 y 104)
- 3a-.y3B-hidroxi-58-androstan-17B-carboxiIato de metiIo (95 y 105).
Los vaïores de despIazamiento quimico y Ias diferencias entre Tos vanres
anaIizados figuran en 1a tabIa 11.
Se observa que en todos Ios casos e] cambio de] isómero 3a a1 3B produce
un corrimiento a campos más aItos de Ios vaiores de resonancia de Ios carbonos
de] aniIIo A. Las diferencias son de aproximadamente 4,6 ppm para e] átomo de
carbono unido a1 oxígeno, 2-3 ppm para Ios carbonos B (2 y 4) y 5-6 ppm para
Ios carbonos y (1 y 5). Estos despIazamientos fueron observados también por
EngeIhard y coIaboradores81 para 3a y 3B coprostanoIes e interpretado en térmi
127
Tabia 11. Diferencias en ios despiazamientos quimicos producidas por un
cambio configuracionai en e] carbono 3.
58 102 58 —>102 103 19 103 ->19
3a 3B 3a 3B
C-l 35,31 29,97 5,34 35,72 30,00 5,72
C-2 30,45 27,91 2,54 30,83 27,92 2,91
C-3 71,58 67,06 4,52 71,62 66,86 4,76
C-4 36,36 33,60 2,76 36,73 33,46 3,27
C-5 42,06 36,60 5,46 42,39 36,36 6,03
94 104 94 -‘104 95 105 95 —>105
3a 3B 3a 3B
C-l 35,27 29,92 5,35 35,47 30,04 5,43
C-2 30,44 27,78 2,66 30,62 27,92 2,70
C-3 71,55 66,91 4,64 71,76 67,03 4,73
C-4 36,28 33,43 2,85 36,54 33,62 2,92
C-5 41,91 36,43 5,48 42,15 36,58 5,57
nos de interacciones sesgadas.
Los compuestos con fusión de aniiios A/B cis pertenecientes a 1a serie 3B
tienen e] sustituyente de carbono 3 con orientación axial, mientras que en 1a se
rie 3a es ecuatoria] (figura 4). En esta üitima, e] hidrógeno 3B presenta inte
racciones entre hidrógenos 1,3-diaxia1es con ios hidrógenos 15 y 58.
128
Figura 4
Dichas interacciones son las más importantes pues producen un desplazamien
to quimico a campos más bajos dei orden de 4,5 ppm. Las mismas desaparecen en e]
isómero B para dar iugar, en este caso, a dos interacciones sesgadas OC(Cl-CZ
C3-O3By C5-C4-C3-03B) que tienen también un efecto desprotector pero de menor
valor absoiuto (z 1,9 ppm). Por esta razón un cambio configuraciona] dei tipo
3a —>3Bproduce como efecto neto un despiazamiento de 1a seña] de] carbono 3 a
campos más altos.
E1 despiazamiento a campos más aitos también se observa para ios carbonos y
(1 y 5) como una consecuencia de] mismo efecto. Para estos carbonos ocurre un
cambio en ios parámetros hidroxiiados a1 variar 1a interacción y de anti a sesga
da, sin embargo 1a contribución a1 despiazamiento quimico provocada por cuaiquig
ra de estas interacciones es dei mismo signo y magnitud por 10 que e] aporte ne
to resuitante es nuio.
Para ios carbonos s (2 y 4) e] cambio en 1a configuración de] carbono 3 con
129
duce a Ta pérdida de una interacción sesgada HO (z 4,41 ppm) (H4a-C4-C3-O3a y
H2a-C2-C3-03a) y a Ia aparición de una interacción sesgada C0 (z 2,28 ppm) (C5
C4-C3-03B y C1-C2-C3-038) Io que trae como consecuencia un despTazamiento de 1as
señaies de Tos carbonos indicados a campos más altos.
La comparación de Ias interacciones que se modifican a1 pasar de Ta sustitu
ción 3a a Ta 3B permite justificar ei efecto pronunciado que afecta Tos despia
zamientos quimicos de Tos carbonos y respecto de aqueITos que son vecinos a1 cen
tro donde se produjo Ta inversión.
A continuación se resumen ios cambios de interacciones y 1as diferencias de
vaTores en eTTos invqucradas.
INTERACCIONES PRESENTES INTERACCIONES PRESENTES
EN EL ISOMERO 3a EN EL ISOMERO 38
TIPO ENLACES VALOR TIPO ENLACES VALOR DIFERENCIA
INVOLUCRADOS INVOLUCRADOS TEORICA
C1 CH CI-HIB y C3-H3B 4,55 4,55
C2 HO H2a-C2-C3-03u 4,41 C0 C1-C2-C3-03B 2,28 2,13
C4 HO H4a-C4-C3-03a 4,41 C0 C5-C4-C3-O3B 2,28 2,13
C5 CH C5-H58 y C3-H3B 4,55 4,55
En derivados Sa-esteroidaTes e] cambio de configuración en e] carbono 3
produce variaciones con e] mismovaïor absoTuto pero de signo contrariogz’84
130
que aquéllas observadas para ios carbonos 1 a 5 de ios derivados Se. Este hecho
resuita previsible pues en 1a serie 5a ios sustituyentes de carbono 3 con orien
tación a son axiaies y ios B ecuatoriaies.
B - 3-0X0 DERIVADOS
La oxidación de 1a función aicohóiica de carbono 3 a cetona produce sóio
una pequeña distorsión en 1a conformación de 1a moiécuia y ias caracteristicas
más importantes observadas se deben a factores electrónicos y estéricos. Se com
pararon ias cetonas con ios aicohoies correspondientes. Los compuestos anaiiza
dos fueron:
- 58-pregnan-3,20-diona (106) con 3a-.y3B-hidroxi-SB-pregnan-ZO-ona (103 y 19)
- 3-oxo-58-c01an-24-oato de metiio (59) con 3a-.y3B-hidroxi-58-c01an-24-oato
de metiio (58 y 102)
- 3-0xo-53-androstan-17B-carboxi1ato de metiio (107) con 3a-.y3B-hidroxi
53-androstan-17B-carboxiiato de metiio (95 y 105).
En e] siguiente cuadro se presentan ias diferencias observadas en ios vaio
res de despiazamiento quimico para ios carbonos B y y respecto de] carboniio ,
originadas por ei cambio en e] grupo funciona].
131
01 CZ C4 05
106 37,02 36,86 42,16 44,08
105 ->106 1,30 6,03 5,43 1,69 3a0H -'3CO
19 ->106 7,02 8,94 8,70 7,72 3BOH*>3CO
59 36,89 36,81 42,06 44,06
58 d-59 1,58 6,36 5,70 2,00 3a0H ->3CO
102 ->59 6,92 8,90 8,46 7,46 380H ->3CO
107 37,09 36,97 42,23 44,15
95 ->107 1,62 6,35 5,69 2,00 3aOH*>3CO
105 -‘107 7,05 9,05 8,61 7,57 3BOH*>3CO
E1 grupo carboniio induce un despiazamiento sistemático a campos más bajos
en ias señales de ios carbonos 8 y y, siendo más importante en aqueiias prove
nientes de 1a serie 3B que de 1a 3a
En ios derivados 3a-hidroxi1ados cada uno de ios carbonos B presenta dos in
teracciones H0 (O3-C3-C4-H4a , 03-C3-C4-H4B , O3»C3-C2-H2a y 03-C3-C2-H28). En
cambio ios carbonos s de ios derivados 3B-hidroxi1ados presentan soiamente una
interacción H0 (03-C3-C2-H23 y 03-C3-C4-H4B) y una interacción C0 (03-C3-CZ-C1 y
03-C3-C4-CS) de mucha menor importancia en 10 que concierne a su contribución a1
vaior absoiuto de] despiazamiento quimico.
Por 10 tanto, cuando se compara 1a diferencia entre ios vaiores de ios des
piazamientos quimicos de cada uno de 10s epimeros con ios vaiores correspondien
132
tes del compuesto carbonilico resulta de mayor magnitud enel caso del derivado
33-hidroxilado. El incremento teórico esperado seria:
3a0H -o 3C0: - CH - y(0H) + yanti = 1,89 ppm
380H -3CO: - y(0H) + yanti = 6,44 ppm
C - EFECTOS PRODUCIDOS POR EL CAMBIO DE LA CADENA LATERAL. CARACTERISTICAS
CONFORMACIONALES.
En la tabla 9 se puede observar que, para todos los compuestos estudiados
los carbonos 12, 13, 16, 17 y 18 son los más afectados por el cambio de la cade
na lateral mientras que, tal comoera previsible, las señales del resto de los
carbonos no varian por encontrarse remotos al sitio de sustitución.
Cuando se comparan las señales de los carbonos 13 y 16 en esteroides del ti
po 20-ceto pregnano (compuestos 19, 92, 100, 103 y 106) con las de los 56-andros
tanos, se aprecia el efecto de desprotección producido por el sustituyente en
carbono 17.
20-ceto pregnano: 6C-13 = 44 ppm , 6C-16 = 23 ppm
58-androstano: 6C-13 = 41 ppm , 6C-16 = 20 ppm
La cadena lateral de los 20-ceto pregnanos adopta dos conformaciones prefe
ridas que están en equilibrio por rotación alrededor del enlace C-17/C-2089’90,
pero aunque en una de ellas existe un eclipsamiento parcial entre el oxigeno y
el grupo metileno de carbono 16, éste no constituye un factor desestabilizante
. . 89 .. .. ., .de 1mportanc1a . Esta conclu51on surgio por comparac1on con el efecto de eclip
133
samiento presente en 1a 2(ecuatoria1)-metiiciciohexanona donde e] mismoha sido
considerado insignificantegr.
La iguaidad en e] efecto y(C0) también se observó para esteroides con cade
na de] tipo 21-hidroxi-20-ceto pregnano (compuestos 94 y 104), 21-acetoxi-20-ce
to pregnano (compuestos 95 y 108) y 17B-carboxi1ato de metiio (compuestos 96 y
105 ).
La comparación de] despiazamiento quimico de] carbono 17 de todos ios com
puestos estudiados indica que ios derivados de 20-ceto pregnanos presentan 1a
seña] despiazada a campos más bajos (6 = 64 ppm). Esta desprotección no sóio se
debe a1 grupo carboniio en B, sino también a 1a reiación 1,3-diaxia1 que existe
entre e] H-17 y ios hidrógenos de] carbono 21 que tiene iibre rotación92 (figu
ra 5).
Cuando se introduce un hidroxiio en ei carbono 21 (compuestos 94 y 104) 1a
seña] de] carbono 17 se desplaza a campos más aitos (6 = 59 ppm). Esto ocurre en
parte por 1a desaparición de uno de ios hidrógenos de carbono 21, pero también
por 1a formación de un puente de hidrógeno intramoiecuiar entre e] hidroxiio de
carbono 21 y e] oxigeno de carbono 20. De esta manera se restringe 1a 1ibre ro
tación entre estos dos carbonosgz, evitando asi una interacción tan efectiva co
mo 1a que existe en e] caso en e] que hay iibre rotación.
E1 carbono 17 de ios 21-acetoxi derivados (compuestos 93 y 108) presenta
e] mismo vaior de desplazamiento quimico que e] de ios 21-hidroxi-derivados. En
este caso ya no hay posibiiidad de formación de un puente de hidrógeno intramo
134
Figura 5: Conformación preferencia] de 1a cadena 1atera1 de 105 ZO-ceto pregna
nos en soïución.
Figura 6: Conformación preferencia] propuesta para 1a cadena 1atera1 de 105
ácidos colánícos o derivados de Ios mismos en soïución.
135
1ecu1ar, pero es factibie que e] grupo acetato resuite Io suficientemente voiu
minoso comopara impedir también una iibre rotación y una totaimente efectiva
interacción de tipo 1,3-diaxia1.
Los derivados de tipo ácido etiánico (compuestos 95, 96, 97, 106, 107 y
109) muestran un despïazamiento de] carbono 17 aün a campos más aitos (6 = 55
ppm) siendo 1a única infïuencia ejercida 1a correspondiente a 1a sustitución con
un carboxiiato de metiio.
Los derivados de ácidos colánicos (compuestos 58, 59, 60, 61, 67, 68, 102
y 110)presentan una situación reaimente diferente. La comparación con e] 58-an
drostano indica una desprotección de] carbono 13 (6 = 42,6 ppm), simiïar a 1a
observada anteriormente, pero un importante despiazamiento de] carbono 16 a cam
pos más bajos (6 = 28 ppm). En este caso ias diferencias observadas en 10s vaio
res de despïazamiento quimico no se pueden expiicar soiamente por factores eiec
trónicos pues de ser asi, ta] como se ha comentado antes, 1a cadena 1atera1 de
beria infiuir sobre ambos carbonos de 1a misma manera. Resulta evidente que di
cha diferencia surge comoconsecuencia de factores estéricos. Teniendo en cuenta
este hecho, se propuso que 1a cadena 1atera1 de los ácidos coiánicos o derivados
de eiios adoptan en soiución una conformación preferencia] (figura 6) simiiar a
1a que adoptan ios 20R-ester01es en soiución93. Esta conformación coincide con
e] rotámero favorecido para 1a cadena 1atera1 de] ácido cóiico en estado crista
iino, segün se ha determinado por análisis de rayos X94. Una disposición prefe
rida simiiar también se ha propuesto para e] coiestano en estado cristaiinog4.
136
En 1a disposición espacia] propuesta se presenta una interacción 1,3-diaxia1
entre e] hidrógeno de carbono 20 y e] hidrógeno B de carbono 16. Esta interación
seria responsabie de 1a desprotección del carbono 16 y de1consiguiente despiaza
miento de su seña] a campos más bajos. Este despiazamiento resuita más importan
te que ei que se observa en ios 20-ceto derivados debido a que 1a interacción
1,3-diaxia1 pianteada produce una desprotección mayor que e] efecto de un carbo
niio en B con 1a orientación que presenta 1a cadena del pregnano.
Cuando se compara e] desplazamiento quimico de] carbono 13 de estos compues
tos con e] correspondiente a1 58=androstano también se observa un corrimiento a
campos más bajos pero mucho menor dado que, para ei carbono 13, se debe exciusi
vamente a 1a sustitución en carbono 17.
E1 despiazamiento quimico de] carbono 16 en ios derivados de ácidos coiáni
cos anaiizados es simiïar a1 observado para e] carbono 16 de ss-coiestanos77 y
SB-pregnanos77.
Es factibie que e] confórmero favorecido en soiución para estos compuestos
sea e] mismoque e] que presentan en sus estructuras cristaiinas y que, ta] como
ha sido demostrado por anáiisis de rayos X94, 1a disposición espacia] de sus ca
denas lateraies tenga e] hidrógeno 20 anti con respecto a1 hidrógeno 17a. Por 10
tanto, existiría también una interacción 1,3-diaxia1 H-20/H-16que seria, en es
te caso como en ios anteriores, 1a responsabie de] despiazamiento a campos más
bajos de] vaior de 1a resonancia dei carbono 16.
E1 vaior de] despiazamiento quimico para e] carbono 13 de estos compuestos
137
es coincidente con e] encontrado para ios ácidos coiánicos en estudio.
En e] siguiente cuadro se comparan ios valores de despiazamiento quimico de
estos carbonos para diferentes compuestos, pudiendo observarse 1a desprotección
sistemática que produce 1a interacción descripta en e] carbono 16 de 10s esteroi
des que 1a presentan.
C-13 C-16 INTERACCION
H20/H16
SB-colestan-3d-oi 43,1 28,7 SI
SB-colestan-3B-01 42,7 28,3 SI
5B-pregnano 42,3 28,3 SI
3s-hidroxi-58—pregnan-20-ona 44,4 22,9 NO
3o-hidroxi-SB-pregnan-ZO-ona 44,4 22,9 N0
33-acetoxi-58-pregnane20-ona 44,1 22,7 N0
3a—acetoxi-58—co1an-24-oato de metiio 42,7 28,1 SI
3-oxo-53-c01an-24-oato de metilo 42,5 28,0 SI
3a-hidroxi-58-co]an-24-oato de metilo 42,7 28,1 SI
3-oxo-SB-androstan-17B-carboxilato de meti- 44,2 23,7 NO
10
3B-hidroxi—58-androstan-17B-carboxi1ato de 44,3 23,9 NO
metiio
3a-hidroxi-58-androstan-17B-carboxi1ato de 44,3 23,8 N0
metiio
138
5En e] caso de] 3B-acetoxipregn-S-en-ZOR-oi9 se ha demostrado por cálcuios
qteóricos de energia de rotámeros96 y por RMN-lH97,9“ que 1a cadena 1atera1 adog
ta soiamente un confórmero favorecido con e] hidrógeno 17a casi anti a1 hidróge
no 20. Esta conformación hace posibie una interacción entre e] hidrógeno 20 y ei
hidrógeno 168, que junto con un pequeño efecto y(OH) permiten expiicar ei despia
zamiento quimico de] carbono 16 (6 = 26 ppm).
Por otro 1ado, compuestos sin hidrógeno en e] carbono 20 como e] 38,20R-di
hidroxi-Z3-norcoianato de metiio y su isómero 205 presentan 1a seña] de] carbono
5 . . . . ..16 a 23 ppm9 , un vaior que se puede atribu1r a 1a ausenc1a de 1a 1nteracc1on
discutida.
Hl ¡1
38-Acetoxipregn-S-en-ZOR-o]
Ac
B1
' 2 R1: CHZCOZCH3 y R2: OH
3B,20R-dihidroxi-23-norcoianato de metiio.
¡1 ¡1 R1: OH y R2= CHZCOZCH3
3B,208-dihidroxi-23-norc01anato de metiio.
139
La posibilidad de una interacción H-l7/H-21 en el confórmero propuesto
(figura 6) explica el desplazamiento a campos más altos del carbono 17 (6 =
56 ppm) cuando se lo compara con los 20-ceto derivados. Además, no se puede des
cartar un posible eclipsamiento parcial H-17/H-22 e interacciones de tipo CC
con el resto de la cadena lateral.
Se debe tener en cuenta que las interacciones mencionadas han sido descrip
tas para anillos de seis miembrosen conformaciones silla86 y en este caso se
está haciendo una extensión a partes aciclicas de las estructuras comoson las
cadenas laterales de los esteroides. A pesar de que ello no seria estrictamente
válido, es razonable predecir su aplicación en el confórmero favorecido en solu
ción ya que los datos obtenidos lo justifican ampliamente.
En el caso de la cadena lateral de compuestos esteroidales, la existencia
de un rotámero principal se debe a la restricción de la libre rotación alrede
dor del enlace entre los carbonos 17 y 20 causada por una repulsión entre el
CH3-18y cualquier grupo unido al carbono 20. Esta interacción estérica debe
tener mayor energía que la mencionada antes entre el hidrógeno 20 y el hidróge
no 16 B.
140
ANALISIS DE LOS DATOS OBTENIDOS PARA DERIVADOS 5B-ESTEROIDALES
SUSTITUIDOS EN LOS CARBONOS 3 Y 7 , Y CON DIFERENTES CADENAS LATERALES
(TABLA 10)
En Tos sistemas esteroidaies con fusión de aniTIOS A/B cis e] sustituyente
a de carbono 7 tiene orientación axial, de manera que 1a introducción de un hi
droxiTo o un aceti10 en esta posición tiene un marcado efecto sobre aTgunos car
bonos a su a1rededor.
La introducción de un hidroxiïo en 1a mencionada posición infïuencia en
forma diferente a ambos carbonos B (6 y 8). En e] caso de] carbono 6 se presen
ta una interacción entre e] hidrógeno 6a y e] hidroxiïo vecino (H0 = 4,41 ppm)
además de una interacción CO (C5-C6-C7-07a) de menor magnitud (2,28 ppm). Esto
da como resuïtado e] despTazamiento de 1a seña] a vaiores de] orden de 34,7 ppm,
ta] como ocurre en e] caso de los compuestos 50, 57 y 78 de 1a tabïa 10. Cuando
estas interacciones no existen e] desplazamiento quimico de] carbono 6 es de]
orden de 26,5 ppm como puede apreciarse en 1a tabTa 9.
Para e1 otro carbono B, e] hidroxiio en posición axia] introduce dos in
teracciones CO (C9-C8-C7-O7a y C14-C8-C7-O7a ). E11as modifican su despIazamien
to quimico a un valor promedio para Tos compuestos 50, 57 y 78 de] orden de 39,7
ppm (tabTa 10) en comparación con e] valor promedio de 35,7 ppm (tabia 9) para
Tos que no 1a presentan.
La introducción de] hidroxilo axia] impiica 1a pérdida de dos interaccio
141
nes entre hidrógenos 1,3-diaxia1es. E110 conduce a un despTazamiento de las se
ñaTes de Tos carbonos 9 y 14 a campos más aTtos. Este efecto se ve incrementado
por 1a aparición de una interacción y(0H) sesgada (-1,28 ppm) en ambos casos.
ET cambio introducido se observa por comparación entre e] vaior de despTazamien
to quimico de estos carbonos en 10s compuestos de 1a tabla 9 (C-9: 40,25 ppm ;
C-14: 56,15 ppm) y Tos datos de Tos respectivos carbonos en Tos compuestos 50,
57 y 78 de 1a tabTa 10. La diferencia experimenta] obtenida, en promedio, fue
de 7,2 ppm para e] carbono 9 y 6,2 ppm para e] carbono 14.
E1 carbono 5 se encuentra en reTación y(0H) sesgada respecto de] hidroxiTo
de carbono 7, pero como e] enïace C-7/0-7 es para1e10 a1 enlace C-5/C-4, 1a hi
droxiTación no introduce cambios en e] número de interacciones entre hidrógenos
1,3-diaxia1es de] carbono en cuestión. Es por eTTo que e] ünico cambio produci
do en 1a seña] es un despiazamiento de 1,28 ppm a campos más aTtos. Esta predig
ción coincide con Tos resultados obtenidos.
TABLA COMPUESTO C-4 C-5 TABLA COMPUESTO C-4 C-5
1 58 36,36 42,06 2 50 39,77 41,56
1 103 36,73 42,39 2 57 39,63 41,53
1 94 36,28 41,91
l 95 34,54 42,15
FinaTmente 1a seña] de] carbono 4 muestra un despTazamiento a campos más
bajos por Ta infïuencia que e] sustituyente en 6 (¿(OH) = 2,86 ppm) produce en
142
estos sistemas A/B cis. Ta] como puede apreciarse en e] cuadro de 1a página an
terior, 1a variación teórica se ve avaïada por ios datos comparativos de ios
compuestos 58, 103, 94 y 95 que no presentan 1a interacción, frente a Ios com
puestos 50 y 57 que 1a presentan.
E1 anáïisis de ios vaiores de despïazamiento quimico de 10s carbonos 3 y 7
de ios compuestos de 1a tabia 10 indica una notoria diferencia entre ambos.
Cuandose anaiizan ias interacciones sesgadas para estos casos se obtienen re
suitados compietamente distintos. En e] caso de] carbono 3, e] hidroxiïo con
orientación a es ecuatoria] y ei hidrógeno 38 interactúa con 10s hidrógenos di
axiaies de ios carbonos 1 y 5. Este hecho contribuye a desplazar e] vaior base
para 1a seña] de un a1coho] secundario (60,99 ppm) a campos más bajos (2x4,55
ppm).
E1 hidroxiio en posición 7a es axial y en este caso tres interacciones 0C
(07a-C7-C8-C9 , 07a-C7-C8-C14 y 07a-C7-C6-C5) despiazan e] vaior base 3x1,97 ppm
también a campos más bajos.
De acuerdo a 1os cáicuios teóricos, 1a variación en ios despiazamientos
quimicos de estos dos carbonos debería ser de 3,19 ppm, siendo mayor e] corres
pondiente a1 carbono 3. Los resuitados experimentaies son 10s siguientes:
COMPUESTO C-3 C-7 C3 - C7
50 71,94 68,52 3,42
57 71,81 68,33 3,48
143
La acetiIación de ambos hidroxi10s produce modificaciones simiIares en Ios
dos carbonos. Las diferencias observadas anteriormente se mantienen.
COMPUESTO C-3 C-7 C3 - C7
49 74,11 71,18 2,93
51 74,08 71,15 2,93
47 73,94 70,99 2,95
52 73,94 71,00 2,94
La acetiiación produce en 1os carbonos B un despIazamiento de sus señaIes
a campos más bajos, pero eI orden de magnitud no es simiIar en todos Ios casos.
Se ca1cu16 e] va1or promedio de] despIazamiento quimico para Ios carbonos 2, 4,
6 y 8 de Ios derivados diacetilados 49, 51, 47 y 52 y e] correspondiente a Ios
compuestos 50 y 57 con ambos hidroinOS Iibres.
tran Ios resu1tados.
En e] siguiente cuadro se mues
C-2 C-4 C-6 C-8
VALOR PROMEDIO CON LOS HIDROXILOS ACETILADOS 26,79 34,63 31,28 37,90
VALOR PROMEDIO CON LOS HIDROXILOS LIBRES 30,69 39,70 34,76 39,86
DIFERENCIA ENTRE AMBOSVALORES 3,90 5,07 3,48 1,97
Se puede observar que e] carbono 4 es e] más afectado. La seña] de este
144
carbono se despiaza por 1a introducción de un acetiio en posición 3a pero es prg
babïe que coiabore a ese desplazamiento 1a presencia de] sustituyente voiuminoso
en carbono 7. Esto üitimo resuitaria comoconsecuencia de 1a unión cis entre los
aniiios A y B que provoca una proximidad espacia] entre e] carbono 4 y e1 aceti
10 de posición 7a. Esta idea se veria apoyada por e] hecho de que pares de com
puestos de 1a tabia 9, como por ejempio 58 y 60 , 103 y 92 ó 94 y 93 , con e]
hidroxiio 3a iibre y acetiiado, muestran para e] carbono 4 una diferencia de va
iores de despïazamiento quimico prácticamente igua] a 1a de] carbono 2.
E1 carbono 8 presenta, por acetiiación de] hidroxiio de carbono 7, un cam
bio mucho menor. Esto podría deberse a que e] ünico hidrógeno unido a1 carbono
analizado es axial y está orientado hacia e] lado B de 1a moiécuia, en dirección
opuesta a1 sustituyente axia] voïuminoso de carbono 7, produciéndose en este ca
so una infiuencia estérica muchomenor.
145
EFECTO DE LA DESHIDRATACION DE UN HIDROXILO 7a Y LA INTRODUCCION DE
UN DOBLE ENLACE EN POSICION 8(14) (TABLA 10)
A continuación se discutirá el efecto producido comoconsecuencia de la des
hidratación de un hidroxilo a en carbono 7 para dar lugar a un doble enlace en
posición 8(14). En la presente sección las diferencias que se mencionarán entre
valores de desplazamiento quimico surgen de la comparación de los datos experi
mentales correSpondientes a los compuestos 78 y 80, ya que la única diferencia
estructural entre amboses la involUCrada en estudio.
Eggert y Djerassi79 investigaron el cambio que origina en la resonancia de
los carbonos la introducción de un doble enlace en distintas posiciones del es
queleto esteroidal. Compararonlos valores observados con los predichos usando
el conjunto de parámetros descriptos por Beierbeck y colaboradoresBG.
La introducción de un doble enlace en un sistema cíclico produce una dis
torsión conformacional apreciable,y en moléculas policiclicas de anillos conden
sados la deformación se propaga a través de los mismos. El grado de transmisión
depende de la rigidez del anillo que contiene el doble enlace y de la cercanía
de los anillos condensados. En el esqueleto esteroidal la flexibilidad de los
cuatro anillos es muydiferente y por lo tanto, dobles enlaces en ciertas posi
ciones producen una transmisión sustancia] de la distorsión, mientras que en
otras el efecto es muchomenor. Por esta razón Eggert y Djerassi indicaron que
en estructuras policíclicas comolos esteroides, no hay una buena correlación
146
entre aigunos valores observados y ios caïcuiados. Las mayores desviaciones ias
encontraron para e] caso de dobies eniaces en e] aniiio C, que está condensado
con un aniiio de cinco miembros. En particuiar, ios compuestos con e] dob1e en
lace en posición 8(14) presentan diferencias no sóio en ios carbonos oiefinicos
sino también en ios aiiiicos (B) y homoaiiiicos (y). Esto justificaria ias difg
rencias encontradas entre ios datos experimentaies y ios teóricos que se deta
11an a continuación.
La deshidratación de] hidroxiio en carbono 7 para dar 1a oiefina en posi
ción 8(14) se puede enfocar como dos modificaciones simuïtáneas. Por un 1ado,
e] reempiazo de un hidroxiio por un hidrógeno y por e] otro, 1a introducción de]
dob1e eniace.
E1 carbono 6 es uno de ios más afectados pues, como consecuencia de] cambio,
pierde 1a interacción de] hidrógeno 68 con e] hidrógeno 86 (CH = 4,55 ppm) que
desaparece a] formarse e] dobie eniace. Ademásse descuenta para este carbono
una interacción de tipo H0 (4,41 ppm) y una C0 (2,28 ppm) que surgian por 1a prg
sencia de un hidroxiio en e] carbono vecino. Por üitimo, también se modifica 1a
señai por 1a presencia de] dobie eniace (y(01ef. anti)= 5,23 ppm). Estos facto
res permiten ca1cu1ar un desplazamiento teórico de aproximadamente 6 ppm a cam
pos más aitos, aunque en rea1idad e] observado fue aün mayor (7,6 ppm).
E1 hidrógeno 7a introduce una interacción de tipo 1,3-diaxia1 con e] hidró
geno 9a. Para e] carbono 9,este efecto se compensa con 1a pérdida de una interag
ción equivaiente entre e] hidrógeno 9a y e] 14 que se eiimina a1 formarse e] do
147
ble enlace. Por lo tanto, el desplazamiento de la señal del carbono en cuestión
se debe al cambio de una interacción con un hidroxilo en y (-1,28 ppm) por la
producida por una olefina en el carbono vecino (3,86 ppm). Esto hace previsible
un corrimiento teórico de la señal de 5,14 ppma campos más bajos y podria jus
tificar el desplazamiento experimental observado de 3,25 ppmen el sentido pre
visto.
El carbono 5 pierde la interacción que tenia con el hidroxilo en y (-1,28
ppm) y el carbono 4 en 6 (2,86 ppm). Esto explicaría el pequeño desplazamiento
del carbono 5 a campos más bajos (0,69 ppm) y el desplazamiento mayor del car
bono 4 en sentido inverso.
La señal del carbono 13 no muestra cambios apreciables pese a estar direc
tamente unido a uno de los carbonos sp2. Esto respaldaria lo indicado por las
reglas semiempiricas pues no está unido a hidrógenos y el parámetro B de olefi
nas no se aplica a carbonos sp3 cuaternarios.
La señal del carbono 18, directamente unido al carbono 13, tiene un pronug
ciado corrimiento a campos más bajos (6,52 ppm). Este hecho puede deberse al
efecto desprotector de la olefina, que se manifiesta en el parámetro y de olefi
nas con la disposición espacial particular observada en este caso, indicada teó
ricamente comoanti.
Los valores de desplazamiento quimico de los carbonos 11 y 12 también se mg
difican por la introducción del doble enlace, pero en un orden de magnitud mucho
menor ya que, la relación de estos carbonos con el mismoes la indicada en las
148
regias semiempiricas comosyn (1,41 ppm). Este efecto compensa parciaimente 1a
pérdida,por parte de cada uno de estos carbonos,de una interacción entre hidró
genos 1,3-diaxia1es (H-lls conHm8e H-12a con H-14). La suma de estos factores
justificaria e] despiazamiento fina] a camposmás aitos de ias dos señaies en
estudio, pero impediriajustificar 1a diferente variación que se presenta entre
ambos casos.
Los métodos utiiizados en e] presente trabajo para 1a asignación de ios des_
piazamientos quimicos de cada uno de ios carbonos de ios compuestos en estudio
no permitieron una asignación inequívoca de ios vaiores correspondientes para ios
carbonos 8 y 14, dado que ambos carbonos oiefinicos son cuaternarios.
. 79 . YDe acuerdo a datos de iiteratura Eggert aSigna el espectro dei coiest
8(14)-eno (111) ei vaior de desplazamiento quimico más aito (141,9 ppm) a] car
bono 14 y e] más bajo alcarbono 8 (126,7 ppm) Para eilo se basó en datos ebteni
dos utiiizando reactivos de despiazamiento para 1a asignación de ios carbonos
oiefinicos de] 5a-C01est—8(14)-en-38—oi (112).
H 112
149
Coincidentemente, Tsuda y co1aboradores78 hacen e] mismo tipo de asignación
para e] coiest-8(14)-en-3B-01 (C-8: 126,1 ppm , C-14: 142,4 ppm). Se debe remar
car que ambosautores trabajan con derivados 53-esteroida1es.
En cambio, Tschesche y Fuhrer43 asignaron para 1a 3B-hidroxi-56-pregn
8(14)-en-20-ona (38) y su derivado aceti]ado,en forma respectiva,1os siguientes
vaïores: 128,7 y 128,1 para e] carbono 14 y 139,5 y 139,7 para e] carbono 8, sin
ac1arar especificamente en qué metodoïogia basan su asignación.
Los compuestos anaïizados por Tschesche son derivados 58 a diferencia de
105 5a considerados anteriormente. Si bien es factib1e que 1a modificación A/B
trans a A/B cis produzca cambios conformacionaïes importantes, ios datos para
los autores están revertidos, pero son coincidentes.
Por otra parte, surgen discrepancias en 1a asignación realizada por Tsche
sche en e] mismotrabajo para otros derivados esteroidaïes anteriormente descrip
tos por varios autores. Por ejempïo, en e] caso de progesterona,considera para e]
carbono 16 un desplazamiento quimico de 38,7 ppm que se encuentra fuera de ios
1imites de 1os va1ores normaïmente encontrados para este carbono en compuestos
de este tipo. Se piensa que ese dato se encuentra intercambiado con e] asignado
por e] autor para e] carbono 12 (24,4 ppm).
En e] presente trabajo, si bien no se puede determinar inequivocamente, se
asigna tentativamente 128,2 ppm para e] carbono 8 y 138,9 ppm para e] carbono
14.
EXPERIMENTAL
GENERALIDADES
Los puntos de fusión fueron determinados con un aparato Fisher-Johns y no
están corregidos.
Los espectros de absorción en el IR se realizaron utilizando dos espectro
fotómetros Perkin-Elmer, modelo 421 o modelo 7103, dispersando la muestra en Nu
jol.
Los espectros de RMN-lHse efectuaron a 100 MHzcon un espectrómetro Varian
XL-100-15 (salvo los casos indicados a 60 MHzcon un espectrómetro Varian A-60).
Los espectros de RMN-13€se realizaron con el equipo Varian XL-100-15 a 25,2 MHz
por el método pulsado con transformada de Fourier, utilizando una computadora
Varian 620/L-100 y una unidad de discos magnéticos Sykes 7000. El solvente em
pleado fue cloroformo deuterado (Cl3CD) salvo en los casos en que se indique lo
contrario y se usó tetrametilsilano comoseñal de referencia interna. Los des
plazamientos quimicos se expresaron en ppmy las constantes de acoplamiento (J)
en Hz. Las señales se indican comosingulete (s), doblete (d), triplete (t), mul
tiplete (m), banda ancha (b.a.). Los espectros de RMN-13C se hicieron con solu
ciones 0,5-0,6 M , con un ancho de barrido de 5700 Hz usando pulsos de 45° y ve
locidad de repetición de pulsos de 0,71 segundos. Los espectros totalmente desa
coplados de protones son el resultado de acumular 10000-15000 pulsos y se obtu
vieron por irradiación del espectro de 1Ha una frecuencia central de 3 ppm. Las
multiplicidades de las señales fueron determinadas por la técnica de ecos de
151
spin con desacopie a1ternado (APT: test de protones vecinaïesgg) utilizando una
secuencia de pulsos 90Ïx - 1 - 180Íy - T - FID (1 = 7 mseg) y cortando el desacg
pïador en e1 periodo entre dos puïsos.
Los compuestos 104 y 106 fueron adquiridos a Makor Chemicais Ltd.; 1os com
puestos 58 y 107 se obtuvieron por meti1ación con diazometano de 105 ácidos co
rrespondientes adquiridos a Makor Chemica1s Ltd. Los compuestos 19 y 103 se ais
1aron desacetiiando ios compuestos 100 y 92 respectivamente mediante un calenta
miento a refiujo con etanol y catáiisis ácida. E1 compuesto 108 se preparó por
acetiïación de] compuesto 104 con anhídrido acético y piridina a temperatura am
biente. E1 compuesto 110 se preparó por tratamiento de] compuesto 58 con ácido
fórmico en tetrahidrofurano a temperatura ambiente durante 20 hs. E1 compuesto
102 se obtuvo por saponificación (con hidróxido de potasio en etanoï) seguida de
tratamiento con diazometano de] compuesto 68.
Los espectros de masa se rea1izaron a 70 eV en un espectrómetro de masa
Varian-MAT CH7-A, comandado por una computadora Varian-MAT Data System 166, con
unidades de salida TRCTektronix 4010 e impresora Tektronix 4631. En todos ios
casos ios espectros se reaiizaron por introducción directa de las muestras.
Las mediciones de radiactividad se 11evaron a cabo en un espectrómetro de
cente11eo liquido Packard Tri-Carb 3003, o en un Tracor Anaiytic Mark III. Las
Las muestras se disoïvieron en una mezcia de 1 m1 de agua y 14 m1 de solución
cente11eadora que contenía 100 g de naftaïeno, 7,0 g de 2,5-difeni10xazo] (PPO)
y 300 mg de 1,4-bis-2-(4-meti1-5-feni10xa201i1)bemceno (dimetii-POPOP) por 1itro
152
de soïución en dioxano.
Las cromatografias en capa deigada anaiiticas se reaiizaron usando como
fase fija siiicagei G (Merck) y comoreveiadores vapores de iodo o soiución
acuosa de ácido suifürico a1 50%con posterior caientamiento a 110°C. Para ma
yor resoiución se emp1earon p1acas cromatográficas comerciaïes de si1icage1 60
F254 sobre aiuminio (Merck).
Las cromatografias en capa deigada preparativas (1-2 mmde espesor) se efeg
tuaron utiiizando siïicageï PF254 (Merck), observándolas 1uego de desarroiiadas
a 1a 1uz u1travioieta (254 nm). Para mayor resoiución, en muestras radiactivas,
se utilizaron piacas cromatográficas comerciaies de siiicagei 60 F254 (Merck) de
0,25 mmde espesor.
Las cromatografias en columna se realizaron utiiizando comoadsorbente si
1icage] Davison (malla 100-200).
Las cromatografias 1iquidas de aita resoiución se efectuaron en un cromato
grafo iiquido Micromeritics modeïo 750, equipado con un detector de indice de
refracción modeio 771. Se utiiizó una coiumna Aitex U1trasphere ODS5 um (250 mm
x 10 mm,d.i.) para cromatografía en fase reversa. E1 sistema de soivente empiea
do fue metanoi-agua (9:1) con un fiujo de 2 m1/minuto.
E1 114CH3fue adquirido a The Radiochemica] Centre Ltd., Amersham, Inglate
Los soiventes fueron evaporados a presión reducida. Las soluciones orgáni
cas fueron secadas por tratamiento con suifato de magnesio anhidro.
153
Las reacciones de metiiación se reaiizaron disolviendo o suspendiendo 1a
muestra en metano] y agregando, gota a gota, una solución etérea de diazometa
no hasta persistencia de] coior amariiio. La soiución amariiia se dejó tapada
y en reposo durante 20 minutos y, 1uego de eiiminar ei exceso de reactivo con
una corriente de nitrógeno, se evaporó e] soivente a presión reducida.
E1 reactivo de Jones se preparó disoiviendo 27 g de trióxido de cromo en
una mezcia de 23 m1 de ácido suifürico (c) y 100 m1 de agua.
Los soiventes de desarroiio para ccd anaiitica fueron: sistema 1: cioruro
de metiieno-metanoi-ácido acético 97:3:0,05, sistema 2: toiueno-acetato de eti
10 95:5, sistema 3: cioruro de metiieno-metanoi 99:1, sistema 4: benceno-aceta
to de etiio 4:1, sistema 5: cioroformo, sistema 6: cioruro de metiieno-metanoi
97:3, sistema 7: cioruro de metiieno-metanoi 95:5, sistema 8: cioruro de meti
ieno-metanoi-ácido acético 95:5:0,05, sistema 9: benceno-acetato de etiio 96:4,
sistema 10: benceno-acetato de etiio 9:1, sistema 11: cioruro de metiieno-meta
n01 98:2, sistema 12: cloruro de metiieno-metanoi-ácido acético 98:2:0,05, sis
tema 13: cioruro de metiieno, sistema 14: cioruro de metiieno-metanoi 93:7, sis
tema 15: cioroformo-hexano 98:2.
Las técnicas experimentales utiiizadas para e] desarroiio de ios estudios
biosintéticos se encuentran descriptas en ias páginas 91-95.
154
A - DEGRADACION DE LA CADENA LATERAL
A1 - DEGRADACION DEL ACIDO BILIAR AL 20-CETO PREGNANO
- Acido 3a,7a-diacetoxi-58-c01an-24-oico (gg).
Método A:
50 mg de ácido quenodesoxicólico (41) se disoïvieron en 2 m1 de
piridina anhidra y se agregaron 0,5 m] de anhídrido acético. La mezc1a se man
tuvo a temperatura ambiente y con agitación durante 16 hs. Finaïizado ese tiem
po se comprobópor ccd (sistema: 1) que e] reactivo de partida habia desapare
cido.
La mezcla de reacción se volcó sobre una soiución de ácido ciorhidrico (c)
en agua (1:1), se extrajo con éter etilico y se 1avó 1a fase orgánica hasta neu
traïidad. La fase etérea se secó y por evaporación de] soivente se obtuvo un ja
rabe. Dicho jarabe se sometió a una reacción de metiiación con diazometano por
1a técnica descripta. E1 análisis por espectroscopia infrarroja de] producto ob
tenido indicó 1a presencia de grupos hidroxiio libres.
Método B:
Una mezcla de 50 mg de ácido quenodesoxicólico (41), 1 m1 de ácido
acético glaciai y 0,5 m1de anhidrido acético se mantuvo a reflujo y con agita
ción durante 2 hs. E] anáïisis de dicha mezcïa por ccd (sistema: 1) indicó simi
lares resuïtados a los obtenidos antes de] aisiamiento de] producto segün e] mé
todo A.
155
Se duplicó e] tiempo de caientamiento pero no se observaron cambios.
Método C:
A 1a mezcia de reacción descripta en e] método B se ie agregó
0,1 m] de ácido ciorhidrico (c) comocataiizador. La soiución se mantuvo a re
fiujo durante 4 hs a1 cabo de ias cuales se determinó por ccd (sistema: 1) que
1a reacción habia dado ios mismos resuitados que en los casos anteriores.
Una proiongación en e] tiempo de caientamiento a 8 hs no modificaba 10 ob
servado.
Método D:
Una soiución de 1,5 g de ácido quenodesoxicóïico (41) en 20 m1 de
anhídrido acético y 0,15 m1de ácido ciorhidrico (c) se caientó a refiujo duran
te 1,5 hs. Se voicó sobre hieio y se filtró e] precipitado obtenido. Dicho pre
cipitado se recristaiizó de etano] acuoso aisiándose 1,6 g (88%) de] compuesto
48, homogéneopor ccd (sistema: 1). P.f. 200-203°C (iit100 : 206-208°C).
IR (cm'l): 3300-2600 (O-H), 174o (c=0, éster), 171o (c=o, ácido).
RMN-lH, ppm: 0,65 (s, 3H, CH3-18), 0,94 (s, 3H, CH3-19), 2,00 (s, 3H, CH3C02-),
2,20 (s, 3H, CH3C02-), 3,62 (s, 3H, -C02CH3), 4,50 (b.a., 1H, H-3),
4,80 (b.a., 1H, H-7).
EM, m/z (z): 356 (M - 2Ac0H, 11), 255 (M - 2Ac0H - CL, 10), 213 (M — 2Ac0H
aniiio D, 6), 145 (6), 78 (100).
- Diacetato de 24-nor-58-c01-22-eno-3a,7a-di01 (4 ).
A una soiución de 800 mg (1,68 mmoies) de ácido 3a,7a-diacetoxi-58-c01an
156
24-oico (48) en 30 m1 de benceno anhidro mantenida a 50°C, se agregaron 80 mg de
acetato cüprico y 0,01 m1 de piridina anhidra y se lievó a ebu11ici6n con agita
ción y en atmósfera de nitrógeno. Se adicionaron 2,2 g (4,45 mmoies) de tetra
acetato de plomo en cuatro porciones separadas por intervaios de una hora. Se
mantuvo a refiujo una hora más y se fiitró e] sólido en suspensión. La soiución
resuitante, de coior verde, se 1avó con soiución acuosa de ácido cïorhidrico a1
5%para e1iminar e] acetato de cobre, luego con soiución acuosa de bicarbonato
de sodio a1 10%y finaimente con agua hasta neutraiidad. La fase orgánica se se
có y por evaporación de] soivente se obtuvo un jarabe de c010r marrón que se pu
rificó por cromatografía en coiumna de siiicagei usando tolueno comosoivente de
e1ución. Se aisïó e] compuesto 49 como un sóiido cristaïino (435 mg, 60%) homo
géneo por ccd (sistema: 2) que se recristaiizó de metano]. P.f. 143-144°C
(Ht.46 :134°c).
IR (cm-1): 174o (c=o).
RMN-lH, ppm: 0,72 (s, 3H, CH3-18), 0,94 (s, 3H, CH3-19), 1,03 (d, J=6Hz, 3H,
CH3-21), 2,03 (s, 6H, CH3C02-), 4,65 (b.a., 1H, H-3), 4,85 (b.a.,
1H, H-7), 4,95 (m, 2H, GHz-23), 5,65 (m, 1H, CH-22).
EM, m/z (%): 370 (M - AcOH, 12), 310 (M - 2Ac0H, 89), 255 (M - 2Ac0H - CL, 100),
213 (M - 2Ac0H- aniilo D, 16), 145 (24).
13RMN- C: ver tabia 10,pág. 123.
157
24-Nor-56-c01-20(22)-eno-3a,7a-di01 gggl.
Método A:
a) Purificación de 1a etilendiamina: se secaron 100 m1de etiiendia
mina sobre ientejas de hidróxido de potasio durante 24 hs y se destiió recogien
dose 1a fracción de punto de ebuiiición 116°C. Esta fracción se guardó sobre fi]
tros moiecuiares de 4 Á hasta ei momentode 1a reacción.
b) Ereparación de] reactivo: 16,9 m1de etiiendiamina se agitaron
en atmósfera de nitrógeno durante 10 minutos y se inyectaron ientamente y con a
gitación 33 m1 de solución de buti] iitio en hexano (14%).
c) Desarroiio de 1a reacción: a1 reactivo preparado comose indicó
en b) se inyectaron 365 mg (0,85 mmoies) de 1a oiefina 49 disueitos en 1,5 m1 de
benceno anhidro. La mezcia se caientó a reflujo durante 20 minutos, se enfrió,
se diluyó con agua y se destiió a presión reducida para eliminar 1a etilendiami
na excedente. E1 residuo se disoivió en 50 m1 de éter etiiico y 1a fase orgánica
se iavó con agua (3x50 m1), se secó y se evaporó.
Ta] comose discutió anteriormente, este método no dió e] resuitado espera
do.
Método B:
a) Purificación de 1a etiiendiamina: se secaron 200 m1de etilendia
mina sobre lentejas de hidróxido de potasio durante 24 hs y se destiió recogién
dose 1a fracción de punto de ebuiiición 116°C. Esta fracción se guardó sobre so
dio a temperatura ambiente durante 48 hs. Después de ese periodo se reflujó 1a
158
mezcla durante una hora recogiéndose sobre sodio la misma fracción de punto de e
bullición 116°C.Todoel proceso (reflujo, destilación, reposo) se repitió tres
veces. Por último se destiló y se usó de inmediato.
b) Preparación del reactivo: se agitaron 7,9 ml de etilendiamina en
atmósfera de nitrógeno, calentando para mantener la temperatura entre 90 y 110°C.
Se agregaron 234 mg de alambre de litio en porciones pequeñasl Luego de cada agre
gado la solución se coloreó de azul y después de un breve lapso de tiempo comen
zó el desprendimiento de hidrógeno. El agregado de las sucesivas porciones de li
tio se efectuó cuando el burbujeo se habia atenuado, independientemente del color
de la solución. Una vez terminado el agregado y desaparecido el color azul, la
temperatura se mantuvo entre 100 y 110°C durante 2 hs para completar la formación
del reactivo.
c) Desarrollo de la reacción: se calentó la solución anterior a 125
130°C, se intensificó la corriente de nitrógeno y se agregó 1,2 g de la olefina
envuelta en un sobre de papel de filtro que se abrió adentro del balón con la
ayuda de una varilla. Se agitó durante 15 minutos a la temperatura indicada y
luego se volcó en un vaso con hielo picado. El producto se separó por extracción
con cloruro de metileno, se lavó la fase orgánica con agua hasta neutralidad y
se secó. Por evaporación del solvente se obtuvo un sólido blanco cristalino, ho
mogéneopor ccd (sistema: 3) que se recristalizó con éter de petróleo para dar
825 mg (35%) de 50 . P.f. 177-178°C (lit.46 :178°C).
IR (cm'l): 3300 (O-H).
159
RMN-lH, ppm: 0,53 (S, 3H, CH3-18), 0,90 (s, 3H, CH3-19), 1,58 (d, J=6Hz, CH3-23),
1,61 (S, 3H, CH3-21), 3,60 (b.a., 1H, H-3), 3,80 (b.a., 1H, H-7),
5,20 (m, lH, CH-22).
RMN-13€:ver tabia 10,pág. 123.
EM, m/z (%): 346 (M, 45), 328 (M - H20, 31), 310 (M - 2H20, 20), 231 (M - H20
aniiio D, 8), 213 (M - 2H20 - anillo D, 20), 87 (100).
- Diacetato de 24-nor-58-c01-20(22)-eno-3a,7a-dioi (EL).
Se disolvieron 500 mg de] compuesto 50 en 10 m1 de anhídrido acético y se
agregó 0,1 m1de ácido ciorhidrico (c). La soiución se calentó a reflujo con agi
tación durante 1,5 hs y se volcó sobre hieio. Se filtró y secó e] precipitado ob
tenido. Su recristalización de metano] rindió 560 mg (90%) de] acetato 51 , homo
géneo por ccd (sistema: 2). P.f.: 130-131°C.
Los valores de Rf en ccd de ios isómeros 49 y 51 coinciden, pero reveiados
los cromatogramas con ácido suifürico y caior, ei isómero 49 da una mancha de
coior rojo 1adri110, mientras que 1a manchacorrespondiente a 51 es de coior ver
de.
IR (cm‘l): 1745 (c=o).
RMN-lH, ppm: 0,52 (s, 3H, CH3-18), 0,93 (s, 3H, CH3-19), 1,58 (d, J=6Hz, CH3-23),
1,62 (s, 3H, CH3-21), 2,02 (s, 3H, CH3C02-), 2,06 (s, 3H, CH3C02-),
4,55 (b.a., lH, H-3), 4,85 (b.a., lH, H-7), 5,20 (m, 1H, CH-22).
RMN-13o: ver tabïa 10 , pág. 123.
160
EM, m/z (%): 430 (M, 1,3), 370 (M - ACOH, 12), 310 (M - 2Ac0H, 10), 253 (M
2Ac0H- anillo D, 17), 43 (100).
- 3a,7a-Diacetoxi-58-pregnan-20-ona (gg).
Método A:
Se disolvieron 500 mg del compuesto 51 en 10 ml de cloruro de me
tileno (secado previamente sobre filtros moleculares). La solución se enfrió con
una mezcla de hielo y cloruro de sodio hasta alcanzar una temperatura aproximada
de -10°C. Se inició entonces un burbujeo de ozono a través de la solución, con
tinuándose el mismohasta 5 minutos después de obtener una coloración celeste en
el medio de reacción. Se evaporó el solvente y el jarabe residual se disolvió en
10 ml de acetona. La ruptura del ozónido se efectuó a O°Cagregando reactivo de
Jones gota a gota y con agitación hasta persistencia del color marrón rojizo. La
mezcla se dejó a temperatura ambiente 5 minutos, se diluyó con agua (30 ml) y se
extrajo el producto con cloruro de metileno (2x50 ml). El extracto orgánico se
lavó y secó y se evaporó el solvente. El residuo obtenido se purificó por croma
tografía en columna de silicagel usando como solvente de elución una mezcla de
tolueno y acetato de etilo (9:1). Se aislaron 385 mg (79%) de la cetona 47 , ho
mogéneapor ccd (sistema: 4), que se recristalizaron con hexano. P.f. 140-141°C
(lit.100:133-134°C, éter-hexano).
1)IR (cm' : 1745 (C=0, éster), 1705 (C=0, cetona).
RMN-lH, ppm: 0,61 (s, 3H, CH3-18), 0,93 (s, 3H, CH3-19), 2,02 (s, 3H, CH3c02-),
161
2,04 (s, 3H, CH3C02-), 2,10 (s, 3H, CH-21), 4,55 (b.a., lH, H-3),3
4,85 (b.a., 1H, H-7).
13RMN- C: ver tabla 10, pág. 123.
EM, m/z (%): 358 (M - ACOH, 3), 298 (M - 2Ac0H, 5), 283 (M - 2Ac0H - CH 15),3,
255 (M - 2Ac0H - CL, 16), 213 (M - 2Ac0H - anillo D, 15), 43 (100).
Método B:
Se disolvieron 112 mgde] diacetato de 24,24-difeni1-58-cola
20(22),23-dieno-3a,7a-dioi (46)(ver pág. 163) en 1 m1de ácido acético glacial.
Se enfrió 1a solución a 0°C y se agregaron 73 mg de trióxido de cromo. Se mantu
vo con agitación a esa temperatura una hora y luego 15 hs a temperatura ambien
te. E1 exceso de oxidante se e1iminó por agregado de 0,5 m1 de metano]. Se agre
garon 20 m1 de agua y se extrajo con éter etílico (2x20 m1). E1 extracto orgáni
co se 1avó, secó y por evaporación de] soivente se obtuvo un residuo que se pu
rificó por cromatografía en coiumnade silicageï (soïvente de elución: toïueno y
toïueno-acetato de etiïo 95:5). Se obtuvieron 22 mg (28%) de 1a cetona 47 , cuyas
caracteristicas espectroscópicas coincidían con ias de] mismocompuestosinteti
zado segün e] método A.
- Diacetato de 24,24-difeni1-56-c01-23-eno—3a,7a-di01(gg) y 3a-acetoxi
24,24-difeni1-58-c01-23-en-7a-01 (gg).
En un baïón de dos bocas se colocaron 7,5 g (47,7 mmoles) de bromobenceno,
1 g (41,6 mmoïes) de magnesio ( previamente desengrasado con éter etílico anhi
162
dro) y 13 ml de éter etílico anhidro. Se agitó la suspensión en atmósfera de ni
trógeno y una vez consumido el magnesio, se agregó lentamente una solución de
1,07 g (2,63 mmoles) de 3a,7a-dihidroxi-58-colan-24-oato de metilo (43) en 15 ml
de benceno anhidro, gota a gota desde una ampolla compensadora. Se calentó a re
flujo durante 3 hs y luego se volcó sobre una mezcla de 10 ml de agua y 7,5 ml
de ácido clorhídrico (c) a 0°C. Se separó la fase orgánica y la acuosa se extra
jo con éter etílico (2x30 ml). Los extractos orgánicos reunidos se lavaron con
agua hasta neutralidad y se arrastraron con vapor de agua para eliminar el bife
nilo. El residuo crudo de la destilación se extrajo con éter etílico; la solu
ción se secó y se evaporó el solvente. El análisis del residuo por ccd (sistema:
7) demostró la presencia de dos compuestos principales, diferentes ambosdel és
ter de partida. Este residuo se trató con 5 ml de ácido acético glacial y 2,5 ml
de anhídrido acético calentando a reflujo durante 2 hs. La solución se volcó so
bre 20 ml de agua y se filtró el precipitado marrón obtenido, que posteriormente
se purificó por cromatografía en columnade silicagel (solvente de elución: clo
ruro de metileno). Se aislaron asi 540 mg (37%) del compuesto 45 y 107 mg (7%)
del compuesto 44.
Datos espectroscópicos correspondientes al compuesto44:
IR (cm'l): 3050-3000 (C-H, aromático), 1730 (C=0), 1600 (C=C).
RMN-lH(60 MHz), ppm: 0,65 (s, 3H, CH3-18), 0,94 (s, 3H, CH3-19), 2,01 (s, 6H,
CH3C02-), 4,60 (b.a., 1H, H-3), 4,90 (b.a., 1H, H-7), 6,15 (m, lH,
163
CH-23), 7,05-7,50 (m, 10H, sistema aromático).
EM, m/z (%): 536 (M - ACOH, 20), 476 (M - 2Ac0H, 4), 461 (M - 2Ac0H - CH3, 3),
315 (M - AcOH - CL, 11), 255 (M - 2Ac0H - CL, 11), 193 (100).
Datos espectroscópicos correspondientes a1 compuesto 45 :
IR (cm-1): 3450 (0-H), 3050-3000 (C-H, aromático), 1730 (C=0), 1600 (C=C).
RMN-lH(60 MHz), ppm: 0,65 (s, 3H, CH3-18), 0,92 (s, 3H, CH3-19), 2,00 (s, 3H,
CH3C02-), 3,80 (b.a., 1H, H-7), 4,55 (b.a., lH, H-3), 6,10 (m, 1H,
CH-23), 7,05-7,50 (m, 10H, sistema aromático).
- Diacetato de 24,24-difeni1-58-c01a-20(22),23-dieno-3a,7a-dio] (gg).
A una solución de 200 mg (0,34 mmoles) de] compuesto 44 en 2,5 m1 de tetra
cïoruro de carbono, se agregaron 63 mg (0,36 mmoïes) de N-bromosuccinimida. La
mezcïa se calentó a refiujo durante 15 minutos irradiando con una Iámpara de luz
visibïe de 500 Watts. Se enfrió y se filtró 1a succinimida 1ibre. E1 fiïtrado se
11evó a sequedad por evaporación de] soivente y e] residuo obtenido se disoïvió
en 2,5 m] de acetona. Luego de agregar 105 mg de ioduro de potasio, se dejó 48
hs a temperatura ambiente. Se filtró 1a sa] obtenida y en e] fiïtrado se redujo
e] iodo con bisulfito de sodio. Se evaporó e] solvente y e] residuo se purificó
por cromatografía en coiumnade siiicagel (soivente de eiución: benceno-acetona,
10011). Se aislaron 135 mg (68%) de] compuesto 46 , puro por ccd (sistema: 3).
1)_IR (cm_ . 3050-3000 (C-H, aromático), 1735 (C=0), 1600 (C=C).
RMN-lH, ppm: 0,54 (s, 3H, CH3-18), 0,91 (s, 3H, CH3-19), 2,00 (s, 3H, CH3C02-),
164
2,02 (s, 3H, CHC0 -), 4,55 (b.a., lH, H-3), 4,90 (b.a., lH,3 2
H-7), 7,00-7,50 (m, 10H, sistema aromático).
A2 - DEGRADACION DEL 20-CETO PREGNANO AL ACIDO ETIANICO
- 3a,7a,21-Triacetoxi-58-pregnan-20-ona (52).
Se disolvieron 200 mg (0,48 mmoies) de 3a,7u-diacetoxi-SB-pregnan-20-ona
(47) en 8 m1 de benceno anhidro. A 1a solución se agregaron 400 mg (0,90 mmoies)
de tetraacetato de piomo, 0,36 m1 de metano] y 1,12 m1 de eterato de trifiuoruro
de boro y 1a mezcla se mantuvo a temperatura ambiente durante 24 hs. Se volcó
sobre 50 m1 de agua y se extrajo e] producto con c10ruro de metileno (3x30 m1).
E1 extracto orgánico se 1avó con agua hasta neutraiidad y se secó. Por evapora
ción de] soivente se obtuvo un jarabe que se recristalizó de etanol. Se aisiaron
162 mg (71%) de] compuesto 52 como un sóïido cristalino homogéneo por ccd (sis
tema: 4). P.f. 156-157°C.
IR (cm-1): 173o (c=o, éster), 1710 (c=o, cetona).
RMN-lH, ppm: 0,66 (s, 3H, CH3-18), 0,94 (s, 3H, CH3-19), 2,04 (s, 3H, CHC0 -),3 2
2,06 (s, 3H, CH3C02-), 2,18 (S, 3H,-CH20COCH3),4,55 (b.a., lH,
H-3), 4,60 (CAB, J=17 Hz, 2H, -CH20C0CH3),4,90 (b.a., lH, H-7).13
RMN- C: ver tabia 10, pág. 123.
EM, m/Z (%): 416 (M - ACOH, 1), 403 (M - ACOH - CH 37), 356 (M - 2ACOH, 4),39
315 (M - ACOH- CL, 6), 296 (M - 3Ac0H, 2), 255 (M - 2Ac0H - CL,
165
100), 213 (M - 2Ac0H - anillo D, 5).
—3a,7a-Dihidroxi-SB-androstan-17B-carboxilato de metilo (ii).
a) Etanólisis de los acetatos de C-3 y C-21:
Se disolvieron 150 mg del com
puesto 52 en 10 ml de etanol y se agregaron 0,2 ml de ácido sulfúrico (c). La
solución se calentó a reflujo durante 24 hs y se volcó sobre 30 ml de agua. Se
extrajo el producto con acetato de etilo (2x50 ml), el extracto orgánico se la
vó con agua hasta neutralidad y se secó. Por evaporación del solvente se obtu
vieron 118 mgde un residuo no cristalino.
b) Ruptura del enlace entre C-20 y C-21:
Se disolvieron 100 mg del jarabe
residual de la reacción anterior en 5 ml de metanol y se agregó una solución de
200 mg de periodato de sodio en 2 ml de agua. La mezcla se agitó a temperatura
ambiente observándose la paulatina aparición de un precipitado blanco cristali
no. Luego de 3 hs de reacción se volcó sobre agua (50 ml) y se extrajo con ace
tato de etilo (2x50 ml). El extracto orgánico se lavó con agua (2x30 ml), se se
có y finalmente se evaporó el solvente obteniéndose 91 mg de producto.
c) gaponificación del acetato de C-7:
Se calentaron a reflujo 90 mgdel ja
rabe obtenido según se indica en b) con 20 ml de solución de hidróxido de pota
sio 3%en etanol, durante 4 hs. Se volcó la solución final sobre 30 ml de agua
166
fria (0°C) y se acidificó 1a mezcla por agregado de ácido cïorhidrico (c), gota
a gota. Se extrajo e] producto con acetato de etilo (2x50 mi), se 1av6 e] ex
tracto con agua hasta neutralidad y se secó. Por evaporación de] solvente se
obtuvo un jarabe que se metiló con 1a técnica antes descripta. E1 producto me
tilado se purificó por recristaiización con benceno-hexano, aislándose 68 mgde]
compuesto 57 como un sólido bianco cristaïino, que presentaba una soïa mancha
en ccd (sistema: 14). P.f. 149-151°c (lit.101: 152-154°c).
E1 rendimiento de] proceso globai (etanóiisis, ruptura, saponificación) fue
62%.
IR (cm-1): 3400 (0—H), 1735 (c=o).
RMN-lH,ppm: 0,66 (s, 3H, CH3-18), 0,91 (s, 3H, CH3-19), 3,50 (b.a., 1H, H-3),
3,68 (s, 3H, -C02CH3), 3,90 (b.a., 1H, H-7).
RMN-13€: ver tabïa 10, pág. 123.
EM, m/z (Z): 350 (M, 1), 332 (M - H20, 12), 314 (M - 2H20, 100), 299 (M - 2H20
CH3, 85), 273 (M - HZO - CL, 24), 254 (M - 2H20 - HCOZCH 13), 2133’
(M - 2H20 - aniilo D, 57).
167
B -INVERSION DE LA CONFIGURACION DEL CARBONO 3
Bl - INVERSION POR OXIDACION Y REDUCCION
- 3-0xo-56-colan-24 oato de metiio (f2).
Se disolvieron 100 mg de litocolato de metiio (58) en 100 m1 de acetona con
5%de ácido acético. Se enfrió 1a solución a 0°C y se agregó e] reactivo de Jo
nes gota a gota y con agitación hasta persistencia de] coior marrón rojizo. La
mezcla se mantuvo 5 minutos a temperatura ambiente y iuego de diïuir con 50 m1 de
agua, se extrajo con cioruro de metiieno (2x40 m1). E1 extracto orgánico se 1avó
con agua (30 m1), con solución acuosa de bicarbonato de sodio 5% (30 m1) y fina]
mente con agua hasta neutraiidad. Por evaporación de] soïvente se obtuvo un re
siduo que se purificó por cromatografía en coiumna de siiicagei ( solvente de eiu
ción: cloruro de metiieno ) pues presentaba una pequeña impureza en e] origen. Se
obtuvieron 93,5 mg (94%) de 1a cetona 59 , que se recristaiizaron de etano].
P.f. 98-100°C.
IR (cm-1): 1740 (c=o, éster), 1710 (c=o, cetona).
RMN-lH, ppm: 0,70 (s, 3H, CH3-18), 0,93 (d, J=6Hz, 3H, CH —21), 1,04 (s, 3H,3
CH3-19), 3,69 (s, 3H, -C02CH3).
13RMN- C: ver tabïa 9 , pág.118.
168
- 3a-Acetoxi-58-c01an-24-oato de metilo (¿EDy 3B-acetoxi-58-c01an-24
oato de metiio (gg).
Se disoivieron 100 mg de] compuesto 59 en 80 m1 de ácido acético y se agre
garon 4 gotas de ácido ciorhidrico (c) y 30 mg de óxido de p1atino. La mezcla se
hidrogenó a temperatura ambiente y presión atmosférica durante 14 hs. Se filtró
y e] filtrado se voïcó sobre 50 m1 de agua. E1 producto se extrajo con acetato
de etilo (2x50 m1) y e] extracto orgánico se iavó con agua (40 mi), solución a
cuosa de bicarbonato de sodio 5% (2x40 m1) y agua hasta neutra1idad. Luego de
secario se evaporó e] solvente aislándose 108 mg (97%) de 1a mezcia epimérica de
60 y 61 . Esta mezcia, que resuitó homogéneapor ccd (sistema: 5) se recristaii
zó de etano]. P.f. 108-118°C.
IR (cm-1): 174o (c=o).
RMN-IH, ppm: 0,66 (s, CH3-18 de 60 y 61), 0,92 (d, J=6Hz, CH —21de 60 y 61 ),3
0,94 (s, CH3-19de 60), 0,98 (s, CH3-19de 61), 2,04 (s, CH3002-),
2,06 (s, CH3C02-), 3,68 (s, -COZCH3),4,70 (b.a., H-3 de 60), 5,40
(b.a., H-3 de 61).
BZ - INVERSION DIRECTA CON AZODICARBOXILATO DE ETILO
- 38-Formi10xi-7a-hidroxi-SB-c01an-24-oato de metilo (ÉED.
Se disolvieron 400 mg (0,99 mmoies) de quenodesoxicoïato de metiio (43) en
12 m1 de tetrahidrofurano anhidro y se agregaron 0,074 mi (1,96 mmoies) de ácido
169
fórmico y 524 mg de trifenilfosfina. Se agitó la mezcla a temperatura ambiente y
se adicionó, con un goteo lento, una solución de 0,45 ml de azodicarboxilato de
etilo en 2 ml de tetrahidrofurano anhidro. El sistema se mantuvo con agitación
durante 14 hs. Por evaporación del tetrahidrofurano a presión reducida se obtuvo
un jarabe que se purificó por cromatografía en columna de silicagel (solvente de
elución: tolueno). Se aislaron 96 mg (20%) de un producto homogéneopor ccd (sis
tema: 6) que por recristalización de etanol dio p.f. 107-108°C.
IR (cm-1): 3500 (O-H), 1735 (c=0).
RMN-lH, ppm: 0,66 (s, 3H, CH3-18), 0,93 (d, J=6Hz, 3H, CH3-21), 0,97 (s, 3H,
CH3-19), 3,64 (s, 3H, -COZCH3),3,80 (b.a., lH, H-7), 5,25 (b a.,
1H, H-3), 8,05 (s, 1H, HC02-).
B3 - INVERSION POR UNA REACCION DE SUSTITUCION
- 3a-Tosiloxi-SB-colan-24-oato de metilo (gg).
A 150 mg (0,38 mmoles) de litocolato de metilo (58) disueltos en 5 ml de pi
ridina anhidra, se agregó une solución de 320 mg (1,68 mmoles) de cloruro de
p-toluensulfonilo (recientemente recristalizado) en 2 ml de piridina anhidra. La
mezcla se mantuvo durante una noche a temperatura ambiente y luego se volcó sobre
una solución de 8 ml de ácido clorhídrico (c) en 10 ml de agua a 0°C. Se agitó du
rante 5 minutos y se extrajo con cloruro de metileno. El extracto orgánico se la
vó con agua hasta neutralidad y se secó. Por evaporación del solvente se obtuvo
170
un jarabe que se recristaïízó de metano]. Se aisïaron 177 mg (85%) de] compues
to 67 comoun producto cristaïíno y homogéneopor ccd (sistema: 2).
P.f. 103,5-105°C.
IR (cm‘l): 173o (c=o), 1600 (c=c).
RMN-lH, ppm: 0,62 (s, 3H, CH3-18), 0,88 (s, 3H, CH3-19), 0,89 (d, J=5Hz, 3H,
CH3-21), 2,44 (s, 3H, Cfls-C6H4-), 3,68 (s, 3H, -C02CH , 7,30-7,803)
(m, 4H, sistema aromático).
RMN-13C:ver tabla 9 , pág. 117.
- 3B-Formioni-SB-coïan-24-oato de metilo (gg).
Se disolvieron 100 mg de] compuesto 67 en 5 m1 de N,N-dimetí1formamida y 1a
mezcïa se calentó en un tubo tapado a 76-78°C durante 48 hs. Se volcó 1a soïución
en agua y se extrajo con cïoruro de metíleno (2x30 m1). E1 extracto orgánico se
1avó repetidas veces con agua (8x50m1) y se secó. Por evaporación de] solvente
se obtuvo un residuo que se purificó por cromatografía en pïaca preparativa (sol
vente de desarroïïo: toïueno-acetato de etiïo 96:4). Se aisïaron 57 mg (74%)de]
compuesto 68 , homogéneo por ccd (sistema: 9).
IR (cm‘l): 1735 (c=0).
RMN-lH, ppm: 0,66 (s, 3H, CH3-18), 0,91 (d, J=6Hz, 3H, CH3-21), 0,98 (s, 3H,
CH3-19), 3,68 (s, 3H, -COZCH3),5,15 (b.a., 1H, H-3), 8,09 (s, lH,
H002-).
RMN-13€: ver tabïa 9 , pág. 117.
171
C - DESHIDRATACION DEL HIDROXILO DE CARBONO 7 E ISOMERIZACION DEL DOBLE
ENLACE FORMADOA LA POSICION 8(14)
- 7a-Hidroxi-3a-meti1succinoxi-SB-co]an-24-oato de metilo (Z9).
A una solución de 260 mg (2,6 mmoies) de anhídrido succinico en 5 m1 de
piridina anhidra, se le agregaron 100 mg (0,25 mmoles) de quenodesoxicolato de
metilo (43). E1 sistema se caïentó a refiujo durante 45 minutos y se voïcó sobre
una solución de 5,5 m1 de ácido cïorhidrico (c) en 15 m1 de agua a 0°C, agi
tando y macerando periódicamente durante 45 minutos. Se decantó 1a solución y
se disolvió e] sóiido en cioroformo. E1 extracto orgánico se 1avó con agua has
ta neutraïidad y se secó. Por evaporación de] soivente se obtuvo un jarabe que
se metiló con 1a técnica antes descripta. E1 producto metiïado se recristaïizó
de metano] obteniéndose 93 mg (73%) de] compuesto 70 como un sólido b1anco cris
talino , homogéneopor ccd (sistema: 7). P.f. 108-110°C
IR (cm-1): 3500 (0-H), 1735 (c=o).
RMN-lH, ppm: 0,65 (s, 3H, CH3-18), 0,90 (s, 3H, CH —19), 2,46 (s, 4H,3
-02CCHZCH2C02-), 3,62 (s, 3H, -C02CH3), 3,65 (s, 3H, -COZCH3),
3,85 (b.a., lH, H-7), 4,60 (b.a., 1H, H-3).
EM, m/z (%): 505 (M - CH3, 1), 502 (M - H20, 1), 388 (M - C H O5 8 20), 373 (M 4,
C5H804 - CH3, 100), 370 (M - C5H 0 - HZO, 17), 346 (M - H8 4 0 '2
anillo D, 3), 255 (M - C H 0 - H5 8 4 O - CL, 16).2
172
3a-Metilsuccinoxi-58-c01—7-en-24-oato de metilo (gg) y 3a-metilsuccinoxi
58-c01-8(14)-en-24-0ato de metilo (gg).
Método A:
Se disoivieron 150 mg (0,29 mmoies) de] compuesto 70 en 5 m1 de
acetona anhidra (secada sobre filtros moiecuïares) y se agregaron 210 mg (1,55
mmoies) de cioruro de zinc anhidro (secado por caicinación inmediatamente antes
de ser usado). Una vez mezclados los reactivos, se destiió parte de 1a acetona
hasta obtener un jarabe, se repuso nueva acetona anhidra en e] baión y se con
tinuó con 1a destiiación. La secuencia de destilaciones y agregados de acetona
a] jarabe se repitió tantas veces comofue necesario hasta comprobar por ccd
(sistema: 5) 1a compïeta desaparición de 70 (para 150 mg de esteroide se nece
sitan aproximadamentetres destiiaciones). A1jarabe fina], de coior amarilïo
ciaro, se agregaron 4 m1 de solución acuosa de ácido ciorhidrico 10%y se extra
jo e] producto con cioruro de metiieno (2x50 m1). Se 1avó e] extracto orgánico
con agua hasta neutralidad y se secó. Por evaporación de] soivente se obtuvo un
residuo que se recristaiizó de metano], aislándose 115 mg (79%) de una mezcia
de los compuestos 71 y 72 que se comportó como homogénea por ccd (sistema: 5).
P.f. 86-90°C.
IR (cm'l): 1735 (c=o).
RMN-lH, ppm: 0,54 (s, CH3-18 de 71), 0,82 (s, CH3-19 de 72), 0,84 (s, CH3-18 de
72), 0,93 (d, J=6Hz, 3H, CH3-21), 0,94 (s, CH-19 de 71), 2,57 (S,3
-02CCH2CH2C02-),3,63 (S, -C02CH3), 3,65 (s, -C02CH3), 4,70 (b.a.,
173
H-3), 5,05 (b.a., H-7).
Los isómeros 71 y 72 no se separaron por ccd con varios sistemas de solven
tes ensayados.
Método B:
Se disolvieron 100 mgde ácido 7a-hidroxi-3a-succinoxi-56-colánico
(70) en 0,5 ml de ácido acético glacial y a la solución incolora se le agregaron
1,5 ml de ácido clorhídrico (c). La suspensión blanca resultante se agitó a tem
peratura ambiente durante 3 hs y se volcó sobre 25 ml de agua. Se extrajo con
acetato de etilo (2x50 ml), y el extracto orgánico se lavó con agua (3x50 ml) y
se secó. Se evaporó el solvente obteniéndose un residuo en el cual se observó
por ccd (sistema: 8) que la mayor parte del alcohol no habia reaccionado.
- 3a-Metilsuccinoxi-SB-col-8(14)-en-24-oato de metilo (gg).
a) Preparación del reactivo: se agregó ácido sulfúrico (c) gota a gota so
bre bisulfito de sodio. El dióxido de azufre gaseoso desprendido se secó por pa
saje sobre ácido sulfúrico (c) y se recogió en un tubo de vidrio refrigerado a
—60°C.Cuando el tubo contenía aproximadamente 3 ml de liquido, se lo cerró a la
llama.
b) Desarrollo de la reacción: en un tubo de vidrio Pyrex de 30 cm de largo,
0,9 cm de diámetro interno y 0,1 cm de espesor, se colocaron 100 mg de la mezcla
aproximadamente equimolecular de las olefinas 71 y 72 , que se obtuvo como pro
ducto de la reacción de deshidratación con cloruro de zinc (pág. 172). Se enfrió
174
a -60°C el tubo cerrado conteniendo el dióxido de azufre liquido y se abrió. Se
volcó cuidadosamente el dióxido de azufre sobre la mezcla de olefinas contenida
en el otro tubo, enfriado también a -60°C. Se cerró el último tubo a la llama,
se lo colocó en un horno y se elevó la temperatura del mismo hasta 100°C en un
lapso de 40 minutos. Despues de 24 hs de calentamiento, se abrió el tubo a -60°C
trasvasándose la solución final de color marrón a un balón a 25°C donde rápida
mente se evaporó el dióxido de azufre. Se lavó el tubo con cloruro de metileno
y se juntaron las soluciones de lavado en el balón, evaporándose posteriormente
el solvente. El jarabe residual se purificó por cromatografía en columnade si
licagel (solvente de elución: cloruro de metileno). Se obtuvieron 75 mg (75%)
del compuesto 72 puro,que luego de una recristalización de etanol tuvo p.f. 128
130°C.
IR (cm'l): 1735 (c=0).
RMN-lH, ppm: 0,82 (s, 3H, CH3-19), 0,85 (s, 3H, CH3-18), 0,94 (d, J=6Hz, 3H,
CH3-21), 2,58 (s, 4H, -02CCH2CH2C02-), 3,62 (s, 3H, -C02CH , 3,643)
(s, 3H, -C02CH3), 4,75 (b.a., 1H, H-3).
EM, m/z (%): 502 (M, 18), 387 (M - CL, 53), 370 (M - C5H804, 100), 355 (M - CL
32, 36), 255 (M - C5H804 - CL, 85).
175
D - OBTENCION DEL 20-CETO PREGNANO A PARTIR DEL ACIDO ETIANICO
- Anhídrido mixto acético y 38-acetoxiandrost-5-en-17B-carboxí1ico (ZZ).
método A:
Se suspendieron 50 mg de ácido 3B-hidroxiandrost-S-en-17B-carboxí
íico (73) en 5 m1 de anhídrido acético y se agregaron 2 gotas de ácido cíorhí
drico (c). Se caientó a reflujo durante una hora y se voicó sobre 50 m1 de agua.
Luego de agitar durante 10 minutos, se extrajo e] producto con cíoruro de meti
]eno (2x40 m1). E1 extracto orgánico se 1avó con agua hasta neutraíidad, se se
có y posteriormente se evaporó e] soívente. E1 residuo se recristaïizó de ben
ceno-hexano, aislándose 58 mg (92%) de] compuesto 77 , que resultó homogéneo por
ccd (sistema: 12). P.f. 253-254°C.
IR (cm'l): 1805 y 1750 (c=o, anhídrido), 1735 (c=o, éster).
EM, m/z (%): 342 (M - AcOH, 99), 327 (M - AcOH - CH3, 22), 299 (M - AcOH - CH3C0,
17), 255 (M - AcOH- CL, 17), 43 (100).
Método B:
Se disoivieron 50 mgde ácido 3B-hidroxiandrost-S-en-17B-carboxí]i
co (73) en 0,5 mi de piridina anhidra y se agregaron 0,5 m1 de anhídrido acético.
La mezcla se mantuvo a temperatura ambiente durante 24 hs y se voícó sobre 10 m1
de solución acuosa de ácido clorhídrico 10%. Luego de 10 minutos de agitación, se
extrajo con cïoruro de metileno (2x40 m1). E1 extracto orgánico se lavó con agua
hasta neutralidad, se secó y se evaporó e] soívente. E1 anáiisis por ccd (sistema
176
12) indicó más de un 50%de conversión de] ácido de partida (73) en e] anhídrido
mixto (77).
- Acido 3B-acetoxiandrost-5-en-17B-carboxi1ico (gg)
Se disoivieron 100 mgde ácido 3B-hidroxiandrost-S-en-17B-carboxi1ico (73)
en 10 m1 de ácido acético a 60°C. La soiución se caïentó a refiujo durante 72 hs
y se volcó sobre agua (50 m1). E1 producto se extrajo con cloruro de metiieno
(2x50 m1) y e] extracto orgánico se 1av6 con agua hasta neutraiidad y se secó.
Por evaporación de] solvente se obtuvieron 95 mg (84%) de] compuesto 74 que re
suitó puro por ccd (sistema: 12). Se recristaiizó de etano] dando un p.f. 248
250°C.
IR (cm-1): 3300-2400 (O-H, ácido), 1735 (C=0, éster), 1710 (C=0, ácido).
RMN-lH, ppm: 0,76 (s, 3H, CH3-18), 1,04 (s, 3H, CH3-19), 2,05 (s, 3H, CH3COZ-),
4,68 (b.a., 1H, H-3), 5,45 (m, lH, H-6), 9,90 (b.a., lH, -COZH).
RMN-13c (01300 + MeOD), ppm: 38,0 (c—1), 27,7 (c—2), 74,0 (c—3), 38,0 (c—4),
139,5 (0-5), 122,1 (C-6), 31,8 (c—7o C-8), 32,0 (c—8 o c—7), 49,9
(c-9), 36,9 (C-lO), 20,9 (0-11), 36,6 (c-12), 43,8 (c—13), 56,1
(c—14), 24,5 (c—15), 23,5 (C-16), 55,0 (c—17), 13,1 (C-18), 19,2
(c—19), 177,3 (0-20), 21,3 (983002-), 170,7 (083902—).
EM, m/z (z): 300 (M —Ac0H, 100), 285 (M —AcOH — CH3, 31), 213 (M —AcOH - ani
110 D, 4).
177
- Cioruro de 3B-acetoxiandrost-S-en-17B-carboxi1iio (Zé).
Se suspendieron 180 mg de] compuesto 74 en 2 m1 de benceno anhidro y seagre
gó una soïución de 1 m1 de cloruro de oxalilo en 2 m1 de benceno anhidro. Se dejó
tapado a temperatura ambiente y en reposo durante 2 hs. Se destiió a presión re
ducida hasta sequedad y se compietó e] secado empieando aito vacio.
E1 compuestose utilizó sin posterior purificación.
IR (cm'l): 1795 (C=0, cioruro de ácido), 1735 (C=0, éster).
RMN-lH, ppm: 0,74 (s, 3H, CH3-18), 0,97 (s, 3H, CH -19), 1,97 (s, 3H, CHC02-),3 3
2,81 (t, J=9Hz, 1H, H-17), 4,55 (b.a., 1H, H-3), 5,30 (m, lH, H-6).
EM, m/Z (%): 318 (M - ACOH, 100), 303 (M - ACOH - CH 21), 267 (M - ACOH - CH 3’ 3
CIH, 9), 255 (M - ACOH- CL, 10).
- 38-Acetoxipregn-S-en-ZO-ona (ai).
Método A:
a) Preparación de] ioduro de metiimagnesio: en un tubo de 20 cm de
iargo y 10 mmde diámetro con un esmeri] macho i 14/26, se colocaron 15 mg (0,63
mmoies) de magnesio (previamente desengrasado con éter etílico) y una barrita mag
nética. Todo e] conjunto se secó en estufa a 110°C durante una hora. Se tapó e]
tubo con un tapón de iátex y se hizo vacio en su interior mediante una aguja que
atravesaba e] tapón. Una vez retirada 1a aguja, se inyectó 1 m1de éter etiiico
anhidro y 1uego 33 y] (0,53 mmoies) de ioduro de metilo ( secado sobre pentóxido
de fósforo durante 24 hs). Se agitó durante 24 hs a temperatura ambiente obte
178
niéndose finalmente una solución turbia de color gris claro.
b) Preparación del ioduro manganoso 10¿z se colocaron en un tubo
550 mg de manganeso en polvo y 2,54 g de iodo. Se tapó el balón con un tapón de
látex y se hizo vacio en su interior mediante una aguja. Se inyectaron 10 ml de
éter etílico anhidro y se mantuvo a temperatura ambiente durante 15 hs. Después
de ese periodo se observó la desaparición del color metálico del manganesoy la
formación de un sólido de color rosado. Se inyectó nitrógeno y se extrajo el
éter etílico con una jeringa. Se hizo vacio en el interior del balón y se guar
dó en la oscuridad.
c) Preparación del ioduro de metilmanganeso: se colocaron 170 mg
(0,55 mmoles) de ioduro manganoso y una barrita magnética en un balón que se ta
pó con un tapón de látex. Se hizo vacio mediante una aguja y se colocaron 2 ml
de éter etílico anhidro. Se inyectó el reactivo de Grignard preparado según se
indica en a) y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 2 hs. Se diluyó
el reactivo formado con 2 ml de éter etílico anhidro.
d) Desarrollo de la reacción: a la solución recién preparada de
ioduro de metilmanganeso se agregaron 190 mg (0,50 mmoles) de cloruro de 3B-ace
toxiandrost-S-en-17B-carboxililo (75) disuelto en 2 ml de benceno anhidro. La
mezcla se dejó a temperatura ambiente durante 18 hs y luego se volcó sobre 20 ml
de solución acuosa de ácido clorhídrico (4%). El producto se extrajo con cloro
formo (2x30 ml) y el extracto se lavó con agua y se secó.
El residuo obtenido al evaporarse el solvente mostró por ccd (sistema: 13)
179
una muy baja conversión en e] compuesto buscado.
Método B:
Se empleó e] equipo que se indica en 1a figura lb de 1a página 74.
a) Preparación de] ioduro de metiimagnesio: se coiocaron 15 mg
(0,63 mmoies) de magnesio (previamente desengrasado con éter etiiico) en e] fon
do de un tubo kitasato de aproximadamente 10 m1 de capacidad con un esmeri] I 10/
30. Se agregó una barrita magnética en e] interior de] tubo y se secó e] conjun
to en una estufa a 110°C durante una hora.
A] mismo tratamiento de secado se sometió un tubo de vidrio de 20 cm de 1ar
go y 10 mmde diámetro con esmeri] ï 14/26 (simiiar a los tubos en Ios que viene
envasado e] ioduro de metiio radiactivo), un adaptador de esmeri] ï 14/26 a i 10/
30 y una barrita magnética. Una vez que se compietó e] secado se siiiconaron los
esmeriles y se armó e] equipo como se indica en 1a figura 1b . En este equipo e]
diámetro de 1a barrita magnética superior es 1igeramente mayor que e] diámetro
interno de] esmeri] I 10/30. Ademáse] magnesio queda adentro de] tubo kitasato.
Se hizo vacio en e] interior de] equipo mediante una aguja que atravesaba
e] tapón de Ïátex de 1a salida iaterai de] tubo kitasato. Una vez retirada 1a a
guja se inyectó a través de] mismo tapón una solución de 35 u] (0,56 mmoies) de
ioduro de metiio (secado sobre pentóxido de fósforo durante 24 hs) disuelto en
1 m1de éter etílico anhidro (destiiado sobre sodio e hidruro de iitio y a1umi
nio inmediatamente antes de ser usado).
La mezcla se agitó durante una hora a temperatura ambiente.
180
b) Preparación de] dimetiicadmio: en un ambiente de nitrógeno an
hidro, se destapó e] tubo kitasato y se colocó en 1a boca de] mismo un embudo
pequeño con esmeri] í 10/30. Se voicaron dentro de] tubo 220 mg (1,21 mmoies)
de cioruro de cadmio finamente puiverizado y secado en estufa a 110°C durante
24 hs. Se tapó ei tubo con un tapón con esmeri] I 10/30 siiiconado y se agitó
2 hs a temperatura ambiente.
c) Desarroiio de 1a reacción: se disoivieron 190 mg (0,50 mmoies)
de cioruro de 3B-acetoxiandrost-S-en-17B-carboxi1iio (75) en 2 m1 de benceno ag
hidro. La solución se inyectó en e] tubo kitasato a través de] tapón de látex
de su saiida Iaterai. La suspensión resuitante se agitó 18 hs a temperatura am
biente y 1uego se caientó cuidadosamente a 50°C durante una hora.
Se sacó ei tapón de vidrio y se agregaron,gota a gota y enfriando, 0,5 m1
de ácido ciorhidrico (c) y 1uego 2 m1 de agua.
Se extrajo e] producto con cioruro de metiieno (2x20 m1) y se 1avó 1a fase
orgánica con agua hasta neutralidad, se secó y se evaporó a sequedad. E1 resi
duo se purificó por cromatografía en columna de silicagei eiuyendo con ciorofor
mo. Se obtuvieron 70 mg (39%) del compuesto 76, homogéneo por ccd (sistema: 13).
Recristaiizado de etano1 dio p.f. 147-149°C.
IR (cm'l): 1735 (c=o, éster), 1705 (c=o, cetona), 1240 (c-o).
RMN-IH, ppm: 0,64 (s, 3H, CH3-18), 1,03 (s, 3H, CH3-19), 2,03 (s, 3H, CH3C02-),
2,14 (s, 3H, CH3-21), 4,60 (b.a., 1H, H-3), 5,42 (m, 1H, H-6).
EM, m/z (%): 298 (M - ACOH, 100), 283 (M - ACOH - CH 30).3’
181
E - SINTESIS TOTALDE I21-14C173B-HIDR0XI-58-PREGN-8(14)—EN-20-0NA
E1 - DEGRADACION DE LA CADENA LATERAL DEL ACIDO BILIAR AL ACIDO ETIANICO
Los compuestos correspondientes a esta primera etapa de 1a sintesis son 1os
que se indican a continuación y su preparación ya se detaiió previamente.
- Acido 3a,7a-diacetoxi-SB-colan-24-oico (48): método D, pág.155.
Diacetato de 24-nor-SB-c01-22-eno-3a,7a-di01 (49): pág.155.
24-Nor-58-c01-20(22)-eno-3a,7a-d101 (50): pág.157.
Diacetato de 24-nor-SB-c01-20(22)-eno-3a,7a-dio] (51): pág.159.
- 3a,7a-Diacetoxi-SB-pregnan-20-ona (47): método A, pág.160.
3a,7a,21-Triacetoxi-58-pregnan-20-ona (52): pág.164.
3a,7a-Dihidroxi-58-androstán-17B-carboxiIato de metilo (57): pág.165.
E2 - DESHIDRATACION DEL HIDROXILO DE CARBONO 7 E ISOMERIZACION DEL DOBLE
ENLACE FORMADOA LA POSICION 8(14)
- 7a-Hidroxi-3a-meti1succinoxi-53-androstan-17B-carboxi1ato de metiïo (gg).
Se disoivieron 220 mg de anhídrido succinico en 5 m1 de piridina anhidra y
a 1a soiución se agregaron 100 mg de 3a,7a-dihidroxi-SB-androstan-17B-carboxi13
to de metiïo (57). La mezcia se caientó a refiujo durante una hora y se volcó
sobre 20 m1 de soiución acuosa de ácido ciorhidrico 15%. Luego de 10 minutos de
agitación a temperatura ambiente, se extrajo e] producto con acetato de etiio
(3x50 m1). La fase orgánica se 1avó con agua hasta neutraiidad y se secó. Por
182
evaporación de] soivente se obtuvo un residuo que se suspendió en metano] y se
metiió con diazometano según 1a técnica antes descripta. E1 jarabe fina] se pu
rificó por cromatografía en coiumnade siiicagei (soivente de e1ución: ciorofog
mo y cioroformo-etanoi 95:5). Se obtuvieron 99 mg (75%) de] compuesto 78, cris
talino y homogéneopor ccd (sistema: 7). Se reCristaiizó de etano] resuitando
ser sumamentehigroscópico. P.f. 118-119°C.
IR (cm-1): 3400 (O-H), 1735 (c=o).
RMN-lH, ppm: 0,66 (s, 3H, CH3-18), 0,93 (s, 3H, CH3-19), 2,62 (s, 4H,
-02CCH2CH2C02-), 3,70 (s, 3H, -C02CH3), 3,72 (s, 3H, -C02CH3),
3,88 (b.a., lH, H-7), 4,60 (b.a., 1H, H-3).
RMN-13€: ver tabia 10, pág 124.
EM, m/z (%): 332 (M - C5H804, 15), 314 (M - C5H804 - H20, 100), 300 (M - C5H804
CH30H, 7), 299 (M - C5H804 - H20 - CH3, 82), 255 (M - C5H804
HZO - CL, 33), 254 (M - C5H804 - HZO - HCO CH 6).2 3’
- 3u-Meti1succinoxi-SB-androst-8(14)-en-17B-carboxi1ato de metiio (gg) x
3a-meti1succinoxi-SB-androst-7-en-17B-carboxi1ato de metiio (¿2).
Se disoivieron 100 mg de] compuesto 78 en 10 m1 de acetona anhidra (secada
sobre filtros moieculares). Se agregaron 400 mgde cioruro de zinc anhidro (fun
dido justo antes de ser usado) y 1a soiución resuitante se destiló hasta obtener
un jarabe (sin Iievar a sequedad). Se repusieron 10 m1 de acetona anhidra y se
volvió a destilar. E1 proceso se repitió 3 veces a1 cabo de ias cuaies, después
183
de reponer 10 m1 de acetona, se agregaron 400 mg de cioruro de zinc anhidro. La
secuencia de agregado de acetona y destiiación se repitió 5 veces más. E1 jara
be amariiio fina] se trató con 10 m1 de soiución acuosa de ácido ciorhidrico
15%y e] producto se extrajo con acetato de etiio (2x50 m1). E1 extracto orgá
nico se 1avó con agua hasta neutralidad y iuego de secario se destiió e] soiveg
te. E1 residuo se suspendió en metano] y se metiió con diazometano según 1a tég
nica descripta previamente. E1 esteroide metiiado se purificó por cromatografía
en coiumnade siiicagei (solvente de eiución: toiueno-acetato de etiio 9:1). Se
aislaron 77 mg (80%) de una mezcia de ias oiefinas 79 y 80 que no se pudo sepa
rar por ccd.
Es conveniente seguir e] desarroilo de 1a reacción por ccd pues e] número
de secuencias de agregado de acetona y destiiación puede variar.
IR (cm-1): 1735 (c=o).
RMN-lH, ppm: 0,54 (s, CH3-18 de 79), 0,82 (s, CH3-19 de 80), 0,84 (s, CH3-18 de
80). 0,93 (S, CH3-19 de 79), 2,60 (s, -02CCH2CH2C02-),3,69 (s,
-C02CH3), 3,71 (s, -C02CH3),4,60 (b.a., H-3), 5,10 (b.a., H-7).
- 3a-Meti1succinoxi-SB-androst-8(14)-en-17B-carboxi1ato de metilo (gg).
a) Separación de 1a mezcia de oiefinas 79 v 80.
La mezcia de ias oiefinas 79 y 80 obtenida como resuitado de 1a reacción
de deshidratación con cioruro de zinc se separó por cromatografía iiquida de a1
ta resolución utiiizando comosolvente metanoi-agua (9:1). Se empieó un fiujo de
184
3 mi/min y una presión de 16 Kpsi. Se coiectó e] compuesto 79 a ios 12,5 minu
tos y e] compuesto 80 a ios 14 minutos.
b) Isomerización dei compuesto 79.
Se coiocaron 50 mg de] compuesto 79 en un tubo de vidrio Pyrex de 30 cm de
1argo y 0,1 cm de espesor enfriado a -10°C. Sobre e] sóiido se voïcaron 2 m1 de
dióxido de azufre a esa misma temperatura, preparado segün se indica en 1a pági
na 173. E1 tubo se cerró y se coiocó en un horno a temperatura ambiente. Luego
de 10 minutos se calentó e] horno ientamente hasta 100°C y se 10 mantuvo asi du
rante 36 hs. Se enfrió 1entamente 1a mezcia hasta -10°C, se abrió e] tubo y se
voicó su contenido en un baión donde rápidamente se evaporó e] exceso de reacti
vo. Se 1av6 e] tubo con cioroformo y las soiuciones de 1avado se juntaron en ei
baión. Se evaporó e] soivente y e] jarabe residuai se purificó por cromatogra
fia en coiumna de siiicagei (soivente de eiución: toiueno—acetato de etiio 9:1).
Se obtuvieron 34 mg (68%) de 1a oiefina 80 que resuitó homogénea por ccd (sis
tema: 10).
Las caracteristicas espectroscópicas y e] punto de fusión de los productos ais
lados por ambos procedimientos eran ios mismos.
1IR (cm’ ): 1735 (c=o).
RMN-lH, ppm: 0,82 (s, 3H, CH3-19), 0,84 (s, 3H, CH3-19), 2,62 (s, 4H,
-02CCH2CH2C02-),3,69 (s, 3H, -c02cn3), 3,71 (s, 3H, -c020H3),
4,75 (b a., 1H, H-3).
185
RMN-13€:ver tabia 10, pág.124.
EM, m/Z (%): 446 (M, 3), 415 (M - CH30H, 3), 314 (M - C5H804, 96), 299 (M
C5H804 - CH3, 81), 255 (M - C5H804 - CL, 16), 57 (100).
- 3a-Hidroxi-58-androst-8(14)-en-17B-carboxilato de metiio (g¿).
Una mezcia de 100 mg de] compuesto 80 y 50 m1 de soiución de hidróxido de
potasio en etano] (2%) se caientó a refiujo durante 6 hs. Luego se voicó sobre
20 m1 de soiución acuosa de ácido cïorhidrico 20%y se extrajo e] producto con
acetato de etiio (3x50 m1). E1 extracto orgánico se 1av6 con agua hasta neutra
lidad y se secó. Por evaporación de] soivente se aisió un residuo que se suspen
dió en 10 m1 de metano] y se metiió con diazometano segün 1a técnica descripta.
E1 sólido resuitante se purificó por ccd preparativa de siiicagei (solvente de
desarroiio: cioruro de metiieno-metanoi 98:2). Se obtuvieron 65 mg (87%) de]
compuesto 81, que resuitó homogéneopor ccd (sistema: 11). Por recristaiización
de metano] dio p.f. 126-127°C.
IR (cm'l): 3400 (O-H), 1735 (c=o).
RMN-IH,ppm: 0,81 (s, 3H, CH3-19), 0,83 (s, 3H, CH3-18), 3,60 (b.a., 1H, H-3),
3,69(S,3H,13
RMN- C: ver tabia 10, pág. 124.
EM, m/z (%): 332 (M, 20), 314 (M - H20, 100), 299 (M - H 0 - CH 91), 255 (M 2 3’
HZO - CL. 10), 254 (M - H20 - HCOZCH 7).39
186
E3 - INVERSION DE LA CONFIGURACION DEL CARBONO 3.
- 3a-Tosi10xi-58—androst-8(14)-en-17B-carboxi1ato de metiio (gg).
Se disoivieron 50 mg de] compuesto 81 en 5 m1 de piridina anhidra y se agrg
garon 110 mgde cioruro de p-toluensuifoni1o (recientemente recristaïizado). La
soiución se mantuvoatemperatura ambiente durante 24 hs y 1uego se voïcó sobre
15 m1 de so]uci6n acuosa de ácido ciorhidrico 18%. E1 producto se extrajo con
cioroformo y 1a fase ciorofórmica se iavó con agua hasta neutralidad, se secó y
se destiió e] so1vente. E1 residuo se purificó por ccd preparativa (so1vente de
desarroiio: cioruro de metiieno). Se obtuvieron 54 mg (74%) de] compuesto 82
con p.f. 56-58°C
IR (cm-1): 173o (c=0), 1600 (c=c).
RMN-IH, ppm: 0,78 (s, 3H, CH3-19), 0,83 (s, 3H, CH3-18), 2,46 (s, 3H, Cfi3-CGH4-),
3,69 (s, 3H, -COZCH3),4,50 (b.a., 1H, H-3), 7,25-7,85 (m, 4H, sis
tema aromático).
13RMN- C: ver tabia 10, pág. 124.
EM, m/Z (%): 314 (M - TSOH, 2), 43 (100).
- 3B-Formiioxi-SB-androst-8(14)-en-17B-carboxi1ato de metiio (gg).
Se disoivieron 50 mg de] compuesto 82 en 2,5 m1 de N,N-dimeti1formamida.
La soiución se mantuvo en un ba16n tapado a 75-76°C durante 50 hs. Se agregaron
25 m1 de agua y se extrajo e] producto con cloruro de metileno (2x50 m1). E1 e5
tracto orgánico se 1avó repetidas veces con agua (10x20 m1) y se secó. Por eva
187
poración de] so1vente se obtuvo un jarabe que se recristaïizó de metano]. Se ai;
1aron 23,3 mg (63%) de] compuesto 83 como un só]ido cristaïino, homogéneo por
ccd (sistema: 5) de p.f. 150-152°C.
IR (cm'l): 173o (C=0).
RMN-lH, ppm: 0,86 (s, 6H, CH3-18 y CH3-19), 3,69 (s, 3H, -602CH3), 5,25 (b.a.,
1H, H-3), 8,07 (s, 1H, HC02-).
13 . ,RMN- C. ver tabïa 10, pag. 125.
EM, m/z (%): 360 (M, 82), 345 (M - CH3, 27), 314 (M - HCOZH, 73), 299 (M - CH 3
HCOZH, 46), 255 (M - HC02H - CL, 11), 147 (100).
E4 - OBTENCION DEL 20-CETO PREGNANO A PARTIR DEL ACIDO ETIANICO
- Acido 3B-hidroxi-SB—androst-8(14)—en-17B-carboxï1ico (gg).
Se disoïvíeron 20 mg de] compuesto 83 en 20 m1 de so1uci6n de hidróxido de
potasio en etano] (2%). La soïución se caïentó a refïujo durante 2 hs y 1uego
se vo1có sobre 10 m1 de so]ución acuosa de ácido cïorhídríco 20%. E1 producto
se extrajo con acetato de eti1o (3x20 m1) y e] extracto orgánico se 1av6 con
agua hasta neutra1idad y se secó. Después de evaporar e] soïvente se aisïaron
17 mg (96%) de] compuesto 84 como un sólido cristaïino que se usó sin purifica
ción previa.
-1IR (cm ): 3500-2700 (O-H, ácido), 3300 (O-H, a1coh01), 1715 (C=0).
188
- Acido 3B-acetoxi-SB-androst-8(14)-en-17B-carboxi1ico (gg).
Se aceti1aron 16,5 mg de] compuesto 84 con 1a misma técnica indicada en 1a
página 176 para e] ácido 38-hidroxiandrost-S-en-17B-carboxi1ico (73). Se aisla
ron 15,5 mg (83%) de] compuesto 85, homogéneo por ccd (sistema: 1), que se usó
sin purificar.
1IR (cm- ): 3400-2600 (0-H, ácido), 1730 (C=0, éster), 1715 (C=0, ácido).
RMN-lH,ppm: 0,83 (s, 3H, CH3-18), 0,85 (s, 3H, CH3-19), 2,06 (s, 3H, cn3c02-),
5,10 (b.a., lH, H-3).
- 121-14CI 3B-Acetoxi-58-pregn-8(14)-en-20-ona (g_).
a) Obtención de] cioruro de ácido.
Se suspendieron 15 mg de] ácido 85 en 0,5 m1 de benceno anhidro y se agre
garon 0,5 m1 de cïoruro de oxaiilo. La solución resultante se dejó tapada y a
temperatura ambiente durante 2 hs. Se evaporó e] so]vente y se usó sin previa
purificación.
1)IR (cm' : 1790 (C=0, cïoruro de ácido), 1730 (C=0, éster).
b) Obtención de] 20-ceto pregnano.
Se empleó e] método B de 1a página 179 con 1as siguientes modificaciones.
E1 equipo empieado es e] que se indica en 1a figura 1a, con un tubo invertido
que contenía en su interior (protegido por un cierre de vidrio) 1 mCi de |14CI
ioduro de metilo de actividad especifica 58 mCi/mmo].
189
bl) Preparación de] ioduro de meti1magnesio radiactivo.
Se usaron 2 mg (0,08 mmo1es) de magnesio.
Una vez armado e] equipo y hecho vacio en su interior, se inyectó una so
1ución de 1,7u1 (0,027 mmoies) de ioduro de metiio anhidro (secado sobre pen
tóxido de fósforo) en 0,3 m1 de éter anhidro (secado sobre sodio e hidruro de
1itio y aiuminio y usado inmediatamente después de su destiiación).
La mezcia se agitó durante 45 minutos (1a reacción demoró aproximadamente
20 minutos en comenzar) y 1uego se enfrió sumergiendo e] fondo de] tubo kitasa
to en aire 1iquido. Con ayuda de un imán externo, se movió 1a barrita magnética
ubicada en 1a parte superior de] equipo, goipeando ei cierre de vidrio hasta
romperlo. Mientras se mantenia congeiado e] fondo de] tubo kitasato, se fiameó
con una micr011ama e] tubo invertido durante 15 minutos para faci1itar e] con
tacto de 0,017 mmo1esde ioduro de metilo radiactivo con e] medio de reacción.
Se retiró e] baño de aire 1iquido y se dejó que e] sistema aïcanzara 1a tempe
ratura ambiente. Se continuó con 1a agitación durante una hora.
b2) Preparación de] dimetiicadmio radiactivo.
Se repitió e] procedimiento empïeado en e] método B parte b (pág.180 ) pero
con 18 mg (0,1 mmoi) de cioruro de cadmio.
b3) Reacción de] dimeti1cadmio radiactivo con e] cioruro de ácido.
Se ap1icó e] método B parte c (pág.180 ) pero usando 15 mg (0,04 mmoïes)
dei cioruro de 3B-acetoxi-SB-androst-8(14)-en-17B-carboxi1iio en 1ugar de] com
190
puesto 75.
E1 producto fina] obtenido se purificó por ccd preparativa usando siiica
ge] comoadsorbente (soivente de desarroiio: cioroformo-hexano 98:2). Se aisia
ron 5,05 mg (36%) de] compuesto 86 como un sóiido cristaïino homogéneo por ccd
(sistemas: 4, 5, 13 y 15).
Actividad especifica de] producto crudo: 1,97x107 dpm/mg.
Actividad especifica de] producto purificado: 2,25x107 dpm/mgo 8,05x109 dpm/
mmo] o 3,66 mCi/mmo].
IR (cm'1 ): 1735 (C=0, éster), 1710 (C=0, cetona).
RMN-lH, ppm: 0,80 (S, 3H, CH3-18), 0,86 (S, 3H, CH3-19), 2,04 (S, 3H, CH3C02-),
2,12 (s, 3H, CH3-21), 5,10 (b.a., 1H, H-3).
- 121-14cl 3B-Hidroxi-58-pregn-8(14)-en-20-ona (gg).
Se disoïvieron 4,9 mg de] compuesto 86 en 10.m1 de etano] y se agregaron
3 gotas de ácido sulfúrico (c). La mezcia se refiujó durante 24 hs y se voicó
sobre 30 m1 de agua. E1 producto se extrajo con acetato de etiio (3x30 m1) y
se 1av6 e] extracto orgánico con agua hasta neutralidad. Después de secario, se
evaporó e] soivente. E1 residuo se purificó por ccd preparativa usando siiica
ge] comoadsorbente (soivente de desarroiio: cioroformo-etanoi 99:1). Se ob
tuvieron 2,49 mg (58%) del compuesto 87 homogéneo por ccd (sistemas: 3 y 4).
P.f. 118-120°C (1it. 43 : 123°c).
Actividad especifica del producto purificado: 2,54x107 dpm/mgo 8.02x109 dpm/mmo].
191
IR (cm'l): 3350 (O-H), 1710 (c=o).
RMN-IH, ppm: 0,80 (s, 3H, CH -18), 0,83 (S, 3H, CH-19), 2,16 (s, 3H, CH-21),3 3 3
4,20 (b.a., 1H, H-3).
192
F - SINTESIS TOTAL DE |21-14CI 3B-HIDROXI-SB-PREGNAN-ZO-ONA
F1 - DEGRADACION DE LA CADENA LATERAL DEL ACIDO BILIAR AL ACIDO ETIANICO.
- Acido 3a-acetoxi-58-coian-24-oico (g_).
Se disoivieron 500 mg de ácido Titocóiico (42) en 3 m1 de piridina anhi
dra y se agregaron 3 m1 de anhídrido acético. La soiución se dejó 24 hs a tem
peratura ambiente y se voicó sobre ácido ciorhidrico acuoso (6 m1 de HC] (c)
en 40 m1 de agua). E1 producto se extrajo con acetato de etiïo (3x50 m1), se
Tavó e] extracto orgánico con agua hasta neutraïidad y se secó. Por evapora
ción de] soivente se obtuvieron 560 mg de un producto puro por ccd (sistema:
12), que recristaiizado de etanol dio p.f. 165-166°C(Tit 103: 169°C).
-1)IR (cm : 3400-2700 (O-H), 1735 (C=O, éster), 1710 (C=0, ácido).
- Acetato de 24-nor-58-c01-22-en-3a-01 (gg).
Se trataron 800 mg (1,9 mmoles) de] ácido 88 con 2,4 g (5,4 mmoïes) de te
traacetato de piomo en ias condiciones indicadas para e] compuesto 48 (pág.155 L
E1 extracto crudo resultante se purificó por cromatografía en coiumna de
siiicagei (soivente de e1uci6n: toiueno). Se obtuvieron 450 mg (63%) de] com
puesto 89, homogéneopor ccd (sistema: 9). E1 producto recristaTizado de metano]
dio p.f. 83,5-85°C.
IR (cm-1): 173o (c=o).
RMN-lH, ppm: 0,68 (s, 3H, CH3-18), 0,94 (s, 3H, CH3-19), 1,03 (d, J=6Hz, 3H,
193
CH3-21), 2,04 (s, 3H, CH3C02-), 4,75 (b.a., lH, H-3), 4,90 (m, 2H,
CH2-23), 5,70 (m, 1H, CH-22).
EM, m/z (%): 372 (M, 2), 357 (M - CH3, 4), 317 (M - CL, 3), 312 (M - ACOH, 38),
297 (M - ACOH - CH 13), 257 (M - ACOH - CL, 100).3,
- 24-Nor-SB-c01-20(22)-en-3a-01 (g_).
a) Purificación de 1a eti1endiamina: se reaïizó con e] mismoprocedimiento
indicado en e] método B de 1a página 157.
b) Preparación de] reactivo: se hicieron reaccionar 334 mgde alambre de
litio con 11 m1 de etiiendiamina en 1a misma forma que se indica en 1a página
158.
c) Desarroiio de 1a reacción: se trataron 1,50 g de] compuesto 89 con e]
reactivo preparado según b) en 1as mismas condiciones señaladas en e] método B
de 1a página 158.
E1 sólido cristalino resuïtante se recristalizó de una mezcïa de etanol
agua obteniéndose 1,17 g (88%) de] compuesto 90 que resultó homogéneo por ccd
(sistema: 6). P.f. 114-115°C.
IR (cm-1): 3300 (O-H).
RMN-lH, ppm: 0,52 (s, 3H, CH3-18), 0,93 (s, 3H, CH3-19), 1,58 (d, J=5Hz, 3H,
CH3-23), 1,62 (s, 3H, CH3-21), 3,65 (b.a., 1H, H-3), 5,25 (b.a.,
lH, CH-22).
194
EM, m/z (%): 330 (M, 14), 312 (M - H20, 2), 257 (M - H20 - CL, 4).
- Acetato de 24-nor-58-coi-20(22)-en-3a-oi (g¿).
Se disoivieron 500 mg del aicohoi 90 en 10 m1 de una mezcia de anhídrido
acético y piridina (1:1). E1 sistema se dejó a temperatura ambiente durante 24
hs y se voicó sobre 15 m1 de soiución acuosa de ácido ciorhidrico 20%. La mez
cia se agitó durante 15 minutos y se extrajo con cioruro de metiieno (3x50 mi).
El extracto orgánico se 1avó con agua hasta neutralidad y se secó. Por evapora
ción de] soivente se obtuvo un residuo que se recristaiizó de etanoi. Se aisla
iaron 490 mg (87%) de] acetato 91, homogéneo por ccd (sistema: 9) y de p.f.
104-105°C.
IR (cm'l): 174o (c=o).
RMN-lH, ppm: 0,52 (s, 3H, CH3-18), 0,94 (s, 3H, CH3-19), 1,58 (d, J=6Hz, 3H,
CH3-23), 1,62 (s, 3H, CH3-21), 2,04 (S, 3H, CH3C02-), 4,70 (b.a.,
lH, H-3), 5,25 (m, 1H, CH-22).
EM, m/Z (Z): 372 (M, 77), 357 (M - CH3, 3), 312 (M - ACOH, 64), 297 (M - ACOH
CH3, 97), 257 (M - ACOH- CL, 21), 82 (100).
- 3a-Acetoxi-585pregnan-20-ona (gg).
Se ozonoiizaron 500 mg de 1a oiefina 91 en ias mismas condiciones que se
indicaron para e] compuesto 51 (pág. 160).
195
E1 residuo fina] se purificó por cromatografía en coiumna de siiicagei
(soivente de eiución: toiueno-acetato de etiio 9:1). Se aisiaron 385 mg (80%)
de] compuesto 92 homogéneopor ccd (sistema: 5). P.f. 101-102°C (Iit.104 :101
102°C).
IR (cm-1): 1740 (c=o, éster), 1705 (c=o, cetona).
RMN-lH, ppm: 0,61 (s, 3H, CH3-18), 0,95 (s, 3H, CH3-19), 2,04 (s, 3H, CH3C02-),
2,12 (s, 3H, CH3-21), 4,65 (b.a., 1H, H-3).
RMN-13€: ver tabla 9 , pág. 118.
EM, m/z (%): 360 (M, 1), 300 (M - ACOH, 67), 285‘(M - ACOH- CH3, 14), 257 (M
ACOH- CL, 11), 43 (100).
- 3a,21-Diacetoxi-SB-gregngg:20-ona (_g).
Se disoivieron 700 mg (1,94 mmoles) de] compuesto 92 en 30 m1 de benceno y
a 1a soiución se agregaron 1,6 g (3,64 mmoies) de tetraacetato de piomo, 1,4 m1
de metano] y 4,5 m1 de eterato de trifiuoruro de boro. La mezcla se trató con
e] mismo procedimiento que se indica en 1a página 164 para e] compuesto 47. E1
producto se extrajo con cioruro de metiieno y e] extracto orgánico se 1av6 con
agua hasta neutraiidad, se secó y se evaporó e] soivente. E1 residuo finai se
purificó por recristaiización de etano] obteniéndose 600 mg (73%) dei diacetato
93 comoun sóiido cristaiino homogéneopor ccd (sistema: 5). P.f. 95-96°C
(iit.1°4 : 97-98°C).
1IR (cm' ): 1740 (C=0, éster), 1710 (C=0, cetona).
196
RMN-lH, ppm: 0,64 (S, 3H, CH3-18), 0,94 (s, 3H, CH3-19), 2,04 (S, 3H, CH3COZ-),
2,18 (s, 3H, -CH20cocu3), 4,60 (CAB, J=20Hz, 2H, -CEZOCOCH3),4,65
(b.a., 1H, H-3).
13 ,RMN- C: ver tabia 9 , pag. 119.
EM, m/z (Z): 358 (M - ACOH, 4), 345 (M - CHZOCOCH3, 70), 343 (M - ACOH - CH3,
1), 257 (M - ACOH- CL, 93), 75 (100).
- 3a,21-Dihidroxi-SB-pregnagf20-ona (gg).
Se trataron 400 mg de] compuesto 93 en ias mismas condiciones de hidróii
sis y extracción de] compuesto 52 indicadas en 1a parte a)de 1a página 165. E1
producto crudo se purificó por cromatografía en coiumnade siiicage] (soivente
de e1uci6n: cioruro de metiieno-metanoi 95:5). Se obtuvieron 230 mg (72%) de]
compuesto 94 como un producto cristalino y homogéneopor ccd (sistema: 7). P.f.
130-132°C (1it.104: 152,5-153,5°C).
1IR (cm_ ): 3300 (0-H), 1705 (C=0).
RMN-lH, ppm: 0,62 (S, 3H, CH3-18), 0,93 (S, 3H, CH3-19), 3,65 (b.a., 1H, H-3),
4,18 (b.a., 2H, —c520H).
RMN-13€: ver tabia 9 , pág. 119.
EM, m/Z (%): 334 (M, 1), 316 (M - H20, 1), 303 (M - CHZOH, 95), 301 (M - H20
CH3, 2), 257 (M - H 0 - CL, 100).2
197
- 3a-Hidroxi-53-androstan-17B-carboxi1ato de metilo (gg).
Se trató 1,0 g (3,0 mmoies) de 1a a-hidroxicetona 94 con 2,0 g (9,3 mmoies)
de periodato de sodio de acuerdo con e] procedimiento indicado en 1a página 165.
parte b. Se aisió un sóiido que se metiió según 1a técnica descripta previamen
te. Se obtuvieron 213 mg (91%) de] éster 95 que se recristaiizó de metano].
P.f. 144-147°C (Ht.105 : 142-146°C).
IR (cm-1): 3300 (O-H), 174o (C=0).
RMN-lH,ppm: 0,65 (s, 3H, CH3-18), 0,93 (s, 3H, CH-19), 3,60 (b.a., 1H, H-3),3
3,68 (s, 3H, -C02CH3).
RMN-13€:ver tab1a 9 , pág.120.
EM, m/z (Z): 316 (M - H20, 2), 302 (M - CH30H, 100), 287 (M - CH30H - CH 70),3’
275 (M - CL, 4), 257 (M - CL - H20, 4).
F2 - INVERSION DE LA CONFIGURACION DEL CARBONO 3.
- 3a-Tosiioxi-SB-androstan-17B-carboxi1ato de metilo (gg).
Se tosiiaron 140 mg de] éster 95 según 1a técnica descripta para e] compueg
to 81 en 1a página 186. E1 residuo se purificó por cromatografía en coiumna de
siiicagei (soivente de e1ución: cioroformo). Se obtuvieron 194 mg (95%) dei pro
ducto buscado (96) que se recristalizó de metano] dando un p.f. 120-121°C.
1)IR (cm- : 1735 (C=0), 1600 (C=C).
RMN-lH, ppm: 0,64 (s, 3H, CH3-18), 0,91 (s, 3H, CH3-19), 2,46 (s, 3H, Cha-C6H4-)a
198
3,68 (S, 3H, -C02CH3), 4,45 (b.a., 1H, H-3), 7,30-7,80 (m, 4H, SÍS
tema aromático).
13 ,RMN- C: ver tabia 9 , pag.120.
EM, m/z (Z): 316 (M - TSOH, 100), 301 (M - TSOH - CH3, 88), 284 (M - TSOH
CH3OH, 4), 257 (M - TSOH - CL, 37), 256 (M - TSOH - HCOZCH 26).3!
- 36-Formi1oxi-58-androstan-17B-carboxi1ato de metiïo (gg).
Se invirtió ia configuración de] carbono 3 de] compuesto 96 usando N,N-di
metiiformamida en ias condiciones indicadas para e] compuesto 67 en 1a página
170 . E1 extracto crudo se purificó por cromatografía en coiumna de silicagei
(soïvente de eiución: toiueno-acetato de etiio 95:5). Se aisiaron 45 mg (61%)
de] producto formiiado 97. Por recristalización de etanoi dio p.f. 95-96°C.
RMN-lH, ppm: 0,66 (s, 3H, CH3-18), 0,99 (s, 3H, CH3-19), 3,68 (s, 3H, -C02CH3),
5,20 (b.a., 1H, H-3), 8,08 (s, 1H, HC02-).
RMN-13€:ver tabia 9 , pag.120.
EM, m/z (Z): 316 (M - HC02H, 100), 303 (M - CL, 4), 301 (M - HCO H - CH 41)2 3’
257 (M - HCOZH - CL, 12).
F3 - OBTENCION DEL 20-CETO PREGNANO A PARTIR DEL ACIDO ETIANICO.
- Acido BB-hidroxi-SB-androstan-17B-carboxi1ico (_g).
Se usó e] mismo método indicado en 1a página 187 para e] compuesto 83 con
lOO-mgde] éster 97. E1 residuo obtenido después de 1a extracción con acetato
199
de etiïo, se recristaïizó de etano] aisïándose 79 mg (90%) de] ácido 98 que
106dio p.f. 239-241°C (1it. : 226-228°C).
IR (cm-1): 3500-2700 (O-H, ácido), 3350 (0-H, a1coh01), 1720 (C=0).
RMN-lH,ppm: 0,88 (s, 3H, CH3-18), 1,02 (s, 3H, CH3-19), 4,30 (b.a., 1H, H-3).
EM, m/z (%): 302 (M - H20, 5), 287 (M - H 0 - CH2 3, 3), 45 (100).
—Acido 3B-acetoxí-53-androstan-17B-carboxí1ico (99).
Se acetiïaron 220 mg de] ácido 98 con ácido acético, empïeando 1a misma tég
niCa usada para e] compuesto 73 (página 176). E1 producto fina] se purificó por
cromatografía en co1umnade siïicageï (soïvente de e1uci6n: c10roformo). Se obtu
vieron 190 mg de] ácido 99 que se recrístaïizó de etano] dando p.f. 170-172°C.
RMP-lH, ppm: 0,73 (s, 3H, CH3-18), 0,95 (s, 3H, CH3-19), 2,07 (s, 3H, CH3COZ-),
5,10 (b.a., 1H, H-3).
- 33-Acetoxí-58-pregnan-20-ona (¿22).
a) Obtención de] c1oruro de ácido.
Se suspendieron 180 mg (0,50 mmoïes) de1 ácido 99 en 2 m1 de benceno anhi
dro. Se agregó 1 m1 de c1oruro de oxa1i1o y se dejó tapado y a temperatura am
biente durante 2 hs. Se evaporó e] solvente a sequedad y se usó sin previa pu
rificacíón.
1).IR (cm' . 1795 (C=0, cïoruro de ácido), 1730 (C=0, éster).
200
b) Obtención de] 20-ceto pregnang.
Se hicieron reaccionar 190 mg (0,50 mmoles) de] cioruro de ácido prepara
do según a) con dimetiicadmio, empieando 1a misma técnica utilizada para 1a sin
tesis de] compuesto 76 en e] método B de 1a página 179. E1 residuo aisiado se
purificó por cromatografía en coiumna de si1icage1 (soivente de e1ución: cloro
formo). Se obtuvieron 73 mg (41%) de 1a metiicetona 100, pura por ccd (sistema:
5). Recristalizada de etano] dio p.f. 120-121°c (1it.107: 121°c).
IR (cm'l): 174o (c=o, éster), 1705 (c=o, cetona).
RMN-lH, ppm: 0,62 (s, 3H, CH3-18), 0,98 (s, 3H, CH3—19), 2,06 (s, 3H, CH3C02-),
2,12 (s, 3H, CH3-21), 5,10 (b.a., lH, H-3).
EM, m/z (%): 360 (M, 1), 300 (M - AcoH, 100), 285 (M - ACOH- CH3, 22), 257 (M
ACOH - CL, 11).
- 121-14CI 38-Acetoxi-SB-pregnan-20-ona (¿QQ).
a) Obtención de] cioruro de ácido.
Se preparó usando ias mismas cantidades y en 1as mismas condiciones que se
indicaron para 1a obtención del cioruro de ácido en 1a preparación de 1a metiicg
tona 100 no radiactiva.
b) Obtención de] 20-ceto pregnagg.
Se empieó e] equipo indicado en 1a figura 1a de 1a página 74.
bl) Preparación de] ioduro de metiimagnesio radiactivo.
Se apiicó 1a técnica indicada en 1a página 189 para 1a preparación de] io
201
duro de metiimagnesio no radiactivo, con ias siguientes modificaciones.
Luego de armado e] equipo con ios 15 mg de magnesio en su interior y de
haber hecho vacio en e] sistema, se inyectó una soiución de 20 u] de ioduro de
metiio anhidro (secado sobre pentóxido de fósforo) en 1 m1 de éter anhidro (se
cado sobre sodio y sobre hidruro de iitio y aiuminio y destiiado antes de usar).
Se mantuvo con agitación durante 30 minutos, 1apso durante e] cua] se consumió
parte de] magnesio y se formó una soiución de coior gris claro.
Se congeió e] medio de reacción sumergiendo e] fondo de] tubo kitasato en
aire iiquido. Con ayuda de un imán externo se movió 1a barrita magnética de 1a
parte superior de] equipo de tai modode romper e] cierre de vidrio de] tubo in
vertido que contenía e] ioduro de metiio radiactivo. Se inyectaron 13 ui de io
duro de metiio no radiactivo y se caientó e] tubo invertido con una microiiama
durante 15 minutos. Se dejó 11egar e] sistema a temperatura ambiente y se conti
nuó con 1a agitación durante 30 minutos. Finaiizado ese tiempo se habia consumi
do prácticamente todo e] magnesio.
b2) Preparación de] dimetiicadmio radiactivo.
Se repitió e] método B parte b) de 1a página 180, empieando 1a misma can
tidad de cioruro de cadmio moiido y anhidro (secado durante un dia a 110°C).
b3) Reacción de] dimetiicadmio radiactivo con e] cioruro de ácido.
Se empieó ei método B parte c) de 1a página 180 pero usando 180 mg dei c10
ruro de 3B-acetoxi-SB-androstan-17B-carboxi1iio en lugar de] cioruro de ácido 75.
202
Se aisiaron 170 mg de producto sóïido cuya actividad específica era
8,90x106 dpm/mgy que se purificó por cromatografía en coïumna de si1icage1 (sol
vente de e1ución: cioroformo). Se obtuvieron 68 mg (41%) de] compuesto buscado
(100), homogéneopor ccd (sistema: 5). Por recristaiización de etanoi dio p.f.
07:119-120°c (1it.1 121°c).
Actividad especifica: 1°recrista1ización (etanoï): 8,75x106 dpm/mg6 3,15x109
dpm/mm01 6 1,43 mCi/mmo].
2°recrista1ización (etanoi): 8,72x106 dpm/mg6 3,14x109
dpm/mmo] 6 1,42 mCi/mmoi.
Las caracteristicas espectroscópicas fueron coincidentes con ias de] com
puesto no radiactivo.
- I21-14CI 3B-Hidroxi-SB-pregnan-ZO-ona (¿3).
Se disoïvieron 5,0 mg de |21-14CI 3B-acetoxi-SB-pregnan-20-ona (100) en
10 m1 de etano] y se agregaron 3 gotas de ácido suifürico (c). La soiución se
ca1ent6 a refiujo durante 24 hs, se voïcó sobre 30 m1 de agua y se extrajo con
cloruro de metiïeno. E1 extracto orgánico se 1av6 con agua hasta neutraiidad y
se secó. Por evaporación de] soivente se obtuvo un residuo que se purificó por
ccd preparativa de siiicagei (soivente de desarroïïo: cloroformo-etanoi 98:2).
Actividad especifica: 10,12x106 dpm/mg6 3,22x109 dpm/mmo]6 1,46 mCi/mmo].
IR (cm-1): 3250 (O-H), 1700 (C=0).
RMN-lH, ppm: 0,62 (S, 3H, CH3-18), 0,97 (S, 3H, CH3-19), 2,11 (S, 3H, CH3-21),
203
4,13 (b.a., 1H, H-3).
EM, m/z (%): 318 (M, 57), 303 (M - CH3, 24), 300 (M - H20, 94), 285 (M - H20
CH3, 30), 275 (M - CL, 5), 260 (M - CH3 - CL,12), 257 (M - H 0 2
CL, 21), 43 (100).
204
RESUMEN.
La biosintesis de los glicósidos cardenólidos ha sido estudiada en sus aspeg
tos primarios y se conoce muy poco acerca de la hidroxilación en posición 14 con
configuración B. Hubo varias hipótesis para este mecanismo que aün no ha sido
aclarado. Debidoa que existían datos contradictorios relacionados con la parti
cipación de un doble enlace en posición 8(14), se decidió sintetizar e inocular
|21-14CI 3B-hidroxi-58-pregn-8(l4)-en-20-ona. Simultaneamente se desarrolló la
sintesis de [21-14C| 3B-hidroxi-SB-pregnan-ZO-ona, que es un precursor conocido
del camino biosintético de cardenólidos, con el fin de usarlo comocontrol en los
ensayos de inoculación en plantas del género Digitalis.
Para preparar ambos compuestos se usaron ácidos biliares comomaterial de
partida porque ademásde presentar las caracteristicas estructurales necesarias
para realizar las sintesis, resultaron ser materias primas económicasy fácilmen
te accesibles. Sobre los esteroides de partida se efectuaron las siguientes modi
ficaciones:
1) Degradación de la cadena lateral del ácido biliar a una cadena de tipo ácido
etiánico.
2) Inversión de la configuración del carbono 3.
3) Deshidratación del hidroxilo de carbono 7 e isomerización del doble enlace for
madoa la posición 8(14).(Esta modificación sólo se aplicó en una de las sin
tesis).
205
4) Construcción de una cadena lateral de] tipo 20-ceto pregnano a partir de un
ácido etiánico.
E1 sustrato a investigar se administró a plantas de D. purpurea no siendo
incorporado por ias mismas.
Comofue notoria 1a falta de datos de RMN-13€de 1os compuestos 58-esteroi
daïes sintetizados, se asignaron los espectros de una serie de esteroides de este
tipo que están estructuraimente re1acionados. Estos se obtuvieron comointermedia
rios en ios caminos de sintesis, se adquirieron comerciaimente o se prepararon es
pecialmente para e] estudio. Con los vaiores obtenidos se ana1izó 1a influencia
de los cambios configuracionaïes y funcionaies en e] carbono 3, de 1a introduc
ción de un doble eniace en 1a posición 8(14) y de 1a presencia de diferentes cadg
nas Iateraies.
Í JuTLLLL/LK/Z¿9L—A\\ Mómca DQLmóh
BIBLIOGRAFIA
1
13
14
15
16
206
a. H. Lichti, C. Tammy T. Reichstein, HeZv. Chim. Acta, gg, 1933 (1956).
J.H. Russe11, 0. Schindïer y T. Reichstein, HeZv. Chim. Acta, gg, 1315
(1961).
b. P. Studer, S.K. Pavanaram, C.R. Gaviïanes, H. Linde y K. Meyer, HeZv.
Chim. Acta, gg, 23 (1963).
C.E. Nativelïe, J. Pharmacol., 2, 255 (1869).
M. Cïoetta, Arch. Exp. Path. Pharmacol., gg, 115 (1920).
A. Nindaus y C. Fraese, Ber. dtsch. chem. Ges., gg, 2503 (1925).
A. Hindaus y G. Schwarte, Ber. dtsch. chem. Ges., gg, 1515 (1925).
F. Kraft, Arch. Pharm., ¿59, 118 (1912).
s. Smith, J. Chem.Soc., 508 (1930).
Rodd's Chemistry of Carbon Cbmpounds(Editor: S. Coffey), Eïsevier Pub1í
shing Company, Amsterdam, V01. 2 parte D.
P.A. Tavormina, M.H. Gibbs y J.N. Huff, J. Am. Chem. Soc., 1g, 4498
(1956).
E. Ramstadt y J.L. Bea], Chem. Ind. (London), 177 (1960).
E. Leete y H. Gregory, Chem. Ind. (London), 1242 (1960).
E. Leete, H. Gregory y E. Gros, J. Am. Chem. Soc., gl, 3475 (1965).
R. Tschesche, Fortschr. Chem.Org. Naturstofïï, lg, 131 (1955).
R. Tschesche, Angew. Chem., Z}, 727 (1961).
E. Gros y E. Leete, J. Am. Chem. Soc., gl, 3479 (1965).
R. Tschesche y G. Lí1ienweiss, Z. Naturforsch., 129, 265 (1964).
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
207
J.V. Euwy T. Reichstein, HeZv. Chim. Acta, 31, 711 (1964).
R. Tschesche y B. Brassat, Z. Naturfbrsch., gig, 894 (1966).
E. Caspi, D.0. Lewis, D.M. Piatak, K.V. Thimann y A. Winter, Experientia,
g, 506 (1966).
E. Caspi y D.0. Lewis, Science, 15€, 519 (1967).
H.H. Sauer, R.D. Bennett y E. Heftmann, Naturwissenschaften, gg, 226
(1967).
H.H. Sauer, R.D. Bennett y E. Heftmann, Phytochemistry, g, 1521 (1967).
R.D. Bennett, H.H. Sauer y E. Heftmann, Phytochemistry, Z, 41 (1968).
E. Caspi y G.M. Hornby, Phytochemistry, 1, 423 (1968).
R. Tschesche, R. Hombach, H. Scholten y M. Peters, Phytochemistry, 2,
1505 (1970).
R. Tschesche, H. Huipke y H..Sch01ten, Z. Naturfbrsch., ggg, 677 (1967).
R. Tschesche, R. Becker y R. Hombach, Z. Naturfbrsch., ggg, 1615 (1968).
R. Tschesche y R. Becker, Z. Naturfbrsch., 25g, 107 (1970).
H.H. Sauer, R.D. Bennett y E. Heftmann, Phytochemistry, Z, 1543 (1968).
H.H. Sauer, R.D. Bennett y E. Heftmann, Phytochemistry, g, 69 (1969).
H.H. Sauer, R.D. Bennett y E. Heftmann, Phytochemistry, g, 839 (1969).
M. Hayano en Oxygenases (Editor: 0. Hayaishi), Academic Press, N.Y., p.
182 (1962).
w. Charney y H.L. Herzog, Microbial Transfbrmations of Steroids, Academic
Press, N.Y., p. 18 (1967).
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
K.R. Varmay E. Caspi, Phytochemistry, g, 1539 (1970).
K.D. Roberts, L. Bandy y S. Lieberman, Biochemistry, g, 1259 (1969).
H. Charney y H.L. Herzog, Microbial Transfbrmations of Steroids, Academic
Press, N.Y., pp. 30, 31 (1967).
E. Caspi y D.0. Lewis, Phytochemistry, Z, 683 (1968).
K. Nakanishi, M. Koreeda, S. Sasaki, M.L. Chang y H.Y. Hsu, Chem. Commun.,
915 (1966).
M.N. Gaïbraith y D.H.S. Horn, Chem. Commun., 905 (1966).
K. Heusïer, J. Ka1voda, G. Anner y A. Wettstein, HeZv. Chim. Acta, 49,
352 (1963).
L. Canóníca, F. Ronchetti y G. Russo, Chem. Commun., 1675 (1970).
D.J. Aberhart, J.G. L1oyd-Jones y E. Caspi, Phytochemistry, 1g, 1065
(1973).
R. Tschesche y U. K1eff, Phytochemistry, lg, 2375 (1973).
R. Tschesche y w. Führer, Chem. 8er., 112, 2692 (1979).
Nieïand, Schïichting y R. Jacobi, Z. Physiol. Chem., l_l, 80 (1926).
Ch. Meystre, L. Ehmann, R. Neher y K. Miescher, HeZv. Chim. Acta, gg,
1252 (1945).
J.C. Beïoeí1, C. Esnauït, M. Fétizon y R. Henry, Steroids, 35 (2), 281
(1979).
R.A. Sheldon y J.K. Kochi en Organic Reactions (editor en jefe: N.G.
Dauben, John Niïey & Sons, Inc., vo]. 19, p. 279 (1972).
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
209
A.S. Naruïa y S. Dev, Tetrahedron Lett., gg, 1733 (1969).
A.S. Naru1a y S. Dev, Tetrahedron, gl, 1119 (1971).
L. Regge], S. Friedman y I. Nender, J. Org. Chem., gg, 1136 (1958).
J.D. Cocker, H.B. Henbest, G.H. Phi11ips, G.P. SIater y D.A. Thomas, J.
Chem. Soc., 6 (1965).
S. Nakanishí, J. Med. Chem., 1, 106 (1964).
J.T. Edward y J.M. Feland, cun. J. Chem., 33, 1311 (1966).
H. Danielsson, P. Eneroth, K. He11str6m y J. Sjüvall, J. Biol. Chem., ¿21,
3657 (1962).
L. Fieser y M. Fieser, Reagents fbr Organic Synthesis, John Wiïey and
Sons, Inc., Vo]. 1 (1967), p. 205.
A.K. Bose, B. La], N.A. Hoffman III y M.S. Manhas, Tbtrahedron Lett., lg,
1619 (1973).
F.C. Chang, J. Org. Chem., 4_4, 4567 (1979).
F.C. Chang, J. Am. Chem. 500., gg, 2906 (1958).
F.C. Chang, N.F. Woody N.G. H01ton, J. Org. Chem., gg, 1718 (1965).
F. Büdecker, Ber. Chem., á}, 1852 (1920).
K. Yamasaki, Z. Physiol. Chem., gg}, 10 (1935).
K. Yamasaki y K. Takahashi, Z. Physiol. Chem., ¿29, 21 (1938).
A.w. Devor y H.w. Mar1ow, J. Am. Chem. Soc., gg, 2101 (1946).
von E. Berner, A. Lardon y T. Reichstein, HeZv. Chim. Acta, gg, 1542
(1947).
65
66
67
68
69
70
72
73
74
75
76
77
78
79
80
210
D.H.R. Barton, J. Chem. Soc., 1116 (1946).
J. Caste1ïs y G.D. Meakins, Chem. Ind., 248 (1956).
E. Schwenk, B. Riege], R.B. Moffett y E. Stah], J. Am. Chem. 300., 65,
549 (1943).
N. Bhacca y D. Niïïiams, Applications of NMRSpectroscopy in Organic
Chemistry, Holden Day, San Francisco (1966), p. 20.
A.N.D. Hudge11, J.H. Turnbui] y W. Niïson, J. Chem. Soc., 814 (1954).
H.0. House y T.M. Bare, J. Org. Chem., 23, 943 (1968).
G. Cahiez, A. Masuda, D. Bernard y J.F. Normant, Tetrahedron Lett., 3175
(1976).
G. Cahiez, D. Bernard y J.F. Normant, Synthesis, 130 (1977).
G. Cahiez, Tetrahedron Lett., gg, 1239 (1981).
H.B. Mac Phiïïamy y C.R. Schoïz, J. Biol. Chem., 418, 37 (1949).
H. Gi1mawy J.F. Neïson, Rec. Trav. Chim., gg, 518 (1936).
w. Coïe y P.L. Juïian, J. Am. Chem. Soc., _Z, 1369 (1945)., gl, 1369
(1945).
J.w. B1unt y J.B. Stothers, Org. Magn., 2, 439 (1977)
M. Tsuda, E.J. Parish y G.J. Schroepfer, J. Am. Chem. Soc., 44, 1282
(1979).
H. Eggert y C. Djerassi, J. Org. Chem., 4g, 5399 (1981).
H.T. Andrew Cheung, L. Brown, J. Boutagy y R. Thomas, J. Chem. Soc. Perkin
I, 1773 (1981).
82
83
84
85
86
87
88
89
90
91
92
93
94
211
G. Engeihardt, D. Zeigan y B. Schonecker, J. Prakt. Chemie, Band 320,
377 (1978).
H.J. Reich, M. Jauteiat, M.T. Messe, F.J. Weigert y J.D. Roberts, J. Am.
Chem. Soc., gl, 7445 (1969).
S.Q.A. Rizvi y J.R. Wi11iams, J. Org. Chem., 3g, 1127 (1981).
H. Eggert, C.L. Van Antwerp, N.S. Bhacca y C. Djerassi, J. Org. Chem.,
gl, 71 (1976).
H. Eggert y c. Djerassi, J. Org. Chem., gg, 3788 (1973).
H. Beierbeck, J.K. Saunders y J.N. Ap Simon, Can. J. Chem., 55, 2813
(1977).
F.J. Evans y P.S. Cowiey, Phytoohemistry, ll, 2971 (1972).
M.S. Maier, Estudio sobre rutas biosintéticas alternativas del anillo bu
tenólido de cardbnólidos en Za planta D. purpurea, Tesis, Departamento de
Quimica Orgánica, Facuitad de Ciencias Exactas y Naturaies, Universidad
de Buenos Aires (1985).
K.M. Heiiman y C. Djerassi, J. Am. Chem. Soc., 81, 60 (1965).
w.L. Duax, J.F. Griffin y o.c. Rohrer, J. Am. Chem. Soc., 19;, 6705 (1981L
M.D. Cotteriii y M.J.T. Robinson, Tetrahedron, gg, 765 (1964).
M.D. Gonzaiez y G. Burton, Org. Magn. Reson., gg, 586 (1984).
E.N. Trachtenberg, C. Byon y M. Gut, J. Am. Chem. 500., gg, 6145 (1977).
C. Romers, C. A1tona, H.J.C. Jacobs y R.A.G. De Graaff, en Terpenoids
95
96
97
98
99
100
101
102
103
104
105
106
107
212
and Steroids, Specialist Periodical Reports, Roya] Society of Chemistry,
London, V01. 4 (1974).
M. Maier, A.M. Se1des y E.G. Gros, Resultados no publicados.
C. A1tona y H. Hirschmann, Tetrahedron, gg, 2173 (1970).
H. Lee, N.S. Bhacca y M.E. N01ff, J. Org. Chem., gl, 2692 (1966).
H. Lee y M.E. Wolff, J. Org. Chem., gg, 192 (1967).
C. Le Cocq y J. Lallemand, J. Chem. Soc., Chem. 60mm., fi, 150 (1981).
T. Kametani, K. Suzuki y H. Nemoto, J. Org. Chem., 31, 2331 (1982).
von H.P. Sigg y T. Reichstein, HeZv. Chim. Acta, gg, 1507 (1956).
F. Ducelïiez, Bull. Soc. Chim. Fr., l}, 815 (1913).
The Merck Index (Editor: M. Windholz), Merck & Co. Rahway, N.J., USA, 9°
edición, p 5392.
M.L. Lewbart y V.R. Mattox, J; Org. Chem., gg, 2001 (1963).
A. Lardon, Helv. Chim. Acta, 39, 597 (1947).
L. Ruzicka, P1.A. Plattner y G. Ba11a, HeZv. Chim. Acta, gg) 65 (1940).
R.E. Marker, 0. Kammy E.L. Nittle, J. Am. Chem. Soc., E2, 1841 (1937).
INDICE DE FIGURAS
pág.
Figura l . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ..74
Figura 2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ..115
Figura 3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ..121
Figura 4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ..128
Figura 5 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ..134
Figura 6 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ..134
INDICE DE TABLAS
Tabla 1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ..103
Tabïa 2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ..103
Tabla 3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ..104
Tabla 4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ..105
Tabla 5 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ..105
Tab1a 6 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ..106
Tabla 7 . . . . . . . . . . . . ... . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ..106
Tabla 8 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ..107
Tabïa 9 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ..117
Tabïa 10 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ..123
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