Návod k ode čítání

Disková difuzní metoda EUCAST pro vyšet řování

antibiotické citlivosti

Verze 5.0 Leden 2017

Změny proti předchozí verzi (v 4.0) Obrázek Změna

3 Objasnění týkající se odečítání zón a použití automatického odečítače zón.

17 Objasnění týkající se odečítání zón kolem trimetoprimu- sulfametoxazolu u Stenotrophomonas maltophilia.

18 Přidán ampicilin-sulbaktam a amoxicilin-klavulanová kyselina.

20 Pokyny pro odečítání zón kolem fosfomycinu u Escherichia coli.

21 Přidána informace o odečítání vankomycinu u enterokoků.

2

Odečítání zón

• Následující pokyny pro odečítání průměrů inhibičních zón jsou součástí diskové difuzní metody EUCAST.

• Odečítá se od bodu úplné inhibice růstu na okraji inhibiční zóny na plotně držené zhruba 30 cm od oka (výjimky a speciální pokyny jsou na obr. 15-24).

• Průměry inhibičních zón se měří na nejbližší milimetr pravítkem nebo posuvným měřítkem. Pokud se použije automatický odečítač zón, musí být kalibrován podle manuálního odečítání.

3

Odečítání zón

• Plotny MH se odečítají na spodní straně, v odraženém světle proti tmavému pozadí.

• Plotny MH-F se odečítají zepředu po odstranění víčka, v odraženém světle.

4

Kolonie uvnitř zóny

Odečítání zón s koloniemi uvnit ř zóny. 5

• Odlišné kolonie uvnitř zóny se vyizolují, ověří se jejich čistota a případně se retestují.

• Nejedná-li se o kontaminaci, je zapotřebí při odečítání zón vzít tyto kolonie do úvahy.

nebo žádná zóna

Žádná zóna

Kolonie uvnitř zóny

Odečítání zón s koloniemi uvnit ř zóny. 6

• Odlišné kolonie uvnitř zóny se vyizolují, ověří se jejich čistota a případně se retestují.

• Nejedná-li o kontaminaci, je zapotřebí při odečítání zón vzít tyto kolonie do úvahy.

E. coli s ESBL

H. influenzae s mutací PBP

Žádná zóna Žádná zóna

Plazivé kolonie

7

• U Proteus spp se odečítá růst a plazení se přehlíží.

8

Dvojité zóny

• Ověří se čistota a vyšetření se případně opakuje.

• Nejedná-li se o kontaminaci, je při odečítání zón zapotřebí vzít tyto kolonie do úvahy.

Odečítání dvojitých zón.

9

Neostré okraje zón

Enterobacteriaceae

• Plotna se drží proti tmavému pozadí zhruba 30 cm od oka a pátrá se po okraji zóny. Plotna se nedrží proti (procházejícímu) světlu a lupa se nepoužívá.

Odečítání zón s neostrými okraji u Enterobacteriaceae .

10

Neostré okraje zón

Stafylokoky

• Plotna se drží proti tmavému pozadí zhruba 30 cm od oka a pátrá se po okraji zóny. Plotna se nedrží proti (procházejícímu) světlu a lupa se nepoužívá.

Odečítání zón s neostrými okraji u stafylokok ů.

11

Neostré okraje zón

S. pneumoniae

• Malé kolonie viditelné na plotně, která je vzdálená zhruba 30 cm od pouhého oka, se při odečítání zón berou do úvahy.

• Malé kolonie v blízkosti okraje zóny, které mohou vznikat na příliš vlhké půdě MH-F, lze potlačit usušením půd před použitím.

Odečítání zón s neostrými okraji u S. pneumoniae.

12

Růst nebo hemolýza?

• Odečítá se inhibice růstu, nikoli inhibice hemolýzy.

• Někdy je obtížné rozlišit mezi hemolýzou a růstem.

– β-hemolyziny difundují do agaru. Z toho důvodu růst uvnitř β-hemolýzy obvykle není přítomen.

– α-hemolyziny do agaru nedifundují. V oblasti α-hemolýzy může být přítomen růst.

– U S. pneumoniae a β-laktamových antibiotik jsou okraje zón obvykle provázeny α-hemolýzou.

13

β-hemolýza

• Hemolýzu od růstu lze při odečítání snadněji odlišit nakláněním plotny dopředu a dozadu.

• β-hemolýza je obvykle bez růstu.

S. pyogenes Streptokoky sk. C

α-hemolýza

• Hemolýzu od růstu lze při odečítání snadněji odlišit nakláněním plotny dopředu a dozadu.

Růst je obvykle p řítomen v celé oblasti α-hemolýzy .

U některých kmen ů se vyskytuje další α-hemolýza bez r ůstu. K odlišení r ůstu pomůže naklon ění plotny ! 14

15

Speciální pokyny k odečítání

• Trimetoprim a trimetoprim-sulfametoxazol obecně

• Stenotrophomonas maltophilia a trimetoprim-sulfametoxazol

• Enterobacteriaceae a ampicilin, ampicilin-sulbaktam a amoxicilin-klavulanová kyselina

• E. coli a mecilinam

• E. coli a fosfomycin

• Enterokoky a vankomycin

• S. aureus a benzylpenicilin

• Detekce indukované rezistence ke klindamycinu u stafylokoků a streptokoků

16

Trimethoprim a trimetoprim-sulfametoxazol

• Při odečítání vnitřních a dvojitých zón se postupuje následovně (viz obrázky níže).

• Jemný, nepatrný růst kolem disku uvnitř zóny s jasnými okraji se přehlíží.

E. coli KNS Moraxella Haemophilus

17

Stenotrophomonas maltophilia a trimetoprim-sulfametoxazol

• Izolát je citlivý, vytváří-li jakoukoli známku inhibiční zóny ≥ breakpoint pro citlivost. Je třeba upozornit, že uvnitř některých zón může být růst masivní.

Žádná zóna

Pokud je viditelný jakýkoli okraj inhibi ční zóny, pak se r ůst uvnit ř přehlíží.

Kmen je citlivý, pokud je pr ůměr zóny ≥16 mm

Rezistentní kmen: žádná inhibi ční zóna,

růst k disku

18

Enterobacteriaceae a ampicilin, ampicilin-sulbaktam,

amoxicilin-klavulanová kyselina

• Přehlíží se jemný růst, který se u některých šarží MH může vyskytnout jako vnitřní zóna. Na některých šaržích se vnitřní zóna nevyskytuje, a pokud se odečítá vnější zóna, pak není mezi šaržemi rozdíl.

19

E.coli a mecilinam

• Kolonie uvnitř inhibiční zóny se přehlížejí.

Žádná zóna

20

E. coli a fosfomycin

• Izolované kolonie uvnitř inhibiční zóny se ignorují a průměr

zóny se odečítá od vnějšího okraje zóny.

Žádná zóna

21

Enterokoky a vankomycin

• Zóny se prohlíží proti procházejícímu světlu.

– Neostré okraje zóny a kolonie uvnitř zóny ukazují na rezistenci k vankomycinu. Pokud je průměr zóny ≥ 12 mm a její okraje jsou neostré, je zapotřebí další vyšetření.

– Izoláty nesmí být hlášeny jako citlivé dříve než za 24 h inkubace.

E. faecalis ne-VRE

E. faecium VRE

S. aureus a benzylpenicilin

• Zóny se prohlíží proti procházejícímu světlu. – Disková difuze je pro detekci producenta penicilinázy

spolehlivější než MIC, pokud se měří průměr zóny a pečlivě se prohlíží její okraj.

S. aureus s ostrým okrajem zóny

a průměrem zóny ≥ 26 mm = rezistentní

S. aureus s neostrým okrajem zóny

a průměrem zóny ≥ 26 mm = citlivý

22

Detekce indukované rezistence ke klindamycinu u stafylokoků

• Indukovanou rezistenci ke klindamycinu lze detekovat průkazem antagonizmu mezi klindamycinem a makrolidem.

• Disky erytromycinu a klindamycinu se umístí ve vzdálenosti

12-20 mm mezi okraji disk ů a pozoruje se antagonizmus (D fenomén).

Příklady D fenoménu u stafylokoků. 23

Detekce indukované rezistence ke klindamycinu u streptokoků

• Indukovanou rezistenci ke klindamycinu lze detekovat průkazem antagonizmu mezi klindamycinem a makrolidem.

• Disky erytromycinu a klindamycinu se umístí ve vzdálenosti

12-16 mm mezi okraji disk ů a pozoruje se antagonizmus (D fenomén).

Příklady D fenoménu u streptokoků. 24

X EUCAST

Výjimka

EUROPEAN COMMITTEE ON ANTIMICROBIAL SUSCEPTIBIITY TESTING

European Society of Clinical Microbiology and Infectious Diseases