Návod k odečítání - szu › uploads › documents › CeM › NRLs › atb › EUCAST ›...
Transcript of Návod k odečítání - szu › uploads › documents › CeM › NRLs › atb › EUCAST ›...
Návod k ode čítání
Disková difuzní metoda EUCAST pro vyšet řování
antibiotické citlivosti
Verze 5.0 Leden 2017
Změny proti předchozí verzi (v 4.0) Obrázek Změna
3 Objasnění týkající se odečítání zón a použití automatického odečítače zón.
17 Objasnění týkající se odečítání zón kolem trimetoprimu- sulfametoxazolu u Stenotrophomonas maltophilia.
18 Přidán ampicilin-sulbaktam a amoxicilin-klavulanová kyselina.
20 Pokyny pro odečítání zón kolem fosfomycinu u Escherichia coli.
21 Přidána informace o odečítání vankomycinu u enterokoků.
2
Odečítání zón
• Následující pokyny pro odečítání průměrů inhibičních zón jsou součástí diskové difuzní metody EUCAST.
• Odečítá se od bodu úplné inhibice růstu na okraji inhibiční zóny na plotně držené zhruba 30 cm od oka (výjimky a speciální pokyny jsou na obr. 15-24).
• Průměry inhibičních zón se měří na nejbližší milimetr pravítkem nebo posuvným měřítkem. Pokud se použije automatický odečítač zón, musí být kalibrován podle manuálního odečítání.
3
Odečítání zón
• Plotny MH se odečítají na spodní straně, v odraženém světle proti tmavému pozadí.
• Plotny MH-F se odečítají zepředu po odstranění víčka, v odraženém světle.
4
Kolonie uvnitř zóny
Odečítání zón s koloniemi uvnit ř zóny. 5
• Odlišné kolonie uvnitř zóny se vyizolují, ověří se jejich čistota a případně se retestují.
• Nejedná-li se o kontaminaci, je zapotřebí při odečítání zón vzít tyto kolonie do úvahy.
nebo žádná zóna
Žádná zóna
Kolonie uvnitř zóny
Odečítání zón s koloniemi uvnit ř zóny. 6
• Odlišné kolonie uvnitř zóny se vyizolují, ověří se jejich čistota a případně se retestují.
• Nejedná-li o kontaminaci, je zapotřebí při odečítání zón vzít tyto kolonie do úvahy.
E. coli s ESBL
H. influenzae s mutací PBP
Žádná zóna Žádná zóna
Plazivé kolonie
7
• U Proteus spp se odečítá růst a plazení se přehlíží.
8
Dvojité zóny
• Ověří se čistota a vyšetření se případně opakuje.
• Nejedná-li se o kontaminaci, je při odečítání zón zapotřebí vzít tyto kolonie do úvahy.
Odečítání dvojitých zón.
9
Neostré okraje zón
Enterobacteriaceae
• Plotna se drží proti tmavému pozadí zhruba 30 cm od oka a pátrá se po okraji zóny. Plotna se nedrží proti (procházejícímu) světlu a lupa se nepoužívá.
Odečítání zón s neostrými okraji u Enterobacteriaceae .
10
Neostré okraje zón
Stafylokoky
• Plotna se drží proti tmavému pozadí zhruba 30 cm od oka a pátrá se po okraji zóny. Plotna se nedrží proti (procházejícímu) světlu a lupa se nepoužívá.
Odečítání zón s neostrými okraji u stafylokok ů.
11
Neostré okraje zón
S. pneumoniae
• Malé kolonie viditelné na plotně, která je vzdálená zhruba 30 cm od pouhého oka, se při odečítání zón berou do úvahy.
• Malé kolonie v blízkosti okraje zóny, které mohou vznikat na příliš vlhké půdě MH-F, lze potlačit usušením půd před použitím.
Odečítání zón s neostrými okraji u S. pneumoniae.
12
Růst nebo hemolýza?
• Odečítá se inhibice růstu, nikoli inhibice hemolýzy.
• Někdy je obtížné rozlišit mezi hemolýzou a růstem.
– β-hemolyziny difundují do agaru. Z toho důvodu růst uvnitř β-hemolýzy obvykle není přítomen.
– α-hemolyziny do agaru nedifundují. V oblasti α-hemolýzy může být přítomen růst.
– U S. pneumoniae a β-laktamových antibiotik jsou okraje zón obvykle provázeny α-hemolýzou.
13
β-hemolýza
• Hemolýzu od růstu lze při odečítání snadněji odlišit nakláněním plotny dopředu a dozadu.
• β-hemolýza je obvykle bez růstu.
S. pyogenes Streptokoky sk. C
α-hemolýza
• Hemolýzu od růstu lze při odečítání snadněji odlišit nakláněním plotny dopředu a dozadu.
Růst je obvykle p řítomen v celé oblasti α-hemolýzy .
U některých kmen ů se vyskytuje další α-hemolýza bez r ůstu. K odlišení r ůstu pomůže naklon ění plotny ! 14
15
Speciální pokyny k odečítání
• Trimetoprim a trimetoprim-sulfametoxazol obecně
• Stenotrophomonas maltophilia a trimetoprim-sulfametoxazol
• Enterobacteriaceae a ampicilin, ampicilin-sulbaktam a amoxicilin-klavulanová kyselina
• E. coli a mecilinam
• E. coli a fosfomycin
• Enterokoky a vankomycin
• S. aureus a benzylpenicilin
• Detekce indukované rezistence ke klindamycinu u stafylokoků a streptokoků
16
Trimethoprim a trimetoprim-sulfametoxazol
• Při odečítání vnitřních a dvojitých zón se postupuje následovně (viz obrázky níže).
• Jemný, nepatrný růst kolem disku uvnitř zóny s jasnými okraji se přehlíží.
E. coli KNS Moraxella Haemophilus
17
Stenotrophomonas maltophilia a trimetoprim-sulfametoxazol
• Izolát je citlivý, vytváří-li jakoukoli známku inhibiční zóny ≥ breakpoint pro citlivost. Je třeba upozornit, že uvnitř některých zón může být růst masivní.
Žádná zóna
Pokud je viditelný jakýkoli okraj inhibi ční zóny, pak se r ůst uvnit ř přehlíží.
Kmen je citlivý, pokud je pr ůměr zóny ≥16 mm
Rezistentní kmen: žádná inhibi ční zóna,
růst k disku
18
Enterobacteriaceae a ampicilin, ampicilin-sulbaktam,
amoxicilin-klavulanová kyselina
• Přehlíží se jemný růst, který se u některých šarží MH může vyskytnout jako vnitřní zóna. Na některých šaržích se vnitřní zóna nevyskytuje, a pokud se odečítá vnější zóna, pak není mezi šaržemi rozdíl.
19
E.coli a mecilinam
• Kolonie uvnitř inhibiční zóny se přehlížejí.
Žádná zóna
20
E. coli a fosfomycin
• Izolované kolonie uvnitř inhibiční zóny se ignorují a průměr
zóny se odečítá od vnějšího okraje zóny.
Žádná zóna
21
Enterokoky a vankomycin
• Zóny se prohlíží proti procházejícímu světlu.
– Neostré okraje zóny a kolonie uvnitř zóny ukazují na rezistenci k vankomycinu. Pokud je průměr zóny ≥ 12 mm a její okraje jsou neostré, je zapotřebí další vyšetření.
– Izoláty nesmí být hlášeny jako citlivé dříve než za 24 h inkubace.
E. faecalis ne-VRE
E. faecium VRE
S. aureus a benzylpenicilin
• Zóny se prohlíží proti procházejícímu světlu. – Disková difuze je pro detekci producenta penicilinázy
spolehlivější než MIC, pokud se měří průměr zóny a pečlivě se prohlíží její okraj.
S. aureus s ostrým okrajem zóny
a průměrem zóny ≥ 26 mm = rezistentní
S. aureus s neostrým okrajem zóny
a průměrem zóny ≥ 26 mm = citlivý
22
Detekce indukované rezistence ke klindamycinu u stafylokoků
• Indukovanou rezistenci ke klindamycinu lze detekovat průkazem antagonizmu mezi klindamycinem a makrolidem.
• Disky erytromycinu a klindamycinu se umístí ve vzdálenosti
12-20 mm mezi okraji disk ů a pozoruje se antagonizmus (D fenomén).
Příklady D fenoménu u stafylokoků. 23
Detekce indukované rezistence ke klindamycinu u streptokoků
• Indukovanou rezistenci ke klindamycinu lze detekovat průkazem antagonizmu mezi klindamycinem a makrolidem.
• Disky erytromycinu a klindamycinu se umístí ve vzdálenosti
12-16 mm mezi okraji disk ů a pozoruje se antagonizmus (D fenomén).
Příklady D fenoménu u streptokoků. 24
X EUCAST
Výjimka
EUROPEAN COMMITTEE ON ANTIMICROBIAL SUSCEPTIBIITY TESTING
European Society of Clinical Microbiology and Infectious Diseases