Post on 15-Jan-2017
JOHN ANDERSSON CORREA MURIEL
VALENTINA GUERRA ZAPATA
ESTUDIANTES FACULTAD DE MEDICINA UPB
TERCER SEMESTRE
2016
INTRODUCTION
Stem cells in the bone marrow or fetal liver are the precursors of both T and
B lymphocytes. Stem cells differentiate into T cells in the thymus, whereas
they differentiate into B cells in the bone marrow. Within the thymus, T cells
become either CD4-positive (helper) cells or CD8-positive (cytotoxic) cells. B
cells can be differentiate into plasma cells that produce large amounts of
antibodies (immunoglobulins).
INTRODUCTION B lymphocytes are involved in the synthesis and
secretion of proteins called antibodies,
immunoglobulins ( Ig ) that are associated with
humoral immunity; Immunoglobulins are formed by
a pair of identical heavy chains (G, M , A, D, E) and
a pair of identical light chains, Kappa or Lambda,
wich determines the immunoglobulin.
They are on B lymphocyte membrane recognizing
the antigen, or as circulating molecules, antibodies
are secreted by plasma cells, these antibodies are
responsibles for the activation, proliferation and
differentiation of B lymphocytes
The Kappa´s chain deficiency shows a homozygous T to G
substitution at position 1288. This mutation causes a substitution
of Cys to Gly in protein sequence and, therefore, determines
the abnormal folding of Kappa chain constant region .This
defect could lead to a total reduction in the number of
circulating antibodies and the consequent defect
immunological response, presenting recurrent bacterial
infections due to immunosuppression.
INTRODUCTION
Announcing the only case reported and
known on the total deficiency of Kappa
light chain deficiency , which was
discovered by chance in a 62 years old
patient, when she was a kid suffered
from recurrent respiratory disease as
occasional digestive problems.
GENERAL PURPOSE
Mujer
Infecciones respiratoriasrecurrentes
Diarrea Ocasional
Plegamiento anormal de la
cadena polipeptidica
de Kappa
MÉTODOS
MÉTODOS
INMUNOFIJACIÓN:
Permite la caracterización clínica de las inmunoglobulinas monoclonales, para proteínas o gammapatías, las muestras biológicas son depositadas sobre una matriz de agarosa en gel,posteriormente se añaden anticuerpos específicos para las inmunoglobulinas y sus cadenas ligeras al gel para que se fijen a sus sitios específicos.
MÉTODOS
CITOMETRÍA DE FLUJO:
Técnica en la cual se hace la valoración de las poblaciones celulares basados en la
identificación de los CLAUSTER DE DIFERENCIACIÓN, mediante la reacción de
Ag-Ac y la utilización de Fluorocromos.
MÉTODOS
MÉTODOS
• SECUENCIACIÓN DEL GENOMA
Determina la cadena de nucleótidos que tiene un fragmento de DNA, cortado por enzimas de restricción. El marcaje del DNA se da de forma radioactiva o química con compuestos Fluorescentes.
MÉTODOS
Detección de la mutación en el DNA, mediante la amplificación del DNA para observar la constante de la cadena Kappa.
MÉTODOS
Figura 1.
RESULTADOSInmunofijación- electroforesis del suero de la paciente:
• Ausencia total de la cadena liviana Kappa unidas a linfocitos B (no reaccionó antikapa)
• Aumento de las cadenas livianas Lambda
• Subclases de IgG, IgA, IgM,IgE e IgD muestran Concentracions normales
• Se repitió Test y se hizo Nefelometría
NEFELOMETRÍA : Exámen para medir de forma rápida y precisa el nivel de ciertas inmunoglobulina, especialmente M, G, A, aquí se usó para la identificación de las cadenas Kappa
Figura 2. RESULTADOS
Citometría de Flujo
• FSC = Forward Scatter Determina el tamaño de la célula • SSC-A : Side Sccater Basado en CD45 y CD19 determina las características propias de la célula
RESULTADOS
Evaluar las poblaciones
celulares (Linfocitos B) que contienen las cadenas
livianas
CD : Moléculas Marcadoras de
superficie celular que reconocen
ciertos anticuerpos
CD19 (Encontrado
específicamente en la
superficie de Linfocitos B)
CD45 (Proteína tirosina
fosfatasa con mayor
expresión en linfocitos)
Garantizan identificación
de los linfocitos para
el estudio
Para la interpretación de resultados utilizaron Dot
Plot
“Lymphocytes were gated using the CD45/SSC dot-plot and CD19þ (gate
R4) B-cells were studied for expression of Kappa and Lambda Immunoglobulin light chains (A)”
IDENTIFICAMOS LAS CADENAS KAPPA Y LAMBDA EN LA SUPERFICIE DE LOS
LINFOCITOS B
• Sabemos que hay cadenas livianas
• No se diferencia la concentración entre Kappa y Lambda
• Seguridad al estar evaluando linfocitos
• Presencia de resultados en R4
“Gated on R4. Dot-plot representing the almost total
absence of surface Kappa light chain expression “
RESULTADOSIDENTIFICACIÓN INDIVIDUAL DE LAS
CADENAS KAPPA
• Se nota la ausencia de las cadenas Kappa, lo que es responsable del estado de la paciente.
• R8 sin expresión de las cadenas
K
“Gated on R4. Dot-plot showing strong expression of lambda light chain.”
RESULTADOS
IDENTIFICACIÓN DE LA SOBRE EXPRESIÓN DE LAS CADENAS LAMBDA
P
RESULTADOSMADRE (heterocigoto-no se expresa)
HERMANA(heterocigoto-no se expresa)
PACIENTE (Homocigota-se expresa)
Figura 3.
RESULTADOS
PUNTO DE MUTACIÓN: 1288 EN EL GEN. T POR G
Heterocigoto: No se expresa anomalía, pero es
portador
Homocigoto: Con la Deficiencia completa
(Como la paciente)
Conduce a una sustitución de Cys por Gly (POSICIÓN 194 de la proteína)
Plegamiento anormal del polipéptido
Figura 3.
ANÁLISIS
• Suero de los pacientes puestos a prueba con antígenos infecciosos comunes• Conclusión: Respuesta inmunológica normal en todos los pacientes
ANÁLISIS
DISCUSIÓNAUTHOR POSTULATE YES/NO
BERNIER ET AL This patients has repeated respiratory infections (requiring antibiotic
treatment) and recurrent episodes of diarrhea since the
childhood, heavily compromising the patient's
life qualityBARANDUN ET AL Patients presented a
decreased concentration of the main immunoglobulin classes and vitamin B12
deficiency.
STAVNEZER-NORDGREN ET AL Revealing a compound heterozygote of the gene for
constant kappa chain, encompassing a G replaced
with a T at nucleotide position 1288 on one allele, and a C
replaced with a T at nucleotide position 1150 on
the other allele.
T is sustituted by a G in 1288 position
MONTECUCCO ET AL A further case, characterized by recurrent pyogenic
infections, hemolytic anemia and occasional
thrombocytopenia has been previously described
Only has respiratory insufficiency and diarrhea
• The deficiency of the Kappa chain is a strange anomaly that is unknown for a lot of people, but that is very important, specifically to the patients who suffer it, it changes their life style in a extreme way.
• The Kappa´s chain deficiency has a big variation in the symptoms presentation
because the immunosuppression is only to specific antigens depending of the case. It´s a trouble to it´s identification.
• Deficiency of light chains can be directly related to immunosuppressive diseases and could a molecular target for the treatment of these.
• A bigger research on the deficiency of immunoglobulin light chains would be a breakthrough for diagnosis of possible autoimmune diseases without cause stated
CONCLUSIONS
John Andersson Correa Muriel
Valentina Guerra Zapata
• Pierguido Sala A, Antonio Colatutto A, Dora Fabbro B, Laura Mariuzzi ,Stefania Marzinotto C, Barbara Toffoletto C, Anna R. Perosa D, Giuseppe Damante B.Immunoglobulin K light chain deficiency: A rare, but probably underestimated, humoral immune defect (citado: Febrero 27,2016) Disponible enhttp://www.sciencedirect.com.consultaremota.upb.edu.co/science/article/pii/S1769721216300143
• X.Fuentes Arderiu, Castiñeiras Lacambra, M, Queralto Compaño. Bioquímica Clínica y Patología Molecular (Internet).1997 (Citado: 12 de Marzo, 2016). Sexta Edición, Volumen 1, Pagina 177. Disponible en:books.google.com.co/books?id=cKGyh_81voC&pg=PA177&dq=inmunofijación+por+electroforesis&hl=es419&sa=X&ved=0ahUKEwishJear7rLAhWBdR4KHQEqAPMQ6AEIGjAA#v=onepage&q=inmunofijaci%C3%B3n%20por%20electroforesis&f=false
BIBLIOGRAFÍA