Baktériumok által közvetített génterápia kísérletes bélgyulladás esetén egereknél

Pálffy Roland, Behuliak Michal, Gardlík Roman, Jáni Peter, Celec Peter

Patofiziológiai Intézet, Orvosi Kar, Molekuláris Biológiai Tanszék, Természettudományi Kar, Comenius Egyetem, Pozsony, Szlovákia

palffyroli@yahoo.co.uk

Bevezetés

• Gyulladásos bélbetegségek (IBD) – Morbus Crohn– Colitis ulcerosa

• IBD állatmodellek– Trinitro-benzolszulfón sav (TNBS)– dextrán nátrium szulfát (DSS)

SOD és MCP-1

Bevezetés

• Baktériumok a Crohn betegségben– Probiotikumok– Genetikailag modifikált probiotikumok

• Lactococcus lactis • Steidler et al. 2000 a Braat et al. 2004

– Baktofekció• Escherichia coli • Castagliuolo et al. 2005

– TGFbeta-1

Bevezetés

Bevezetés

Bevezetés

• Baktofekció

Célok

• antioxidatív és gyulladásellenes génterápia hatásának megfigyelése dextrán-szulfát nátrium sóval kezelt egereken

Metódusok

• 40 Balb/c egér• DSS protokoll (Rochat et al., 2007)

– enyhe colitis model– 10 nap 1%DSS az ivóvízben – 10 nap paralel kezelés

• Baktérium adagolás– SL7207 (Darji et al. 1997) – 20 Mio minden nap – gyomorszonda

Metódusok

• Átvitt gének– SOD1 (Cu-Zn szuperoxid-dizmutáz )

• Antioxidatív génterápia

– 7ND-MCP-1 (monocitákat kemoatraktáló protein 1 mutáns formája)• Gyulladásellenes génterápia pcDNA3

5860 bpBGH pA

SV40 poly A

SV40 promoter

CMV promoter

SV40 origin of replication

ColE1 origin

Neomycin ORF

Ampicillin ORF

hSOD2

Metódusok

• 4 csoport

– CTRL + médium– DSS + médium– DSS + SL7207/SOD1– DSS + SL7207/7ND-MCP1

Metódusok

• folyamatos megfigyelés– fekáliák állaga– testsúly

• gyulladás mediátorok (ELISA segítségével)– IL-1, IL-6 és TNFalfa a vastagbél mintákban

• hisztológia

Eredmények

Eredmények

Eredmények

Eredmények

Eredmények

Eredmények

Eredmények

Összegzés

• az 1%-os dextrán-szulfát nátrium só oldatos kezelés könnyű bélgyulladást váltott ki a Balb/c egereknél

• a génterápia hatása nem volt követhető a gyulladás serkentő citokinek szintjének változásával

• a vastagbélszövet hisztológiai indexe javult a génterápia hatására atenuált Salmonella Typhimurium SL7207 baktérium felhasználásával

Köszönöm figyelmüket!