Akciğer Adenokarsinomlarında EGFR Mutasyon ve EML4-ALK translokasyon

Analizi

B. Öz, Ş. Batur, T. Öztürk, Ö. Aydın, K. Kaynak, A.Turna, A. Demirkaya, S. Erdamar Çetin, N. MandelİÜ Cerrahpaşa T F PatolojiADİÜ Cerrahpaşa T F Göğüs Cerrahisi ADVKV Amerikan Has., Medikal Onkoloji

Akciğer kanserlerinde kişiye özgü tedavi seçimi

Bir çok kanser türlerinde «Tek tip tedavi » dönemi geride kaldı.

Akciğer kanseri , özellikle de adenokarsinom, «kişiye özgü tedavi» için bir model oluşturmuştur.

Bugünkü uygulamalar yanı sıra yakın gelecek için de büyük umutlar vardır.

???

?%45-49??

K-Ra

s %

30

ALK %

4BRAF % 3PDGFR

MET %1

EGFR %10-15

PI3KCA

HER2 %

3

Erlotinip

gefitinip

Glee

vec

crizotinibPLX4032GSK2118436

BKM 120

Transtzumab

NeratinibBIBV 2992

Docetaksel +/+_AZD6244

BEZ235 +

Ner

atini

bAf

atini

b,

Tiva

ntini

p

Akciğer Adenokarsinomlarında yönlendirici mutasyonlar

bilinmeyen

KRAS

EGFR

ALKBRAF

HER2

PIK3CAAkt

Akciğer Adenokarsinomlarında hedefe yönelik tedavi

Klinik uygulama

Yakın gelecekte uygulamaya girecekler

EGFR Sinyal Yolağı

Epitelyal farklılaşma ve fonksiyonunda rol oynayan transmembran tirozin kinaz reseptörlerinden

EGF ya da diğer ligandların bağlanması

TK aktivasyonu ilePI3K/Akt yolağı

Ras/Raf/MAPK yolağı aktiflenir.

EGFR Gen Mutasyonu: TK bölgesinde aktivasyon -2004

Nat Rev Cancer. 2007; 7: 169-81.

Akc Adenokarsinomlarında EGFR-TKI duyarlığı ile ilişkili EGFR Mutasyonları

Akciğer Adenokarsinomlarında EGFR araştırılması

EGFR mutasyonuEGFR protein ekspresyonu

EGFR gene copy sayısı

Flöresan in-situ hibridizasyon (FISH)

DNA ekstraksiyonu,

RT-PCR sequencing

pyrosequencing

İmmunohistokimya (IHK)

ALK mutasyonu

=Anaplastik large cell lenfoma kinaz

ALK somatik hücrelerde (nöral hücre hariç)

%3-7 Adeno/KHDAKGenç, hasta sigara içmemişEGFR «-» hastalarSolid büyüme paterni, taşlı yüzük hücreli ve müsinöz ADenoKa

ALK 2p23’da , EML4 2p21’ da

İnsersiyon yada translokasyon

ALK mutasyonu

Nature 448:561, 2007

yada

Insersiyon

Translokasyon

EML-4/ALK mutasyonu

Yöntem;İHK

FİSH

RT-PCR

Akc Adenokarsinomlarında prediktif belirleyicilerin saptanmasında önerilen algoritma

Adenokarsinom, KHDAK, AC fenotipi

( IHK)

EGFR mutasyon analizi,KRAS (isteğe bağlı) mutasyon

analizi

İleri evre/Tüm evrelerde

Negatif

ALK FISH

ALK IHK (???)

pozitif

Amaç:

Akciğer adenokarsinomlarında moleküler belirteçlerin Türk hastalardaki fenotipik özelliklerini belirlemek ve dünya literatür bilgileri ile karşılaştırmak,

Moleküler çalışmanın materyal tiplerinin uygulanabilirliklerini araştırmak,

Adenokarsinom histopatolojik alt tipleri ile EGFR mutasyonu ilişkisini incelemek,

ALK mutasyonu araştırma yöntemini belirlemek FİSH

İmmunhistokimya

Materyal-Metod 1

Aralık 2010- Ocak 2012

İ.Ü. CTF Patoloji AD’ nda veya dış merkezde tanı almış primer ya da metastatik akciğer adenokarsinomlu olgulardan EGFR mutasyon analizi istenen 100 olgu

EML4-ALK translokasyonu floresan in situ hibridizasyon (FISH) analizi istenen 29 olgu

K-ras istenen 24 olgu

Materyal-Metod 2

H+Eosin boyalı lamlardan % 50-75 tümör alanı içeren doku seçilerek mevcut parafin bloklardan ependonf tüpe 8-10 m kalınlığında 5-6 kesit alınmıştır.

EGFR ve K- ras mutasyon analizi için: Kesitlerden elde edilen total genomik DNA, EGFR geninin exon18 exon19 exon20 ve exon21 bölgelerini içeren kısmının ve K-ras için ex12,13 ve 61 bölgelerini içeren kısmının PCR ile amplifikasyonunda kullanılmıştır.

Amplifikasyon ürünleri konvansiyonel (dNTP) dizi analizi incelemesine alınmıştır. (Direkt sekanslama ve kapalı sistem mikro array)

Materyal-Metod 3

H+Eosin boyalı lamlardan % 50-75 tümör alanı içeren doku seçilerek mevcut parafin bloklardan ependonf tüpe 8-10 mikronmetre kalınlığında 5-6 kesit

EML4-ALK değerlendirilmesinde mevcut parafin bloklardan

İmmunhistokimyasal inceleme (Abcam 5A4) primer antikoru

FISH analizi WYSIS-ABBOTT break apart probu

Akc Adenokarsinomlarında genetik araştırma: CTF Patoloji deneyimi

Aralık 2010-ocak 2012

EGFR mutasyonu:100 Adenokarsinom

%40/ %60

yaş 22-88(24-88/ 22-78)

median 59,6(58,9/60,1)

Akc Adenokarsinomlarında genetik araştırma: CTF Moleküler Patoloji deneyimi

Aralık 2010- ocak 2012

%32 metastatik odaktan

%68 Primer odaktan

Materyalin çoğunluğu rezeksiyon materyali (lobektomi,pnömonektomi)

Tüm materyal tiplerinden (sitoloji-küçük bx) yeterli DNA

elde edilebildi !

23%

14%

12%11%

5%

3%

32%

Lobektomi Bronş bxİİAB Wedge Pnö-monek-tomi Tru cut bxMetastaz

3%

6%

1%

1%

Akc Adenokarsinomlarında genetik araştırma: CTF Patoloji deneyimi

Aralık 2010-Ocak 2012

11/100 pozitif %11

10 / 1

9 Ex 19 ve 2 Ex 21’de

8 (%72,8) sigara öyküsü yok

Akc Adenokarsinomlarında genetik araştırma: CTF Patoloji deneyimi

Aralık 2010- Ocak 2012

Olgu Yaş Cins Sigara Organ Alınma Şekli Histolojik tip- patern EGFR

1 51 K 20y 120p-y AC Wedge rezeksiyon Lepidik patern baskın mikst Exon19

2 77 K Yok AC Lobektomi Lepidik patern baskın mikst Exon19

3 46 E Yok AC Lobektomi Lepidik patern baskın mikst Exon19

4 55 K 4 y 36p-y AC Lobektomi Asiner patern baskın mikst Exon19

5 62 K Yok Kemik-vertebra Eksizyon Adenokarsinom metastazı Exon19

6 60 K Yok AC Lobektomi Asiner patern baskın mikst Exon19

7 84 K Yok AC Bronkoskopik biopsi Adenokarsinom Exon19

8 45 K 20yıl Kemik-vertebra Tru-cut Adenokarsinom metastazı Exon21

9 39 K Yok AC İnce iğne aspirasyon biopsi

Küçük hücre dışı karsinom Exon19

10 78 K Yok AC Wedge rezeksiyon Adenokarsinom mikst Exon19

11 60 K Yok Beyin-oksipital Eksizyon Adenokarsinom metastazı Exon21

Nat Rev Cancer. 2007; 7: 169-81.

Akc adenokarsinomlarında EGFR-TKI duyarlığı ile ilişkili EGFR Mutasyonları

2 olgu9 olgu

Mutasyon analizi yapılan olgularda histopatolojik paternler

Asiner ve lepidik paternde yüksek oranda EGFR pozitifliği

%37 Asiner ve lepidik patern;

Pozitiflerin %63,6sı asiner ve lepidik pattende

Lepidik tek başına

bakıldığında %30,7

24

13

13222

19

16

9

ASİNER

SOLİD

LEPİDİK

PAPİLLER

MİKROPAPİLLER

MÜSİNÖZ

SİTO

BX KÜÇÜK

?

3

4

1

1

2

Akc Adenokarsinomlarında genetik araştırma: CTF Patoloji deneyimi

Aralık 2010- Ocak 2012

Kras mutasyonu:

24 olguda araştırıldı.(EGFR ile eş zamanlı veya ardından)

5olgu pozitif (% 20,83)

bu olgular EGFR ve ALK negatif

3’ü Müsinöz, 1’ i asiner

Akc Adenokarsinomlarında genetik araştırma: CTF Patoloji

deneyimi Mart 2011- ocak 2012

ALK rearajmanı:29 KHDAK olgusu %96AdenokarsinomFİSH yöntemi (Break-apart –Wysis Abbott moleküler) 26 olgu IHKALK reaarangementi %100 negatif, 1 olguda amp : polizomi ALK+ kabul edilemez

~250 kb ~300 kb

t(2;5) ALK genebreakpoint region

2p23 regionTelomere Centromere

3’ 5’

~250 kb ~300 kb

t(2;5) ALK genebreakpoint region

2p23 regionTelomere Centromere

3’ 5’

ALK mutasyonu (FİSH)

yaş aralığı: 22-78, ort :58

%62.1 %37.9 29 olgudan %86.2’ sinde değerlendirilen hücrelerde 2p23 (ALK) bölgesinde ilişkin translokasyon gözlenmemiştir. %13.8’ hücre yetersizliği nedeniyle sonuç -

Sonuçlar: 1 Çalışmamız ülkemizde akciğer adenokarsinomlarında hedefe yönelik tedavi için genetik analiz sonuçlarını veren ilk geniş seridir.

%11 oranında EGFR mutasyon pozitifliği Batı kökenli toplumlarla uyumlu;

Tüm dünyadaki gibi ve sigara içmeyenlerde (%90)

EGFR (+) hastalarla araştırılan grupla yaş farkı yok.

Hem rezeksiyon hem de metastatik odaktan çalışılabildi, sitolojik materyal ve hücre bloklarında da sonuç alınabildi.

Sonuçlar: 2

Tüm EGFR pozitiflikleri TKI’ne duyarlılığı + etkileyen mutasyondu (% 81 Ex 19)

En sık Lepidik patendeki olgularda EGFR mutasyonu + (%30.7)

ALK mutasyon değerlendirmesinde FİSH yöntemi

ALK «+» olgu saptanmadı. Kras + olguların hiç biri (EGFR ve ALK pozitif değil

Kras + olguların %60’ı sigara içici

Sonuçlar: 3

Her türlü rezeksiyon yada hücre bloğu olan materyal çalışılabildi.

Dokunun büyüklüğü, tümör miktarı, tümörün özellikleri yanı sıra, uygun DNA elde edebilmek yada FİSH yöntemini uygulayabilmek için uygun fiksasyon ve doku takibi çok önemlidir.

Cerrahpaşa Tıp Fakültesi – Patoloji Anabilim Dalı-Moleküler Patoloji

Teşekkür ederim.