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食品中合成着色剂的测定 —— 色素提取
2012.4.18
课程目的:
1. 掌握食品中合成着色剂的测定原理;
2. 了解高效液相色谱的工作原理及操作方法。
着色剂:通过使食品着色后改善其感官性状,增进食欲的一类物质。
天然着色剂:辣椒红、甜菜红、红曲米、胭脂虫红、高粱红、叶绿素铜钠、姜黄、栀子黄、胡萝卜素、藻蓝素、可可色素、焦糖色素等等。
合成色素:用人工合成的方法从煤焦油中制取,或以苯、甲苯、萘等芳香烃化合物为原料合成的有机色素。包括苋菜红、柠檬黄、亮蓝、日落黄、诱惑红、赤鲜红等等。
合成着色剂的潜在危害——致泻性、致癌性
国际: JECFA 制定各种合成着色剂的 ADI
我国:食品安全国家标准、食品添加剂使用标准( GB2760-2011 )
现状:超量使用,使用工业色素、染料色素
方便、快速、准确地检测食品中合成着色
剂,是对其进行有效管理的必要手段。
测定手段( GB/T 5009.35-2003 ):
1. 高效液相色谱法
2. 薄层色谱法
3. 示波极谱法
4. 其他:纸上层析、分光光度法
苋菜红、亮蓝、柠檬黄、日落黄
着色剂 最大使用量( g/kg )柠檬黄 0.1日落黄 0.1苋菜红 0.05
亮蓝 0.025
合成着色剂在饮料中的最大使用量
( GB2760-2011 )
一、实验原理
1. 聚酰胺吸附法提取合成着色剂
聚酰胺(尼龙)通过氢键吸附着色剂,天然着色剂(影响测定)在酸性条件下被洗脱去除,合成着色剂在碱性条件下被洗脱收集,浓缩后上机测定。
吸附——洗涤——解吸附——浓缩——上机理化测定一般步骤:除杂质、收集目标物、调整浓度、上机
2. 高效液相色谱法
高效液相色谱法( HPLC ):是色谱法的一个重要分支,以液体为流动相,采用高压输液系统,将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱,在柱内各成分被分离后,进入检测器进行检测,从而实现对试样的分析。
检测器:二极管阵列检测器
3. 结果分析
保留时间(定性):根据样品中各物质被洗脱至检测器的时间差异来进行定性分析;
峰面积(定量):根据样品峰面积与标准品峰面积的比较来进行定量分析。
试剂 配方 作用聚酰胺粉 吸附柠檬酸溶液 20g 柠檬酸, 100mL 水溶解 调 PH
PH 4 的水( 70℃ )
水 + 柠檬酸溶液,调至 PH=4 ,加热
洗涤
甲醇 - 甲酸溶液 60mL 甲醇 +40mL 甲酸 洗涤无水乙醇 - 氨水 -水
70mL 乙醇 +20mL 氨水 +10mL水
解吸附
乙酸铵溶液 1.54g 乙酸铵,纯水定容至1000mL ,乙酸调 PH 至 4
流动相
合成着色剂标准溶液
浓度 0.05mg/mL 定量分析
50% 乙醇 定容样品其他 乙酸、甲醇、氨水、蒸馏水水
二、试剂与器材
二、试剂与器材
器材:
烧杯、玻棒、吸管、移液管、 G3 漏斗、抽滤瓶 *2 、针筒、温度计、 5mL 玻璃离心管
电子天平、水浴锅
三、实验步骤
1. 取样、脱气
称取饮料 20g ,倒入 50mL 烧杯,碳酸饮料用电炉加热除去
二氧化碳。(已脱气)。
2. 色素吸附
称取聚酰胺 3g ,用少许 PH4 的水( 70℃ )调成糊状,加入待
测样品,搅拌 5min 。
3. 除杂质 组装好 G3 漏斗,将样品倒入漏斗,抽滤; PH4 的水( 70℃ )洗涤 3次,每次 20mL (洗涤沉淀物); 甲醇 - 甲酸洗涤 3次,每次 20mL (洗涤天然色素); 400mL PH4 的水洗涤。
4. 解吸附 更换抽滤瓶。用乙醇 - 氨水 - 水溶液洗涤三次( 5mL 、 10mL 、 5mL ),收集解吸液。
5. 样品浓缩
解吸液倒入蒸发皿中, 80℃ 水浴蒸发至约 2mL ,以乙酸(一小滴)调节 PH 至 6 。收集样品至玻璃离心管,加水定容至 5mL 。
3g 聚酰胺 20g 饮料
70 PH4℃ 水,糊状
加热脱气混合搅拌 5min
G3 漏斗抽滤
70 PH4℃ 水, 20mL ,洗 3 次
甲醇 - 甲酸, 20mL ,洗 3次70 PH4℃ 水, 400mL 洗涤
乙醇 - 氨水 - 水,洗三次, 5ml 、 10mL 、 5mL
更换抽滤瓶
收集滤液, 80℃ 水浴至 2mL
乙酸调 PH 至 6 ,离心管定容至 5mL ,冰箱保存
抽滤过程注意搅拌、倒废液
清洗漏斗:自来水 - 盐酸 - 蒸馏水
目标物
6. 上机测定
3000rpm 离心 5min ,取上层 10μL 进高效液相色谱。
7. 结果分析
( 1 )保留时间
( 2 )含量计算
X——试样中着色剂含量( g/kg ) A—— 样液中着色剂含量( μg )
V2—— 进样体积( mL ) V1——试样稀释总机体( mL )
m——试样质量( g ) 结果保留两位有效数字