©2012 Waters Corporation 1
UPCUPC22
UltraPerformanceUltraPerformance Convergence ChromatographyConvergence Chromatography
Enemmän selektiivisyyttä
kromatografia-analytiikkaan
Liisa Kanner
©2012 Waters Corporation 2
ErilaisetErilaiset erotustekniikaterotustekniikat
Gas Chromatography Liquid Chromatography Convergence Chromatography
GC
Capillary GC
HPLC
UPLC
SFC
UPC2
©2012 Waters Corporation 3
UltraPerformanceUltraPerformance Convergence ChromatographyConvergence Chromatography
Convergence Chromatography on kromatografinen erotustekniikka, jokaon vaihtoehtoinen neste- tai kaasukromatografialle.
UltraPerformance Convergence Chromatography [UPC2]
Alusta asti uudelleen suunniteltu kromatografialaitteisto, jossa eluenttinakäytetään hiilidioksidia ,CO2 . Erotuksen selektiivisyys vastaanormaalifaasierotusta, mutta sopii erinomaisesti myöskäänteisfaasitekniikaksi.
ACQUITY UPC2
Laite perustuu UPLC tekniikkaan ja mahdollistaa haastavimmatkin erotuksetluotettavasti ja nopeasti.
©2012 Waters Corporation 4
Why The Name?Why The Name?
Giddings, J.C. (1965) A critical evaluation of the theory of gas chromatography. In Gas Chromatography. 1964, edited by A. Goldup, p. 3-24. Elsevier, Amsterdam
In this article Dr. Giddings stated “One of the most interesting features of ultra high pressure gas chromatography would be convergence with classical liquid chromatography.”
Prof. Calvin Giddings (1930-1996)
©2012 Waters Corporation 5
NäytteenkäsittelyNäytteenkäsittely
Useimmiten näytteenkäsittely koetaan hankalaksi jakalliiksi ja siitä haluttaisiin päästä niin vähällä kuinmahdollista.
Useimmissa näytteenkäsittely prosesseissa päädytäänorgaaniseen liuottimeen.– neste/neste, Soxhlet, tislaus, haihdutus ja uudelleen
liuotus Useat matriisit vaativat orgaanisen liuottimen
(geelit, rasvat, öljyt, synteeseissä käytetyt liuottimet) solvents, etc.)
image from dyapharma.com image from sefetec.net image from tasnee.com
©2012 Waters Corporation 6
NäytteeenkäsittelyNäytteeenkäsittely
SoxhletExtraction
Distillation
Evaporation
Macro Micro Liquid / Liquid
DryingGrinding SFE
SPE
©2012 Waters Corporation 7
UPCUPC22
SPE Extraction(Florisil)
GasGas ChromatographyChromatographyGasGas ChromatographyChromatography
STEP 1
Elution in hexane/ethyl acetateSTEP 2
Evaporate to drynessSTEP 3
Reconstitute in cyclohexaneSTEP 4
pyrethroidspyrethroids
Derivatize sample
Ready for analysis
STEP 5
STEP 6
SPE Extraction(Oasis HLB)
ReversedReversed--phase LCphase LCReversedReversed--phase LCphase LC
Elution in methanol
Evaporate to dryness
Reconstitute in water
carbamatescarbamates
Ready for analysis
Convergence Convergence ChromatographyChromatography
Convergence Convergence ChromatographyChromatography
Direct Analysis on UPC2
Convergence Chromatography
Eliminate lengthy evaporation and
reconstitution steps
No need for derivatization
©2012 Waters Corporation 8
KromatografisetKromatografiset erotustekniikaterotustekniikat
Gas Chromatography
Liquid Chromatography
Convergence Chromatography
Erotus saadaan aikaa lämpötilagradientilla
•Hyvä tehokkuus [N]• Käytännössä ei ole rajoituksia kolonnin pituuden suhteen
•Rajoittunut selektiivisyys[α]• Vähän vaihtoehtoja stationäärifaasiksi
Erotus saadaan aikaan liuotingradientilla
•Hyvä tehokkuus[N]• Paine rajoittavana tekijänä
• Suhteellisen hyvä selektiivisyys [α]• Paljon erilaisia muotoja ja stationäärifaaseja: RP, NP, SEC, IEX, affiniteetti, ionipari, HILIC, GPC…etc.
Erotus saadaan aikaan liuotingradientilla
•Hyvä tehokkuus[N]• Eluentin CO2 alhainen viskositeetti mahdollistaa pidemmät kolonnit japienemmät partikkelit
•Hyvä selektiivisyys[α]• Paljon erilaisia stationäärifaaseja ja liuotinvaihtoehtoja eluentiksi
GC
LC
CC
©2012 Waters Corporation 9
KaasukromatografianKaasukromatografiankehityskehitys
Gas Chromatography
Sen jälkeen kun kapillaarikolonnitotettiin käyttöön –luvulla, on vain vähä tapahtunut GC maailmassa.
GC Capillary GC
Vain vähän kehitystä GC-tekniikassa viimeisen 30 vuoden aikana
*1
*1: image from Restek.com *2: image from teaching.shu.ac.uk *3: image from soils.org
*2
*3
©2012 Waters Corporation 10
18,000 psi
30,000 psi
130,000 psi
0
50,000
100,000
150,000
200,000
250,000
300,000
350,000
400,000
450,000
500,000
5 µm 3.5 µm 1.7 µm 1.4 µm 1.0 µm
Plat
es/m
eter
Particle Size
NestekromatografianNestekromatografiankehityskehitys
Liquid Chromatography
Siirtyminen UPLC-tekniikkaan 2004 on muuttanut nestekromatografiansuorituskykyä huomattavasti, parantaen resoluutiota, herkkyyttä janopeutta
LC UltraPerformance LC[UPLC]
partikkelikokoa
LC erotuksen tehokkuutta (N) on parannettu pienentämällälaitteistojen tilavuutta ja kolonnienpartikkelikokoa
ACQUITY UPLC I-Class laitteisto
70% more efficiencythan 1.7 µm
100% more efficiencythan 3.5 µm
©2012 Waters Corporation 11
SFC:nSFC:nkehityskehitys
Convergence Chromatography
SFC UltraPerformanceConvergence Chromatography
Data courtesy of Davy Guillarme, Jean-Luc Veuthey LCAP, University of Geneva, Switzerland
UltraPerformance Convergence Chromatography on SFC laitteiston ja kolonnien kehityksen tulos.
©2012 Waters Corporation 12
UPCUPC22:n :n sovellettavuussovellettavuusNopeatNopeat kiraalisetkiraaliset erotukseterotukset
Nopeat kiraaliset erotukset
Kannattaa siirtyä UPC2
tekniikkaaan– Tulokset vähintään yhtä hyviä kuin perinteisellä NP
kromatografialla
– Analyysiaiaka 1/30
– Eluenttien kulutus 1/75• 135 µL MeOH vs 10 mL heksaani/etanoli
Koko analyysi prosessi on nopeampi
Eluenttien valmistukseen janäytteenkäsittelyyn kuluva aika on lyhyempi
Kolonnien käyttöikä on pidempi
Eluenttien kulutus on vähäisempää jakäytettävät eluentit ovat edullisempia
AU
0.00
0.12
0.24
0.36
0.48
Minutes0.00 0.10 0.20 0.30 0.40 0.50 0.60 0.70 0.80 0.90 1.00
AU
0.00
0.30
Minutes0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00
UPC²
NPLC11 min
0.3 min
©2012 Waters Corporation 13
UPCUPC22:n :n sovellettavuussovellettavuusKorvaaKorvaa normaalifaasinormaalifaasi tekniikantekniikan
6.23
7
10.8
55
20.8
50
26.6
32
30.8
56
35.8
19
AU
-0.0004
-0.0002
0.0000
0.0002
0.0004
0.0006
0.0008
0.0010
0.0012
0.0014
0.0016
0.0018
0.0020
Minutes0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 45.00 50.00
ACQUITY UPC² 15 min
Cost per run ~ $0.05
Normal Phase HPLC50 min
Cost per run ~ $5.89
Kun normaalifaasiteknologiakorvataan UPC2:llä
Eluenttien valmistukseen ja näytteenkäsittelyynkuluu vähemmän aikaa
Kolonnien käyttöikä pitenee
Eluentikustannukset ovat huomattavastialhaisemmat
Kannattaa siirtyä UPC2 tekniikkaaan Tulokset vähintään yhtä hyvät
Analyysiaika vähnenee ainakin 3:s osaan
Kustannukset per analyysi 5.89 $:sta, 5 senttiin.
©2012 Waters Corporation 14
UPCUPC22:n :n monipuolisetmonipuolisetkäyttömahdollisuudetkäyttömahdollisuudet
A 4-hydroxyacetophenoneB p-nitrophenolC 2-hydroxyacetophenoneD 4-chloroacetanilideE acetanilideF phenacetinG 3-aminophenolH paracetamolI 2-aminophenol
Lääkeaineanalytiikka, epäpuhatusmäärityksetLääkeaineanalytiikka,
epäpuhatusmääritykset
Ympäristöanalytiikka Elitarvikeanalytiikka
Kemianteollisuus
Non-ionic surfactantsParacetamol and impurities
Chiral pesticides Vitamin E isomers
Permethrin
©2012 Waters Corporation 15
Perustuu UPLC tekniikkaaan
Huomattava lisäys selektiivisyyteenkromatografiassa
©2012 Waters Corporation 16
UPCUPC22
UPC2 teknologiassa voidaan hyödyntää kaikkia normaalifaasinselektiivisyys ominaisuuksia– Ortogonaalinen käänteisfaasikromatografialle– Pääasiallinen eluentti CO2, ei juurikaan tarvita normaalifaasianalytiikassa käytettäviä
haitallisia eluentteja.
UPC2 soveltuu monille yhdistetyypeille– 80-85% käänteisfaasilla erotettavista yhdisteistä voidaan erottaa myös
UPC2 :lla
– Jos yhdiste liukenee orgaanisenn liuottimeen, se sopii analysoitavaksi UPC2 :lla– Useimmat orgaaniset suolat– Vahvat orgaaniset hapot ja emäkset– Pienet rasvaliukoiset peptidit– Poolittomat (esim., vahat ja öljyt )– Sopii erinomaisesti isomeerien stereoisomeerien diastereomeerien ja kiraalisten
yhdisteiden erotukseen.
Detektoreiksi sopivat:– UV, PDA, ELSD, CD, MS, FID
©2012 Waters Corporation 17
MitäMitä on on superkriittinensuperkriittinen nesteneste??
Korkea diffuusio ja alhainenviskositeetti josta seurauksena
nopea ja tehokaskromatografia
Neste/kaasu Kriittinenpiste
Superkriitinenneste
Lisätäänlämpötilaa japainetta
Lisätäänlämpötilaa japainetta
©2012 Waters Corporation 18
UPCUPC22 tekniikantekniikan periaatteetperiaatteet
HPLC:n kaltainen erotustekniikka– Normaalisti nestekromatogrfaiassa käytettävä heikko eluentti (vesi) on
korvattu hiilidioksidilla CO2
Eluenttina on superkriittinen neste + yksi tai useampiaeluenttipareja– CO2 on yleisin superkriittinen eluentti– Metanoli on yleisin eluenttipari
Erotus on normaalifaasikromatografia kaltainen
Substance Critical Temp oC Critical Pressure(bar)
Comments
Carbon Dioxide 31 74 Physical state easily changed
Water 374 221 Extreme conditions needed
Methanol 240 80 Extreme temperature needed
Ammonia 132 111 Highly corrosive
Freon 96 49 Environmentally unfriendly
Nitrous Oxide 37 73 Oxidizing agent
©2012 Waters Corporation 19
Solvent Strength
Solvent EluotropicValue [Eo]
Polarity [P’]
Pentane, Hexane, Heptane
0 0.1
Xylene 0.22 2.5
Toluene 0.22 2.4
Diethyl ether 0.29 2.8
Dichloromethane 0.30 3.1
Chloroform 0.31 4.1
Acetone 0.43 5.1
Dioxane 0.43 4.8
THF 0.48 4.0
MTBE 0.48 2.5
Ethyl acetate 0.48 4.4
DMSO 0.50 7.2
Acetonitrile 0.52 5.8
Isopropanol 0.60 3.9
Ethanol 0.68 4.3
Methanol 0.73 5.1
Water 10.2
LiuottimienLiuottimien valintavalinta
Käänteisfaasi
UPC2
Hei
kko
Vah
vaN
orm
aali
faas
i
Supercritical CO2
Superkriittinen CO2, jota käytetään UPC:ssä liukeneekaikkiin eluotrooppisen sarjanliuottimiin, minkä takia on mahdollista käyttää laajaajoukkoa erilaisenselektiivisyyden omaaviaeluentteja
Normaalifaasi
©2012 Waters Corporation 20
StationäärfaasiStationäärfaasiSelektiivisyysSelektiivisyys vaihtoehdotvaihtoehdot
Stationary Phase Choices
Silica / BEH
2-ethylpyridine
Cyano
Aminopropyl
Diol
Amide
PFP
Phenyl
C18 < C8
Käänteisfaasi
Normaalifaasi
UPC2
UUPC2 kromatografiahyödyntää sekä normaali, että käänteisfaasikromatografiankolonnikemioita, jolloin on käytettävissä laajaselektiivisyysalue
©2012 Waters Corporation 21
SelektiivisyytennSelektiivisyytenn vaikuttavatvaikuttavat työkaluttyökalutRP RP jaja NP NP kromatografiassakromatografiassa
EluenttiPentane, Hexane, Heptane
Xylene
Toluene
Diethyl ether
Dichloromethane
Chloroform
Acetone
Dioxane
THF
MTBE
Ethyl acetate
DMSO
Acetonitrile
Isopropanol
Ethanol
Methanol
Kiinteäfaaasi
Silica / BEH
2-ethylpyridine
Cyano
Aminopropyl
Diol
Amide
PFP
Phenyl
C18 < C8
Käänteisfaasi
Normaalifaasi
Huomioitava eriliuottimiemmahdollinen
liukenemattomuustoisiinsa
©2012 Waters Corporation 22
UPC2
Melkein kaikkinestekromatorafiassa
käytetttävätliuottimet jakolonnifaasit
SelektiivisyytenSelektiivisyyten vaikuttavatvaikuttavat työkaluttyökalutUPCUPC22 kromatografiassakromatografiassa
EluentitPentane, Hexane, Heptane
Xylene
Toluene
Diethyl ether
Dichloromethane
Chloroform
Acetone
Dioxane
THF
MTBE
Ethyl acetate
DMSO
Acetonitrile
Isopropanol
Ethanol
Methanol
Kiinteäfaasi
Silica / BEH
2-ethylpyridine
Cyano
Aminopropyl
Diol
Amide
PFP
Phenyl
C18 < C8
©2012 Waters Corporation 23
SelektiivisyytenSelektiivisyyten vaikuttavatvaikuttavat työkaluttyökalutUPCUPC22 kromatografiassakromatografiassa
EluenttiPentane, Hexane,
Heptane
Xylene
Toluene
Diethyl ether
Dichloromethane
Chloroform
Acetone
Dioxane
THF
MTBE
Ethyl acetate
DMSO
Acetonitrile
Isopropanol
Ethanol
Methanol
Kiinteäfaasi
Silica / BEH
2-ethylpyridine
Cyano
Aminopropyl
Diol
Amide
PFP
Phenyl
C18 < C8
Hei
kko
Vah
va
SuperkriittinenCO2
Orgaaninenliuotin
UPC2
Melkein kaikkinestekromatorafiassa
käytetttävätliuottimet jakolonnifaasit
©2012 Waters Corporation 24
ACQUITY UPCACQUITY UPC22 laitteistolaitteisto::EnemmänEnemmän selektiivisyyttäselektiivisyyttä
: CSH PFP
AU
0.000
0.012
0.024
0.036
0.048
: HSS C18 SB
AU
0.000
0.012
0.024
0.036
0.048
: BEH HILIC
AU
0.000
0.012
0.024
0.036
0.048
: 2-EP
AU
0.000
0.012
0.024
0.036
0.048
Minutes0.00 0.60 1.20 1.80 2.40 3.00 3.60 4.20 4.80 5.40 6.00
ACQUITY UPC2 Hybrid 2-EP 1.7 µm
ACQUITY UPC2 Hybrid 1.7 µm
GA D(1,2)
C
HF
B
E
GA D
C
HF
B
E
GA
DC
H F
BE
GADC
HF*
B
E
ACQUITY UPC2 CSH Fluoro-Phenyl 1.7 µm
ACQUITY UPC2 HSS C18 SB 1.7 µm
AP
I
AP
I
AP
I
AP
I
©2012 Waters Corporation 25
UPCUPC22 kromatografiakromatografia::LisääLisää selektiivisyyttäselektiivisyyttä haastaviinhaastaviin erotuksiinerotuksiin
Stationary Phase
Silica / BEH
2-ethylpyridine
Cyano
Aminopropyl
Diol
Amide
PFP
Phenyl
C18 < C8
% O
rgaan
inen
Rasvaliukoisetvitamiinit
Rasvaliukoisetvitamiinit
HeikkoHeikko
VahvaVahva
SuperkriitinenCO2
Orgaaninenliuotin
©2012 Waters Corporation 26
UPCUPC22 kromatografiakromatografia: :
Rasvaliukoiset vitamiinit
Analyysiaika nopeampi verrattunakäänteis- ja normaalifaasierotuksin
UPC2 sopii hyvin erilaislle valmisteilleo Öljypohjaisille, jauhoille ja tableteille
Näyte voidaan injektoida suoraanuutttoliuoksessa
retinol
AU
-0.05
0.00
0.05
0.10
0.15
0.20
0.25
0.30
0.35
0.40
0.45
0.50
0.55
0.60
0.65
0.70
Minutes0.00 0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00 2.20 2.40 2.60 2.80 3.00
Vitamin ApalmitateVitamin A
acetate
AU
0.00
0.25
0.50
0.75
1.00
Minutes0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00 5.50 6.00 6.50 7.00 7.50 8.00 8.50 9.00 9.50 10.00
6.86
2
AU
0.000
0.006
0.012
0.018
0.024
Minutes4.20 4.404.604.80 5.005.205.40 5.605.806.00 6.206.40 6.606.807.00 7.207.407.60 7.808.008.20 8.408.60 8.809.00
cis-vitamin Apalmitate
trans-vitamin A palmitate
Vitamin D3cholecalciferol
Vitamin D3cholecalciferol
0.48
9
0.69
5
0.76
3
0.89
3
AU
0.00
0.26
0.52
0.78
1.04
Minutes0.00 0.12 0.24 0.36 0.48 0.60 0.72 0.84 0.96 1.08 1.20
α-tocopherol
β-tocopherol
δ-tocopherol
γ-tocopherol
Vitamin E isomers
ACQUITY UPC2 BEH
ACQUITY UPC2 HSS C18 SB ACQUITY UPC2 HSS C18 SB
©2012 Waters Corporation 27
UPCUPC22 kromatografiakromatografia::LisääLisää selektiivisyyttäselektiivisyyttä haastaviinhaastaviinerotuksiinerotuksiin
Kiinteäfaasi
Silica / BEH
2-ethylpyridine
Cyano
Aminopropyl
Diol
Amide
PFP
Phenyl
C18 < C8
Lipidit
% O
rgaan
inen
HeikkoHeikko
VahvaVahva
Superkriittinen CO2
Orgaaninenliuotin
©2012 Waters Corporation 28
UPCUPC22 kromatografiakromatografia: : PoolisetPooliset jaja neutraalitneutraalit lipiditlipidit
PC
SMLPC
PE
TAG
Neutraalit ja pooliset lipidit
UPC2 :lla voidaan yhdellä menetelemällä erottaa erilipidiryhmiä, kun GC.llä ja RPLC.llä voidaan erottaavain yksi ryhmä kerrellaan
Hyvä erotuskyky sekä ryhmien välille, että piikeilleryhmän sisällä
Selektiivinen monille biologisille uutteille
TAG: Triacylglycerides PE: Phosphotidylethanolamine PC: PhosphotidylcholineSM: Sphynogomyelin LPC: Lysophosphotidylcholine
©2012 Waters Corporation 29
TAG mix
CE mix
FFA
All mix
ESI-
ESI+
UPCUPC22 kromatografiakromatografia: : NeutraalitNeutraalit lipiditlipidit
©2012 Waters Corporation 30
LisääLisää selektiivisyyttäselektiivisyyttä haastaviinhaastaviinerotuksiinerotuksiin luonnontuotteidenluonnontuotteidenanalyyseissäanalyyseissä
Kiinteäfaasi
Silica / BEH
2-ethylpyridine
Cyano
Aminopropyl
Diol
Amide
PFP
Phenyl
C18 < C8
Luonnontuotteet
% O
rgaan
inen
heikkoheikko
VahvaVahva
SuperkriittinenCO2
Orgaaninenliuotin
©2012 Waters Corporation 31
AU
0.00
0.05
0.10
0.15
0.20
Minutes0.00 2.20 4.40 6.60 8.80 11.00 13.20 15.40 17.60 19.80 22.00
UPCUPC22 kromatografiakromatografia: : LuonnontuotteetLuonnontuotteet
Kamomilla
Luonnontuotteiden määritys on erityisenhankalaa johtuen näytteidenmonimutkaisuudesta
Usein tarvitaan ortogonaalinen erotus, jottavoidaan varmistaa näytteen karakterisointi
Näytteiden uuttoliuokset on injektoitavissasellaisenaan UPC2 kolonniin
1. apigenin-7-O-glucoside2. chamaemeloside3. apigenin
1
2
3
Anthemis nobilis(kamomilla)
©2012 Waters Corporation 32
UPCUPC22 kromatografiakromatografia: : LuonnontuotteetLuonnontuotteet
Inte
nsity
0
80000
160000
240000
320000
Minutes11.60 11.80 12.00 12.20 12.40 12.60 12.80 13.00 13.20 13.40 13.60 13.80 14.00 14.20 14.40 14.60 14.80 15.00 15.20 15.40
Inte
nsity
0.0
4.0x105
8.0x105
1.2x106
1.6x106
Minutes4.62 5.28 5.94 6.60 7.26 7.92 8.58 9.24 9.90 10.56
MS tekniikalla analysoitu käyttäen sekä LC ettäSFC tekniikkaa
XIC of m/z=475 UPC2 tekniikalla löytyi uusiisobaarinen komponentti
UPLC …joka puuttuu UPLC-RP kromatogrammista
UPC2
*
©2012 Waters Corporation 33
BinolinBinolin kiraalinenkiraalinen erotuserotus
AU
0.00
0.02
0.04
0.06
0.0 5.0 10.0 15.0 20.0
Rs=1.67NPLC
AU
0.00
0.20
0.40
0.60
0.80
1.00
Minutes0.0 5.0 10.0 15.0 20.0
Rs=2.61UPC2
Experimental Conditions
©2012 Waters Corporation 34
EdutEdut kiraalisessakiraalisessa UPC² UPC² erotuksessaerotuksessa
BINOLin enantiomeerien erotus alle 2:n minuutin
Waters ACQUITY UPC² laitteistolla
UPC² on 9 kertaa nopeampi kuin NPLC
Ympäristön kannalta parempi vaihtoehto– Ei tarvita heksaania
Paljon pienemmät analyysikustannukset– $2.85/analyysi NPLC :llä vs. $0.08/analyysi for UPC²:lla
o Nopeampi
o CO2 ja metanoli ovat halpoja liuottimia
©2012 Waters Corporation 35
AU
0.00
0.12
0.24
0.36
0.48
Minutes0.00 0.10 0.20 0.30 0.40 0.50 0.60 0.70 0.80 0.90 1.00
AU
0.00
0.30
Minutes0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00
Perustuu ACQUITY laitteistoon– UPC² systeemin tilavuus on n. 66 µL
– UPC² systeemin dispersio on n. 25 µL 2 mL/min virtauksella
o ACQUITY UPLC : dispersio on n.16 µL
o Alliance :n dispersio on 40 µL
Pienempi dispersio UPC²:lla vähentää vyöhykkeen leviämistä
Nopeampi erotus vähentääkustannuksia huomattavasti
PienetPienet partikkelitpartikkelit kiraalisissakiraalisissaerotuksissaerotuksissa
0.30
IB3 (2.1 50 mm, 3 µm)15% methanol3 mL/min120 barTotal analysis time: 18 s
AD-H (4.6 150 mm, 5 µm)70/30 hexane/ethanol1 mL/min
UPC²
NPLC
Warfarin
©2012 Waters Corporation 36
EnantiomeeriEnantiomeeri--epäpuhtaudenepäpuhtaudenmääritysmääritys UPC²:llaUPC²:lla
O(R)
OH
O
O(S)
OH
O
Benzyl Mandelate
AU
0.000
0.002
0.004
Minutes0.00 0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00
RS
AU
0.00
0.20
Minutes0.00 0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00
R S RS=7.28
Analyte Benzyl mandelate
Isomer R- S-
Retention tR (min) 0.933 1.344
Std. Dev. 0.00179 0.00283
% RSD 0.23 0.21
Peak area Peak area (µV*sec) 593374 594972
Std. Dev. 2815.47 2986.23
% RSD 0.47 0.50
©2012 Waters Corporation 37
ParempiParempi kvantitointikvantitointi
R- ja S-benzyl mandelaatin enantiomeerit n. 1,5 minuutissaWaters ACQUITY UPC² laitteistolla
Erinomainen toistettavuus– < 0.23% RSD retentiolle– < 0.5% RSD piikin pinta-alalle
Parempi detektointi herkkyys mahdollistaa 0.02 prosenttisenenantiomeeri epäpuhtauden määrityksen– Parempi pumppu– Laite suunniteltu siten, että paineenvaihtelu on melkein olematon– Detektorissa hyvä lämpötilakontrolli
o Vähemmän altis ympäristön lämpötilan muutoksille– Injektioventtiili erikoisesti UPC²:een suunniteltu, koska pulssin oltava
mahdollisimman pieni
©2012 Waters Corporation 38
R, SR, S--methamfetamiinienmethamfetamiinien erotuserotusUPCUPC2 2 menetelmällämenetelmällä
Kiraalinen erotus 5:ssä minuutissa
Huomattavasti nopeampi kuin GC tai CE
Optimoitu metamfetamiinin UPC2 ckromatogrammi 1: S-MA2: R-MA
AU
0.000
0.004
Minutes0.00 1.00 2.00 3.00 4.00
1 2Rs=1.84
©2012 Waters Corporation 39
MethamfetamiininMethamfetamiinin jaja sensenlähtöaineidenlähtöaineiden erotuserotus
R/S enentiomeerisuhde antaa arvokasta tietoa metamfetamiinin lähtöaineista, maantieteellisestä alkuperästä sekä valmistuksen tasosta.
R, S-enantiomeerien ja kahden yleisen lähtöaineen erotus 6:ssa minuutissa.
UPC2 UV kromatogrammi1: S-MA 2: R-MA3: (1S,2S)-pseudoephedrine4: (1R, 2S)-ephedrine.
AU
0.000
0.002
Minutes0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00
1 2
3
4
©2012 Waters Corporation 40
UPCUPC22 SovelluksiaSovelluksia
Pharmaceutical Food/Env Chemical Materials ClinicalChiral drugs
Transfer from USP methodsFat-soluble vitamins
Lipid analysisAchiral impurity analysis
Chiral pesticidesExplosives
OLEDsAzo dyes
Non-ionic surfactants
Polymer additivesDrugs of abuse
Vitamin D metabolitesCarotenoids
Positional isomersSteroids Steroids
Extractables and leachablesReaction monitoring
Library screeningDMPK/BioanalysisNatural products
MetabolomicsGlycerides
PAHLubricants
©2012 Waters Corporation 41
ACQUITY UPC² SystemACQUITY UPC² System
©2012 Waters Corporation 42
YhteenvetonaYhteenvetona
ACQUITY UPC2 teknologia käyttää kompressoitua hiilidioksidia (CO2) pääasiallisena eluenttina ja sopii hyvin sekä rutiini, että monimutkaisempiinanalyyseihin, etenkin näytteisiin jonka komponentit edustavat laajaapoolisuusaluetta .
UPC2 tarjoaa erinomaisen työkalun perinteisten LC ja GC tekniikoidentilalle/rinnalle
UPC2 tekniikka perustuu luotettavaan UPLC teknologiaan .
UPC2 tarjoaa poikkeuksellisen paljon mahdollisuuksia selektiivisyydenlisäämiseksi ja näin ollen se soveltuu monille erilaiselle yhdistetyypeille
– 80-85% yhdisteistä, joita analysoisaan RPLC tekniikalla voidaan analysoidaUPC2 -tekniikalla
– Mikä tahansa yhdiste, joka liukenee orgaaniseen liuottimeen sopiianalysoitavaksi UPC2 -tekniikalla.
©2012 Waters Corporation 43
ACQUITY UPCACQUITY UPC22 SystemSystem
Top Related