INSTITUTO NACIONAL DE DIAGNOSTICOINSTITUTO NACIONAL DE DIAGNOSTICOINSTITUTO NACIONAL DE DIAGNOSTICOINSTITUTO NACIONAL DE DIAGNOSTICO
Y REFERENCIA EPIDEMIOLOGICOSY REFERENCIA EPIDEMIOLOGICOSY REFERENCIA EPIDEMIOLOGICOSY REFERENCIA EPIDEMIOLOGICOS
“Situación Epidemiológica y Laboratorio “Situación Epidemiológica y Laboratorio “Situación Epidemiológica y Laboratorio “Situación Epidemiológica y Laboratorio de la Rabia en México”de la Rabia en México”de la Rabia en México”de la Rabia en México”
PRESENTA: D en C ALEJANDRA MELÉNDEZ FÉLIXPRESENTA: D en C ALEJANDRA MELÉNDEZ FÉLIXPRESENTA: D en C ALEJANDRA MELÉNDEZ FÉLIXPRESENTA: D en C ALEJANDRA MELÉNDEZ FÉLIXPRESENTA: D. en C. ALEJANDRA MELÉNDEZ FÉLIXPRESENTA: D. en C. ALEJANDRA MELÉNDEZ FÉLIXPRESENTA: D. en C. ALEJANDRA MELÉNDEZ FÉLIXPRESENTA: D. en C. ALEJANDRA MELÉNDEZ FÉLIX
Lab. de Rabia InDRE AMFLab. de Rabia InDRE AMF
RED DE RABIA 2011RED DE RABIA 2011
InDRE
INSTITUCIÓN REGULADORA DE LA
SECRETARÍA DE SALUD EN MÉXICO
Estados con mínimo contacto con el InDRE (COL)
Estados sin LESP– muestras analizadas por el InDRE (BC, BCS, SIN, NAY, MICH, DF, YUC)
LESP formalmente integrados a la red (23)
Lab. de Rabia InDRE AMFLab. de Rabia InDRE AMF
Actualmente Morelos está en proceso de implementación (MOR)
I N F O R M A C I Ó NI N F O R M A C I Ó NI N F O R M A C I Ó NI N F O R M A C I Ó N
LESPs(SSA)
Laboratorios de (SAGARPA)
INDRE (SSA)CENASA (SAGAR)
POBLACIÓN
Centros de control canino o antirrábicos
CENAVECEDGE
JEFES DE PROGRAMA
LESPs (SSA)INDRE (SSA)
CENASA (SAGAR)LABs (SAGARPA)
Centros de control caninoy antirrábicos
OPS
Lab. de Rabia InDRE AMFLab. de Rabia InDRE AMF
OPSCDC
APOYO DEL LAB DE RABIA DEL InDRE 2010APOYO DEL LAB DE RABIA DEL InDRE 2010
Diagnóstico de rabia 3667 (12+, 3531- y 124 rechazadas)
A l di ó ti B j C lif i B j C lif i S Si l N it C li Mi h áApoyo en el diagnóstico •Baja California, Baja California Sur, Sinaloa, Nayarit, Colima, Michoacán yMorelos .También al área metropolitana: 7 Centros antirrábicos y Centros de ControlCanino del Distrito Federal, Centro de Control Canino de Naucalpan, CentroAntirrábico Cuautitlán Izcalli y a la Jurisdicción de Ecatepec.
Control de calidad (23LESP) 2541 [246+, 1295 (85 rechaz, 4 incong)]
Red de LESP •Envío de dos paneles anuales• Control de calidad mensual 5-10% de muestras negativas y el 100% demuestras positivas•Implementación de IFD por el LESP de Morelos a la Red de diagnóstico,p p gcapacitación próxima al LESP de Yucatán.
Colaboración binacional •Asistencia de un funcionario del Laboratorio de Rabia del InDRE al D t t d S l d d A ti T 30 t bi ló iDepartamento de Salud de Austin Texas con 30 muestras biológicas para corroborar resultados antigénicos y genéticos, obteniendo un 100% de concordancia•Implementación del control externo por CDC al Laboratorio de Rabia del InDRE•Ampliación del panel de AcMo
Lab. de Rabia InDRE AMFLab. de Rabia InDRE AMF
•Ampliación del panel de AcMo
COMPROMISO DEL TCC-GUATEMALA-CHIAPAS- InDRE 2010COMPROMISO DEL TCC-GUATEMALA-CHIAPAS- InDRE 2010
•Antecedentes:
E l 2005 d l I DRE li ó i it G t lEn el 2005una persona del InDRE realizó una visita a Guatemala para implementar la caracterización antigénica y el Control
Externo por parte de nosotros, a lo cual no se le dio seguimientoseguimiento.
•Resultado esperado•Resultado esperado•Cronograma de envió de muestras de Guatemala al LESP enChiapas y al InDRE
•Flujograma desde que se toma la muestra hasta su resultado porIFD y estudios especiales, precisando tiempos de emitirresultados.
•Costo estimado de la vigilancia del virus rábico en el aéreafronteriza
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•Personal de Guatemala capacitado por el InDRE
INTRODUCCIONINTRODUCCION
Envoltura viralEnvoltura viralProteína MProteína M
A.A. Virus de la rabia en Virus de la rabia en forma de balaforma de bala
NucleocápsideNucleocápsideB.B. Estrías en la RNPEstrías en la RNP
C.C. Espículas de las glicoproteínas Espículas de las glicoproteínas l d bí li ídil d bí li ídi
RhabdoviridaeRhabdoviridaeLyssavirusLyssavirus
NucleocápsideNucleocápside
ancladas en una bícapa lipídicaancladas en una bícapa lipídica
3’ 5’NN PP MM GG LL
22 22 -- 2525 35 35 -- 4040 65 65 -- 808058 58 -- 6262190190 KDKD
ΨΨ
Lab. de Rabia InDRE AMFLab. de Rabia InDRE AMF
KDaKDa KDaKDa KDaKDaKDaKDa 190 190 KDaKDa
TECNICAS UTILIZADAS EN EL ESTUDIO DEL VIRUS DE LA RABIATECNICAS UTILIZADAS EN EL ESTUDIO DEL VIRUS DE LA RABIA
Detección del virus rábico por IFD e Inmunohistoquímica
Aislamiento del virus por inoculación
Procesamiento de encéfalos deanimales silvestres y domésticossospechosos de rabia
Aislamiento del virus por inoculaciónintracerebral de ratones lactantes ocultivo celular
C1 C4 C9 C10 C12 C15 C18 C19
CVS/ERA/SAD/PAST + + + + + + + + ControlPerro/ mangosta + + + + + + - + 1
Perro + + - + + + - + 2A i
VAgAcs Monoclonales
+Vampiro - + + + - - + 3
*Tadarida brasilensis - + + + + - - - 4
Vampiro - + +/- + + +/- - +/- 5
*Lasiorus cinereus +/- + + + + - - - 6
Central zorrillo - + + + + + + + 8
*Tadarida b. mexicana + + + + + - - - 9
Zorrillo BCS + + + + - + - + 10
Arizona zorro + + + - + + - + 7
Caracterización antigénica del virus con un panel de 8 anticuerpos monoclonales
donados por el CDC.
RT-PCR y secuenciaciónAnálisis de las secuencias y construcción de
árboles filogenéticos . En implementación RT-PCR en tiempo real
pVampiro - + + + - - - + 11
Lab. de Rabia InDRE AMFLab. de Rabia InDRE AMF
Titulación de anticuerpos antirrábicos por ELISA y por Inhibición de Focos
Fluorescentes (RIFFT).
INMUNOFLUORESCENCIA DIRECTA (IFD)
AnticuerposespecíficosF
F F
LavadosPBS pH 7.6
Conjugado Antirrábico
F F F
AntígenorábicoAntígeno
del cerebro F F
Lab. de Rabia InDRE AMFLab. de Rabia InDRE AMF
INMUNOHISTOQUÍMICA
La técnica de Inmunohistoquímica que es una prueba rápida, basada en launión de un anticuerpo a una enzima (peroxidasa) y que al reaccionar conun antígeno produce coloración que puede ser observada por unu a t ge o p oduce co o ac ó que puede se obse ada po umicroscopio óptico
Anticuerposespecíficos + peroxidasa
P
P P
Improntas del encéfalo
LavadosPBS, agua y
tinciones
P P P
Antígenorábico
P P
Negativa
Positiva
Lab. de Rabia InDRE AMFLab. de Rabia InDRE AMF
+ sustrato
Positiva
TIPIFICACIÓN ANTIGÉNICA
C1 C4 C12C9 C15C10 C18 C19P l d 8Panel de 8
anticuerpos monoclonales
del CDC
N 12000 pb P M G LRNA- *
V8V1 * *C1 -
C18 - Anti-ratón marcado con
FF F
marcado con FITC
*Proteína N de diferentes virus de la rabia
Lab. de Rabia InDRE AMFLab. de Rabia InDRE AMF
CARACTERIZACIÓN ANTIGÉNICA DEL VIRUS DE LA RABIA POR AcMo
VAgC1 C4 C9 C10 C12 C15 C18 C19Acs Monoclonales
CVS/ERA/SAD/PAST + + + + + + + + Control
Perro/Mangosta + + + + + + - + 1Perro + + - + + + - + 22
Zorrillo Central - + + + + + + + 8Zorrillo BCS + + + + + + 10
Zorro Arizona + + + - + + - + 7
*Tadarida brasilensis - + + + + - - - 4*Lasiorus cinereus +/- + + + + - - - 6
*Tadarida b. mex. + + + + + 9
Zorrillo BCS + + + + - + - + 10
+Vampiro - + + + - - + 3Vampiro - + +/- + + +/- - +/- 5
Tadarida b. mex. + + + + + - - - 9
Vampiro - + + + - - - + 11*Murciélagos insectívoros
Ciclo aéreo
Lab. de Rabia InDRE AMFLab. de Rabia InDRE AMF
Ciclo terrestre
TOTAL DE MUESTRAS TRABAJADAS POR EL LABORATORIO DE RABIA DE InDRE 2010
Lab. de Rabia InDRE AMFLab. de Rabia InDRE AMFMuestras negativas Muestras positivas
PORCENTAJES DE LAS VARIANTES ANTIGÉNICASPORCENTAJES DE LAS VARIANTES ANTIGÉNICASPORCENTAJES DE LAS VARIANTES ANTIGÉNICASPORCENTAJES DE LAS VARIANTES ANTIGÉNICAS
V1 1% V1
2005 2006
38%47%
1% V3V4V5V7V8V9
33%
52% 1%
V1
V3
V5
V7
V8
V9
8%1%0,08% 1%2%2%
0,08%
V9V10V11ATÍPICA
1%10%2%
0,4% V9
V11
ATÍPICA
2007 2008
13%1%
8%
1%1% V1
V3
V7
V8
V9
9%7%
2%
1%
0,3%
2%1%V1V3V7V8V9
7%1%
68%
V10
V11
ATÍPICA 78%
V9V10V11ATÍPICA
Lab. de Rabia InDRE AMFLab. de Rabia InDRE AMF
CARACTERIZACIÓN ANTIGÉNICA 2010 – JUNIO 2011419 MUESTRAS TOTALES
CARACTERIZACIÓN ANTIGÉNICA 2010 – JUNIO 2011419 MUESTRAS TOTALES
V1 Perro CHIH DF MEX
300
350316
V1 Perro CHIH, DF, MEX, PUE,CHIS, SON
V3 Vampiro CHIH. CAM, GRO, QROO
200
250V7 Zorro Ariz DGO, CHIH
V8 Zorrillo Centro JAL, ZAC, MÉX, QRO CHIH COL GRO
150
QRO,CHIH,COL, GRO
V9 Murc Insect JAL, DF, OAX, NL
50
100
4021
321
7 6 5
V10 Zorrillo B.C.S.
V11 Vampiro HGO, GTO, SLP, PUE, TAM, CAM, QRO,TAB CHIS MEX GRO NAY VER
0Variantes antigénicas
3 5 CHIS,MEX,GRO, NAY, VERAtípica SIN, B.C.S., TAM, GTO
Lab. de Rabia InDRE AMFLab. de Rabia InDRE AMF
ANÁLISIS MOLECULAR:ANÁLISIS MOLECULAR:
RT-PCR Y SECUENCIAMIENTO NUCLEOTÍDICO
RT-PCR Y SECUENCIAMIENTO NUCLEOTÍDICONUCLEOTÍDICONUCLEOTÍDICO
Lab. de Rabia InDRE AMFLab. de Rabia InDRE AMF
TIPIFICACIÓN MOLECULAR
N P M G L5´ 3´
304bdg
Ly001, JW12 (1500)
550FW (960pb) 304bdg
Termociclador
( p ) g
A8bis (700pb) 304bdg
NUCLEOPROTEINATermociclador
Selección de un gen semivariable
Lab. de Rabia InDRE AMFLab. de Rabia InDRE AMF
DISTRIBUCIÓN GEOGRÁFICA DEL BROTE DE RABIA CANINA ISTRIBUCIÓN GEOGRÁFICA DEL BROTE DE RABIA CANINA EN EL VALLE DE MEXICO 2005EN EL VALLE DE MEXICO 2005--20062006
DISTRIBUCIÓN GEOGRÁFICA DEL BROTE DE RABIA CANINA ISTRIBUCIÓN GEOGRÁFICA DEL BROTE DE RABIA CANINA EN EL VALLE DE MEXICO 2005EN EL VALLE DE MEXICO 2005--20062006
Tadarida brasiliensis mexicana V-9Coyotepec
OtumbaZumpangoTecamac
4 h
64
Perro V-1
Zorrillo V-8
Atípica
TultepecTultitlan
EcatepecMelchor Ocampo
Cuautitlan
Tlalnepantla
NextlalpanAcolman
Xonacatlan
TeotihuacanEstado Mex.
Coacalco
4 65
4
2
513
33
Valle de Bravo Malinalco
D.F.Netzahualcóyotl
Tequixquiac
Luvianos Amatepec
Tejupilco
Cuernava
Cuernavaca.
Huehuetocan 3
4
4
Tlataya
Lab. de Rabia InDRE AMFLab. de Rabia InDRE AMF
DISTRIBUCIÓN GEOGRÁFICA DEL BROTE DE RABIA CANINA ISTRIBUCIÓN GEOGRÁFICA DEL BROTE DE RABIA CANINA EN EL VALLE DE MEXICO 2005EN EL VALLE DE MEXICO 2005--20062006
DISTRIBUCIÓN GEOGRÁFICA DEL BROTE DE RABIA CANINA ISTRIBUCIÓN GEOGRÁFICA DEL BROTE DE RABIA CANINA EN EL VALLE DE MEXICO 2005EN EL VALLE DE MEXICO 2005--20062006
Tadarida brasiliensis mexicana V-9Coyotepec
OtumbaZumpangoTecamac
4 h
64
Perro V-1
Zorrillo V-8
Atípica
TultepecTultitlan
EcatepecMelchor Ocampo
Cuautitlan
Tlalnepantla
NextlalpanAcolman
Xonacatlan
TeotihuacanEstado Mex.
Coacalco
4 65
4
2
513
33
Valle de Bravo Malinalco
D.F.Netzahualcóyotl
Tequixquiac
Luvianos Amatepec
Tejupilco
Cuernava
Cuernavaca.
Huehuetocan 3
4
4
Tlataya
Lab. de Rabia InDRE AMFLab. de Rabia InDRE AMF
ANÁLISIS FILOGENÉTICOANÁLISIS FILOGENÉTICOANÁLISIS FILOGENÉTICOANÁLISIS FILOGENÉTICO
247coahcy01
363puedg024508tmct02
4506tmct02
370puedg02
362puedg02
112431puehm964822puedg96
555mxmxdg78
117293puedg97y
4815slpdg99
3251grodg003285grodg01
3287grodg01
4485yucdg0158
4491mxdg02365puedg043281puedg004519puedg02
3279puedg01564tlxdg04 4476yucdg99
4481yucdg01
4480yucpg02
64
93 9782
82
3278grodg994513puedg023302tlxdg01
4686puedg02117828puedg97
3303tlxdg02375puedg024491mxdg02
4626chishm034486chisdg02
2780coahbv06641sinsk01
4534sonsk0261
57
63
81
89 9594 59
100
841mxteotpg06
8092mxecadg05 115461slp96909puedg97
1278mxdg91117898puedg97118836verhm97
3278grodg993299dfdg99
5 3puedg0
231sinsk0159
57
5868
9785
316539739154720620839040338631683164mxecadg05
1944mxacodg06
194mxzumdg06 1246chihsk06
1248chihsk06
3304mxdg02
5245sonsk023142mxfrr901282mxdg913244mxdg983121mxhm913244mxdg98
84
57
5975
Lab. de Rabia InDRE AMFLab. de Rabia InDRE AMF
38631683284mxdg9939472131664511mxdg023763713546544013754514mxdg0231591374466846602553267mxdg016503325hgo023954023163378356664355315866035931612713160392V682Coa963300349317125421437321331693260dfdg00317374021538135037974135110443583934516mxdg02385263
3162mxdgeca0510
LOCALIZACIÓN GEOGRÁFICA DE CASOS DE RABIA POSITIVOSLOCALIZACIÓN GEOGRÁFICA DE CASOS DE RABIA POSITIVOSEN SERES HUMANOS 2010 EN SERES HUMANOS 2010 -- 20112011
LOCALIZACIÓN GEOGRÁFICA DE CASOS DE RABIA POSITIVOSLOCALIZACIÓN GEOGRÁFICA DE CASOS DE RABIA POSITIVOSEN SERES HUMANOS 2010 EN SERES HUMANOS 2010 -- 20112011
f3UriqueChih,zorrf3GuachochiChih zorr
m68Nonoava,zorrim6Guachochi,zorri
f3GuachochiChih,zorr
m7LoretoBCS,zorr
m9EscuinapaSin,murc
m8LaYescaNayarit,murcm9NayarNayarit,murcm21NayarNayarit,murc
f7TantoyucaVer,murc
m9-21Tulti-OtuEdoMéx perro
f4StaM.SLP,murcif38Nayar,Nay?
2000
2001
f4TuxpanJalis,murc
m11CarrilloPVeracruz,murc
m10HueyapanVerac,murcf28CunduacanTab,murc
f52SnLorenzoOax,murc
m11SnMartínPue,s/dm32SnMiguelPue,s/d
m9-21Tulti-OtuEdoMéx,perro
m2EcatEdoMéx,perrom14-18ArteagaMich,murci
m13ComalcalcoTab,s/d
f27ChiconquiacoVer,zorra
2009
2010
f4SnSeb,murcm63,Hostotipaquillo,murc
f63CopándaroMich,murc
2002
2003
2004
2005
f5CacahuatánChis,perrom6TlacoapaGro,murcm40OzolotepecOax,zorro
Lab. de Rabia InDRE AMFLab. de Rabia InDRE AMF
2006
2007
2008
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