Languages
Pages
Legal
PENGARUH INDUKSI PLUMBUM ASETAT TERHADAP MEMORISPASIAL DAN INTAKE SUKROSA PADA TIKUS PUTIH JANTAN
(RATTUS NOVERGICUS) GALUR SPRAGUE DAWLEY
(Skirpsi)
FAKULTAS KEDOKTERANUNIVERSITAS LAMPUNG
BANDAR LAMPUNG2017
OlehTEGUH DWI WICAKSONO
ABSTRACT
THE EFFECT OF LEAD ACETATE INDUCED TO SPATIAL MEMORY ANDSUCROSE INTAKE ON MALE RATS (RATTUS NORVEGICUS)
STRAIN SPRAGUE DAWLEY
By
TEGUH DWI WICAKSONO
Background: Vehicle contributes for 70%-80% of air pollution, one of the components suchpollution is plumbum. Plumbum is a neurotoxic metal that can lower spatial memory andsucrose intake.Methods: This is a completely randomized design method used 24 male rats (Rattusnorvegicus) Sprague-Dawley aged 2-3 months were divided into 4 groups induced by leadacetate for 7 days, the control group (K), group 1 dose of 50 mg/kg (P1), group 2 doses of100 mg/kg (P2) and the treatment group 3 doses of 200 mg/kg (P3). Spatial memory assessedusing a Morris water maze test probe method with exercise 4 times/day for 2 days andsucrose intake was assessed using method 2-hours access by looking at the percentage ofconsumption of sucrose 4% of the total fluid. Data were analyzed using One-way ANOVA.Result: The results of the average number of spatial memory in K: 35.28%, P1: 25.55%, P2:25.28%, P3: 21.39% obtained significant influence with p = 0.037. The results of the averagevalue of sucrose intake in K: 77.03%, P1: 17:58%, P2: 18.63%, P3: 11:03% obtainedsignificant influence with p=0.000.Conclusion: Induction of plumbum acetate for 7 days can reduce spatial memory and sucroseintake of white rats (Rattus norvegicus) male Sprague-Dawley.
Keywords: Intake of sucrose, Lead, Spatial memory
ABSTRAK
PENGARUH INDUKSI PLUMBUM ASETAT TERHADAP MEMORI SPASIAL DANINTAKE SUKROSA PADA TIKUS PUTIH JANTAN (RATTUS NORVEGICUS)
GALUR SPRAGUE DAWLEY
Oleh
TEGUH DWI WICAKSONO
Latar belakang: Kendaraan menyumbangkan 70%-80% polusi udara, salah satu komponenpolusi tersebut adalah plumbum. Plumbum merupakan logam bersifat neurotoksik yangdapat menurunkan memori spasial dan intake sukrosa.Metode: Penelitian ini menggunakan metode rancangan acak lengkap dengan sampel 24ekor tikus putih (Rattus norvegicus) jantan galur Sprague-dawley berusia 2-3 bulan terbagi kedalam 4 kelompok yang diinduksi dengan plumbum asetat selama 7 hari, yaitu kelompokkontrol (K), kelompok perlakuan 1 dosis 50 mg/kg (P1), kelompok perlakuan 2 dosis 100mg/kg (P2) dan kelompok perlakuan 3 dosis 200 mg/kg (P3). Memori spasial dinilaimenggunakan alat Morris-water maze metode probe test dengan latihan 4 kali/hari selama 2hari dan intake sukrosa dinilai menggunakan metode 2-hours access dengan melihatpersentase konsumsi sukrosa 4% terhadap keseluruhan cairan. Data dianalisis menggunakanmetode One-way Anova.Hasil penelitian: Hasil rerata nilai memori spasial pada K: 35.28%, P1: 25.55%, P2: 25.28%,P3: 21.39% didapatkan pengaruh yang bermakna dengan nilai p=0.037. Hasil rerata nilaiintake sukrosa pada K: 77.03%, P1: 17.58%, P2: 18.63%, P3: 11.03 % didapatkan pengaruhyang bermakna dengan nilai p=0.000.Simpulan: Induksi plumbum asetat selama 7 hari dapat menurunkan memori spasial danintake sukrosa tikus putih (Rattus norvegicus) jantan galur Sprague-dawley.
Kata kunci : Intake sukrosa, Memori spasial, Plumbum
PENGARUH INDUKSI PLUMBUM ASETAT TERHADAP MEMORISPASIAL DAN INTAKE SUKROSA PADA TIKUS PUTIH JANTAN
(RATTUS NORVEGICUS) GALUR SPRAGUE DAWLEY
OlehTeguh Dwi Wicaksono
SkripsiSebagai Salah Satu Syarat untuk Mencapai Gelar
SARJANA KEDOKTERANPada
Program Studi Pendidikan DokterFakultas Kedokteran Universitas Lampung
FAKULTAS KEDOKTERANUNIVERSITAS LAMPUNG
BANDAR LAMPUNG2017
RIWAYAT HIDUP
Penulis dilahirkan pada keluarga sederhana di Lampung Selatan pada tanggal 3
November 1995, sebagai anak kedua dari empat bersaudara dari Bapak Haryono
dan Ibu Marmi yang sangat menyayangi penulis.
Penulis menempuh pendidikan Taman Kanak-kanak (TK) di TK Al-Muhajirin
Sidoasih, Lampung Selatan dan selesai pada tahun 2000. Lalu penulis menempuh
Sekolah Dasar di MI Al-Muhajirin Sidoasih, Lampung Selatan dan selesai pada
tahun 2007. Selanjutnya, penulis melanjutkan pendidikan di SMP Negeri 1 Sragi
yang diselesaikan pada tahun 2010, kemudian penulis melanjutkan pendidikan di
SMA Negeri 1 Kalianda dan selesai pada tahun 2013.
Tahun 2013, Penulis diterima dan terdaftar sebagai Mahasiswa Fakultas
Kedokteran Universitas Lampung melalui jalur SNMPTN Undangan. Selama
menjadi mahasiswa, penulis aktif dalam FSI Ibnu Sina periode 2014-2015 yaitu
sebagai Staf Bina Baca Quran, dan Wakil Ketua BPH As-syfa periode 2014-2015
serta syukur alhamdulilah penulis juga menjadi bagian dalam Asisten Dosen
Anatomi periode 2015/2016.
“Sesungguhnya Kami telah mengemukakan amanat kepada langit, bumi dangunung-gunung, maka semuanya enggan untuk memikul amanat itu danmereka khawatir akan mengkhianatinya, dan dipikullah amanat itu oleh
manusia. Sesungguhnya manusia itu sangat zalim dan bodoh ”.(QS. Al-Ahzab : 72)
Sebuah tulisan kecil teruntuk :
“Bapak dan Mama Tercinta”
When you walk through the stormHold your head up high
And don’t be afraid of the darkAt the end of the storm there’s a golden sky
And the sweet silver song of a larkWalk on through a rainWalk on through a wind
Though your dreams be tossed and blown
SANWACANA
Puji syukur Penulis ucapkan kehadirat Allah Subhanahu wa Ta’ala, karena atas
rahmat dan hidayah-Nya skripsi ini dapat diselesaikan. Sholawat serta salam
semoga selalu tercurahkan kepada Nabi Muhammad Solallahu Alaihi Wasalam.
Skripsi dengan judul “Pengaruh Induksi Plumbum Aseta terhadap Memori
Spasial dan Intake Sukrosa Pada Tikus Putih Jantan (Rattus norvegicus) Galur
Sprague Dawley” adalah salah satu syarat untuk memperoleh gelar sarjana
Kedokteran di Universitas Lampung.
Dalam kesempatan ini penulis mengucapkan terimakasih kepada:
1. Bapak Prof. Dr. Ir. Hasriadi Mat Akin, M.P., selaku Rektor Universitas
Lampung.
2. Dr. dr. Muhartono, M.Kes, Sp.PA., selaku Dekan Fakultas Kedokteran
Universitas Lampung.
3. Dr. Anggraeni Janar Wulan, M.Sc., selaku Pembimbing Utama yang selalu
bersedia meluangkan waktu dan kesediaannya untuk memberikan bimbingan,
kritik, saran serta nasihat yang bermanfaat dalam proses penyelesaian skripsi
ini.
4. dr. Ratna Dewi Puspita Sari, Sp.OG., selaku Pembimbing Kedua atas
kesediannya untuk menyempatkan waktu memberikan bimbingan, saran dan
kritik selama proses skripsi ini serta memberikan banyak ilmu selama lebih
dari setahun terakhir ini.
5. Dr. dr. Asep Sukohar, M.Kes., selaku Penguji Utama pada ujian skripsi untuk
masukan dan saran-saran yang diberikan.
6. dr. Oktadoni Syaputra, M.Med.Ed., selaku Pembimbing Akademik
7. dr. Betta Kurniawan, M.Kes., selaku dosen dan juga guru yang telah
memberikan banyak motivasi dan nasihat tentang dunia maupun akhirat.
8. Ibuku tersayang, Marmi, terimakasih atas doa, kasih sayang, nasihat serta
bimbingan yang telah diberikan untukku, serta selalu mengingatkan ku untuk
selalu mengingat Allah SWT. Semoga Allah SWT selalu melindungi ibunda
dan menjadikan ladang pahala.
9. Ayahku tercinta, Haryono yang selalu memberikan doa dan semangat
untukku dalam menjalankan pendidikan kedokteran serta selalu
mengingatkanku untuk selalu dekat dengan Allah SWT. Semoga Allah selalu
memberikan kesehatan dan lindungan kepada ayahanda.
10. Kakak dan adik-adikku Primadhani, Tria dan Balint yang selalu memberikan
doa, memotivasi dan mendukung.
11. Kepala Laboraturium Biologi Molekuler Fakultas Kedokteran Universitas
Lampung Ibu Nuriah yang telah membantu dalam penelitian ini.
12. Seluruh Staf Dosen FK Unila atas ilmu dan pengalaman berharga yang telah
diberikan kepada penulis untuk menambah wawasan yang menjadi landasan
untuk mencapai cita-cita.
13. Seluruh Staf Akademik, TU dan Administrasi FK Unila, serta pegawai yang
turut membantu dalam proses penelitian skripsi ini.
14. Sahabat-sahabat saya M. Ega Al-Farizi, Fuad Iqbal Elka Putra, Fathan Muhi
Amrulloh, Raka Novadlu Cordita, Restu Pamanggih, M. Jyuldi Prayoga,
Agus Fathul Muin, Ahmad Farishal. Sebagai teman seperjuangan, saling
mengingatkan dan selalu memberikan semangat tentang kehidupan dunia
maupun akhirat.
15. Sahabat-sahabat saya NWNC yaitu Ahmad sirajudin, Restu Pamanggih, Raka
Novadlu Cordita, Ridho Pambudi, M. Marliando, Maldini Ningrat, Khairul
Anam, dan Benny BPP. Terimakasih atas semangatnya, keseruannya, doa,
dukungan dalam penyelesaian skripsi ini.
16. Keluarga Asisten Dosen Anatomi periode 2015-2016, dr. Anggraeni Janar
Wulan, M.Sc, dr. Rekha Nova Iyos, dr. Catur Ari Wibowo, M. Jyuldi
Prayoga, Teguh Dwi Wicaksono, Josua Tumpal, M. Marliando, M. Azzaky
Bimandama, Fauziah Lubis, Azzren Virgita Pasya, Sutria Nirda Syati, Ria
Arisandi, Indrani Nur WP, Rosi Indah Pratama, Indah Iswara, Shafira Fauzia,
Seftia Farera Nanda.
17. Teman laki-laki seperjuangan kloter terakhir OSCE dan SOCA dari semester
pertama hingga terakhir Tito Tri Saputra, yang selalu bersama menunggu
berjam-jam ujian dan selalu mendoakan.
18. Teman-teman MoC dan angkatan 2013 yang tidak dapat disebutkan satu-
persatu, terimakasih atas pengalaman-pengalaman dan perjuangan selama ini.
19. Sahabat-sahabat saya yang dipertemukan sejak masih memahami arti
kehidupan: Angga, Rama, Tian, Dedi, Tuko, Arif, Iqbal, Salamun, Endro,
Agus yang telah mengajari penulis tujuan hidup ini.
Akhir kata, Penulis menyadari bahwa skripsi ini masih jauh dari kesempurnaan.
Akan tetapi, sedikit harapan semoga skripsi yang sederhana ini dapat berguna dan
bermanfaat bagi kita semua. Aamiin.
Bandar Lampung, 16 Januari 2017
Penulis
Teguh Dwi Wicaskono
i
DAFTAR ISI
Halaman
DAFTAR ISI...................................................................................................... i
DAFTAR TABEL ............................................................................................. iii
DAFTAR GAMBAR ......................................................................................... iv
BAB 1 PENDAHULUAN
1.1.Latar Belakang ........................................................................................ 1
1.2.Rumusan Masalah ................................................................................... 5
1.3.Tujuan Penelitian .................................................................................... 5
1.4.Manfaat Penelitian .................................................................................. 6
BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA
2.1. Memori Spasial ..................................................................................... 7
2.1.1. Pengertian dan Jenis-jenis memori................................................ 7
2.1.2. Mekanisme Penyimpanan Memori Spasial ................................... 9
2.2. Plumbum............................................................................................... 12
2.2.1. Pengertian Plumbum ..................................................................... 12
2.2.2. Plumbum Sebagai Pemicu Stres Oksidatif.................................... 13
2.2.3. Pengaruh Stres Oksidatif terhadap Memori Spasial...................... 15
2.2.4. Pengaruh Stres Oksidatif terhadap Intake Sukrosa ....................... 18
2.3. Morris Water Maze ............................................................................... 19
2.4. Kerangka Teori ..................................................................................... 21
2.5. Kerangka Konsep.................................................................................. 23
2.5. Hipotesis ............................................................................................... 23
BAB 3 METODE PENELITIAN
3.1. Desain Penelitian .................................................................................. 24
3.2. Tempat dan Waktu Penelitian ............................................................... 24
ii
3.3. Populasi dan Sampel ............................................................................. 24
3.4. Kelompok Perlakuan............................................................................. 25
3.5. Kriteria Inklusi dan Eksklusi ................................................................ 26
3.6. Variabel Penelitian................................................................................ 26
3.7. Definisi Operasional ............................................................................. 27
3.8. Bahan dan Alat Penelitian..................................................................... 28
3.9. Prosedur Penelitian ............................................................................... 28
3.10. Analisis Data....................................................................................... 33
3.11. Etika Penelitian ................................................................................... 33
BAB 4 HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1. Gambaran Umum Penelitian................................................................. 35
4.2. Hasil Penelitian ..................................................................................... 36
4.2.1. Memori Spasial ............................................................................. 36
4.2.2. Intake Sukrosa ............................................................................... 37
4.2.3. Analisis Bivariat ............................................................................ 37
4.3. Pembahasan........................................................................................... 42
4.3.1. Hubungan Plumbum terhadap Memori Spasial ............................ 42
4.3.2. Hubungan Stres Oksidatif terhadap Intake Sukrosa...................... 46
BAB 5 KESIMPULAN DAN SARAN
5.1. Kesimpulan ........................................................................................... 49
5.2. Saran ..................................................................................................... 49
DAFTAR PUSTAKA
LAMPIRAN
3.9.1. Pembuatan Larutan Plumbum Asetat.......................................... 28
3.9.2. Prosedur Pengujian Memori Spasial Morris Water Maze .......... 29
3.9.3. Prosedur Pengujian Intake Sukrosa ............................................ 31
3.9.4. Alur Penelitian ............................................................................ 32
iii
DAFTAR TABELTabel Halaman
Tabel 1. Definisi Operasional .............................................................................. 27
Tabel 2. Hasil Rerata Memori Spasial ................................................................. 36
Tabel 3. Hasil Rerata Intake Sukrosa................................................................... 37
Tabel 4. Uji Normalitas Data ............................................................................... 38
Tabel 5. Uji Homogenitas Levene’s..................................................................... 38
Tabel 6. Hasil Uji One-way anova Memori Spasial ............................................ 39
Tabel 7. Hasil Post Hoc LSD Memori Spasial .................................................... 40
Tabel 8. Hasil Uji One-Way Anova Intake Sukrosa............................................. 40
Tabel 9. Hasil Post Hoc LSD Intake Sukrosa ...................................................... 41
iv
DAFTAR GAMBAR
Gambar Halaman
Gambar 1. Jalur Potensial Aksi Ingatan Jangka Panjang ..................................... 10
Gambar 2. Mekanisme Plumbum Mengakibatkan Kematian Sel ....................... 17
Gambar 3. Ilustrasi Morris Water Maze Test ....................................................... 20
Gambar 4. Kerangka Teori.................................................................................... 22
Gambar 5. Kerangka Konsep ................................................................................ 23
Gambar 6. Diagram Alur Penelitian ..................................................................... 32
BAB 1PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Jumlah Penduduk di Indonesia pada tahun 2010 tercatat sebanyak 238 juta jiwa.
Setiap tahunnya jumlah penduduk indonesia meningkat, hal ini sebanding lurus
dengan peningkatan jumlah kendaraan bermotor (BPS, 2012). Dimana, sampai tahun
2013 jumlah kendaraan bermotor di Indonesia sebesar 105 juta unit (BPS, 2014).
Peningkatan jumlah kendaraan bermotor ini, tentunya akan menurunkan kualitas
lingkungan yang disebabkan oleh meningkatnya polusi udara (Shafii, 2008). Hasil
dari berbagai observasi menyebutkan bahwa konstribusi polusi udara dari kendaraan
bermotor mencapai 70%-80% dari total pencemaran (Depkes, 2014).
Perlu disadari oleh masyarakat bahwa 89% karbon monoksida (CO), 100% plumbum
(Pb), 73% hidrokarbon (HC), 61% oksida nitrogen (NOx), 53% karbon dioksida
(CO2) dan 1% asap di udara dihasilkan oleh kendaraan bermotor bensin (spark
ignition engine) dari keseluruhan gas buangan kendaraan bermotor (Irawan, 2008).
Diantara sumber polusi yang terdapat pada gas buangan kendaraan bermotor tersebut,
terdapat satu logam berat berbahaya yaitu plumbum (Pb). Plumbum merupakan salah
2
satu logam berat yang dapat berdampak buruk bagi kesehatan jika terhirup ke dalam
sistem pernapasan. Plumbum banyak dihasilkan dari kendaraan bermotor bensin,
kurang lebih 25%-50% Pb tinggal di udara. Dengan demikian, semakin banyak
kendaraan yang digunakan, maka akan semakin banyak juga Pb yang tertinggal di
udara (Sudarmaji et al., 2006).
Tingginya kadar Pb pada pencemaran udara oleh kendaraan bermotor ini, dapat
mengakibatkan terhirupnya logam berat ini ke dalam saluran pernafasan. Plumbum
akan masuk ke dalam tubuh manusia bersama udara yang terhirup melalui saluran
pernapasan dan saluran pencernaan, sedangkan absorpsi melalui kulit sangat kecil
sehingga dapat diabaikan. Rerata 10-30% Pb yang terinhalasi diabsorpsi oleh paru -
paru dan sekitar 5-10% dari yang tertelan diabsorpsi melalui saluran cerna,
sedangkan sebanyak 30-40% Pb yang diabsorpsi melalui saluran pernapasan akan
masuk ke aliran darah, masuknya Pb ke aliran darah tergantung pada ukuran partikel,
daya larut, volume pernapasan dan variasi faal antar individu (Kurniawan, 2008).
Berdasarkan hasil penelitian Manalu (2001) diketahui bahwa tingkat kepadatan lalu
lintas berpengaruh terhadap kadar Pb dalam darah pedagang kaki lima. Pada
kepadatan lalu lintas yang tinggi menunjukan kadar Pb di udara sebesar 0.007-0.021
µg/m3 dengan kadar Pb dalam darah pedangang kaki lima sebesar 0.366-0.806 ppm.
Pada lalu lintas dengan kepadatan yang sedang menunjukan kadar Pb di udara sebesar
0.005-0.015 µg/m3 dengan kadar Pb dalam darah pedangang kaki lima sebesar 0.124-
0.339 ppm sedangkan pada lalu lintas dengan kepadatan yang rendah menunjukan
3
kadar Pb di udara sebesar 0.0048-0.0096 µg/m3 dengan kadar Pb dalam darah
pedangang kaki lima sebesar 0.176-0.298 ppm.
Di dalam tubuh, Pb dapat menyebabkan stres oksidatif (Ostrovskaya et al, 2011).
Induksi Pb selama 96 jam dapat menyebabkan stres akut yang ditandai dengan
perubahan morfologi dan respon dari antioksidan diantaranya catalase (CAT),
peroxidase (POD), superoxide dismutase (SOD), glutathione peroxidase (GPx),
malondialhydeid (MDA) (Tian et al., 2014). Ambica et al., (2016) melakukan
penilaian pengaruh Pb terhadap kadar enzim antioksidan pada 250 penduduk kota
secara acak yang sering terpapar asap kendaraan. Terjadi peningkatan kadar CAT,
SOD dan GPx pada penduduk yang memiliki kadar Pb darah diatas 15 µg/dl. Pada
penelitian Li et al., (2015) induksi Pb dalam peroide akut dengan konsentrasi yang
berbeda (0, 3.6, 7.3, 14, 29, 58 mg/dl) selama 7 hari menunjukan perubahan
histopatologi testis dan peningkatan enzim CAT, GPx dan SOD yang menunjukan
bahwa terjadinya stres oksidatif. Shafiq-ur-rehman (1984) menginduksi tikus dengan
Pb asetat 2% selama 10 hari. Penelitian ini menunjukan terjadinya peroksidasi lipid
pada membran sel di semua bagian otak tikus. Pada penelitian Ahmed et al., (2013)
terjadi kematian sel pada otak tikus yang diinduksi dengan 25 dan 50 mg/kg
plumbum asetat.
Salah satu organ yang paling peka terhadap stres oksidatif ialah hippocampus
(Harbani, 2013). Ercal et al., (2001) menjelaskan bahwa oksidan yang dicetuskan
oleh Pb maupun efek langsung terhadap membran sel dapat memicu terjadinya cidera
4
sel yang dapat berlanjut menjadi kematian sel-sel. Lebih lanjut dalam penelitian
Shafiq-ur-rehman (1984) menunjukan bahwa Pb dapat dapat menginduksi peroksidasi
lipid sel neuron di semua bagian otak. Jika peroksidasi lipid ini berlanjut maka
kematian sel pun dapat terjadi (Kumar, 2007). Pada penelitian Meng et al., (2016)
paparan Pb ini dapat menyebabkan kematian sel-sel di hippocampus dan
mengakibatkan gangguan pada memori spasial.
Morris water maze pada penelitian Novita (2015) digunakan untuk menguji pengaruh
stres kronis listrik terhadap memori spasial pada tikus putih galur dawley. Morris
water maze, walaupun terlihat sederhana, merupakan suatu uji yang menantang bagi
tikus karena memerlukan berbagai proses pemikiran yang rumit. Proses ini meliputi
lokalisasi spasial berdasarkan petunjuk visual yang secara berurutan melibatkan
peristiwa pemrosesan, konsolidasi, retensi, dan retrieval untuk bisa mencapai pada
platform yang tersembunyi di water maze (Alvin & Terry, 2009).
Belakangan ini, ada beberapa penelitian tentang pengaruh stres terhadap perubahan
perilaku yang dinilai dari intake sukrosa. Pada penelitian-penelitian tersebut
menunjukan bahwa stres dapat menurunkan asupan sukrosa pada hewan coba
(Grønli, 2006; Pothion et al., 2004). Hingga saat ini, belum ada penelitian mengenai
pengaruh induksi plumbum terhadap intake sukrosa. Zat beracun merupakan salah
satu pencetus terjadinya stres dan plumbum merupakan salah satu dari zat yang
sangat beracun bagi tubuh (Sherwood, 2014 ; Widiowati, 2008). Oleh karena itu,
5
penelitian ini dilakukan untuk mengetahui pengaruh dari induksi plumbum terhadap
perubahan perilaku yang dinilai dari intake sukrosa.
Berdasarkan uraian latar belakang diatas, penulis berminat untuk melakukan
penelitian tentang pengaruh induksi plumbum asetat dalam 7 hari terhadap memori
spasial (Water Morris maze test) dan intake sukrosa pada tikus putih (Rattus
novergicus) galur Sprague dawley.
1.2 Rumusan Masalah
Dari latar belakang diatas dapat dirumuskan masalah penelitian yaitu:
1. Apakah terdapat pengaruh Pb asetat terhadap memori spasial pada tikus putih
(Rattus norvegicus) galur Sprague dawley?
2. Apakah terdapat pengaruh Pb asetat terhadap intake sukrosa pada tikus putih
(Rattus norvegicus) galur Sprague dawley?
1.3 Tujuan Penelitian
1. Untuk mengetahui pengaruh Pb asetat terhadap terhadap memori spasial dengan
water morris maze test pada tikus putih (Rattus novergicus) galur Sprague
dawley.
6
2. Untuk mengetahui pengaruh Pb asetat terhadap perubahan prilaku yang dinilai
dari intake sukrosa tikus putih (Rattus novergicus) galur Sprague dawley.
1.4 Manfaat Penelitian
1. Bagi Peneliti
Untuk menambah pengetahuan mengenai tata cara penulisan karya ilmiah yang baik
dan mengetahui pengaruh Pb asetat terhadap terhadap memori spasial dan perubahan
prilaku yang dinilai dari intake sukrosa tikus putih (Rattus novergicus)
2. Bagi Institusi Pendidikan
Hasil yang diperoleh dari penelitian ini diharapkan dapat dipublikasikan sehingga
memberikan sumbangan informasi bagi ilmu pengetahuan di bidang kedokteran.
3. Bagi Masyarakat
Memberikan informasi untuk meningkatkan pengetahuan masyarakat mengenai
bahaya dari polutan (plumbum asetat).
BAB 2TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Memori Spasial
2.1.1 Pengertian dan jenis-jenis Memori
Memori merupakan bentuk penyimpanan informasi yang didapat dari proses
pembelajaran atau latihan berulang (Dorland, 2010). Proses pembelajaran tersebut
akan disandikan (coding), disimpan (storage) dan kemudian dikeluarkan kembali
(retrieve atau recall) dalam bentuk ingatan (Kandel et al, 2000). Secara umum,
yang disimpan adalah konsep bukan informasi verbatim (kata-kata). Namun
demikian, informasi yang disimpan dapat juga berupa kata demi kata (Sherwood,
2014).
Penyimpanan informasi yang diperoleh dilakukan paling sedikit dalam dua cara:
ingatan jangka-pendek (short term memory) dan ingatan jangka-panjang (long
term memory) (Guyton & Hall, 2007). Ingatan jangka-pendek memiliki kapasitas
penyimpanan terbatas dan berlangsung detik hingga jam, sedangkan ingatan
jangka-panjang berkapasitas sangat besar dan dipertahankan dalam hitungan
harian hingga tahunan (Sherwood, 2014).
8
Terdapat dua jenis memori berdasarkan jenis informasi yang disimpan, yaitu
memori deklaratif (eksplisit) dan memori non-deklaratif (implisit). Memori
eksplisit terlibat dalam proses mengingat secara sadar terhadap informasi tentang
individu, kejadian spesifik, tempat, dan benda (Sherwood, 2014). Sedangkan
memori implisit terlibat dalam proses mengingat bawah sadar dalam pelaksanaan
tugas dan prosedur, seperti keterampilan motorik (Mann & Klemm, 2011).
Memori spasial termasuk dalam memori deklaratif atau eksplisit (Cassenti &
Carlson, 2008). Memori spasial berkaitan dengan kemampuan mengingat ruang
bidang, mengenali bentuk, jarak, dan luas, serta mengetahui arah atau posisi
seseorang. Tanpa adanya memori spasial maka individu akan mengalami kesulitan
dalam memahami posisi diri, melihat bentuk dan ruang bidang, tidak dapat
mengingat arah atau letak suatu benda, serta tidak dapat memperkirakan jarak
suatu tempat (Mastrangelo et al., 2008). Stimulus berupa gambar-gambar yang
merepresentasikan peristiwa terkini dimasukkan ke hippocampus kemudian
diasosiasikan dengan stimulus peristiwa di masa lampau (Japardi, 2002).
Berbeda dengan memori spasial yang berkaitan mengenali sesuatu yang luas,
memori kerja merupakan ingatan yang digunakan untuk merencanakan,
memutuskan dan melaksanakan suatu tindakan. Sebagai contoh sesuatu yang
bergantung pada memori kerja diantaranya ketika kita hendak menyelesaikan
suatu masalah matematika tanpa menggunakan kertas, menyimpulkan suatu
pendapat yang panjang, dan tidak melakukan kesalahan dua kali saat menjawab
suatu pertanyaan pilihan (Sherwood, 2014).
9
2.1.2 Mekanisme Penyimpanan Memori Spasial
Hippocampus merupakan tempat dominan terjadinya penyimpanan jangka-
panjang serta krusial bagi perubahan ingatan jangka-pendek menjadi ingatan
jangka-panjang. Hippocampus juga berperan sangat penting dalam ingatan
spasial (Sherwood, 2014). Hippocampus sendiri adalah bagian tengah lobus
temporalis yang merupakan bagian sistem limbik (Snell, 2011).
Proses penyimpanan dan mengingat kembali sesuatu hal dimulai ketika neuron
presinaps melepaskan neurotransmitter eksitatorik glutamat sebagai respon
potensial aksi (Sherwood, 2014). Glutamat berikatan dengan dua jenis reseptor di
neuron pascasinaps, yaitu reseptor N-methyl-D-aspartic acid (NMDA) dan
reseptor α-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazolepropionic acid (AMPA).
Reseptor AMPA adalah kanal-reseptor yang biasa terdapat pada sinaps, yang
terbuka jika berikatan dengan glutamat dan memungkinakan ion masuk ke
dalam neuron pascasinaps (Gümrü & Arıcıoğlu, 2012). Sedangkan reseptor
NMDA adalah kanal-reseptor yang memungkinkan masuknya ketika
terbuka. Akan tetapi, kanal-reseptor ini ditutup oleh pintu dan ion magnesium( ) yang secara fisik menghambat kanal untuk membuka pada potensial
istirahatnya (Zito, 2009).
Untuk membuka kanal NMDA, harus ada dua kejadian yang terjadi hampir
bersamaan, yaitu pelepasan glutamat prasinaps dan depolarisasi pascasinaps oleh
masukan lain. (Zito, 2009). Kanal NMDA terbuka jika berikatan dengan glutamat,
akan tetapi aksi ini sendiri tidak mengizinkan masuknya . Depolarisasi
10
tambahan pada neuron pascasinaps, akibat terikatnya glutamat pada reseptor
AMPA cukup diperlukan untuk mendepolarisasikan neuron pascasinaps agar
dapat dipaksa keluar dari kanal ini (Sherwood, 2014).
Gambar 1. Jalur Potensial Aksi Memori(Sumber : Sherwood, 2014)
Ketika kanal-reseptor NMDA terbuka akibat pembukaan pintu dan pengeluaran
secara bersamaan, memasuki sel pascasinaps. yang masuk
mengaktifkan jalur caraka kedua (second messenger) pada neuron ini. Jalur caraka
kedua ini menyebabkan penyisipan fisik reseptor AMPA tambahan pada
11
membran pascasinaps, sehingga menyebabkan peningkatan ketersediaan reseptor
AMPA. Peningkatan ketersediaan reseptor AMPA ini akan meningkatkan
potensial aksi eksitatorik pada neuron pascasinaps. Peningkatan sensitivitas
neuron pascasinaps ini akan membantu mempertahankan ingatan jangka panjang.
Selain itu, jalur caraka kedua ini juga mengeluarkan nitrat oksida yang akan
memberikan umpan balik positif. Umpan balik positif ini akan meningkatkan
pelepasan glutamat dan membantu mempertahankan ingatan (Sherwood, 2014).
Modifikasi yang berlangsung selama pembentukan ingatan jangka panjang akan
bertahan lama meskipun aktivitas yang menyebabkan perubahan ini telah
berhenti. Oleh karena itu, informasi dapat disampaikan disepanjang jalur sinaps
yang sama ini dengan lebih efisien jika terkativasi kembali di masa yang akan
datang (meningat). Ingatan jangka panjang bersifat spesifik bagi jalur yang
teraktivasi. Jalur di antara masukan prasinaps inaktif lainnya dan sel pascasinpas
yang sama tidak terpengaruh (Sherwood, 2014). Sehingga jika kita mengingat
sesuatu yang baru dalam jangka panjang, maka akan ada pembentukan sinaps baru
khusus yang permanen dalam jalur pengingatan hal tersebut. Berbeda dengan
ingatan jangka pendek yang hanya memperkuat hubungan sinaps-sinaps yang
sudah ada (Guyton & Hall, 2007).
12
2.2 Plumbum (Pb)
2.2.1 Pengertian Plumbum
Plumbum (Pb) atau lebih dikenal dengan nama timah hitam (timbal) merupakan
saah satu logam berat yang terdapat secara alami di kerak bumi. Plumbum
dimasukan ke dalam logam berat karena memiliki massa jenis lebih dari 5gr/cm3
atau lima kali lebih besar dibandingkan massa jenis air (1gr/cm3) (Ernawati,
2010). Plumbum sendiri memiliki massa jenis 11.34 g/cm3 (Widiowati, 2008).
Plumbum pada awalnya merupakan logam berat yang terdapat di kerak bumi
(Widowati, 2008). Di dalam bumi sebenarnya jumlah Plumbum sangatlah sedikit,
yaitu hanya 0.0002% dari jumlah kerak bumi jika dibandingkan dengan logam
lain (Palar, 1994). Akan tetapi, jumlah plumbum di permukaan bumi dapat
mencapai 300 kali lebih banyak dibandingkan Pb alami. Peningkatan jumlah Pb di
permukaan bumi tersebut terjadi karena penggunaan Pb dalam kehidupan manusia
(Widiowati, 2008). Zat ini banyak ditemukan pada peralatan sehari-hari, seperti
kabel telepon, kabel listrik, pipa air minum, zat pewarna ada cat, zat penkilap
pada keramik dan bahan bakar kendaraan bermotor (Nasution, 2004).
Plumbum merupakan salah satu logam berat dan oksidan kuat. Plumbum akan
sangat berbahaya bagi tubuh karena dapat menyebabkan iritasi kulit, mata dan
saluran napas, merusak gusi, sistem saraf pusat, ginjal dan sistem reproduksi
(MSDS, 2006). Zat ini dapat masuk kedalam tubuh melalui makanan, air, udara
13
yang tercemar oleh logam Pb. Plumbum yang masuk akan diabsorpsi oleh tubuh.
Orang dewasa mengabsorpsi Pb 5-15% dari seluruh Pb yang masuk, Sedangkan
anak-anak mengabsorpsi Pb lebih besar yaitu 41.5% (Widiowati, 2008).
2.2.2 Plumbum Sebagai Pemicu Stres Oksidatif
Plumbum merupakan racun yang dapat menyebabkan berbagai gangguan di dalam
tubuh. Berbagai gangguan tersebut diantaranya seperti gangguan neurologis,
hematologi, dan reproduksi. Aktivitas senyawa Pb dalam tubuh dikaitkan dengan
stres oksidatif, melalui pembentukan molekul reactive oxygen species (ROS)
(Aykin-Burns et al., 2003; Ding et al., 2000).
Oksigen dapat menerima elektron tunggal dan membentuk molekul tak stabil yang
dikenal dengan molekul ROS. Beberapa contoh ROS antara lain radikal singlet
oksigen (O-), superoksid (O2-), dan radikal hidroksil (HO). Dalam homeostasis
tubuh manusia, normalnya pembentukan ROS umumnya dijaga seminimal
mungkin oleh mekanisme pertahanan antioksidan (Sherwood, 2014). Beberapa
kondisi tertentu dimana peningkatan radikal bebas tidak diimbangi dengan
peningkatan pertahanan antioksidan, akan menyebabkan beberapa kerusakan
dalam jaringan, yang dikenal sebagai stres oksidatif (Mc Kee, 2003).
Menurut Ercal et al, (2001) mekanisme Pb dalam pembentukan radikal bebas
terdiri dari 2 cara berbeda yang berhubungan, yakni pembentukan ROS dan
penekanan sistem antioksidan
14
1. Pembentukan ROS
Ion Plumbum memiliki efek langsung terhadap membran sel, dimana pajanan
berlebihan Pb pada membran sel mungkin meningkatan perubahan intregitas pada
komponen membran sel (Gurer & Ercal, 2000). Pajanan Pb di membran sel otak
meyebabkan perubahan level dari phospolipid pada membran dimana
berhubungan lurus dengan peningkatan peroksidasi lemak (Shafiq-ur-rehman,
1984). Menurut Ercal et al., (2001) perubahan komposisi lipid ini adalah
penyebab perubahan integritas, permeabilitas dan fungsi membran sel yang akan
meningkatkan peroksidasi lemak.
Selain itu. senyawa Pb juga menghambat delta aminolevulinic acid
dehidrogenase (DALAD), enzim utama dalam biosintesis heme yang
menyebabkan peninggian kadar substrat aminolevulinic acid (ALA). Peningkatan
kadar ALA menyebabkan pembentukan hidrogen peroksida, radikal superoksida
dan juga interaksi keduanya menghasilkan radikal hidroksil, suatu radikal bebas
yang paling reaktif (Ercal et al., 2001).
2. Penekanan sistem antioksidan
Plumbum memiliki affinitas tinggi terhadap gugus sulfhidril (SH) (Widiowati,
2008). Zat ini menghambat beberapa enzim dengan gugus fungsional SH seperti
enzim DALAD dan glucose 6-phosphat dehidrogenase (G6PD). G6PD adalah
enzim yang bertanggung jawab untuk menyediakan NADPH di luar mitokondria.
Molekul pereduksi NADPH ini penting dalam menjaga tersedianya glutathione (γ-
15
glutamyl-cysteinyl-glycine; GSH) yang dibentuk kembali dari glutation
teroksidasi (GSSG) oleh enzim glutation reduktase (GR) (Devlin, 2002).
Glutathione mempunyai gugus tiol (-SH) yang besifat reduktif yang menjadikan
molekul ini pelindung sel dari stres oksidatif. Plumbum yang berikatan dengan
gugus tiol dari GSH, menyebabkan kadar GSH menurun dan mempengaruhi
aktivitas antioksidannya. Selain itu, Enzim GR membantu sistem pertahanan
antioksidan secara tak langsung. Enzim ini memiliki disulfida pada tempat
katalitiknya, yang merupakan target dari Pb. Dengan demikian, Pb yang terikat
pada enzim ini akan menghambat aktivitasnya (Ercal et al., 2001).
2.2.3 Pengaruh Stres Oksidatif terhadap Memori Spasial
Penelitian mengenai pengaruh stres oksidatif terhadap memori spasial mulai
banyak dilakukan dalam satu dekade terakhir. Penelitian-penelitian tersebut
menunjukan bahwa stres oksidatif dapat melemahkan memori spasial pada hewan
coba (Hritcu et al., 2011; Pandey et al., 2015; Sandi et al., 2005). Stres oksidatif
sendiri adalah ketidakseimbangan antara jumlah radikal dan antioksidan, dimana
jumlah radikal bebas lebih banyak dibandingkan dengan antioksidan. Sebelumnya
telah dijelaskan bagaimana Plumbum dapat menyebabkan stres oksidatif (Murray
et al., 2009).
Radikal bebas merupakan spesies kimiawi dengan satu elektron tak berpasangan
di orbital terluar. Keadaan kimiawi tersebut sangat tidak stabil dan mudah
bereaksi dengan zat kimia anorganik atau organik (Murray et al., 2009). Saat
16
dibentuk dalam sel radikal bebas segera menyerang dan mendegradasi asam
nukleat serta berbagai molekui membran. Selain itu, radikal bebas menginisiasi
reaksi autokatalitik. sebaliknya, molekul yang bereaksi dengan radikal bebas
diubah menjadi radikai bebas, semakin memperbanyak rantai kerusakan (Kumar,
et al., 2007).
Menurut Kumar (2007) tiga reaksi yang paling relevan dengan jejas sel yang
diperantarai radikal bebas
1. Peroksidasi lipid membran
Ikatan ganda pada lemak tak jenuh membran mudah terkena serangan radikal
bebas berasal dari oksigen. Interaksi radikal lemak menghasilkan peroksida, yang
tidak stabil dan reaktif, dan terjadi reaksi rantai autokatalitik. Sebelumnya juga
telah dijelaskan bahwa Pb memiliki efek langsung terhadap membran sel
hippocampus yang dapat mengakibatkan peroksidasi lemak (Ercal et al., 2001;
Shafiq-ur-rehman, 1984).
2. Fragmentasi DNA
Reaksi radikal bebas dengan timin pada DNA mitokondria dan nuklear
menimbulkan rusaknya untai tunggai. Kerusakan DNA tersebut telah memberikan
implikasi pada pembunuhan se1 dan perubahan sel menjadi ganas.
3. Ikatan silang protein
Radikal bebas mencetuskan ikatan silang protein yang diperantarai sulfhidril,
menyebabkan peningkatan kecepatan degradasi atau hilangnya aktivitas
17
enzimatik. Reaksi radikal bebas juga bisa secara langsung menyebabkan
fragmentasi polipeptida.
Melalui reaksi-reaksi tersebut, radikal bebas maupun ROS dapat mengakibatkan
Jejas pada sel yang kemudian dapat berlanjut menjadi kematian sel (Kumar,
2007). Plumbum maupun ROS yang dihasilkan oleh reaksi Pb dapat
mngakibatkan kematian sel-sel pada hippocampus yang akan melemahkan dari
memori spasial (Meng et al., 2016).
Gambar 1. Mekanisme Plumbum Mengakibatkan Kematian Sel(Sumber : Ercal et al., 2001)
18
2.2.4 Pengaruh Stres Oksidatif terhadap Intake Sukrosa
Ketidakseimbangan antara radikal bebas dan antioksidan dalam tubuh akan
menimbulkan respon fisiologis. Pada keadaan ini disekresikan beberapa hormon
dalam mempertahankan homeostasis tubuh. Epinefrin merupakan hormon yang
disekresikan karena respon stres terhadap peningkatan tonus saraf simpatis
(Sherwood, 2014). Selain itu, epinefrin juga akan memobilisisasi simpanan energi
lemak dan karbohidrat untuk meningkatkan glukosa dan asam lemak darah
sebagai respon dalam mempertahankan kondisi tubuh (Guyton & Hall, 2007).
Selain epinefrin, sejumlah hormon lain berperan dalam respon stres secara
keseluruhan Respon hormon utama adalah pengaktifan sistem corticotropin
releasing hormone (CRH) – adrenocorticotropin hormone (ACTH) – kortisol.
Peran kortisol dalam membantu tubuh menghadapi stres diperkirakan berkaitan
dengan efek metaboliknya. Kortisol menguraikan simpanan lemak dan protein
sembari memperbanyak simpanan karbohidrat dan meningkatkan ketersediaan
glukosa darah (Sherwood, 2014).
Peningkatan glukosa dan asam lemak darah juga terjadi karena penurunan hormon
insulin dan peningkatan hormon glukagon. Baik sistem saraf simpatis maupun
epinefrin yang disekresikan keduanya menghambat insulin dan merangsang
glukagon (Sherwood, 2014). Perubahan hormon ini bekerja sama untuk
meningkatkan kadar glukosa dan asam lemak darah. Epinefrin dan glukagon
mendorong glikogenolisis hati. Hormon-hormon ini juga bersama kortisol
19
mendorong glukoneogenesis hati. Namun, insulin yang sekresinya tertekan selama
stres, melawan penguraian simpanan glikogen hati. Semua efek ini membantu
meningkatkan konsentrasi glukosa darah (Guyton & Hall, 2007).
Peningkatan glukosa darah tersebut akan didistribusikan ke jaringan yang lebih
aktif saat terjadinya stres, seperti otak dan otot skelet. Aktivitas yang tidak
diperlukan seperti pencernaan, produksi hormone pertumbuhan dan gonad akan
dikurangi. Sehingga pada saat terjadi stres hal seperti aktivitas makan,
pertumbuhan dan aktivitas seksual akan mengalami penurunan (Schneiderman et
al., 2005). Pada penelitian Pothion et al., (2004) dan Murray et al., (2013)
menunjukan penurunan aktivitas makan pada tikus yang diinduksi oleh stres
melalui penurunan intake sukrosa per oral.
2.3 Morris Water Maze
Morris water maze merupakan suatu uji yang menantang bagi tikus karena
memerlukan berbagai proses pemikiran yang rumit. Proses ini meliputi lokalisasi
spasial berdasarkan petunjuk visual yang secara berurutan melibatkan peristiwa
pemrosesan, konsolidasi, retensi, dan retrieval untuk bisa mencapai pada platform
yang tersembunyi di water maze. Proses umum pada tikus yang menggunakan
navigasi visuospasial ini juga dianggap mempunyai kontribusi yang sama pada
manusia untuk penggunaan proses kognitif sehari-hari. Oleh karena itu, model uji
menggunakan Morris water maze ini dianggap relevan dengan studi pada penyakit
20
neurodegeneratif atau neuropsikiatri di mana terdapat gangguan fungsi memori
(Alvin & Terry, 2009).
Morris water maze secara umum menggunakan kolam air berbentuk bulat
berdiameter 120-180 cm dan kedalaman 60cm dengan air yang dijaga suhunya
sesuai suhu ruang serta memiliki platform yang tersembunyi di bawah permukaan
air. Platform ini disembunyikan dengan cara : menambahkan bahan tertentu (susu
atau zat pewarna yang tidak berbahaya) agar air terlihat opaque, atau platform
diberi cat yang sama dengan dasar dan dinding kolam. Beberapa objek gambar
dengan bentuk geometri yang berbeda-beda (lingkaran, segitiga, persegi, dll.)
ditempelkan pada dinding kolam untuk menandai kuadran kolam dan dapat
digunakan tikus sebagai alat bantu navigasi dalam kolam. Tikus secara individu
dimasukkan ke dalam kolam untuk kemudian dicatat waktu dan jarak tempuh
yang dibutuhkan untuk mencapai platform (Alvin & Terry, 2009; Watermaze,
2013).
Gambar 3. Ilustrasi Morris Water Maze Test(Sumber : Alvin & Terry, 2009)
21
2.4 Kerangka Teori
Plumbum merupakan logam berat yang bersifat toksis bagi tubuh dan dapat
masuk kedalam tubuh melalui sistem pernapasan maupun pencernaan. Plumbum
yang masuk dapat menyebabkan stres oksidatif dengan meningkatkan radikal
bebas dan menekan sistem antioksidan (Ercal et al., 2001). Stres oksidatif ini
dapat menyebabkan kerusakan pada sel neuron hippocampus yang pada akhirnya
sel tersebut mengalami kematian (Shafiq-ur-rehman, 1984). Kematian sel-sel
neuron hippocampus ini akan menurunkan memori spasial. Ketidakseimbangan
antara radikal bebas dan antioksidan dalam tubuh akan menimbulkan respon
fisiologis yaitu dengan perubahan hormonal, seperti peningkatan hormon
epinefrin, glukagon dan kortisol (Sherwood, 2014). Hormon-hormon tersebut
akan meningkatkan glukosa darah yang akan didistribusikan ke jaringan yang
lebih aktif saat stres seperti otak. Sehingga pada saat stres aktivitas seperti makan
akan menurun (Schneiderman et al., 2005).
22
Keterangan := Memicu
= Yang diteliti
Gambar 4. Kerangka Teori Pengaruh induksi plumbum asetat pada tikusputih jantan terhadap memori spasial dan intake sukrosa
Induksi AkutPlumbum Asetat
Efek langsungradikal Pb dan
PeningkatanROS
PenekananSistem
Antioksidan
Stres Oksidatif
Kerusakan SelNeuron
Hippocampus
Gangguanpada Memori
Spasial
PerubahanIntake Sukrosa
↑ Kortisol↑ Epinefrin ↑ Glukagon
Peningkatan Glukosa darah,Asam amino darah dan asam
lemak darah
23
2.5 Kerangka Konsep
Gambar 5. Kerangka Konsep
2.6 Hipotesis
1. H0: Tidak terdapat pengaruh induksi plumbum asetat terhadap memori spasial
tikus putih (Rattus novergicus) galur Sprague dawley.
H1: Terdapat pengaruh induksi plumbum asetat terhadap memori spasial tikus
putih (Rattus novergicus) galur Sprague dawley.
2. H0: Tidak terdapat pengaruh induksi plumbum asetat terhadap intake sukrosa
tikus putih (Rattus novergicus) galur Sprague dawley.
H1: Terdapat pengaruh induksi plumbum asetat terhadap intake sukrosa tikus
putih (Rattus novergicus) galur Sprague dawley.
Variabel Independen
Induksi Plumbum Asetat
Memori Spasial
Variabel Dependen
Intake Sukrosa
BAB 3METODOLOGI PENELITIAN
3.1 Desain Penelitian
Penelitian ini merupakan studi eksperimental dengan metode rancangan acak
lengkap (RAL) dengan pendekatan post test only control group design. Dengan
rancangan ini, peneliti dapat membandingkan hasil perlakuan antara kelompok
perlakuan dan kelompok kontrol.
3.2 Tempat dan Waktu
Penelitian ini dilaksanakan pada bulan September-Oktober tahun 2016 di animal
house Fakultas Kedokteran Universitas Lampung.
3.3 Populasi dan Sampel
Sampel yang dipakai pada penelitian ini adalah tikus, menurut Watermaze (2013)
tikus adalah hewan terbaik sebagai hewan coba pada morris water maze, karena
hewan ini adalah hewan yang sama digunakan morris pada penelitian memori
spasial.
25
Populasi penelitian ini adalah tikus putih jantan (Rattus norvegicus) galur Sprague
dawley berumur 2-3 bulan atau 10-12 minggu yang diperoleh dari Institut
Pertanian Bogor. Jumlah sampel berdasarkan kriteria sampel WHO yaitu minimal
5 ekor pada setiap kelompok. Penentuan besar sampel ditentukan dengan
menggunakan rumus Federer:
t (n-1) ≥ 15
4 (n-1) ≥ 15
4n - 4 ≥ 15
4n ≥ 19
n ≥ 5
Untuk mengantisipasi drop out, maka sampel ditambah 10% pada setiap
kelompok (Notoatmodjo, 2005). Sehingga didapatkan sampel sebanyak 24 ekor,
dengan masing-masing kelompok terdiri 6 ekor tikus sampai akhir penelitian.
3.4 Kelompok Perlakuan
1. Kelompok 1: Kelompok tikus yang tidak diinduksi plumbum asetat (Kelompok
Kontrol).
2. Kelompok 2: Kelompok tikus yang diinduksi plumbum asetat 50mg/kgbb per
hari (Kelompok P1).
3. Kelompok 3: Kelompok tikus yang diinduksi plumbum asetat 100mg/kgbb per
hari (Kelompok P2).
26
4. Kelompok 4: Kelompok tikus yang diinduksi plumbum asetat 200mg/kgbb per
hari (Kelompok P3).
3.5 Kriteria Inklusi dan Ekslusi
Kriteria inklusi sampel pada penelitian adalah:
1. Tikus putih jantan (Rattus norvegicus) galur Sprague dawley
2. Sehat
3. Berat Badan 150-250 gram
4. Usia 2-3 bulan atau 10-12 minggu.
Kriteria ekslusi sampel pada penelitian adalah:
1. Rambut botak atau rontok
2. Aktivitas tidak aktif
3.6 Variabel Penelitian
Variabel penelitian yang digunakan adalah sebagai berikut:
1. Variabel Bebas: Variabel bebas pada penelitian ini adalah induksi
plumbum asetat.
2. Variabel Terikat: Variabel terikat pada penelitian ini adalah memori
spasial dan intake sukrosa.
27
3.7 Definisi Operasional
Pada tabel 1 dapat dilihat variabel-variabel yang akan digunakan pada penelitian
ini, berikut dengan definisi operasional, alat ukur yang digunakan, cara
pengukuran, hasil ukur, dan skala variabel yang digunakan untuk penetuan uji
analasis yang akan digunakan.
Tabel 1. Definisi Operasional
No Variabel Definisi Alat Ukur Hasil Ukur Skala
1. Plumbum Asetat Bahan kimia beracunyang diberikan padatikus jantan secaraintraperitoneal
Spuit K = kontrolP1 = 50 mg/kgP2 = 100 mg/kgP2 = 200 mg/kg
Kategorik
2. Memori Spasial Kemampuanmengingat ruangbidang, mengenalibentuk, jarak, danluas serta posisi yangdinilai denganmenggunakan alatmorris maze radial(Mastrangelo et al.,2008).
Stopwatch Persentase waktuyang dihabiskantikus berenangpada kuadrantarget terhadapkeseluruhanwaktu yangditempuh tikusmelewati seluruhkuadran (Alvin &Terry, 2009).
Numerik
3. Intake Sukrosa Jumlah sukrosa yangdikonsumsi
Gelas ukur Persentasekonsumsi larutansukrosa denganjumlahkeseluruhancairan yangdiminum(Pothion et al.,2004)
Numerik
28
3.8 Bahan dan Alat Penelitian
Bahan yang digunakan pada penelitian ini adalah sebagai berikut
1. Tikus jantan (Rattus norvegicus) galur Sprague dawley sehat 150-250 gram
usia 2-3 bulan
2. Pb Asetat (Pb(CH3COO)2)
3. 60 ml air
4. 60 ml larutan sukrosa 4%
Alat yang digunakan pada penelitian ini adalah sebagai berikut
1. Spuit 1 cc/ml
2. Kandang tikus
3. Botol minuman 60 ml
4. Tempat makan
5. Stopwatch
6. Kamera
7. Morris water maze
3.9 Prosedur Penelitian
3.9.1 Pembuatan larutan Pb Asetat
Larutan plumbum asetat dibuat dengan cara melarutkan Pb asetat ke dalam
aquades agar mudah untuk diinjesikan. Plumbum asetat memiliki kelarutan
sebesar 20g/100ml dalam air, yang berarti plumbum asetat dapat dilarutkan ke
29
dalam aquades. Larutan stok Pb asetat dibuat dari dosis yang paling besar, yaitu
200 mg/kg. Tikus yang digunakan memiliki rerata berat badan 200 gram,
sehingga didapatkan dosis 40 mg atau 0.04 gram yang akan dilarutkan ke dalam
aquades. Besarnya pelarut didapatkan dari perbandingan dengan kelarautan dari
plumbum asetat dalam air. 20100 = 0.04= 0.04 10020= 0.2
Berdasarkan perbandingan diatas, didapatkan bahwa 40 mg Pb asetat akan larut
dalam 0.2 ml aquades. Sehingga didapatkan larutan stok Pb asetat sebesar
4gr/20ml aquades. Selanjutnya dilakukan pengenceran dari larutan stok untuk
dosis 100 mg/kg dan 50 mg/kg.
3.9.2 Prosedur Pengujian Memori Spsial dengan Morris Water Maze
Uji memori spasial dilakukan sesudah perlakuan untuk membandingkan memori
spasial tikus sesudah perlakuan pada tiap kelompok tikus. Semua hewan coba
sebelumnya diberikan latihan dahulu dengan Morris water maze metode invisible
platform trials selama 2 hari sebanyak 4 kali latihan dan dihitung waktunya
mencapai platform (Watermaze, 2013).
Setiap awal percobaan, ditentukan satu titik awal tempat tikus diletakkan pertama
kali di dalam kolam, lalu tikus akan berenang mencari platform dan naik ke atas
30
platform. Waktu yang dibutuhkan tikus untuk mencapai platform (escape latency)
dicatat. Setelah tikus berhasil mencapai platform maka diberi waktu untuk
beristirahat di atas platform selama 30 detik, lalu dikeringkan dan dikembalikan
ke dalam kandang untuk menghangatkan tubuh sebelum dilakukan percobaan lagi
berikutnya. Setiap kali percobaan harus selesai dalam waktu 60 detik. Bila dalam
60 detik tikus gagal mencapai platform, maka tikus dituntun ke arah platform dan
dibiarkan selama 20 detik untuk beristirahat. Setelah itu, tikus diletakkan kembali
ke kandang untuk persiapan diadakan percobaan berikutnya. Pada percobaan
ketiga dan keempat, ditentukan lagi satu titik awal secara random tempat tikus
diletakkan di dalam kolam pada awal uji ini, lalu tikus akan berenang mencari
platform dan naik ke atas platform. Waktu yang dibutuhkan tikus untuk mencapai
platform (escape latency) dicatat (Alvin & Terry, 2009).
Untuk menilai retensi memori spasial, dilakukan probe test sehari setelah
selesainya keseluruhan uji Morris water maze metode hidden platform test. Pada
uji retensi memori spasial ini, platform diangkat dari kolam, sedangkan komponen
lain dibiarkan seperti semula. Selama 60 detik tikus dibiarkan berenang di kolam,
dihitung persentase waktu yang dihabiskan tikus untuk berenang pada kuadran
target (kuadran yang sebelumnya diletakkan platform) terhadap keseluruhan
waktu yang ditempuh tikus melewati seluruh kuadran (Alvin & Terry, 2009).
31
3.9.3 Prosedur Pengujian Intake Sukrosa
Larutan sukrosa 4% dibuat dengan cara mencampurkan 240 ml air dengan 10 gr
sukrosa. Sebelum masa pemberian plumbum asetat tikus dilatih untuk
mengkonsumsi larutan sukrosa 4%. Pengujian intake sukrosa dilakukan dengan
mengukur persentase konsumsi larutan sukrosa 4% (Pothion et al., 2004) pada
hari ke 1 setelah induksi plumbum asetat sampai hari ke 7. Pengukuran dilakukan
dengan melihat persentase sukrosa yang dikonsumsi per jumlah keseluruhan
cairan yang dikonsumsi oleh tikus pada jam 17.30-19.30 WIB (2-hours access)
setiap hari. Larutan sukrosa 4% dibuat dan diganti setiap hari.
32
3.9.4 Alur Penelitian
K P1 P2 P3
Gambar 6. Diagram Alur Penelitian
Penimbangan Berat Badan Tikus
Pembagian Kelompok Secara Random dan Aklimitisasi
Penimbangan Berat Badan Tikus
Tidak diinduksiPb asetat
selama 7 hari
Diinduksi50mg/kgbb Pbasetat selama 7
hari
Diinduksi200mg/kgbb Pbasetat selama 7
hari
Pengukuran Jumlah Asupan Larutan Sukrosa Selama 7hari
Uji Memori Spasial dengan Morris Water Maze (Post test)
Intepretasi Hasil Penelitian
Diinduksi100mg/kgbb Pbasetat selama 7
hari
33
3.10 Analisis Data
Kelompok penelitian ini terdiri atas tiga kelompok yaitu satu kelompok kontrol
negatif, dan dua kelompok perlakuan. Hasil penelitian diuji secara statistik dengan
uji normalitas (Shapiro-Wilk) dan homogenitas (Levene). Data dianalisis
menggunakan uji One-Way Anova. Data memori spasial terdistribusi normal dan
homogen sedangkan data intake sukrosa terdistribusi normal namun tidak
homogen sehingga dilakukan transformasi akar kuadrat (Square root) untuk
memenuhi persyaratan uji One-Way anova. Selanjutnya dilakukan uji One-Way
anova pada kedua variabel. Pada uji One-Way anova didapatkan nilai p<0.05
(hipotesis dianggap bermakna) pada kedua variabel, dilanjutkan dengan
melakukan analisis Post hoc LSD untuk mengetahui perbedaan antar kelompok
yang lebih rinci.
3.11 Etik Penelitian
Penelitian ini telah diajukan ke Komisi Etik Penelitian Kesehatan Fakultas
Kedokteran Universitas Lampung, dengan menerapkan prinsip 3R dalam protokol
penelitian, yaitu:
1. Replacement, adalah keperluan memanfaatkan hewan percobaan sudah
diperhitungkan secara seksama, baik dari pengalaman terdahulu maupun
literatur untuk menjawab pertanyaan penelitian dan tidak dapat digantikan
oleh makhluk hidup lain seperti sel atau biakan jaringan.
34
2. Reduction, adalah pemanfaatan hewan dalam penelitian sesedikit
mungkin, tetapi tetap dapat mendapatkan hasil yang optimal. Dalam
penelitian ini sample dihitung berdasarkan rumus federer yaitu t (n-1) ≥ 15
dengan n adalah jumlah hewan yang diperlukan dan t adalah jumlah
kelompok perlakuan.
3. Refinement adalah memperlakukan hewan percobaan secara manusiawi
dengan prinsip dasar membebaskan hewan coba dalam beberapa kondisi
seperti:
a. Bebas dari rasa lapar dan haus, pada penelitian ini hewan coba
diberikan pakan standar dan minum secara ad libitum.
b. Bebas dari ketidak-nyamanan, pada penelitian hewan coba
ditempatkan di animal house dengan suhu terjaga 20-25°C,
kemudian hewan coba terbagi menjadi 6 ekor tiap kandang.
Animal house berada jauh dari gangguan bising dan aktivitas
manusia serta kandang dijaga kebersihannya sehingga,
mengurangi stress pada hewan coba.
c. Bebas dari nyeri dan penyakit dengan menjalankan program
kesehatan, pencegahan, dan pemantauan, serta pengobatan
terhadap hewan percobaan jika diperlukan.
Prosedur pengambilan sampel pada akhir penelitian telah dijelaskan dengan
mempertimbangkan tindakan manusiawi dan anesthesia serta euthanasia dengan
metode yang manusiawi oleh orang yang terlatih untuk meminimalisasi atau
bahkan meniadakan penderitaan hewan coba sesuai dengan IACUC (Ridwan,
2013).
BAB 5KESIMPULAN DAN SARAN
5.1 Kesimpulan
Dari penelitian ini didapatkan kesimpulan sebagai berikut:
1. Induksi plumbum asetat selama 7 hari dapat menurunkan memori spasial pada
tikus putih jantan (Rattus norvegicus) galur Sprague-Dawley.
2. Induksi plumbum asetat selama 7 hari dapat menurunkan intake sukrosa pada
tikus putih jantan (Rattus norvegicus) galur Sprague-Dawley.
5.2 Saran
Adapun saran yang dapat disampaikan dari penelitian ini untuk dilakukan oleh
peneliti lain adalah sebagai berikut:
1. Disarankan untuk meneliti lebih lanjut mengenai induksi kronik plumbum
asetat terhadap memori spasial.
2. Disarankan untuk meneliti lebih lanjut mengenai pengaruh induksi plumbum
asetat terhadap spatial learning dan visual discrimination learning
50
3. Disarankan untuk meneliti lebih lanjut mengenai pengaruh induksi plumbum
asetat terhadap kadar gluthatione peroxidase, catalase, caspase 8, dan
caspase 9.
4. Disarankan untuk meneliti zat yang dapat mengahambat atau memperbaiki
penurunan fungsi memori spasial akibat dari induksi plumbum asetat
5. Disarankan untuk menggunakan metode lain untuk menilai pengaruh stres
terhadap perubahan intake sukrosa.
DAFTAR PUSTAKA
Ahmed MB, Ahmed MI, Meki AR, Abdarboh N.. 2013. Neurotoxic effect of leadon rats: Relationship to apoptosis. Int J Health Sci Qassim. 7(2): 192-9.
Alvin V, Terry J. 2009. Methods of behaviour analisys in neuroscience: SpatialNavigation (Water Maze) Tasks. edisi ke-2. Georgia: Medical college ofGeorgia.
Ambica PJ, Shekawat PS, Pareek H, Yadav D, Sharma P, John PJ. 2016. Effect oflead on human blood antioxidant enzymes and glutathione. Int J BiochemRes Re. 13(1):1-9
Aykin-Burns N, Laegeler A, Kellog G, Ercal N. 2003. Oxidative effects of lead inyoung and adult fisher 344 rats. Arch. Environ. Contam. Toxicol. 44 (1):417– 20.
Barkour RR, Bairy LK. 2015. Evaluation of passive avoidance learning andspatial memory in rats exposed to low levels of lead during specific periodsof early brain development. Int J Occup Med Environ Health. 28(3): 533-44.
Bazgar M, Goudarzi I, Abrari K, Elahdadi-salmani M, Lashkarbolouki T. 2015.Effect of postnatal chronic lead exposure on spatial learning and memory inmale rat. Zahedan J Res Sci. 17(9): 29-32.
BPS. 2012. Penduduk Indonesia menurut provinsi. Tersedia pada:www.bps.go.id/linkTabelStatis/View/id/1426 diakses tanggal 12 Mei 2016.
BPS. 2014. Perkembangan jumlah kendaraan bermotor. Tersedia pada:www.bps.go.id/linkTabelStatis/View/id/1413 diakses tanggal 12 Mei 2016.
Cassenti D, Carlson R. 2008. Effect of pacing and working memory load on errortype patterns in a routine skill. Am J Phsycol. 121 (1): 57–81.
Depkes. 2014. Dampak kesehatan akibat polusi udara. Tersedia pada:http://pppl.depkes.go.id/berita?id1382 diakses tanggal 12 Mei 2016.
Devlin MT. 2002. Bioenergetics and oxidative metabolism In: Biochemistry withclinical correlations. Edisi ke-5. Canada: Wiley-liss.
Ding Y, Gonick HC, Vaziri ND. 2000. Lead promotes hydroxyl radical generation
and lipid peroxidation in cultured aortic endothelial cells. Am J Hypertens,13 (5): 552–5.
Dorland W. 2010. Kamus Kedokteran Dorland. Edisi ke-31. Jakarta: BukuKedokteran EGC.
Ercal N, Gurer H, Aykin-Burns N. 2001. Toxic metals and oxidative stress. Part1. Mechanisms involved in metal induced oxidative damage. Curr Top MedChem. 1 (6): 529–39.
Ernawati, 2010. Kerang bulu (Anadara inflata) Sebagai Bioindikator PencemaranLogam Berat Timbal (Pb) dan Cadmium (Cd) di Muara Sungai Asahan.Universitas Sumatera Utara.
Grønli J. 2006. an Animal model of depression. University of bergen: Departmentof Biomedicine, Section of Physiology.
Gümrü S, Arıcıoğlu F. 2012. Ampakines: Selective AMPA Receptor Modulatorswith Potential Benefits. MUSBED. 2(4): 143–8.
Gurer H, Ercal N. 2000. Can antioxidan be benefical in the treatment leadposioning. Free radic biol med. 29 (10): 927–45.
Guyton AC, Hall JE. 2007. Buku Ajar Fisiologi Kedokteran Edisi ke-11. Jakarta:Buku Kedokteran EGC.
Harbani N. 2013. Korelasi Kadar Plumbum dalam Darah dengan GangguanKognitif pada Petugas Stasiun Pengisian Bahan Bakar Umum KotamadyaYogyakarta [Thesis]. Universitas Gajah Mada.
Hritcu L, Ciobica A, Stefan M, Lavinia M, Toshitaka P, Nabeshima. 2011. Spatialmemory deficit and oxidatve stress damage following exposure tolypopolysccharide in a rodent model of parkinson’s disease.J Neu Res. 77(1):35–43.
Irawan RM. 2008. Pengaruh methanol terhadap pengurangan emisi gas buangcarbon monoksida pada kendaraan motor bensin. Traksi. 1(6): 39–47.
Japardi I. 2002. Learning and Memory. Fakultas Kedokteran bagian Bedah:Universitas Sumatera Utara.
Jett DA, Kuhlmann AC, Guilarte TR. 1997, Intrahippocampal administration lead(Pb) impairs performance of rats in the morris water maze. PharmacolBiochem Behav. 57(1): 263-96.
Jones JB, Tan T, Bloom SR. 2012. Minireview: glucagon in stress and energyhomeostasis. Endocrinology. 153(3): 1049-54.
Kandel E, Schwart JH, Jessel T. 2000. Principles of Neural Science. Edisi ke-4.USA: McGraw-Hill.
Koelsch S, Boehlig A, Hohenadel M, Nitsche I, Bauer K, Sack U. 2016. Theimpact of acute stress on hormones and cytokines, and how their recovery isaffected by music-evoked positive mood. Scientific Reports. Tersedia pada:http://www.nature.com/articles/srep23008#supplementary-informationdiakses tanggal 4 desember 2016
Kumar V, Cotran RS, & Robin SL. 2007. Buku Ajar Patologi Robin. Edisi ke-7.Jakarta: EGC.
Kurniawan W. 2008. Hubungan Kadar Pb Dalam Darah dengan Profil Darah padaMekanik Kendaraan Bermotor di Kota Pontianak [Thesis]. ProgamPascasarjana Universitas Diponegoro Semarang. Universitas Diponegoro.
Laurence RR dan Bacharach AL. 1964. Evaluation of drug activities,pharmachometrics. London: Academic Press
Li N, Hou Y, Ma D, Jing W, Dham H, Wang L. 2015. Lead accumulation,oxidative damage and histopathological alteration in testes and accessoryglands of freshwater crab, Sinopotamon henanense , induced by acute leadexposure. Exotoxiol Envioren Saf. 17 (2015): 20–7.
Li N, Jia J, Zheng Y, Liu X, Zhu M, Shi B et al. 2010. Lead impairs ability oflearning and memory and effects expression of synapstosomal-assosiatedprotein-25 in hippocampus of offspring. Zonghua Lao Dong Wei Sheng ZhiYe Bing Za Zhi. 28 (9): 652-5.
Mann M, Klemm K. 2011. Efficient exploration of discrete energy landscape.phsy. E. Stat. Nonlin. Soft. Matter Phys. 83(11): 1-8.
Manalu J, Siregar T, Widiowati W. 2006. Hubungan kepadatan lalulintaskendaran bermotor dengan kandungan timbal udara, timbal dalam darahpedagang kaki lima di kota Surakarta. Bionatura. 8(2): 20-6
Mitra A, Guevremont G Timofeeva E. 2016. Stress and sucrose intake modulateneuronal activity in the anterior hypothalamic area in rats. PLoS ONE. 11(5):1-21
Mastrangelo ME, Schleich CE, & Zenuto RR. 2008. Short-term effects of an acuteexposure to predatory cues on the spatial working and reference memoryperformance in a subtteranean rodent. Anim Behav. 77(3): 685–92.
Mc Kee T, Mc Kee JR. 2003. Aerobic metabolism II: electron transport andoxidative phosphorylation In: Biochemistry the molecular basis of life Edisike-3. New york: McGraw-Hill.
Meng H, Wang L, He J, Wang Z. 2016. The Protective Effect of Gangliosides onLead (Pb)-Induced Neurotoxicity Is Mediated by Autophagic Pathways. Int JEnviron Res Public Health. 13(4): 365. Tersedia pada:http://www.mdpi.com/1660-4601/13/4/365.
MSDS-Material Safety Data Sheet. 2006. Lead nitrate. MSDS no L3130. hlm.1–8.
Murray R, Boss-Williams KA, Weiss JM. 2013. Effects Of Chronic Mild StressOn Rats Selectively Bred For Behavior Related To Bipolar Disorder AndDepression. Elsevier Inc. 119 (1): 115–29.
Murray RK, Granner DK, Rodwell VW. 2009. Biokimia Harper. Edisi ke-27.Jakarta: EGC.
Nasution FA. 2004. Bahaya Timbal dan Permasalahanya. Bandung: IntstitutTeknologi Bandung.
Notoatmodjo. 2005. Metodologi Penelitian Kesehatan. Jakarta: PT. Rineka Cipta
Novita Y. 2015. Pengaruh Ekstrak Etanol Pegagan (centella Asciatica sp.)Terhadap Pembentukan Memori Spasial Pascastres Listrik Kronis Kajianpada Tikus Putih (sprague Dawley). Universitas Gajah Mada.
Ostrovskaya SS, Shatornaya VF, Kolosova I. 2011. Combined impact ofplumbum and cadmium on the organism. Foreigning Literature Review.hlm.2011–13.
Palar H. 1994. Pencemaran dan Toksikologi Logam Berat. Jakarta: Rineka Cipta.
Pandey SP, Singh HK, & Prasad S. 2015. Alterations in hippocampal oxidativestress, expression of AMPA receptor GluR2 subunit and associated spatialmemory loss by Bacopa monnieri extract (CDRI-08) in streptozotocin-induced diabetes mellitus type 2 mice. PLoS ONE. 10(7): 1–23.
Pothion S et al. 2004. Strain differences in sucrose preference and in theconsequences of unpredictable chronic mild stress. Behav Brain Res. 155(2004): 135–46.
Remus JL, Stewart LT, Camp RM, Novak CM, Johnson JD. 2015. Interaction ofmetabolic stress with chronic mild stress in altering brain cytokins andsucrose preference. Behav Neurosct. 129(3): 321-30.
Ridwan, E. 2013. Etika Pemanfaatan Hewan Percobaan dalam PenelitianKesehatan. J Indon Med Assoc. 3 (63): 112-6.
Sandi C. et al. 2005. Acute Stress-Induced Impairment of Spatial Memory IsAssociated with Decreased Expression of Neural Cell Adhesion Molecule inthe Hippocampus and Prefrontal Cortex. J Bio Psych. 57(2005): 856–64.
Schneiderman NG, Ironson, SD, & Siegel. 2005. Stress and health: Psychological,Behavioral, and Biological Determinants. Annu Rev Clin Psychol. 1(2005):607–28.
Shafii S. 2008. The removal of zinc and plumbum (lead) by using hydrogenperoxide [Thesis]. University Malaysia Pahang.
Shafiq-ur-rehman. 1984. Lead-induced regional lipid peroxidation lipid in brain.Toxx let. 21(1): 333–7.
Sherwood L. 2014. Fisiologi Manusia dari Sel ke Sistem. Edisi ke-8. Editor Penditet al. Jakarta: Buku Kedokteran EGC.
Snell R. 2011. Neuroanatomi Klinik. Edisi ke-7. Editor Sugiharto L,Djayasaputra, Sali C. Jakarta: EGC.
Strekalova T, Couch Y, kholod N, Boyks M, Malin D, Laprince P et al. 2011.Update in the methodology of chronic stress paradigm: internal controlmatters. Behav Brain Func. 7(9): 1-18.
Sudarmaji, Mukono J, Corie I. 2006. Toksikologi logam berat b3 dan dampaknyaterhadap kesehatan. JKL. 2(2): 129–42.
Takahashi A. 1975. Problem of hygine maintenance for food coming into contactwith rubber and plastics products. Nippon Gomu Kyokaishi: 48(9):537[translated by Inglis EA. 1976. Int Polymer Sci Tech. 3(1): 93-105]
Tian Y. et al. 2014. Acute and chronic toxic effects of Pb on polychaete Perinereisaibuhitensis: morphological changes and responses of the antioxidant system.environ Sci. 26(8): 1681–8.
Watermaze. 2013. Learning about Morris Water Mazw. Richard Baker. Tersediapada: watermaze.org diakses tanggal 3 juni 2016.
Widiowati W. 2008. Efek Toksik Logam. Edisi ke-1. Yogyakarta: ANDI.
Vollmer LE, Ghosal S, Rush JA, Sallae FR, Herman JP, Weinert M et al. 2013.Attenuated stress-evoked anxiety, increased sucrose preference and delayedspatial learning in glucocorticoid-induced receptor-deficient mice. GenesBrain Behav. 2013 (12): 241-9.
Xiao Y, Fu H, Han X, Hu X, Gu H, Chen Y et al. 2014. Role of sypnaticstructural plasticity in impairment of spatial learning and memory induced bydevelopmental lead exposure in wistar rats. PloS ONE. 9(12): 1-16.
Zito K. 2009. NMDA Receptor Function and Physiological Modulation. USA:University of California
Top Related