LABORATORY OF CELLULAR THERAPY “G. LANZANI”Scientific Director: Dr. M Introna
USC EMATOLOGIA Ospedali Riuniti BergamoDirector: Prof. A Rambaldi
DL 24/4/2006 n° 219 “Codice comunitario”(attua le 2001/83/CE, 2003/94/CE, 2003/63/CE)
Regola tutto il ciclo di vita dei prodotti farmaceuticidalla produzione alla commercializzazione.
Allegato I. Parte IV: medicinali per terapie avanzate (celluleper terapia somatica e/o terapia genica).
Contiene il discusso articolo 28 sulle eccezioni ospedaliereVedi legge 07/07/2009 n° 88, G.U. 161 del 14/07/2009
Norme per la Sperimentazione Clinica
DPR 21/09/2001 n° 439 per Fasi I
DL026/04/2002 Documentazione ISS per fasi I
DL 24/06/2003 N° 211 (attua 2001/20/CE) per GCP e successivo DL 21/12/2007 (IMPD)
DL 06/11/2007 n°200 (attua 2005/28/CE) per GCP
DL 02/03/2004 e successivi per “Banca Dati”
DL 05/12/2006 per “Usi Consolidati”e successivi decreti “proroga”
DL 05/12/2006 per “Usi Compassionevoli”
DM 08/05/2003 per “Usi Compassionevoli”
Altre norme per la Sperimentazione Clinica
DL 06/11/2007 n°191 (attua 2004/23/CE)
DL 25/01/2010 N° 16 (attua 2006/17/CE e 2006/68/CE)
ISTITUTO DEI TESSUTI/CNT
AIFA
Area produzione e controllo
Ufficio autorizzazioni officine
Il Laboratorio di Terapia Cellulare “G.Lanzani” è autorizzato aprodurre prodotti per terapia cellulare sottoforma di
preparazioni liquide di piccolo volume per uso parenteralepreparate in asepsi.
Roma, 27.07.2007
N° aM-144/2007
30/07/2007 Preliminary authorization of the “Lanzani” Cell Factory by AIFA
28/11/2008 Official authorization of the “Lanzani” Cell Factoryby AIFA n° aM 189/2008
27/02/2008 2nd General inspection
JULY 07
FEBRUARY 08
NOVEMBER 08
12/04/2007 Inspection of follow up of corrective actionsAPRIL 07
NOVEMBER 09 3-6/11/09 Inspection of follow up
19/12/2005 1st General InspectionDECEMBER 2005
Chronology of the AIFA inspections up to finalauthorization of the Cell Factory
Other antigens or naive
Ruolo soppressorio sulla immunità da parte delle cellule MSC
Le Blanc et al. Lancet 2004
Clinical course and immunosuppression of the patient
Le Blanc et al, Lancet 2008
Survival from time of haemopoietic stem –cell transplantation inpatients given mesenchymal stem cells
n = 30n = 25
Production MSC
Expansion from BM Quality controls
Week0 12345678910
1incubatorMedium,½literPL 2‐3bagswith80‐100x106/batch
o1with100x106+2‐3smallbags/batch
LaboratoryTC2:2incubators
EndotoxinLAL
Sterility
MycoplasmaCulture(EP)
Phenotype,viability
From frozenvial P1
13
25
10
3
Number of frozenvials at p1
(~2x106cells/vial)
3
2
4
1
Frozen bags(mean:80x106cells/bag)
200.0
147.0
375.2
95.0
hMSC Frozen(x 106)
washout
washout
washout
washout
Origin ofmaterial
BG-MSC12
BG-MSC11
BG-MSC7
BG-MSC2
Code
1
20
5
1
n° vials usedFrozen bags
(mean 1x107cells/bags)Code
1BG-MSC12
32BG-MSC11
10BG-MSC7
3BG-MSC2
hMSC EXPANSIONS
…from “fresh material”
…from “frozen vials bank”
Capelli C. et al, BMT, 2007; Capelli C et al., Cytotherapy, 2009
24/11/2008 Submission of Phase I MSC/aGVHD IMPD to ISS
24/04/2009 Authorization by ISS
16/07/2009 Authorization by E.C. Monza
NOVEMBER 08
APRIL 09
JULY 09
Time scale of approval of Phase I clinicalstudy with MSC in aGVHD
NOVEMBER 09 Authorisation by E.C. Bergamo
MSC for the treatment of severe aGVHD
• Dossier n° Eudra CT: 2008/007869/23
• Usage of MSC for steroid resistant grade III-IV aGVHD
• Scientific project shared with Prof. A. Biondi and dott. E. Biagi,Unità di Pediatria, Ospedale San Gerardo, Monza, UniversitàMilano Bicocca.
• Clinical PI: Dott. E. Biagi
Authorization by ISS on 24/04/2009Authorization by E.C. Monza on 16/07/2009
Pts GVHD Grading at MSC Infusion
No. of MSC
Infusion
Infused MSC (Dose/kg)
Response After MSC Infusion Follow-up
1A Chronic overlap syndrome (skin and mucosae grade III)
1 1 x 106/kg Partial response temporary Skin and mucosae grade I
Alive with chronic skin and mucosae GVHD grade II
2A Chronic overlap syndrome (skin and mucosae grade II)
1 1 x 106/kg Complete response definitive No GVHD
Alive with skin chronic GVHD grade I
2B Chronic mucosae and liver grade III
1 1.4 x 106/kg Partial response temporary Chronic mucosae and liver grade II
3A Acute skin grade I 1 1 x 106/kg Complete response definitive No GVHD
Alive, no GVHD
4A Acute skin grade I 1 0.7 x 106/kg No response Skin GVHD grade I
Alive, no GVHD
4B Chronic skin and liver grade III 4 2.8 x 106/kg
Partial response temporary Skin and liver grade II
5A Acute skin grade II 1 1.2 x 106/kg Complete response definitive No GVHD
Alive, no GVHD
5B Chronic skin GVHD grade I 1 1.2 x 106/kg No response Skin GVHD grade I
6A Chronic overlap (skin and mucosae grade III)
1 1.2 x 106/kg Complete response definitive
Alive, no GVHD
7A Acute skin grade I 2 2.4 x 106/kg Complete response definitive No GVHD
Alive, no GVHD
8A Acute (skin II and gut grade IV) 2 3.2 x 106/kg Partial response temporary Skin and gut grade II
Death for progressive gut GVHD And pulmonary aspergillosis
9A Acute (skin and gut grade IV) 2 2 x 106/kg No response Skin and gut grade IV
Death for sepsis
10A Acute gut grade IV 2 2.4 x 106/kg Partial response temporary Grade III
Alive, no GVHD
11A Acute gut grade IV 1 3.7 x 106/kg No response Deah for gut GVHD and pneumonia
Lucchini G. et al, BBMC, 2010, in press
MSC infusions in pediatric patients
Richiesta di emendamento sostanziale a ISSper allargamento a 13 centri ematologici italiani
e cambio dosaggio (3 somministrazioni al posto di 2)Aspetti logistici critici
Coordinamento pediatrico: MonzaCoordinamento adulti: Bergamo
In attesa di risposta formale da ISS
A novembre 2010 già arruolati 13 pazienti
MSC per il trattamento della GVHD acuta grave
CIK culturePBMCsDay 0
INFgamma1000 IU/ml
OKT3 50 ng/mlIL2 500 IU/ml
IL2 500 IU/mlevery 3-4 days
Day 1 Day 21
Protocol for generation of cytokine-induced killer cells
CD3
CD
56
CD
56
CD3
CD
56 NK
CD56
T
CD3
CIK
CD3CD56
Introna M. et al, BMT, 2006Franceschetti M. et al., Exp Hematol, 2009Pievani A et al., Blood in pressPievani A. et al., submitted
Murine CIK cells GFP transduced and i.v. injected in syngenic animals carrying s.c.lymphoma
Edinger, M. et al, Blood 2003
Homing of cytokine-induced killer cells in vivo
Day 0: early localization of CIK cells to the lungs;Day 1: distribution to other sites, including liver and spleen;Day 3: preferential infiltration of subcutaneous tumor site;Day 12: regression of tumor and minimal signal from remaining CIK cells
Nishimura, R. et al.Blood 2008;112:2563-2574
Trafficking and survival of CIK cells upon adoptive transfer
Produzione CIK
Produzione Controlli di qualità
Week0 12345678910
1incubatoreTerreno,OKT3,IFNg,IL‐23‐4sacche/produzione
LaboratorioTC1:3incubatori
NostroLALemycoplasma(Mycoalert)
Sterilità
MycoplasmaColtura(P.E.)
Feno[po,vitalità
• Dossier n° 64499-PRE.21-848
• Titolo: Impiego linfociti CIK: Fase I
• Approvazione in data 30/05/2005
• Progetto scientifico in condivisione con il Prof. A. Biondi eil dott. E. Biagi, Unità di Pediatria, Ospedale San Gerardo,Monza, Università Milano Bicocca.
Cellule CIK da donatore per le ricaduteleucemiche
Chiusura studio CIK Fase I
05/06 Arruolamento di 17 pazienti tutti singolarmenteautorizzati dall’Ufficio comma c del ISS dietro specifica
richiesta
06.12.06 Invio manoscritto con dati di 11 pazientiPubblicazione su Hematologica 2007, 92, 07, 948-955
06.10.08 Invio relazione finale chiusura Fase I
Results
Clinical responseNone 6Stable Disease 1Hematologic Improvement 1Complete response 3
Alive/dead 4/7
Days of Median Follow upfrom transplant 782 (188-1327)
Introna et al, 2007
RECIPIENT
DONOR
Days posttranplant
27
90
120
132
155
174
377
DLI (+102)
CIK (+132)
CIK (+174)
77%
22%
25%
6%
45%
97%
100%
0%
100%
Response of pt 765 as determined by chimerism analysis of CD3+ cells
Introna et al, 2007
AIFA
•Progetto scientifico in condivisione con il Prof. A. Biondi e il dott. E. Biagi,Unità di Pediatria, Ospedale San Gerardo, Monza, Università Milano Bicocca,con il Prof. S. Cortelazzo, Ospedale Bolzano.
•PI clinico: Prof. A Rambaldi
Infusione sequenziale di linfociti non manipolati del donatore (DLI) e linfocitikiller indotti da citochine (CIK) dopo il trapianto allogenico di cellule staminali
Protocollo CIK 2
Numero EudraCT: 2008-003185-26
Fase II autorizzata da AIFA il 14.04.09, Prot.n° AIFAII/37533/P
Autorizzazione da CE Bergamo: 30/07/2009
Therapeutic use
1st DLI: 1x106/kg
2nd DLI: 1x106/kg
10x106/kg5x106/kg5x106/kg4
10x106/kg5x106/kg1x106/Kg3
5x106/kg5x106/kg1x106/Kg2
5x106/kg1x106/Kg1x106/Kg1
3rd CIK cells infusion
2nd CIK cells infusion
1st CIK cells infusion
Combina-tion
None1,5,101-5-10BGFL.H.VIII
None1,5,101-5-10BZFA.G.VII
None1,51-5-5BZFM.A.VI
None1,51-5-5BZFV.D.V
None1-5-51-5-5BGMP.P.IV
None1-1-51-1-5BGMT.G.III
None1-11-1-5BGFV.A.II
None1-51-1-5BGMM.C.M.I
Toxicity(aGVHD)
TreatmentGroupCityGenderPatient N°
CIK II protocol: enrollment at November 2010
Laboratorio di Terapia Cellulare “G. Lanzani”Responsabile: M. Introna
1. Processazione dicellule staminali
emopoieticheResponsabile: M.
Introna
Referente Qualità delLaboratorio (RQL):
J. Golay
OperatoriG. BorleriC. CapelliE. Gotti
2. Produzione di prodotti diTerapia Cellulare in GMPQualified person: M. Introna
Assicurazione di QualitàResponsabile: J. Golay
Operatori:G. BorleriC. CapelliA. Pievani
E. GottiL. BolognaA. Amaru
3. Ricerca e SviluppoGroup leaders
M. IntronaJ. Golay
Personale AmministrativoE. Traini
Programma di Trapianto delleCellule Staminali EmopoieticheDirettore: Alessandro Rambaldi
USC Ematologia
OrganigrammaCentro di Raccolta
SIMTResponsabile: Dott.essa A.
Falanga
Unità Clinica
Laboratorio di Terapia Cellulare“G.Lanzani”
USC Ematologia, Ospedali Riuniti di Bergamo
Associazione ItalianaContro le Leucemie
Linfomi e Mielomi – ONLUSsezione PAOLO BELLI
Alessandro Rambaldi Direttore USC EmatologiaMartino Introna Qualified Person DT e RRPJosée Golay Quality Control e RRCQGianmaria Borleri Operator ProductionChiara Capelli Operator ProductionAlice Pievani Operator ProductionElisa Gotti Operator ProductionLuca Bologna Operator Quality ControlAriel Amaru PhD, Ricerca e sviluppoElisabetta Traini Operatore di supporto gestionale
Microbiologia OORRBGUfficio Tecnico OORRBGUfficio Qualità OORRBG
Uffici Amministrativi OORRBGUfficio Ambientale OORRBG/Impresa pulizie
Ricerca donatori: E. OldaniGestione software: F. Delaini
Gestione GCP: ML Ferrari
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