Ensaio Imunossorventeligado à enzima-
ELISA
M.V. Thaís Gasparini Baraldi
Mestranda em Medicina Veterinária
Laboratório de Pesquisa em Suínos – FCAV/Unesp
Prof. Helio José MontassierResp. Disciplina Imunologia
Veterinária
Melhores Métodos Diagnósticos
5 pré-requisitos:•Rapidez• Simplicidade• Sensibilidade• Especificidade •Baixo custo
MURPHY et al. (1999)
Por que realizar testes diagnósticos?
Enzyme-linked immunosorbent assay - ELISA
• Teste de ligação primária
• ELISA indireto
• ELISA competitivo
• ELISA sanduíche (de captura)
• ELISA competitivoDETECÇÃO DE ANTÍGENOS (Ag)
DETECÇÃO DE ANTICORPOS (Ac)
Cuidados na colheita de soros para uso no
ELISA
Etapas ELISA
1. Diluição do soro sanguíneo2. Incubação3. Lavagem4. Anticorpo conjugado à enzima5. Incubação6. Lavagem7. Substrato8. Incubação9. Solução de parada 10. Leitura
COR
ELISA INDIRETO
BOVINOS:- Detecção de Acs anti-BVDV, anti-BoHV, anti-Paramyxovirus (Parainfluenza bovina), etc.SUÍNOS:- Detecção de Acs anti-SIV, anti-Circovirus, anti-Parvovirus, anti-Mycoplasma, anti-Actinobacillus, etc.CÃES:- Detecção de Acs anti-Virus da cinomose, anti-parvovírus, anti-vírus rábico, anti-leptospira, etc.
ELISA INDIRETO
ELISA-SANDUÍCHE (Captura)
ELISA COMPETITIVO- detecção de Acs
BOVINOS:- Detecção de Acs anti-FMDV.SUÍNOS:- Detecção de Acs anti-SIV.
Ensaio Imunoenzimático
VANTAGENS
• Alta sensibilidade
• Boa especificiade
• Baixo custo
• Kits
• Versatilidade (amostras individuais e grande escala)
DESVANTAGENS
• Aparelhos para a lavagem das placas
• Espectofotômetro-leitura da reação
• Reações inespecíficas
• Problemas na pureza do antígeno para alguns tipos de vírus
Thaís Gasparini [email protected]
Obrigada!
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