DIAGNOSTIGO GENETICO PREIMPLANTACIONAL
Manuel Gasco
El diagnóstico genético preimplantacional El diagnóstico genético preimplantacional (DGP) es el estudio del material genético (DGP) es el estudio del material genético del embrión para detectar determinadas del embrión para detectar determinadas alteraciones. Con este estudio genético alteraciones. Con este estudio genético parcial podemos seleccionar los parcial podemos seleccionar los embriones cromosómicamente normales embriones cromosómicamente normales antes de su transferencia al útero antes de su transferencia al útero materno. materno.
AneuploidíasAneuploidías
MonosomíasMonosomías TrisomíasTrisomías TriploidíasTriploidías
La técnica consiste en extraer una o dos La técnica consiste en extraer una o dos células de un embrión de más de seis células de un embrión de más de seis células para analizar su material genético.células para analizar su material genético.
Three day old embryos
FISH: FISH: HHibridación "in situ" con sondas ibridación "in situ" con sondas fluorescentes de DNAfluorescentes de DNA..
PCRPCR
Cromosomas: X, Y, 13, 16, 18, 21 y 22Cromosomas: X, Y, 13, 16, 18, 21 y 22
FISHFISH
Sondas fluorescentes q se ligan a Sondas fluorescentes q se ligan a cromosomas específicos y son marcadas cromosomas específicos y son marcadas con biotina, estos son detectados con con biotina, estos son detectados con anticuerpos conjugados con fluorocromos anticuerpos conjugados con fluorocromos específicos y se observan bajo específicos y se observan bajo microscopía de fluoerescencia.microscopía de fluoerescencia.
X
Y
Interphase nucleus
Normal DiploidTriploid
Tetraploid Missing chromosomes
Normal DiploidTriploid
Tetraploid Missing chromosomes
Monosomy Double trisomy
PGD
Lepidium meyenii (Maca) incrementa el tamaño de la camada en ratonas adultas
normales
Ruiz Ana, Stephanie Salazar, Norma Aspajo, Julio Rubio, Manuel Gasco, Gustavo Gonzales.
Instituto de Investigaciones de la AlturaDepartamento Académico de Ciencias Biológicas y Fisiológicas
Facultad de Ciencias y FilosofíaUniversidad Peruana Cayetano Heredia
INTRODUCCION
• Maca es una crucifera q crece exclusivamente entre 3800 y 4500 msnm en los andes centrales peruanos y ha sido utilizada por siglos como nutriente y como potenciador de la fertilidad.
• Estudios previos han demostrado efectos positivos de la maca sobre la espermatogénesis (Gonzales GF, 2001, 2003, 2004; Chung, 2005; Bustos-Obregòn, 2005) y sobre el comportamiento sexual (Zheng BL, 2000; Cicero AF, 2001, 2002) mientras que en hembras solo hay un estudio reportado donde determinan que la maca no modifica la tasa de implantación en ratonas (Oshima M, 2003).
OBJETIVO
• Determinar el efecto del extracto acuoso de Maca en ratonas adultas sobre los índices reproductivos y peso uterino (ratonas ovariectomizadas).
METODOS
• Ratonas de la cepa Balb/C, fueron divididas en 3 grupos:
Indices Reproductivos Sitios de ImplantaciónPeso Uterino
Ratas Ovariectomizadas
Vehículo Maca1 g/kg
Maca0.5 g/kg
VehículoMaca1 g/kg
Vehículo
Preparacion del Extracto Acuoso
• El hipocótilo seco molido se hierve en agua durante 2 hrs, se filtra y se refrigera a -70oC y luego al proceso de liofilizado.
• 2.2 g del liofilizado se diluye en agua destilada hasta obtener una dosis de 1g/kg.
Estudio de los sitios de Implantación
• El tratamiento fue durante 22-28 días (15 días previos a la monta y durante los primeros 7 días de gestación).
• Las ratonas fueron sacrificadas al día 7 de preñez, el útero fue removido y se observaron los sitios de implantación, los embriones fueron contados y pesados.
Estudio de los Indices Reproductivos
• 15 días previos a la monta, durante la preñez y 21 días post parto, las hembras fueron administradas con maca o vehículo.
• Se registró el número de crías vivas al día 4 y 21, el día de la abertura vaginal y la tasa sexual (fracción masculina).
INDICES REPRODUCTIVOS
Indice de Fertilidad(♀ preñadas/♀copularon) X 100
Indice de Gestación(♀ con crías vivas/♀ preñadas) X 100
Indice de Viabilidad Post-natal(crías vivas día 4/crías vivas) X 100
Indice de Viabilidad al destete(crías vivas al día 21/crías vivas día 4) X 100
Efecto estrogénico de Maca
?
Ratonas ovariectomizadas30d
Administró 42 días de Maca o Vehículo
Análisis Estadísticos
• Normalidad de los datos: Test de Kolmogorov-Sminorv.• Peso corporal, sitios de implantación, longitud de la
gestación y tamaño de camada se evaluaron con el test t de Student’s.
• Analisis multivariado fue utilizado para determinar si el tratamiento con maca influye sobre el número de crías y sobre el día de la abertura vaginal.
• Los índices reproductivos fueron analizados con el test de proporción pareada.
• P<0.05 fue estadísticamente significante.
RESULTADOSINDICES REPRODUCTIVOS EN RATONAS QUE RECIBIERON MACA O
VEHICULO
80
82
84
86
88
90
92
94
96
98
100
Indice de Fertilidad Indice de Gestacion Indice de ViabilidadP osnatal
Indice de Viabilidad alDestete
%
Vehículo
Maca
Sitios de Implantación
12345678
9101112131415
Sitios de Implantación
Num
ero
de im
plan
taci
ones
Vehículo
Maca
Longitud de la Gestación
15
16
17
18
19
20
21
Longitud de la Gestación
Día
s d
e p
reñ
ez Vehículo
Maca
Efecto de la maca sobre el tamaño de la camada
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
Día 1 Día 4 Día 21
Nú
me
ro d
e c
ría
s
Vehículo
Maca
* *
* P<0.05 respecto al grupo vehículo
Día del Abertura Vaginal
0
5
10
15
20
25
30
35
<7 crías ≥ 7 crías
Día
de
la a
ber
tura
vag
inal
Vehículo
Maca
Ratonas Ovariectomizadas
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
Peso Uterino
Peso
ute
rino
en m
g
Vehículo
Maca
*
CONCLUSIONES
La administración de maca (1 g/kg) a ratones hembras normales en edad reproductiva incrementa el tamaño de la camada, sin afectar los índices de fertilidad, de gestación, de viabilidad post-natal, de viabilidad al destete, número de implantaciones y apertura vaginal.
La administración de maca (0.5 g/kg/) aumenta el peso uterino en ratonas ovariectomizadas, luego de 42 días de tratamiento.
RATAS TRATADAS CON MACA NEGRA (Lepidium meyenii) DURANTE UN CICLO
ESPERMATOGÉNICO
J. Nieto, M. Gasco, J.Rubio, S. Yucra, GF Gonzales
Instituto de Investigaciones de la AlturaFacultad de Ciencias y Filosofía
Universidad Peruana Cayetano Heredia
INTRODUCCIÓN
• La espermatogénesis en rata dura 12.5 días.• La Maca presenta diferentes ecotipos de acuerdo al color de su
hipocotilos (13 descritos).• La Maca amarilla, roja y negra obtenidas de Carhuamayo Junín, tienen
diferentes componentes nutricionales al compararlos entre ellos. (Yllescas, 1994)
• 2005 : Effect of short-term and long-term treatments with three ecotypes of Lepidium meyenii (MACA) on spermatogenesis in rats. (C. Gonzales, J. Nieto, S Yucra, J. Rubio, M. Gasco, C. Góñez, S. Miranda and GF Gonzales) (en revisión)
• Maca Negra tuvo el mejor efecto en conteo de espermatozoides y motilidad; maca amarilla tuvo un efecto intermedio; mientras que maca roja no tuvo efectos a nivel de estos parámetros.
Efectos de diferentes ecotipos de Maca ( 42 días) en la longitud del estadío VIII del epitelio del túbulo seminífero (cm.), conteo de espermátides, producción diaria de espermatozoides (DSP) y
tránsito de espermatozoides en ratas.
• Los datos son promedio ± EE. *P<0.01; **P<0.02 with respect to control group. Number of rats per group is between parentheses.respecto al grupo control. El número de ratas por grupo están entre los paréntesis.
OBJETIVO GENERAL
• Determinar el efecto de la maca negra, un ecotipo de la maca (Lepidium meyenii) sobre la producción diaria de espermatozoides, conteo de espermátides, conteo de espermatozoides y niveles de hormonas en un ciclo espermatogénico.
OBJETIVOS ESPECÍFICOS
• Determinar el efecto de la maca negra a diferentes tiempos de administración(1,3,5,7 y 12 días) durante un ciclo espermatogénico.
• Determinar el efecto de la maca negra en la histología del testículo y del epidídimo durante un ciclo espermatogénico.
• Determinar el efecto de la maca negra sobre los niveles de testosterona intratesticular y sérica.
MÉTODO
• Se administró a ratas Holtzman adultas 2gr/Kg de MN (666.6 mg.) y vehículo durante 1, 3, 5, 7, y 12 días.
• Un día después de cada tratamiento las ratas fueron sacrificadas y evaluadas.
• Se pesaron los órganos sexuales: epidídimos, testículos, vesícula seminal y próstata.
• Se evaluaron los niveles de testosterona sérica e intratesticular.
RESULTADOS
Producción Diaria de espermatozoides (DSP)
12,00
14,00
16,00
18,00
20,00
22,00
Treatment Time (days)
DS
P (
x10
6)
1 3 5 7 12
* a
c b
b
b
A
(p<0.05)(p<0.05)
Conteo de espermatozoides en epidídimo
70.00
90.00
110.00
130.00
150.00
170.00
190.00
210.00
230.00
Time of Treatment (days)
Ep
idyd
imal sp
erm
co
un
t (x
106
)
Black Maca Control
1 3 5 7 12
**
*c d
c
d
cad
B
Conteo de Espermatozoides en el Conducto deferente
4.00
6.00
8.00
10.00
12.00
14.00
Time of Treatment (days)
Va
s d
efe
ren
s s
pe
rm c
ou
nt
(x1
06 )
Black Maca Control
1 3 5 7 12
*
**
c
C
MN 7 DIAS VS MN 12 DÍAS
Área tubular y luminal maca negra durante 7 y 12 días
*P<0.05 respecto al area tubular
Se contaron 20 tubulos por animal, 100 por grupo.
0
5
10
15
20
25
30
35
7 Days 12 Days
% o
f lum
inal
are
a re
late
d to
tub
ular
are
a
Control Black Maca
*
Efectos de Maca Negra en los túbulos seminíferos administrada a ratas durante 7 y 12 días. A,C: Grupos controles de ratas tratadas durante 7 y 12 días,
respectivamente; B,D: Maca Negra tratada durante 7 y 12 days, respectivamente. HE stain. ×100 magnification. Las barras representan 500
um.
Histología de la cola del epidídimo en ratas machos adultos tratadas con Maca Negra durante 7 y 12 días. A, C: grupos Control de ratas tratadas durante 7 y 12 días, respectivamente; B, D grupos de Maca Negra (2g/kg) tratada durante 7 y 12 días, respectivamente. HE stain. Magnificación: X 10. Las barras representan 500 um.
MACA NEGRA 7D TESTOSTERONA
INTRATESTICULAR
Niveles de testosterona Intratesticular (TTI) y testosterona sérica (TS)- ng/g
testículo
C MN
TTI 16,89 ± 2.03 17,22 ± 3.67
T SERICA 264.73 ± 34.11 229.46 ± 47.18
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