Cultivos Submersos de Agaricus blazei Formulados com Resíduos de Fruta para Produção de Fenol-oxidases, Celulases e Xilanases

Letícia Osório da Rosa, Marli Camassola e Aldo José Pinheiro DillonUniversidade de Caxias do Sul – Centro de Ciências Agrárias e Biológicas - Instituto de Biotecnologia - E-mail: ajpdillo@ucs.br

INTRODUÇÃO

O cogumelo Agaricus blazei é um macrofungo comestível, tido

como medicinal e com grande potencial terapêutico, porém, existem

poucas informações a respeito da sua produção de enzimas hidrolíticas,

tais como, celulases e xilanases que podem ser aplicadas na indústria

têxtil, de detergente e na indústria de polpa e papels e fenol-oxidases

que apresentam aplicações nas indústrias de bebidas, alimentos, têxteis,

farmacêutica e potencial em processos de biorremediação. Em virtude

da disponibilidade de resíduos de frutas na região nordeste do Rio

Grande do Sul e ao conhecimento de que algumas frutas apresentam

capacidade indutora para fenol-oxidases e enzimas hidrolíticas, este

trabalho teve como objetivo verificar a produção destas enzimas por A.

blazei, em cultivos submersos, empregando 1 % de fonte de carbono

(resíduos de frutas ou glicose como controle).

MATERIAIS E MÉTODOS

RESULTADOS E DISCUSSÃO

CONCLUSÃO

BIBLIOGRAFIA

*Fungo utilizado

Agaricus blazei AB-2007, pertencente à coleção de microrganismos

do IB-UCS.

*Meios de cultivo e condições de cultivo

*Meio líquido

0,1%(m/v) peptona,

10%(v/v)nutrientes

90%(v/v)H2O destilada

1% (m/v) glicose (controle) -C(glic)

1% (m/v) bagaço de abacaxi - A

1% (m/v) bagaço de bergamota comum - BC

1% (m/v) bagaço de bergamota Pocan - BP

1% (m/v) bagaço de laranja - L

1% (m/v) bagaço de maçã - MÇ

1% (m/v) bagaço de maracujá - M

1% (m/v) bagaço de uva - U

+

Autoclavados – 15min

Triplicata de cada tratamento

Inóculo:

3 Discos de 1,5 cm de

diâmetro �

de uma placa (ágar,

farelo de trigo,

serragem,CaCO3 e H2O

destilada)

+

Linhagem

*Análises

-Manganê peroxidase: dosadas utilizando vermelho de fenol como

reagente (Kuwahara et al., 1984).

-Lacase: quantificadas pela oxidação do substrato ABTS (Wolfenden

& Wilson, 1982).

-Endoglucanase: quantificadas utilizando a solução

carboximetilcelulose 2% como substrato (Ghose, 1987).

- Filter paper activity (FPAases): realizadas empregando papel filtro

Whatman no 1 como substrato (Mandels, 1969).

- Xilanase: a atividade de xilanases foi dosada de acordo com Bailey

(1992).

-ᵦ -glucosidase: foi realizada utilizando p-nitrophenyl-b-D-

glucopyranoside (pNPG) segundo Hang e Woodams, 2004.

� Resultados das atividades enzimáticas de lacase e manganês

peroxidase; endoglucanase, filter paper activity, xilanase e ᵦ - glucosidase:

Tabela 1. Atividade de lacases de Agaricus

blazei AB-2007, cultivado com diferentes fontes

de carbono.

Figura 1. Atividade de manganês peroxidase

de Agaricus blazei AB-2007, cultivado com

diferentes fontes de carbono.

Figura 2. Atividade de endoglucanase de Agaricus blazei AB-2007, cultivado com

diferentes fontes de carbono.

Figura 3. Atividade de Filter Paper Activity de Agaricus blazei AB-2007, cultivado

com diferentes fontes de carbono.

Figura 4. Atividade de xilanase de Agaricus blazei AB-2007, cultivado com

diferentes fontes de carbono.

Bailey, M.J.; Biely, P.; Poutanen, K. (1992). J. Biotechnol. 23:33: 257-270.

Ghose, T.K. (1987). Appl. Environm. Microbiol. 49: 205-210.

Hang YD, Woodams EE. (1994). Lebensm Wiss Technol. 27:587–9.

Kuwahara, M.; Glenn, J. K.; Morgan, M. A. & Gold, M. H. (1984). FEBS Lett. 169: 247-250.

Mandels, M.; Weber, J. (1969). Adv. Chem. Ser. 95: 391-414.

Wolfenden, R. S. & Wilson, R. L. (1982). J. Chem. Soc. Perkin Trans. II. 02:805- 812.

Os dados obtidos neste trabalho indicam a possibilidade do

emprego de resíduos de frutas para a produção de enzimas em

Agaricus blazei. Meios suplementados com resíduos de frutas são

economicamente viáveis e podem constituir-se em uma alternativa para

produção de micélio, do qual pode-se extrair glucanas e do meio de

cultivo obter enzimas.

Coleta alícotas de 5ml para análises ����tempo (dias): 0, 3, 6, 9, 12, 15

Bolsista de Apoio Técnico a Pesquisa do CNPq - Nível 2A

Figura 5. Atividade de xilanase de Agaricus blazei AB-2007, cultivado com

diferentes fontes de carbono.

Temp(dias)

A BC BP L MÇ M U C glic

0 0 0 0 0 0 0 0 0

2 0 0 0 0 0 0 0 0

6 0 0,355 0,162 0 0 0 0 0

9 0,030 0,061 0,012 0 0 0 0 0

12 0 0,037 0 0 0,025 0 0 0

15 0 1,281 1,572 2,148 0 0 0,413 0

0 3 6 9 12 150

1

2AbacaxiBergamota ComumBergamota PocanLaranjaMaçãMaracujáUvaControle (glicose)

Tempo (dias)

Man

ganês p

ero

xid

ases

(UI.m

L-1

)

0 3 6 9 12 150

25

50

75

100Abacaxi

Bergamota Comum

Bergamota Pocan

Laranja

Maçã

Maracujá

Uva

Controle (glicose)

Tempo (dias)

Xil

an

ase

(U

I.m

L-1

)

0 3 6 9 12 150.0

0.1

0.2

0.3

0.4Abacaxi

Bergamota Comum

Bergamota Pocan

Laranja

Maçã

Maracujá

Uva

Controle (glicose)

Tempo (dias)

Fil

ter

Pap

er

Acti

vit

y

(UI.

mL

-1)

0 3 6 9 12 150

50

100

150Abacaxi

Bergamota Comum

Bergamota Pocan

Laranja

Maçã

Maracujá

Uva

Controle (glicose)

Tempo (dias)

ββ ββ-

glu

co

sid

as

es

(UI.

mL

-1)

0 3 6 9 12 150.0

0.1

0.2

0.3

0.4

0.5Abacaxi

Bergamota Comum

Bergamota Pocan

Laranja

Maçã

Maracujá

Uva

Controle (glicose)

Tempo (dias)

En

do

glu

ca

nase

(UI.

mL

-1)

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