CROISSANCE BACTERIENNE
Prsent par Dr DJRO AGBA AIME
PLAN Introduction I-LE CYCLE CELLULAIRE BACTERIEN 1) cycle 2) courbe de croissance II- FACTEURS DE CROISSANCE Conditions physico-chimiques III-MOYENS DETUDE DE LA CROISSANCE BACTERIENNE A- Milieux de culture B- Principales techniques de numration bactrienne Conclusion
INTRODUCTION
-Etat vgtatif -Etat de repos Croissance: augmentation de volume des cellules augmentation du nombre de cellules.-
LE CYCLE CELLULAIRE BACTERIEN 3tapes l'initiation (B) : ARNm et protines la rplication de l'ADN chromosomique (C) la division cellulaire (D)
LE CYCLE CELLULAIRE BACTERIEN bactries Gram positif paroi est riche en peptidoglycane AUTOLYSINE cellules filles
Mode de regroupement
2) courbe de croissance bactrienne
Interprtation Phase stationnaire croissance exponentielle phase stationnaire :
N ! No v 2-d= temps de doublement de la population, -No=la population initiale -T=le temps
t d
Figure2 Multiplication de Escherichia coli
II-FACTEURS DE CROISSANCE Conditions physico-chimiques de la croissance Temprature pH activit de leau pression osmotique concentration en oxygne pression
Temprature (C): Psychrophile0 20 Msophile20 45 Thermophile45 plus de 70 Psychrotrophe0 35 Thermorsistante 65 hermophile70 prs de 110 Cryophile 4C Thermophile thermorsistante 45 et 60
Noms
Tempratures de croissance Exemples (C)
Psychrophile Msophile Thermophile Psychrotrophe (ou psychrophile
0 20 20 45 45 plus de 70 0 35
Pseudomonas marina Escherichia coli Thermus aquaticus Bacillus psychrophilus, Pseudomonas fluorescens
facultatif) Thermorsistante Supportent des tempratures de 65 C pendant quelques minutes Hyperthermophile cryophiles Thermophile thermorsistante 70 prs de 110 4C Ont une temprature optimale de croissance entre 45 et 60 ET supportent de hautes tempratures pendant un moment Entrocoques et Streptocoques (sans faire des spores) Archobactrie Pyrolobus fumarii Germes ou spores de Bacillus et Clostridium
pH Majorit pH=7 Les bactries mdicales : pH optimum= 77,6 acide alcalin : vibrio .
activit de leau (aw) eau pure a une aw de 1 addition sucre, sel autre solut diminue aw,
pression osmotique
isotoniques milliosmoles
[NaCl]=9g/l soit 300
Mycoplasmatales :paroi espces marines :35 g de NaCl /l
bactries non-halophiles: [NaCl] 0,2 M pour les moins halophiles et 5,2 M pour les plus halophiles halotolrantes :staphylocoque
Exemple
Exemple
concentration O2 Arobie: O2 fermentatif : un substrat organique. respiration anarobie : cytochrome+phosphorylation oxydative compos minral
Barotolrant
Croissance entre 1 et 500 atm.
Colwellia hadaliensis Pas trouv dexemple Pas trouv dexemple
Modrment barophile
Croissance optimale 5000 m et encore possible 1 atm. pression
Barophile extrme
Ils requirent au minimum 400 atm ou plus pour leur dveloppement.
Milieux de culture milieu solide: agrgation cellules colonies isolesl
glatine : 25C et bactrie glose ou agar-agar: +produits biologiques
Milieux de culture En milieu liquide : dispersion Boullon de culture
Milieux de culture Les milieux naturels ou empiriques Trs utiliss constituants d'origine animale (macrations oudcoctions de tissus, peptones, uf, glatine, lait,.)
vgtale (pomme de terre, levure, soja, )
Les milieux synthtiques chimiquement dfinis milieu ure-indole
Les milieux semi-synthtiques substances chimiques + produits naturels exemple, la glose lactose au bromocrsol pourpre (BCP) : 5 g de peptone+3 g d'extraits de viande+10 g de lactose+15 g d'agar-agar +0,025 g de pourpre de bromocrsol.
Autres milieux milieux d'isolement milieux d'enrichissement et les milieux slectifs milieux d'identification milieux de conservation
techniques de numration
Techniques ne permettant pas de diffrentier les bactries vivantes des bactries tues
Numration directe - Numration en chambre gradue
-Numration en cellule de Breed -Compteurs lectronique de particules
Numration indirecte sur lame (mthode de Wrhigt)
pour la numration des suspensions vaccinales
Milieu de culture non renouvel Mthode directe Dtermination par rapport au poids sec Ou biomasse 1mg=qq milliards debactries
Milieu de culture non renouvel
Numration totale Numration viable
Milieu de culture non renouvel Mthodes indirectes Msure optique tubidimtrique Dosage par absorption du CO2 libr Dosage de N2 bactrien Activit enzymatique bactries
Nphlomtrie soit une gamme talon partir dune suspension bactrienne titre - soit une gamme dalbumine
Techniques applicables uniquement aux bactries vivantesNumration milieu solide par ensemencement dans la masse principe : on parle de CFU= Colonie Formant Unit, UFC=Unity Forming Colony
Technique lanse calibre dite de platine ou ose 1 ose = 15mg de bactries cultives sur milieu solide Diamtre moyenne 23mmm 4,8mm vol = 20UI 3,5mm vol =10UI 2,25 vol = 4UI 2,1mm vol = 3UI
technique de la lame immerge Plaquettes commercialises : - sur une surface CLED ( pour dnombrement de cocci et bacilles) - sur lautre surface Mac Conkey ( pour les Bacilles Gram (-) - interprtation des rsultats laide dabaques
Contrle de pollution de surface
- par empreinte sur glose - Ou frotter sur une aire bien limite Mthodes de stries
c) Numration en milieu liquide Dtermination du NPP= Nombre le Plus Probable =mthode de Mc Crady d) Numration par filtration sur membranes e) Ensemencement automatique : Ex : appareil de Steers
Dnombrement des bactries par la technique des dilutions
Conclusion L'tude de la nutrition et de la croissance bactrienne est riche d'applications : Elle permet de dfinir les paramtres assurant une culture optimale des bactries (atmosphre gazeuse, temprature, pression, etc.). Elle permet la confection de milieux servant cultiver, isoler et identifier les bactries ainsi qu' tudier leur sensibilit aux antibiotiques
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