Attività del Laboratorio Nazionale di Riferimento nell’ambito delle
micotossine
Francesca Debegnach
Reparto OGM e Xenobiotici di Origine Fungina
ISTITUTO SUPERIORE DI SANITÀ (ISS) COME LABORATORIO NAZIONALE DI RIFERIMENTO (LNR):
Decisione della Commissione 98/536/CEE stabilisce l’elenco dei Laboratori Nazionali di Riferimento per la ricerca dei residui
Direttiva 96/23/CE, recepita con DL.vo 336/99Che designa l’ISS come LNR per le micotossine (Allegato 1 - categoria B3d)
COMPITI DEL LABORATORIO NAZIONALE DI RIFERIMENTO:Regolamento CE N. 882/2004 – Art. 331. Gli Stati membri predispongono che per ciascun Laboratorio Comunitario di
Riferimento…siano designati uno o più Laboratori Nazionali di Riferimento.
2. Questi Laboratori Nazionali di Riferimento:a) collaborano con il Laboratorio Comunitario di Riferimento nel loro ambito di
competenza;b) coordinano, nella loro sfera di competenza, le attività dei laboratori ufficiali
responsabili dell’analisi dei campioni a norma dell’articolo 11;c) se del caso, organizzano test comparativi tra i laboratori nazionali ufficiali e
assicurano un adeguato follow-up dei test comparativi effettuati;d) assicurano la trasmissione all'autorità competente e ai laboratori nazionali ufficiali
delle informazioni fornite dai laboratori comunitari di riferimento;e) offrono assistenza scientifica e tecnica all'autorità competente per l'attuazione di piani
di controllo coordinati adottati a norma dell’articolo 53;f) hanno la responsabilità di effettuare altri compiti specifici previsti secondo la
procedura di cui all’articolo 62, paragrafo 3, fatti salvi ulteriori compiti nazionali previsti.
a) collaborano con il Laboratorio Comunitario di Riferimento nelloro ambito di competenza;
b) coordinano, nella loro sfera di competenza, le attività dei laboratori ufficiali responsabili dell’analisi dei campioni a norma dell’articolo 11;
c) se del caso, organizzano test comparativi tra i laboratori nazionali ufficiali e assicurano un adeguato follow-up dei test comparativi effettuati;
d) assicurano la trasmissione all'autorità competente e ai laboratori nazionali ufficiali delle informazioni fornite dai Laboratori Comunitari di Riferimento;
e) offrono assistenza scientifica e tecnica all'autorità competente per l'attuazione di piani di controllo coordinati adottati a norma dell’articolo 53;
f) hanno la responsabilità di effettuare altri compiti specifici previsti secondo la procedura di cui all’articolo 62, paragrafo 3, fatti salvi ulteriori compiti nazionali previsti.
a) collaborano con il Laboratorio Comunitario di Riferimento nel loro ambito di competenza;
b) coordinano, nella loro sfera di competenza, le attività dei laboratori ufficiali responsabili dell’analisi dei campioni a norma dell’articolo 11;
c) se del caso, organizzano test comparativi tra i laboratori nazionali ufficiali e assicurano un adeguato follow-up dei test comparativi effettuati;
d) assicurano la trasmissione all'autorità competente e ai laboratori nazionali ufficiali delle informazioni fornite dai Laboratori Comunitari di Riferimento;
e) offrono assistenza scientifica e tecnica all'autorità competente per l'attuazione di piani di controllo coordinati adottati a norma dell’articolo 53;
f) hanno la responsabilità di effettuare altri compiti specifici previsti secondo la procedura di cui all’articolo 62, paragrafo 3, fatti salvi ulteriori compiti nazionali previsti.
Il Laboratorio Nazionale di Riferimento
Fornisce ai laboratori ufficiali:
Consulenza tecnica e scientifica
Metodi di campionamento e di analisi
Organizza studi di validazione
Organizza corsi di formazione e aggiornamento
STUDIO DI VALIDAZIONE PER LA
DETERMINAZIONE DELLA AFLATOSSINA
B1 NEL MAIS
Lo studio è stato presentato al CEN ed è attualmente in discussione
Il lavoro è in pubblicazione su Journal of chromatography
MATERIALI (I)
Campione di analisi:
GRANELLA DI MAIS MACINATA
La scelta del mais in granella è legata alla necessità di considerare la matrice integrale allo scopo di poter impiegare il metodo sia per l’analisi di prodotti derivati (farina per polenta) sia per il mais destinato ad uso zootecnico.
MATERIALI (II)
3 livelli di contaminazione5 livelli:
2 livelli di spike
Bianco≅ 2 µg/kg (ppb)≅ 15 µg/kg (ppb)
2 µg/kg (ppb)5 µg/kg (ppb)
ELABORAZIONE STATISTICA DEI RISULTATI (I)
E ed I (SPK)5.00 µg/kg
D ed F*17.60 µg/kg
C e G*0.00 µg/kg
B ed H*2.20 µg/kg
A ed L (SPK)2.00 µg/kg
Campione
2621272125Numero risultati accettati
18062Numero laboratori con outliers
3030303030Numero laboratori partecipanti
20052005200520052005Anno
* Campioni naturalmente contaminati
ELABORAZIONE STATISTICA DEI RISULTATI (II)
4.2115.53-1.861.64Valore medio(µg/kg)
E ed I (SPK)5.00 µg/kg
D ed F*17.60 µg/kg
C e G*0.00 µg/kg
B ed H*2.20 µg/kg
A ed L (SPK)2.00 µg/kg
Campione
2.034.95-0.860.87Limite di ripetibilità – r (r=2.8x Sr) (µg/kg)
17.2011.39
(≤ 15)
-16.58
(≤ 20)
18.97Dev. St. Rel. Ripetibilità RSDr (%)
0.721.77-0.310.31Dev. St. ripetibilità - Sr (µg/kg)
* Campioni naturalmente contaminati
ELABORAZIONE STATISTICA DEI RISULTATI (III)E ed I (SPK)5.00 µg/kg
D ed F*17.60 µg/kg
C e G*0.00 µg/kg
B ed H*2.20 µg/kg
A ed L (SPK)
2.00 µg/kg
Campione
84± 23---82± 23Recupero (%)
0.840.68-0.750.68Valore di HORRAT
3.508.77-1.571.28Limite di riproducibilità R (R=2.8x RSDR) (µg/kg)
29.7220.16
(≤ 20)
-30.24
(≤ 30)
27.78Dev. St. Rel. di Riproducibilità RSDR (µg/kg)
1.253.13-0.560.46Dev. St. di riproducibilità SR(µg/kg)
* Campioni naturalmente contaminati
INDICE DI HORRAT
L’indice di Horrat rappresenta una guida per determinare l’accettabilità della precisione di un metodo.
L’indice di Horrat è il rapporto tra la deviazione standard di riproducibilità (RSDR) ed il valore previsto della deviazione standard di riproducibilità (predicted reproducibility standard deviation-PRSDR).
La previsione viene fatta sulla base del livello medio di contaminazione del materiale preso in esame.
La riproducibilità del metodo è garantita se il valore di Horrat è tra0.5 e 1.5
STUDIO DI VALIDAZIONE PER LA
DETERMINAZIONE DELLA OCRATOSSINA
A IN CAMPIONI DI CACAO IN POLVERE
Lo studio è stato presentato al CEN ed è attualmente in discussione (verrà presentato come prEN
xxx in autunno al technical Committee)
Il lavoro è stato pubblicato:
Brera C., S. Grossi, Miraglia M. (2005). Interlaboratory study for ochratoxin A determination in cocoa
powder samples. Journal of Chromatography & Related Technologies. Vol. 28(1), 35-62.
Brera C., S. Grossi, Miraglia M. (2003). High performance liquid chromatographic method for the
determination of ochratoxin a in cocoa powder. Journal of Liquid Chromatography & Related
Technologies. Vol. 26(4), 585-598.
Scientific Institute of Public Health - BelgiumDr. J. Y. Michelet
Central Science Laboratory - UKDr. S. Mc Donald
BGVV – Mycotoxins and Contaminants - GermanyDr. H. Klaffke
Centro National de Alimentation – Istituto de Salud Carlos III (Isciiù) - SpainDr. P. A. Burdaspal
Laboratori EuropeiNeotron S.p.A.Dr. G. Zoboli
ARPA Emilia Romagna – Area Analitica Alimenti e TossicologiaDr. S. Zanotti
ARPAV – Servizio Laboratori DAP, VeneziaDr. F. Zanon
ARPAT – Dipartimento LivornoDr. G. Spinelli – Dr. M. Mazzetti
IZS Abruzzo e Molise – Bromatologia e ResiduiDr. G. Scortichini
Progetto Natura, S.r.l., PratoDr. P. Pucci
ISAN – Università “Sacro Cuore” PiacenzaProf. A. Pietri
ARPAV – Laboratorio Chimica degli AlimentiDr. B. Gnech
Chemical Control S.r.l.Dr. L. Gandino
ARPA Campania – Dipartimento NapoliDr. G. Esposito
ARPA Piemonte – Polo AlimentiDr. P. Branca
ARPA Emilia Romagna – Sezione di BolognaDr. C. Bergamini
ARPA Lazio – Sede di RomaDr. B. Bencivenga
Parmalat – Ricerca e Sviluppo,Dr. E. Bassi
Laboratori Nazionali
0,290,160,410,130,07Dev. St. di riproducibilità SR (µg/kg)
3130293040Dev. St. Rel. Riproducibilità RSDR (%)
0,810,45
1,150,360,20Limite di ripetibilità – R (R=2.8x Sr) (µg/kg)
0.690.610.670.580.68Valore di HORRAT
0,530,310,620,220,14Limite di ripetibilità – r (r=2.8x Sr) (µg/kg)
3029312924Numero laboratori partecipanti
3027312924Numero laboratori dopo eliminazione degli outliers
80± 2480 ± 25---Recupero (%)
20(≤ 20)
20(≤ 20)
15(≤ 20)
19(≤ 20)
29(≤ 40)
Dev. St. Rel. Ripetibilità RSDr (%)
0,190,110,220,080,05Dev. St. ripetibilità - Sr (µg/kg)
0,940,531,420,420,17Valore medio (µg/kg)
Spike(1 µg/kg)
Spike(0.5 µg/kg)
Livelloalto
Livellomedio
LivellobassoCampioni
a) collaborano con il Laboratorio Comunitario di Riferimento nel loro ambito di competenza;
b) coordinano, nella loro sfera di competenza, le attività dei laboratori ufficiali responsabili dell’analisi dei campioni a norma dell’articolo 11;
c) se del caso, organizzano test comparativi tra i laboratori nazionali ufficiali e assicurano un adeguato follow-up dei test comparativi effettuati;
d) assicurano la trasmissione all'autorità competente e ai laboratori nazionali ufficiali delle informazioni fornite dai Laboratori Comunitari di Riferimento;
e) offrono assistenza scientifica e tecnica all'autorità competente per l'attuazione di piani di controllo coordinati adottati a norma dell’articolo 53;
f) hanno la responsabilità di effettuare altri compiti specifici previsti secondo la procedura di cui all’articolo 62, paragrafo 3, fatti salvi ulteriori compiti nazionali previsti.
OCRATOSSINA A IN CAMPIONI DI
POLVERE DI CACAO
PROFICIENCY TESTING
Il lavoro è in pubblicazione:
Brera C., S. Grossi, F. Debegnach, B. De Santis, V. Minardi, M. Miraglia. Proficiency
testing as a tool for implementing internal quality control: the case of ochratoxin A
in cocoa powder. Accreditation and quality assurance.
-4,00
-3,00
-2,00
-1,00
0,00
1,00
2,00
3,00
4,00
5,00
7 2 9 10 34 11 38 15 24 26 35 37 3 27 25 22 17 30
Codice Laboratorio
z-sc
ores
0.71 µg/kg
0.28 µg/kg
Z-scores per ochratoxin A (0.40 µg/kg) in campioni di cacao
-6,00
-4,00
-2,00
0,00
2,00
4,00
6,00
8,00
10 2 7 34 11 24 38 9 35 37 3 26 25 15 27 30 17 22
Codice Laboratorio
z-sc
ores
0.11 µg/kg
0.29 µg/kg
Z-scores per ochratoxin A (0.19 µg/kg) in campioni di cacao
-4,00
-3,00
-2,00
-1,00
0,00
1,00
2,00
3,00
4,00
5,00
9 7 2 10 38 3 27 34 22 37 26 11 15 24 17 35 25 30
Codice Laboratorio
z-sc
ores
2.43 µg/kg
0.94 µg/kg
Z-scores per ochratoxin A (1.45 µg/kg) in campioni di cacao
6718121.45
6118110.40
5618100.19
Percentuale di soddisfazione
Numero totale diz- scores
Numero diz-scores
soddisfacenti| z | ≤ 2
Concentrazione di OTA (µg/kg)
6718121.45
6118110.40
5618100.19
Percentuale di soddisfazione
Numero totale diz- scores
Numero diz-scores
soddisfacenti| z | ≤ 2
Concentrazione di OTA (µg/kg)
a) collaborano con il Laboratorio Comunitario di Riferimento nel loro ambito di competenza;
b) coordinano, nella loro sfera di competenza, le attività dei laboratori ufficiali responsabili dell’analisi dei campioni a norma dell’articolo 11;
c) se del caso, organizzano test comparativi tra i laboratori nazionali ufficiali e assicurano un adeguato follow-up dei test comparativi effettuati;
d) assicurano la trasmissione all'autorità competente e ai laboratori nazionali ufficiali delle informazioni fornite dai Laboratori Comunitari di Riferimento;
e) offrono assistenza scientifica e tecnica all'autorità competente per l'attuazione di piani di controllo coordinati adottati a norma dell’articolo 53;
f) hanno la responsabilità di effettuare altri compiti specifici previsti secondo la procedura di cui all’articolo 62, paragrafo 3, fatti salvi ulteriori compiti nazionali previsti.
PROGRAMMI COORDINATI
Raccomandati dalla Comunità Europea
Organizzati dal Ministero della Salute
ISS offre assistenza tecnica e scientifica:
• Metodi di campionamento• Metodi di analisi
Ministero della Salute stende un rapporto da inviare alla Commissione
Programma coordinato di ispezione nel settore dell’alimentazione animale per l’anno 2004 (2005), in conformitàdella direttiva 95/53/CE del Consiglio
Raccomandazione della Commissione del 17 febbraio 2004
2004/163/CE
Raccomandazione della Commissione del 2 marzo 2005
2005/187/CE
Raccomanda agli Stati membri:
di realizzare un programma coordinato di ispezione volto a controllare la concentrazione di micotossine* nei mangimi
indicando i metodi di analisi
Il metodo di campionamento dovrebbe comprendere sia un campionamento casuale, che un campionamento mirato
I campioni devono essere i mangimi sospettati di contenere concentrazioni più elevate di micotossine**
* aflatossina B1, ocratossina A, zearalenone, deossinivalenolo e fumonisine
** cereali, semi e frutti oleosi, mangimi immagazzinati per lungo periodo o trasportati via mare per lunghe distanze
Raccomandazione della Commissione del 10 marzo 2005
2005/175/CE
Programma coordinato di controllo ufficiale dei prodotti alimentari per l’anno 2005, in conformità della direttiva 89/397/CEE
Gli Stati membri dovrebbero procedere ad ispezioni e controlli e, laddove necessario, prelevare campioni e sottoporli ad analisi di laboratorio, allo scopo di:a)…d) Valutare la sicurezza di taluni alimenti destinati ai lattanti e ai bambini, per quanto concerne i tenori di nitrato e patulina.
Le autorità competenti…dovrebbero prelevare campioni rappresentativi
di alimenti contenenti carote, patate, ortaggi a foglia e prodotti derivati
dalle mele, soprattutto a livello di vendita al dettaglio senza trascurare
la produzione e l’importazione.
Per il controllo ufficiale…si raccomandano i metodi di campionamento
e analisi stabiliti dalla seguente legislazione comunitaria:
Direttiva 2002/63/CE
Direttiva 2003/78/CE
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