AJCristóvão, Departamento Zoologia Universidade Coimbra 2003
A Parede Celular emBactérias
Tem como função:
-Manter as formas característicasdas células-Protecção contra alterações depressão osmótica-Fornecer uma plataforma rígidapara ligação dos apêndicessuperficiais
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Composta por umamacromolécula chamadapeptidoglicano, tambémdesignada por mureína.
ComposiComposiçãção eo eestrutura da paredeestrutura da parede
celularcelular
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1. Um esqueleto polissacar Um esqueleto polissacaríídeodeo
A. ácido N-acetile muramico(Mur)
B. N-acetile glucosamina (Gln)
2.2. CadeiasCadeias pept peptíídicasdicas laterais lateraiscontendo
A. aminoácidos D- e L-
B. ácido diaminopimelico (emalguns casos)
C. As cadeias laterais formampontes cruzadas,que podem variar entreespécies.
PeptidoglicanoPeptidoglicanoconsiste em:consiste em:
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r r r rr r
CitoplasmaCitoplasmaCitoplasma
rrrr
ácido lipoteóico
Peptidoglicano- ácido teóico
Membrana Citoplasmática
Envelope celular Gram +Envelope celular Gram +
CitoplasmaCitoplasmaCitoplasmaMembrana (citoplasmática) interna
Mem
bra
na E
xte
rna
Lipopolissacarídeo
r
Porina
Lipoproteína castanhaPeptidoglicano
Envelope celular Gram-Envelope celular Gram-
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Gram Gram positivaspositivas e GramGramnegativasnegativas
A coloração de Gram é baseadaem características quereflectem as diferençasestruturais entre os 2 grupos.
As diferentesAs diferentescaractercaracteríísticas dasticas da
parede celularparede celularpermite formar 2permite formar 2grandes Gruposgrandes Grupos
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Alta (devido àpresença de umamembranaexterna)
BaixoConteúdo lipidicoe delipoproteínas
AltaVirtualmentenenhum
Lipopolissacarideo
PresenteAusenteMembranaexterna
PresenteAusenteEspaçoperiplásmico
AusentePresente emmuitas
Ácidos teóicos
fina (camadaúnica)
Grossa (multi-camada)
Canada depeptidoglicano
Pde serdescorada erecorada comsafranina
Retem cristaisvioleta e ficapúrpura-violeta
Reacção ao testeGram
Gram-NegativaGram-PositivaCaracteristicas
Características dasBactérias Gram-Positivas e
Gram-Negativas I
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4 anéis no corpobasal
2 anéis no corpobasal
Estruturaflagelar
Endotoxinasprimárias
Toxinasproduzidas
BaixaAltaResistência físicaà ruptura
BaixaAltaInhibição porcorantes básicos
BaixaAltaSusceptibilidadea detergentesanionicos
BaixaAltaResistência àazida de sódio
BaixaAltaResistência àsecagem
Gram-NegativaGram-PositivaCaracteristicas
Características dasBactérias Gram-Positivas e
Gram-Negativas II
Exotoxinaspromárias
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Tipos de Parede Celular(Gram)
COLORAÇÃO DE GRAM
(POSITIVO E NEGATIVO)
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• Objectivo– Ver morfologia celular– De diagnóstico: Que tipo de
parede é que uma bactériapossui
– Classificação: O tipo de paredepermite separar as células em2 grandes grupos
Coloração de Gram
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• Cristal Violeta (violeta)– Coloração primária; coloração positiva– A parede celular cora de violeta
• Iodo de Gram– Mordante– Combina-se com os CV para formar um
complexo insolúvel que fica aprisionado nascamadas de peptidoglicano mais grossas
• Etanol/cetona– Descolorante– Os complexos CV-I são lavados para for a
das células Gram-, porque as camadas depeptidoglicano não são suficientementeespessas para osreter; atravessam amembrana externa
• Safranina (pink)– Cora todas as célula mas somente as Gram-
são visualizadas, nas outras sobrepõem-se ovioleta.
Reagentes para Coloraçãode Gram
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Colocar uma gota de água na laminae espalhar com ansa um pouco de células
Secar ao ar
Fixar à chama (NÃO QUEIMAR OS DEDOS)
Colocar uma gota de corante e após o tempo necessário
escorrer
Colocar uma gota de óleo deimersão
e observar ao microscópioampliação 100x
Óleo
100x
lamina
Adaptado de BROCK
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PASSO 1
PASSO 2
Após secar e fixar comcalor, colocar noreagente cristal violeta 1min
TODAS as células ficamvioletas
Após lavar com umpouco de água, colocarcom iodo de Gram 1 min
TODAS as célulascontinuam violetas
PASSO 3
PASSO 4
Após lavar com um poucode água, colocar cometanol/acetona 30 s
Células Gram+ violetas,restantes incolores
Após lavar com umpouco de água, colocarem safranina, 1 minGRAM-
Após lavar com umpouco de água, e secarcom um papel de filtro,as células Gram+ ficamvioletas e as Gram-ficam vermelho a rosado
GRAM+
Adaptado de BROCK
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Exemplos deColorações Gram
Gram+ Gram-
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• Géneros que formam endósporos– Bacillus– Clostridium
• É um mecanismo desobrevivência, não é parareprodução (só se formamquando o ambiente se tornademasiado agressivo para viver)
• Estas estruturas estão dormentese podem sobreviver eternamente,porque são extremamente difíceisde destruir
Endósporos
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Formação de umEndósporo
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• Interesse:– Para diagnosticar algumas
doenças– Algumas doenças são causadas
por endósporos– Como são praticamente
indestrutíveis algumas doenças,as bactérias que os formampodem ser particularmentepatogénicas e por issoperigosas, por ex o Clostridiumbotulinum, que causa obotulismo.
Coloração deEndósporos
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• Verde Malaquite (verde)– O aquecimento ajuda a passar a parede
do endósporo– Só se cora o esporo e não a parede
celular• Safranina (vermelho/rosa)
– Agente contrastante– Não cora o endósporo– Fornece contraste para o esporo.
Reagentes a usar
Procedimento1. Fazer um esfregaço2. Colocar num suporte com água a ferver por baixo3. Corar com malaquite 5% 5 min (sobre água a ferver)4. Lavar com água5. Corar com safranina 30s6. Lavar com água7. Observar ao microscópio (Objectiva de imersão)
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Exemplo deendósporo corado
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