Wykład 6 (3.5 MB PPT-file)
-
Upload
truongminh -
Category
Documents
-
view
232 -
download
2
Transcript of Wykład 6 (3.5 MB PPT-file)
![Page 1: Wykład 6 (3.5 MB PPT-file)](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062401/587616881a28abd8348b8df1/html5/thumbnails/1.jpg)
Chemia koloru cz.6
Luminescencja c.d.Prof. Daniel T. Gryko
![Page 2: Wykład 6 (3.5 MB PPT-file)](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062401/587616881a28abd8348b8df1/html5/thumbnails/2.jpg)
Plan wykładu
• Chemoluminescencja• Bioluminescencja• Sondy fluorescencyjne – obrazowanie
optyczne• Białka fluorescencyjne (Green fluorescent
proteins)
![Page 3: Wykład 6 (3.5 MB PPT-file)](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062401/587616881a28abd8348b8df1/html5/thumbnails/3.jpg)
Podstawy zjawiska
LuminescencjaEmisja fotonów (w zakresie ultrafioletu, widzialnym
i podczerwonym) z elektronowych stanów wzbudzonych.
FotoluminescencjaPod wpływem światła
ElektroluminescencjaPod wpływem prądu elektrycznego
ChemiluminescencjaPod wpływem reakcji chem.
![Page 4: Wykład 6 (3.5 MB PPT-file)](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062401/587616881a28abd8348b8df1/html5/thumbnails/4.jpg)
Podstawy zjawiska
ChemiluminescencjaEmisja fotonów z elektronowych stanów wzbudzonych
na które cząsteczka dostała się wskutek reakcji chemicznej
1838-1914
![Page 5: Wykład 6 (3.5 MB PPT-file)](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062401/587616881a28abd8348b8df1/html5/thumbnails/5.jpg)
Co i jak?
NHNH
O
ONH2
OH-, H2O2
-N2 COO-
NH2
COO-
+hv (425 nm)
NN
O
NH2 O-OOHON
O
NH2 O
NH
O- COO-
NH2
COO- *
![Page 6: Wykład 6 (3.5 MB PPT-file)](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062401/587616881a28abd8348b8df1/html5/thumbnails/6.jpg)
‘Lofina’
B. Radziszewski, Chem. Ber. 1885, 18, 355-358.
NH
N OH-, O2
+hv (530 nm)
*
O
O
CHO
+HOAc, NH4OAc
Ar
N
N
ArR
OHO
Ar
N
N
ArRO
O
Ar
N
N
ArRO
O N
NR
OO
R
R
N
NR
OO
R
R
![Page 7: Wykład 6 (3.5 MB PPT-file)](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062401/587616881a28abd8348b8df1/html5/thumbnails/7.jpg)
Zastosowania chemiluminescencji
• Rozrywka (latawce, ‘świecące patyki’)• Analiza gazów (np. NO 1ppb)• Analiza związków organicznych• Sekwencjonowanie DNA• Detekcja biomolekuł
![Page 8: Wykład 6 (3.5 MB PPT-file)](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062401/587616881a28abd8348b8df1/html5/thumbnails/8.jpg)
‘Sticks’
• American Cyanamide Company 1960
hv
O O
OO
ArAr+ H2O2 O O
O O+ 2ArOH
OH
COONat-BuOH+
H2O2
Cl
2CO2+
Emiter
Emiter*
![Page 9: Wykład 6 (3.5 MB PPT-file)](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062401/587616881a28abd8348b8df1/html5/thumbnails/9.jpg)
Wzmocniona chemiluminescencja
• Peroksydaza chrzanowa jest przyłączana do interesującej nas biocząsteczki
• Ten kompleks katalizuje przekształcenie chemiluminoforu w wzbudzony emiter, który dalej utleniany H2O2 przechodzi w stan trypletowy (C=O)
• Ten ostatni przechodząc w stan podstawowy emituje światło
![Page 10: Wykład 6 (3.5 MB PPT-file)](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062401/587616881a28abd8348b8df1/html5/thumbnails/10.jpg)
Bioluminescencja
BioluminescencjaProdukcja i emisja światła przez żywy organizm.
Świetlik (Photinus pyralis) Common glowworm (Lampyris Noctiluca)
![Page 11: Wykład 6 (3.5 MB PPT-file)](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062401/587616881a28abd8348b8df1/html5/thumbnails/11.jpg)
Co i dlaczego?
S
N
S
N
HO
COOH
S
N
S
N
HO
OO2 + ATP, lucyferaza + CO2
AMP
PP
hv (562 nm)
Grzyb (Panellus stipticus)
S
N
S
N
N
COOH
Me
J. Am. Chem. Soc. 2010,
![Page 12: Wykład 6 (3.5 MB PPT-file)](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062401/587616881a28abd8348b8df1/html5/thumbnails/12.jpg)
Sondy fluorescencyjne
• Jedna z najważniejszych metod badania komórek
• Znakowanie (labelling)• Możliwość wielokrotnego znakowania
![Page 13: Wykład 6 (3.5 MB PPT-file)](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062401/587616881a28abd8348b8df1/html5/thumbnails/13.jpg)
Sondy fluorescencyjne - wymagania
• Selektywne wiązanie z pewnych typem komórek, organelli lub cząsteczek
• Brak toksyczności• Wysoka • Fotostabilność• Pozostawanie w komórce…• Kompatybilność ze źródłłem wzbudzenia
![Page 14: Wykład 6 (3.5 MB PPT-file)](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062401/587616881a28abd8348b8df1/html5/thumbnails/14.jpg)
Sondy fluorescencyjne – potrójne znakowanie
• Niebieskie (Oregon green), zielone/żółte (Alexa 588), Cy5 (czerwone)
![Page 15: Wykład 6 (3.5 MB PPT-file)](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062401/587616881a28abd8348b8df1/html5/thumbnails/15.jpg)
Przykładowe sondy fluorescencyjne
![Page 16: Wykład 6 (3.5 MB PPT-file)](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062401/587616881a28abd8348b8df1/html5/thumbnails/16.jpg)
Białka fluorescencyjne
• Odkrycie w 1962 (Aequorea victoria)• Nagroda Nobla w 2008
Roger TsienMartin ChalfieOsamu Shimomura
![Page 17: Wykład 6 (3.5 MB PPT-file)](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062401/587616881a28abd8348b8df1/html5/thumbnails/17.jpg)
Białka fluorescencyjne
"Roger Y. Tsien - Nobel Lecture". Nobelprize.org. 30 Oct 2010 http://nobelprize.org/nobel_prizes/chemistry/laureates/2008/tsien-lecture.html"Osamu Shimomura - Nobel Lecture". Nobelprize.org. 30 Oct 2010 http://nobelprize.org/nobel_prizes/chemistry/laureates/2008/shimomura-lecture.html
![Page 18: Wykład 6 (3.5 MB PPT-file)](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062401/587616881a28abd8348b8df1/html5/thumbnails/18.jpg)
GFP- jak to działa?
• Właściwości spektroskopowe to rezultat interakcji chromoforu z resztami aminokwasowymi ‘dookoła’
![Page 19: Wykład 6 (3.5 MB PPT-file)](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062401/587616881a28abd8348b8df1/html5/thumbnails/19.jpg)
Dlaczego GFP
• Właściwości spektroskopowe mogą być zmieniane za pomocą technik biologii molekularnych
• Łatwo przyłączalne do innych białek• Tylko tlen niezbędny• Nieinwazyjne• Wzbudzenie 450-650 nm
![Page 20: Wykład 6 (3.5 MB PPT-file)](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062401/587616881a28abd8348b8df1/html5/thumbnails/20.jpg)
Modyfikacje genetyczne
![Page 21: Wykład 6 (3.5 MB PPT-file)](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062401/587616881a28abd8348b8df1/html5/thumbnails/21.jpg)
GFP – modyfikacje genetyczne
![Page 22: Wykład 6 (3.5 MB PPT-file)](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062401/587616881a28abd8348b8df1/html5/thumbnails/22.jpg)
GFP dziś
![Page 23: Wykład 6 (3.5 MB PPT-file)](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062401/587616881a28abd8348b8df1/html5/thumbnails/23.jpg)
GFP – zachód słońca
![Page 24: Wykład 6 (3.5 MB PPT-file)](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062401/587616881a28abd8348b8df1/html5/thumbnails/24.jpg)
GFP - zastosowania
• Sensory• Wizualizacja związków biologicznie
czynnych w komórkach• Mikroskopia fluorescencyjna• Polarność rozpuszczalnika• Pomiary gęstości cieczy