ABSTRACT

The enzymes involved in oxidative

processes important in the

metabolism of our body, this is very

important to know how these work in

the same, in order to understand

this we must understand the ways in

which these come into operation

and how our body behaves as they

do, which is why both enzymes

known as co enzymes is of vital

importance and was visible

evidence in the development of

practice, through the submission of

a piece of chicken muscle to

demonstrate different reactions

functionality and how relationship

enzymes and co enzymes and how

these can be inhibited.

Introducción

Esta práctica es de gran importancia

ya que son bases esenciales para

nuestra formación como estudiantes

de medicina en este laboratorio

vamos a realizar procedimientos

interesantes para determinar

reconocimiento de enzima y

coenzimas hay que tener en cuenta

que la coenzima son pequeñas

moléculas orgánicas no proteicas

que transportan grupos químicos

entre enzimas y las enzimas son

moléculas proteicas que cumplen

una función de catalizar reacciones

químicas, consta como a partir de

un poco de musculo depollo se

puede obtener una coenzima y

enzima de cómo se separan y como

lograr que nuestra reacción tome el

color requerido se debe a la acción

de la enzima y coenzima asociadas.

Palabras claves

Enzima, coenzima, actividad

enzimática, oxidoreductasa,

citocromo oxidasa y deshidrogenasa

láctica.

Generalidades

Las enzimas que intervienen en

procesos de oxidación se conocen

como oxidasas y se puede dividir en

cinco grupos:

OXIDASAS: Catalizan la remoción

de hidrogeno de un sustrato y usan

solamente al oxigeno como aceptor

de hidrogeno. Forman agua como

un producto de la reacción.

DESHIDROGENASAS AEROBIAS:

Catalizan la remoción de hidrogeno

de un sustrato pero, a diferencia de

las oxidasas, pueden usar oxigeno u

otras sustancias artificiales como

aceptores.

DESHIDROGENASAS

ANAEROBIAS: Catalizan la

remoción del hidrogeno de un

substrato, pero que no son capaces

de usar oxigeno como aceptor de

hidrogeno. Realizan dos funciones

principales:

a. Transferencia de hidrogeno de un

sustrato a otro en una reacción de

óxido reducción acoplada que no

implica una cadena respiratoria.

b. Enzima inicial de una cadena

respiratoria de transporte de

electrones desde el substrato al

oxígeno.

HIDROPEROXIDASAS: Enzimas

que utilizan el peróxido de

hidrogeno como sustrato.

OXIGENASAS: Enzimas que

catalizan la transferencia directa e

incorporación del oxígeno a una

molécula de sustrato.

CITOCROMO OXIDASA: Enzima

de la cadena respiratoria que se

encuentra en todos los tejidos

principalmente en el miocardio. Esta

enzima contiene hierro, que pasa

alternativamente de una forma

reducida a una oxidada. La función

biológica de la citocromo oxidasa es

la catálisis de oxidación por O2 del

citocromo C. Es inhibida por el

cianuro que se acopla a la forma

oxidada del hierro, bloqueando así a

la enzima. Su actividad e inhibición

se puede demostrarse mediante la

oxidación secundaria de sustancias

tales como la p-fenilendiamina que

se vuelve roja o púrpura con la

oxidación.

Citocromo ------------------ Citocromo

------------------ p-fenilediamina

DESHIDROGENASA LÁCTICA:

Distribuida en todo el organismo,

pero se encuentra principalmente en

músculo, hígado, riñón y corazón.

Su función es catalizar la oxidación

reversible del lactato a piruvato,

quitando o agragando dos

hidrógenos. Para esto necesita NAD

y pasa a una forma oxidada

NADH+H+, este se re oxida con

flavoproteínas termolábiles que

reducen el azul de metileno a leuco

MATERIALES

Equipo de disección

Musculo de pollo

Arena

Hielo

Cloruro de sodio

Norita

Azul de Metileno

PROCEDIMIENTO

Preparación de la Coenzima:

1. Tome aproximadamente 1

gramo de músculo de una de

las piernas del conejo

2. Pongalo en 8 mL de agua

caliente (esto para inactivar

las enzimas del músculo, que

pueden destruir la coenzima

después de la muerte del

animal).

3. Caliente en baño de maría

hirviendo por 4 ó 5 minutos;

4. Luego se enfrie y se pasa

todo el contenido del tubo a

un mortero con1 gramo de

arena y triture hasta formar

una pasta fina.

5. Centrifugue la mezcla y

guarde el sobrenadante que

contiene la coenzima en un

baño de hielo hasta ser

usado.

Preparación de la enzima:

1. Tome aproximadamente 1

gramo de músculo de la otra

pierna y se colóco en un

mortero.

2. Añada 20 mL de NaCl 0.9% y

1 a 2 gramos de arena.

Triture hasta obtener una

pasta fina.

3. Centrifugue la mezcla y tome

el sobrenadante, que

contiene la enzima láctica.

Para remover cualquier resto

de la coenzima de la

preparación enzimática

añada ½ gramo de NORITA

(carbón activado).

4. Mezcle por inversión. Deje

reposar la mezcla con

agitaciones ocasionales por

media hora. Luego

centrifugue y guarde el

sobrenadante que será la

solución de enzima pura

también en hielo hasta ser

usada.

ANALISIS DE RESULTADOS

Para realizar este laboratorio fue

necesario una cantidad de enzimas

las cuales cumplen distintas

funcione en este caso realizamos la

practica con el musculo de pollo, el

cual no nos dio un valor exacto ya

que requería de mas tiempo,

independientemente, analizamos

que los extractos enzimáticos y

coenzima ticos mostrados en la

tabla los cuales encontramos en

tejidos animales, estas enzimas

deterioran rápidamente los tejidos

después de la muerte.

Podemos analizar que en el tubo 2

presenta una decoloración más

severa, debido a que los

componentes en el tubo se

disponen de diferentes factores que

hacen posible el resultado, teniendo

en cuenta que la deshidrogenasa

láctica la cual actúa en ambientes

faltos de oxígeno a la cual se le

otorga 2 ml de aceite mineral.

Lo único faltante en esta práctica

fue el tiempo, ya que necesitamos

de el para saber cuál de los tubos

cambio de color para poder acertar

más en nuestro análisis.

CONCLUSIONES

Se logró establecer

experimentalmente que los cambios

de temperatura son efectores

directos que alteran o inactivan las

enzimas del músculo que destruyen

en la coenzima después de la

muerte.Por medio de la

desnaturalización se logra

interaccionar biológica y

químicamente la actividad

enzimática de un tejido animal.

Las enzimas oxidativas representan

un papel químico y biológico

primordial dentro del metabolismo

aeróbico, sufren una variación

característica en su actividad.

Las enzimas son una bese

fisiológica importante en el cuerpo

humano, dado que las rutas

metabólicas que ellos median

permiten el funcionamiento óptimo

de diferentes componentes

estructurales del cuerpo humano.

Las enzimas se establecen como

órgano-específicas.

La coenzima NADH al momento de

interactuar durante la reacción con

la enzima se reduce generando

NADH, el cual es objeto de

oxidación por parte de las

flavoproteínas termolábiles que

reducen al mismo tiempo el azul de

metileno.

Se logró establecer que para

separar tanto coenzima como

enzima son necesarios los procesos

de centrifugado como maceración.