VIRUSI PROKARIOTA

mr Petar Knežević

Novi Sad, 2007.

UNIVERZITET U NOVOM SADU

PRIRODNO MATEMATIČKI FAKULTETDEPARTMAN ZA BIOLOGIJU I EKOLOGIJU

MORFOLOGIJA

ADSORPCIJA

• RECEPTORI: transportni proteini, glikokaliks, tejhojne kiseline, peptidoglikan, itd.

• Prvo se reverzibilno vežu za primarne receptore, a zatim ireverzibilno za sekundarne

• Efikasnost povećavaju Mg2+ i Ca2+,a inhibiraju ugljenohidrati, žuč i dr.

• Gubitak receptora→ rezistencija na infekciju → mutacija faga → infekcija

PENETRACIJA I DEKAPSIDACIJA

• Kontrakcija omotača repa i ubacivanje NK

• Enzimska razgradnja površinskih struktura

• Zaštita NK- cirkulatorna forma, proteini i neuobičajeni nukleotidi

EKLIPSA

• EKSPRESIJA RANIH VIRUSNIH PROTEINA

• SINTEZA NK• EKSPRESIJA KASNIH VIRUSNIH

PROTEINA • INTRACELULARNO SKLAPANJE I

AKUMULACIJA

LIBERACIJA

• LIZA, RETKO PUPLJENJE• HOLINI PRAVE OTVORE NA MEMBRANI

BAKTERIJE, ŠTO OMOGUĆAVA DA ENDOLIZINI DOĐU DO ĆEL. ZIDA

• ENDOLIZINI:– Endo- β- N glukozaminidaza i N-

acetilmuraminidaza- glavne veze u peptidoglikanu– endopeptidaze deluju na transpeptidne mostove– N- acetilmuramil- L alanin amidaze (ili samo

amidaze) deluju na amidne veze koje povezuju šećerne i peptidne komponente peptidoglikana

• KOD MALIH ssDNK I RNK FAGA- AMURINI- aktiviraju autolizine

• KOD T4 OKO 100 VIRIONA/ĆELIJI• CEO CIKLUS TRAJE OKO 25 MIN.

• LITIČKI CIKLUS• LIZOGENI CIKLUS (LIZOGENI ILI

UMERENI FAGI)– U FORMI EPIZOMA (PROFAG) ILI

CIRKULARNE DNK– REPRESORNI PROTEIN JEDINI

AKTIVAN– UV INDUCIBILNI ILI NE– ZNAČAJNI U TRANSDUKCIJI

ZNAČAJ

• NAJBROJNIJI MO- preko 1030

• EKOLOGIJA BAKTERIJA• LIZOGENA KONVERZIJA- patogeni• INDIKATORI U SANITARNOJ

MIKROBIOL.• MODELI ZA ANIMALNE VIRUSE• KLONIRANJE- vektori• POLJOPRIVREDA I INDUSTRIJA• MEDICINA- dijagnostika i terapija

U sanitarnoj mikrobilogiji enterični virusi su od najvećeg značaja (enterovirusi, astrovirusi, enterični adenovirusi, ortoreovirusi, rotavirusi, kalcivirusi i hepatitis A i E virusi)

Karakteriše ih dugo preživljavanje u vodi, umerena rezistencija na hlor i visoka relativna infektivnost

Troškovi, dugo vreme inkubacije (3-12 dana) i opšta kompleksnost metoda onemogućavaju rutinsko praćenje njihovog prisustva u vodi

Indeks organizmi su bakteriofagi, zbog velike sličnosti sa humanim virusima

Koriste se:KOLIFAGI (somatski i FRNK fagi) iFAGI Bacteroides fragilis-a

Kolifagi

Somatski kolifagi široko rasprostranjeniF RNK kolifagi inficiraju samo F+ bakterije; specifični

za crevni traktz ljudi i životinja (10% ljudi, 45% goveda, 60% svinja i 70% živine) Postoje IV serotipa (I i IV animalni, III humani)

Fagi Bacteroides fragilis-a

Specifični za crevni traktdomaćin anaeroban i nisu univerzalno prisutniOdsustvo faga ne znači obavezno odsustvo enteričnih

virusa; značaj pri dezinfekciji

ODREĐIVANJE BROJNOSTI

• DIREKTNO- EM• INDIREKTNO-

METODOM PLAKA– EFIKASNOST OKO 50%– PFU- PLAKE FORMING

UNIT– 106/PLAK– MUTNE PLAKE-

LIZOGENI

ZADATAK

• ODREDITI BROJNOST KOLIFAGA U VODI DUNAVA METODOM PLAKA– RASTOPITI POLUTEČNU PODLOGU SA 0.7%

AGARA– DODATI 100μl KULTURE BAKTERIJE KADA

TEMPERATURA PODLOGE PADNE NA OKO 500C

– DODATI UZORAK:• 1. I 2. KLUPA 1ml• 3. I 4. KLUPA 100μL• 5. I 6. KLUPA 10μL

– BLAGO PROTRESTI EPRUVETU NEKOLIKO SEKUNDI I RAVNOMERNO PRELITI PLOČU SA MPA PODLOGOM

– NA PLOČU NAPIATI GRUPU I ZAPREMINU UZORKA

UZORAK ZAPREMINA

UZORKA

BR.

PLAKA

BR. FAGA

/ml

DUNAV

1ml

100μL

10μL

PROSEČAN BROJ KOLIFAGA/ml