Vinicius de Lima. O modelo de estudo: Inseto hematófago obrigatório Hemíptero da família...
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Vinicius de Lima
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O modelo de estudo: Inseto hematófago obrigatório Hemíptero da família Reduviidae e
subfamília Triatominae Importância para a saúde pública
mundial – Transmissor do T. cruzi.
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Idéia geral do funcionamento da UCP
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UCP em rhodnius prolixus Alimentação sanguínea = muitos ROS Teoria dos vampiros UCP seria uma adaptação ao estresse
oxidativo?
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UCP na termogênese Descrita em vários organismos como
uma proteína termogênica Poderia esta ser responsável pela
geração de calor em órgãos tais como o músculo de vôo?
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Genômica Busca do(s) gene(s) para UCP no
genoma de Rhodnius prolixus usando seqüências de UCP de outros insetos
Montagem do gene usando o algorítimo GeneWise
Confirmação filogenética usando o programa MEGA 4.
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Experimentos de bancada: Elaboração de iniciadores específicos
para UCP de Rhodnius prolixus RT-PCR – Confirmação da expressão
gênica em determinados órgãos -> Alvos como Intestino médio posterior, corpo gorduroso e músculo de vôo
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RT-qPCR para análise de quantificação da expressão gênica
Fabricação de um peptídeo sintético a partir da seqüência de UCP e posterior síntese de anticorpo policlonal
Western Blotting / imunohistoquímica nesses órgãos analisados sob situação de jejum, alimentação sanguínea e vôo.
RNAi – Análise de fenótipo por microscopia de fluorescência: marcação de ROS
Calorimetria do músculo de vôo
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Rhdnius prolixus possuirá UCP em seu genoma.
Essa(s) UCP(s) deve(m) ser expressa(s) nos três órgãos analisados.
Suas expressões tanto gênicas quanto protéicas devem sofrer regulações em função do estado fisiológico do inseto
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UCP deve proteger, principalmente os intestinos, de um estresse oxidativo mediado pela presença do grupo Heme
UCP deve aumentar a produção de calor no músculo de vôo e sem esta o vôo deve ser comprometido
Ausência de UCP deve resultar em possível morte ou não postura de ovos
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Em dois anos:Insect Biochemistry and Molecular
Biology,Journal of Insect Science, Isect
Physiologyou Journal of Biological Chemistry