UVOD U ELEKTROFORETSKE SEPARACIJE · hello! Ja sam Željko Debeljak Ja sam ovdje jer nešto znam o...
32
UVOD U ELEKTROFORETSKE SEPARACIJE
Transcript of UVOD U ELEKTROFORETSKE SEPARACIJE · hello! Ja sam Željko Debeljak Ja sam ovdje jer nešto znam o...
UVOD U
ELEKTROFORETSKE
SEPARACIJE
hello!
Ja sam Željko DebeljakJa sam ovdje jer nešto znam o analitičkim separacijama.
Možete me kontaktirati na [email protected]
Ako nije drugačije navedeno
Slike su, uz ljubazno dopuštenje, preuzete iz:
High Performance Capillary Electrophoresis: A Primer, H.H. Lauer, G. Rozing, 2nd edition, Agilent Technologies, USA, 2014.
1.
Kome još trebaju foreze?
Kad imamo imunokemijske autoanalizatore
Pregled najčešćih kliničkih primjena foreza
Stanični lizati
Hemoglobinopatije: Hb
Nasljedne bolesti:
fragmenti nukleinskih kiselina
Likvor
Multipla skleroza: oligoklonalne vrpce
Likvoreja: CDT
Urin
Bubrežne bolesti: tipizacija proteinurije, citrati/oksalati
Nasljedne bolesti: metaboliti
Serum
Mišićne bolesti: CK
Monoklonske gamapatije: SPE
Alkoholizam: CDT
Intoksikacije: ksenobiotici
Kontrolni uzorak
Uzorak bolesnika
Diluirani uzorak
bolesnika
Diluirani uzorak
bolesnika
HbA0
HbS i Lepore
HbA2
PRIMJER HEMOGLOBINOPATIJE
2.
POVIJEST FOREZA
“Sećanje je smešna lupa koja sitne stvari uveličava” Đ.B.
Kako je sve krenulo?
Arne Tiselius
Dalo bi se o njemu svašta reći ali …
https://todayinsci.com/T/Tiselius_Arne/TiseliusArne-Quotations.htm
Kuda to ide?
Mikropostroji
( za nas jugonostalgičare “čipovi”)
https://www.news-medical.net/life-sciences/What-is-Microfluidics.aspx
3.
Sad malo deskriptivne
fizikalne kemije
Otvaranje crne kutije
Separacija srodnih spojeva GCSF-a
4.
A sad to isto ali bez
sličica
Za one koji stvarno žele razumjeti što rade
Rocket science?
𝑣 = 𝜇𝑒 𝐸
Nije ono što mislite!
𝜇𝑒 = 𝑞
6 𝜋 𝜂 𝑟
Zato se bavimo
separacijama
𝑅 = 2 (𝑡2 − 𝑡1)
𝑊2 + 𝑊1
Hmm ….
𝑅 =∆𝜇𝑎
4 2
𝑉
𝐷 ( 𝜇 𝑎 + 𝜇𝐸𝑂𝐹 )
Vrag je u detaljima
𝑄 = 𝑉2 𝑡
𝑅𝐼
5.
KAKO TO PRIMIJENITI?
Da odahnemo
Instrumentalna analiza
Predanalitika Interpretacija
Predanalitika
✘ Ili je jednostavna ili je uopće nema!
✘ Najčešće samo dilucija uzoraka (nekad i sa organskim otapalom)
✘ Deproteinizacija (kod analize malih analita)
✘ Ekstrakcija, dijaliza, ultrafiltracija …
✘ Ali, reagense često pripremamo sami (puferi, diluenti …)
Instrumentalna analiza
Instrumentalna analiza:
Pregled elektroforetskih načela
Nosač
Gel: PAGE, agaroza
Kapilara:
Ne-presvučena, presvučena
Mikropostroj
Višedimenzionalne
separacije
2D: proteini
Elektrokromatografija
Aditivi
Amini: inaktivacija Si-OH
Ciklodekstrini: kirali
Deterdženti: MEKC
Amfoliti: IEF
Prosijvajući polimeri: gel filtracija
Puferi
Velik kapacitet: niska ionska jakost
Transparentni: fosfat, borat, glicil-glicin
Niska mobilnost: TRIS , CHAPS
Interpretacija: nativna detekcija
DETEKTOR Način rada Osjetljivost (mol/L)
Identifikacija sastavnica
Kvantifikacija sastavncia
UV/VIS On-line 10-5 – 10-7 NE DA
LIF On-line 10-9 – 10-12 NE DA
qqq, qTOF MS On-line 10-8 – 10-9 DA DA
MALDI TOF MS Off-line 10-8 – 10-9 DA NE
Interpretacija: derivatizacija i kvalifikacija
Nativna detekcija
Visokozastupljene sastavnice: citrati u urinu
Selektivni detektori
Derivatizacija
Prije separacije: kromogene skupine (danziliranje AK)
Tijekom separacije: keliranje, indirektna detekcija
Nakon separacije: enzimi, ostali proteini, nukleinske kiseline
Zahvale
E, da je više takvih ljudi
Siniša Stipaničić, AlphaChrom
Place your screenshot here
Silvana Malčić, PLIVA d.d.
Place your screenshot here
Ivana Leščić Ašler, IRB
Place your screenshot here
