Uso de La Prueba Hipoosmótica en La Evaluación de La Fertilidad Potencial de Semen Canino Fresco y...

7/21/2019 Uso de La Prueba Hipoosmtica en La Evaluacin de La Fertilidad Potencial de Semen Canino Fresco y Congelado

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Uso de la prueba hipoosmtica en la evaluacin de la fertilidad potencial de semen

canino fresco y congelado

Evaluation of fresh and frozen canine semen by the hypoosmotic swelling test

A. SANCHEZ1, M.V., M.Sc., Dr. (c) Cs. Vet.; J. RUBILAR2, M.V.; R. GATICA2, M.V., Ph.D.

1Becario Conicyt, Programa de Doctorado en Ciencias Veterinarias, Escuela de Graduados,

Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Austral de Chile. 2Instituto de

Reproduccin Animal, Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Austral de Chile,

Casilla 567, Valdivia, Chile.

[email protected]

RESUMEN

Se estudi la integridad de la membrana espermtica en espermatozoides caninos ensemen fresco y en semen congelado/descongelado, mediante la prueba hipoosmtica ylas correlaciones de dicha prueba con algunos parmetros de evaluacin usados de rutinaen el estudio de semen de perro, usando 20 eyaculados. El semen se obtuvo pormanipulacin digital. A travs de un espermiograma convencional se obtuvo un volumenpromedio 1.9 0.9 ml (1 y 2 fracciones), 83.8% de motilidad progresiva, 92.0% deespermatozoides vivos, y 83.5% de espermatozoides normales. La concentracinespermtica fue de 325 x 106espermatozoides por ml. Se realiz la prueba hipoosmticapara evaluar la funcionalidad de la membrana espermtica empleando una solucinhipoosmtica de 55 mOsm/l, obtenindose un 87.9 8.1% de espermatozoides con colas

curvadas en el semen fresco. Diez y ocho de veinte eyaculados fueron congelados en undiluyente en base a TRIS-Fructosa - cido ctrico, 20% yema de huevo y 8% de glicerol,diluyendo hasta alcanzar una concentracin promedio de 150 x 10 6 espermatozoides porml. El semen diluido fue envasado en pajuelas de 0.25 ml. Posteriormente las muestrasfueron sometidas a un perodo de adaptacin a 5C por 2 horas, para luego ser congeladasen vapor de nitrgeno lquido por 8 minutos, antes de ser sumergidos directamente en elnitrgeno lquido. La descongelacin de las pajuelas fue hecha en agua a 40C por 15segundos, y el semen congelado/descongelado fue evaluado en base a su motilidadprogresiva y respuesta a la prueba hipoosmtica, dando como resultados 47.4 + 17.6% demotilidad y un porcentaje promedio de espermatozoides con colas curvadas de 53.7 +

13%. La correlacin obtenida para las variables de motilidad progresiva y respuesta a laprueba canino. Adems, es importante destacar que este trabajo constituira uno de losprimeros en su tipo a nivel nacional, particularmente en lo referido a la criopreservacinde semen de perro.


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SUMMARY

Twenty ejaculates from 5 adult dogs were collected by digital manipulation, in order tostudy the functional capacity of spermatozoal membranes in fresh and frozen/thawedsemen. The average volume obtained was 1.9 0.87 ml (1 and 2 fractions). The

progressive motility, live and normal sperm were 83.3%, 92.0% and 83.5%, respectively.The average concentration was 325 x 106sperm per ml. Semen samples were exposed toan hypoosmotic solution (55 mOsm/L) observing 87.9% of spermatozoa with curved tails.After evaluation, 18 ejaculates were extended with a TRIS-fructose-citric acid diluentcontaining 20% egg yolk and 8% glycerol, added to the semen to obtain 150 x 10 6spermatozoa per ml. The samples were packaged in 0,25 ml straws and kept for 2 hours at5C for equilibration and then frozen in liquid N2 vapour for 8 min. before submirge theminto liquid N2. The samples were stored in liquid N2for 2 to 9 weeks. Straws were thawedin water bath at 40C for 15 sec. and evaluated. The progressive motility was 47.4 17.6%and spermatozoa with curved tails reached 53.7%. The correlation obtained infrozen/thawed semen between progressive motility and HOST was significant r = 0.88 andhigher (p


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INTRODUCCION

El descubrimiento del glicerol como crioprotector y el hecho de que fueranespermatozoides las primeras clulas en ser satisfactoriamente congeladas/descongeladas(Polge y col., 1949)result determinante en el desarrollo de la inseminacin artificial. La

criopreservacin de espermatozoides y as como la preservacin de la capacidadfecundante de los mismos, ha sido descrita como exitosa en varias

especies de animales domsticos y silvestres (Holt, 2000; Farstad, 2000). No obstanteestos antecedentes, se debe considerar que los espermatozoides experimentan daodurante el proceso de congelacin y descongelacin (Parks y Graham, 1992). Se hadescrito que semen con alto porcentaje de espermatozoides mtiles, viables ymorfolgicamente normales, al ser sometido a tcnicas corrientes de criopreservacinexperimenta una reduccin de la motilidad espermtica, fenmeno que se asocia conmodificaciones en el metabolismo celular y daos en la membrana espermtica(Hammerstedt y col., 1990;Abraham-Peskir y col., 2000).

Un aspecto fundamental en el uso de semen congelado/descongelado en tcnicas debiotecnologa reproductiva lo constituye la adecuada evaluacin de la capacidadfecundante de los espermatozoides (Anzar y Graham, 1995). En nuestro pas, por ejemplo,se han seleccionado y recuperado espermatozoides mtiles, morfolgicamente normalesy con acrosoma intacto para fecundacinin vitro(Risopatrn y col., 1994;De los Reyes ycol., 1996). Sin embargo, en medicina veterinaria, en la evaluacin de rutina del semencongelado/descongelado, se usan fundamentalmente parmetros fsicos tales comomotilidad, morfologa y concentracin espermtica (Hellemann y col., 1992).

La membrana espermtica es una estructura dinmica que participa en el reconocimientoy transporte de molculas, estas funciones permiten que el espermatozoide adapte sumetabolismo al medio en que se encuentra, proporcionando un sistema molecular para elreconocimiento del ovocito (Hammerstedt y col., 1990). La evaluacin de su integridadconstituye una importante informacin en la evaluacin de la fertilidad potencial delmacho (Jeyendran y col., 1984). Adems, la integridad del plasmalema no slo esfundamental para el metabolismo del espermatozoide, sino que tambin lo es para unaadecuada capacitacin y reaccin del acrosoma y, por lo tanto, para la fertilidad delmacho (Yanagimachi, 1993).

La prueba hipoosmtica o hypoosmotic swelling test (Jeyendran y col., 1984), permiteevaluar la funcionalidad de la membrana plasmtica de los espermatozoides mediante laobservacin de alteraciones morfolgicas que sufren las clulas espermticas al serexpuestas a condiciones hipotnicas (incremento de tamao y flagelos flectados o curvos).Se ha observado que la suspensin de espermatozoides en un medio hipotnico ocasionaun desequilibrio osmtico entre el medio extracelular y el intracelular, situacin que elespermatozoide trata de vencer difundiendo agua al compartimento intracelular y, comoconsecuencia, la clula aumenta su volumen (Bredderman y Foote, 1969).
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En condiciones fisiolgicas la fecundacin no ocurre si la membrana plasmtica delespermatozoide es bioqumicamente inactiva, aun cuando permanezca estructuralmenteintacta, por lo tanto la prueba hipoosmtica es un indicador ms preciso que lascoloraciones supravitales (Tamuli y Watson, 1992).

El propsito del presente estudio fue usar la prueba hipoosmtica como un mtodo paraevaluar la integridad de la membrana espermtica en espermatozoides caninos en semenfresco y en semen congelado/descongelado. Adems, estudiar la relacin de dicha pruebacon algunos parmetros convencionales de evaluacin usados de rutina en el estudio delsemen de perro.

MATERIAL Y METODOS

Obtencin de semen. Se colectaron 20 eyaculados mediante manipulacin digital. Losdonantes de semen fueron 5 perros: 2 Siberian Husky, 1 Ovejero Alemn y 2 mestizos,sexualmente maduros, con un peso promedio de 20.8 7.2 kg y una edad promedio de

3.7 1.4 aos. De cada eyaculado slo se recolectaron la primera y segunda fraccin,considerando que se ha descrito que la tercera fraccin presenta un efecto desfavorableen la conservacin de semen a bajas temperaturas (England y Allen, 1992b), considerandoespecialmente que uno de los objetivos del estudio implicaba la criopreservacin de losespermatozoides.

Espermiograma. Las muestras seminales fueron evaluadas de acuerdo con la mtododescrito por Daz y Arancibia (1971). Brevemente: se registr volumen, color, olor,motilidad progresiva con microscopio de contraste de fase (x400) y platina temperada,porcentaje de espermatozoides vivos y morfologa con tincin eosina _ nigrosina,

evaluadas mediante microscopa de campo claro (x1000), y concentracin espermticamediante el recuento en cmara de Neubauer y dilucin 1:100 con agua destilada.

Congelacin y descongelacin de semen. El semen fue diluido lentamente con undiluyente en base a TRIS - yema de huevo (20%) - glicerol (8%) (Gill y col., 1970), hastaalcanzar una concentracin promedio de 150 x 106espermatozoides por ml. El semen fueenvasado en pajuelas de 0.25 ml (MINITB,), las cuales fueron rotuladas para su posterioridentificacin. Las pajuelas fueron enfriadas a 5C por 2 horas, perodo de equilibrio, yluego puestas en vapor de nitrgeno lquido en una rampa metlica a una altura de 4 cmsobre la superficie del nitrgeno lquido durante 8 minutos antes de ser sumergidosdirectamente en el nitrgeno lquido. Una vez pasado este tiempo las pajuelas fueronsumergidas en nitrgeno lquido y transferidas y guardadas en un termo para sualmacenamiento. Para descongelar las muestras, las pajuelas fueron sumergidas en agua a40C por 15 segundos (Hellemann y col., 1992). Se descongelaron y evaluaron dospajuelas por cada eyaculado.

Prueba hipoosmtica. Se prepar una solucin de fructosa anhidra: 0.675 g/l y citrato desodio: 0.268g/l, calibrada a 55 mOsm/l en agua bidestilada. Cabe sealar que en el
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presente estudio se us una solucin de osmolaridad levemente inferior a la descrita porKumi-Diaka (1993)(55 mOsm/l v/s 60 mOsm/l). Para efectuar la prueba, tanto en semenfresco como congelado/descongelado, se diluy 10 ml de semen en 100 ml de la solucinhiposmtica, luego se incub en estufa a 37C por 45 minutos, para finalmentedeterminar la proporcin de clulas que respondieron positivamente a la prueba

hipoosmtica, bajo un aumento de x100 con microscopio de contraste de fase. Se estimcomo respuesta positiva de la integridad de la membrana los diferentes grados decurvatura de colas espermticas realizando un recuento de 200 espermatozoides pormuestra (Jeyendran y col., 1984).

Evaluaciones y anlisis estadstico. Cada muestra de semen fresco fue evaluadainmediatamente despus de la obtencin, tanto por espermiograma convencional comopor la prueba hipoosmtica. En el semen congelado/descongelado se evalu motilidadprogresiva y prueba hipoosmtica. Para el anlisis estadstico los porcentajes de motilidadprogresiva y de clulas con curvatura de la cola fueron transformados por el mtodo deBliss y luego se calcularon las correlaciones y compararon las medias por la prueba de t ode comparacin mltiple de Tukey.

RESULTADOS Y DISCUSION

En general, la respuesta de los perros a la recoleccin del semen con estimulacin manualfue satisfactoria, es decir, fue posible colectar el semen en todos los donantes. Losresultados del espermiograma, as como el porcentaje de espermatozoides querespondieron a la prueba hipoosmtica en el semen fresco, se presentan en elcuadro 1.

CUADRO 1. Espermiograma y respuesta a la prueba hipoosmtica en semen canino fresco (n=20).

Semen evaluation and hypoosmotic test (n=20).

Variable Seminal Promedio D. E. Coeficiente deVariacin (%)

Volumen (ml) 1.9 0.87 45.8Motilidad Progresiva (%) 83.8 9.5 11.3

Vitalidad Espermtica (%) 92.0 4.7 5.1Morfologa Normal (%) 83.5 20.3 24.3

Concentracin espermtica(106/ml)

324.7 188.5 58.1

Respuesta a prueba

hipoosmtica (%)

87.9 8.1 9.2
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Se obtuvo un volumen seminal promedio de 1.9 0.9 ml, colectando slo la primera ysegunda fraccin de los eyaculados. Este valor es similar a lo descrito por Boucher y col.(1958)yEngland y Allen (1989).Cabe sealar que el plasma seminal afecta negativamentela viabilidad de los espermatozoides preservados a temperatura ambiente y refrigerados(England y Allen, 1992b;Snchez y col., 1995;Rota y col., 1995).

La motilidad espermtica evaluada en este estudio alcanz un valor promedio de 83.8%(rango 60 - 90%), destacando que en slo dos eyaculados la motilidad progresiva fueinferior a 70%, valor considerado como mnimo para una buena calificacin reproductivaen perros (Feldman y Nelson, 1996). Los valores de motilidad progresiva encontradosfueron similares a los descritos porTaha y col. (1983),England y Allen (1989)ySnchez yRubilar (2001),quienes sealan porcentajes de entre 80 y 90%. Sin embargo, Tello y col.(1988),usando vagina artificial, obtuvieron un 72.8 y 49.7% de motilidad en perros de razaOvejero Alemn de 3 y 4 aos respectivamente. Al respecto, Boucher y col. (1958)describen mejor calidad seminal en la recoleccin con manipulacin digital versus vaginaartificial, esto fundamentalmente considerando aspectos tales como motilidad progresiva,concentracin espermtica y volumen seminal.

El porcentaje de espermatozoides vivos fue similar a los reportados por England y Allen(1992ay1992b). Esta caracterstica fue la que present menor variabilidad (coeficiente devariacin 5.1%). Daz y Arancibia (1971) indican que valores sobre 75% deespermatozoides vivos permiten estimar a un eyaculado como de buena calidad.

La morfologa espermtica, considerando el porcentaje de espermatozoides normalesobtenidos (83,5%), fue levemente inferior al reportado porTello y col. (1988)yThomas ycol. (1993). Sin embargo, este valor se considera adecuado para una buena calificacin

reproductiva en perros adultos, por cuanto es superior al 70% (Feldman y Nelson, 1996;Farstad, 1998). En el 90% de los eyaculados (18/20) se encontr sobre un 80% deespermatozoides normales; el coeficiente de variacin de 24.3% obtenido se puedeexplicar por el efecto de eyaculados con valores de 18.7 y 30.3% de clulasmorfolgicamente normales, respectivamente.

La concentracin espermtica promedio registrado en este estudio fue de 325 x 10 6 188espermatozoides por ml, cifra que se encontrara dentro del rango normal para perrosadultos (Feldman y Nelson, 1996;Farstad, 1998). SegnFeldman y Nelson (1996)un perrode tamao medio con menos de 200 x 106 espermatozoides totales por eyaculado essospechoso de problemas de fertilidad. Slo dos eyaculados presentaron valoresinferiores a 200 x 106 espermatozoides totales y estos coincidieron con baja motilidadprogresiva. Esta variable seminal fue la que present el mayor coeficiente de variacin(58.l%), lo que se podra explicar por el efecto de factores como raza, tamao testicular,reserva espermtica extragonadal, frecuencia de eyaculacin y edad (Olar y col., 1983;England, 1999).
http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#03http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#03http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#03http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#03http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#09http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#09http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#09http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#10http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#10http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#10http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#34http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#34http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#34http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#33http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#33http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#33http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#16http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#16http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#16http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#39http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#39http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#39http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#09http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#09http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#09http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#35http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#35http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#35http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#35http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#41http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#41http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#41http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#03http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#03http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#10http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#10http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#10http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#10http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#1http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#1http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#1http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#07http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#07http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#41http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#41http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#41http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#42http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#42http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#42http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#42http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#16http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#16http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#16http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#14http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#14http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#16http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#16http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#16http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#14http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#14http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#14http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#16http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#16http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#16http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#26http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#26http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#26http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#13http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#13http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#13http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#26http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#16http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#14http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#16http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#14http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#16http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#42http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#42http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#41http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#07http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#1http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#10http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#10http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#03http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#41http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#41http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#35http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#35http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#09http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#39http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#16http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#33http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#34http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#10http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#09http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#03http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2002000100014#03


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La respuesta de los espermatozoides sometidos a la prueba hipoosmtica, alcanz unvalor de 87.9 8.1%, la cual fue similar a lo descrito en espermatozoides caninos (Kumi-Diaka, 1993), espermatozoides humanos (Jeyendran y col., 1984), espermatozoidesbovinos (Correa y col., 1997) y espermatozoides equinos (Elgueta, 1992). Luego de sersometidos a la prueba hipoosmtica los espermatozoides exhibieron cambios

morfolgicos evidenciados por curvatura de la cola y pieza media, lo cual concuerda conlas observaciones deKumi-Diaka (1993)yRota y col. (1995).Las correlaciones obtenidasentre la respuesta al HOST y algunos parmetros convencionales de evaluacin seminalfueron las siguientes: HOST v/s Motilidad Progresiva r = 0.65 (p < 0.01); HOST v/sespermatozoides vivos r = 0.61 (p < 0.01) y HOST v/s espermatozoides normales r = 0.85 (p< 0.01). Estos valores concuerdan con lo observado para espermatozoides caninos(England y Plummer, 1993; Kumi-Diaka, 1993; Rodrguez-Gil y col., 1994), humanos(Jeyendran y col., 1984) y equinos (Elgueta, 1992) y permiten sealar que la pruebahipoosmtica estima de manera eficiente la fertilidad potencial del semen canino, y dadosu bajo costo y facilidad de realizacin, podra sugerirse su implementacin para el anlisisseminal de rutina en clnica reproductiva de animales pequeos.

De los eyaculados obtenidos slo se procesaron 18 para congelacin (90%), ya que 2 deellos presentaron parmetros seminales considerados como insatisfactorios para sersometidos a este proceso. Es decir, motilidad progresiva


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el proceso de congelacin _ descongelacin (Parks y Graham, 1992). La correlacinobtenida para las variables motilidad progresiva y respuesta a la prueba hipoosmtica enel semen congelado/descongelado fue alta y significativa r = 0.88 (p


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BIBLIOGRAFIA

ABRAHAM-PESKIR, J., E. CHANTLER, E. UGGERHJ. 2000. Significance of plasmalemadisruption in bovine and equine spermatozoa. Theriogenology54: 1075-1086. [Links]

ANZAR, M., E. GRAHAM. 1995. Effect of filtration on post-thaw quality of bull semen.Theriogenology43: 439-449. [Links]

BOUCHER, J., R. FOOTE, R. KIRK. 1958. The evaluation of semen quality in the dog and theeffects of frecuency of eyaculation upon semen quality, libido, and depletion of spermreserves. Cornell Vet. 48: 67-86. [Links]

BREDDERMAN, P., R. FOOTE. 1969. Volume of stressed bull spermatozoa andprotoplasmatic droplets, and the relationship of cell size to motility and fertility. J. Anim.Sci. 28: 496-501. [Links]

CORREA, J., M. PACE, P. PAVOS. 1997. Relationship among frozen-thawed spermcharacteristics assessed via the routine semen analysis, sperm functional test and fertilityof bulls in an artificial insemination program. Theriogenology48: 721-731. [Links]

DE LOS REYES, M., C. ALMENDRA, M. BERLAND, H. DEL CAMPO, C. BARROS. 1996.Seleccin de espermatozoides de toro para fecundacin in vitro. Arch. Med. Vet. 27: 31-38. [Links]

DIAZ, O., C. ARANCIBIA. 1971. Calificacin de la fertilidad potencial de los animalesdomsticos. Santiago, Chile, Eds. Vera-Gianini. [Links]

ELGUETA, M. 1992. Evaluacin y adaptacin de la prueba hipoosmtica del semen depotro. Tesis M.V., Fac. Cs. Veterinarias y Pecuarias, Universidad de Chile. [Links]

ENGLAND, G., W. ALLEN. 1989. Seminal characteristics and fertility in dogs. Vet. Rec. 125:399. [Links]

ENGLAND, G., W. ALLEN. 1992a. Factors affecting the viability of canine spermatozoa. I.Potential influences during processing for artificial insemination. Theriogenology37: 363-371. [Links]

ENGLAND, G., W. ALLEN. 1992b. Factors affecting the viability of canine spermatozoa. II.Effects of seminal plasma and blood. Theriogenology37: 373-381. [Links]

ENGLAND, G., J. PLUMMER. 1993. Hypo-osmotic swelling of dog spermatozoa. J. Reprod.Fert. Suppl. 47: 261-270. [Links]


10/12

ENGLAND, G. 1999. Semen quality in dogs and the influence of a short interval secondeyaculation. Theriogenology 52: 981-986. [Links]

FARSTAD, W. 1998. Mating and artificial Insemination in the Dog. En: Manual of SmallAnimal Reproduction and Neonatology. British Small Animal Veterinary Association.

United Kingdom, pp. 95-103. [Links]

FARSTAD, W. 2000. Assisted reproductive technology in canid species. Theriogenology53:175-186. [Links]

FELDMAN, E., R. NELSON. 1996. Canine and Feline Endocrinology and Reproduction. W. B.Saunders Co., Philadelphia, USA. [Links]

FOOTE, R. 1964. Extenders for freezing dog semen.Am. J. Vet. Res. 25: 37-39. [Links]

GILL, H., C. KAUFMAN, R. FOOTE, R. KIRK. 1970. Artificial insemination of beagles bitches

with freshly collected, liquid-stored, and frozen semen. Am. J. Vet. Res. 31: 1807-1813. [Links]

HAMMERSTEDT, R., J. GRAHAM, J. NOLAN. 1990. Cryopreservation of mammalian sperm:what we ask them to survive.J. Androl. 11. 73-88. [Links]

HAY, M., W. KING, C. GARTLEY, S. LEIBO, K. GOODROWE. 1997. Canine spermatozoa _cryopreservation and evaluation of gamete interaction. Theriogenology48: 1329-1342. [Links]

HELLEMANN, C., M. GONZLEZ, A. GUZMN. 1992. Efecto de yema de huevo en polvo, unsurfactante y centrifugacin en la sobrevida de espermatozoides caprinos congelados.Arch. Med. Vet. 24: 141-148. [Links]

HOLT, W. 2000. Basic aspects of frozen storage of semen.Anim. Reprod. Sci. 62: 3-22. [Links]

JEYENDRAN, R., H. VAN DER VEN, M. PEREZ-PELAES, B. CRABO, L. ZANEVELD. 1984.Development of an assay to asses the functional integrity of the human sperm membraneand its relationship to other semen characteristics.J. Reprod. Fert. 70: 219-228. [Links]

KUMI-DIAKA, J. 1993. Subjecting canine semen to the hypo-osmotic test. Theriogenology39: 1279-1289. [Links]

NTHLING, J., C. GERSTENBERG, D. VOLKMANN. 1995. Success with intravaginalinsemination of frozen-thawed dog semen _ A retrospective study.Jl. S. Afr. Vet. Ass. 66:49-55. [Links]


11/12

OLAR, T., R. AMMAN, B. PICKETT. 1983. Relationships among testicular size, dailyproduction and output of spermatozoa, and extragonadal reserves of the dog. Biol.Reprod. 29: 1114-1120. [Links]

PARKS, J., J. GRAHAM. 1992. Effects of cryopreservation procedures on sperm

membranes. Theriogenology38: 209-222. [Links]

PLATZ, C., S. SEAGER. 1977. Successful pregnancies with concentrated frozen caninesemen. Lab. Anim. Sci. 27: 1013-1016. [Links]

POLGE, C., A.SMITH, A. PARKES. 1949. Revival of spermatozoa after vitrification anddehydration at low temperatures. Nature164: 666. [Links]

PROVINCE, C., R. AMANN, B. PICKETT, E. SQUIRES. 1984. Extenders for preservation ofcanine and equine spermatozoa at 5C. Theriogenology22: 409-415 [Links]

RISOPATRON, J., R. SANCHEZ, N. SEPULVEDA, E. VILLAGRAN, P. PEA. 1994. Seleccin deespermatozoides de bovino desde semen congelado-descongelado: comparacin de dosmtodos.Arch. Med. Vet. 26: 35-40. [Links]

RODRIGUEZ-GIL, J., A. MONTSERRAT, T. RIGAU. 1994. Effects of hypoosmotic incubationon acrosome and tail structure on canine spermatozoa. Theriogenology42: 815-829. [Links]

ROTA, A., B. STRM, C. LINDE-FORSBERG. 1995. Effects of seminal plasma and threeextenders on canine semen stored al 4C. Theriogenology44: 885-900. [Links]

SANCHEZ, A., W. VON FREY, M. DE LOS REYES. 1995. Efecto de diluyentes y plasmaseminal en la preservacin de espermatozoides equinos refrigerados. Vet. Arg. 113: 172-178. [Links]

SANCHEZ, A., J. RUBILAR. 2001. Obtencin de cachorros mediante inseminacin artificialcon semen canino refrigerado. Primera descripcin en Chile.Arch. Med. Vet. 33: 105-110. [Links]

SEAGER, S., W. FLETCHER. 1973. Progress on the use of frozen semen in the dog. Vet. Rec.92: 6-10. [Links]

SILVA, L., K. ONCLIN, B. LEJEUNE, J. VERSTEGEN. 1996. Comparison of intravaginal andintrauterine insemination of bitches with fresh or frozen semen. Vet. Rec. 138: 154-157. [Links]


12/12

STRM, B., A. ROTA, C. LINDE-FORSBERG. 1997. In vitro characteristics of caninespermatozoa subjected to two methods of cryopreservation. Theriogenology48: 247-256. [Links]

TAHA, M., D. NOAKES, W. ALLEN. 1983. The effect of the frecuency of the eyaculation on

seminal characteristics and libido in the beagle dog.J. Small Anim. Pract. 24: 309-315. [Links]

TAMULI, M., P. WATSON. 1992. Effect of temperature of incubation on the developmentof resistence to cold stress and hypoosmotic stress in boar spermatozoa incubed for up to24 hours. Proc. 12thInt. Cong. Anim. Reprod. AI. 1484-1486. [Links]

TELLO, L., M. DE LOS REYES, A. BERNAL. 1988. Descripcin de algunas caractersticasseminales en caninos de raza ovejero alemn.Avances en Cs. Vet. 3: 52-56. [Links]

THOMAS, P., R. LARSEN, J. BURNS, C. HAHN. 1993. A comparison of three packaging

techniques using two extenders for the cryopreservation of canine semen. Theriogenology40: 1199-1205. [Links]

YANAGIMACHI, R. 1993. Mammalian Fertlization. Physiology of Reproduction. En: Knobil,E., J. Neil. Ed. NY Raven Press, pp. 189-317. [Links]

Uso de La Prueba Hipoosmótica en La Evaluación de La Fertilidad Potencial de Semen Canino Fresco y...

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