UNIVERSIDAD PEDRO RUIZ GALLOMICROBIOLOGA DE LOS ALIMENTOS I

MICROBIOLOGA DE LOS ALIMENTOS I

UNIVERSIDAD NACIONAL PEDRO RUZ GALLO LAMBAYEQUE Facultad de Ciencias Biolgicas

PRACTICA N 08 NUMERACIN, AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN DE Staphylococcus aureus

DOCENTE: Dra. Graciela Albino CornejoALUMNO:Tarrillo Dvila, Miguel ngel

Lambayeque, Ciclo 2015 I

INTRODUCCINDesde su descubrimiento por el mdico Alexander Ogston en 1880, Staphylococcus aureus es considerado un patgeno con gran potencial para causar mltiples infecciones en el humano y en los animales. S. aureus es la especie tipo del grupo, considerada la ms virulenta, responsable de un amplio espectro de enfermedades, que van desde infecciones de la piel y tejidos blandos hasta infecciones graves que amenazan con la vida. El impacto de las cepas de S. aureus sobre la salud es la resistencia que puede presentar a mltiples antibiticos, sobre todo a la meticilina. A travs de los aos se ha incrementado la tasa de morbilidad y mortalidad a pesar del gran nmero de antibiticos disponibles que existen. S. aureus forma parte de la flora normal del humano, entre 25 y 50% de la poblacin sana est colonizada por esta bacteria, constituyendo un riesgo por su diseminacin.Una de las intoxicaciones alimentarias que se presentan con mayor frecuencia es la originada por la ingestin de la enterotoxina que se forma en los alimentos cuando en los mismos se multiplica ciertas cepas de Staphylococcusaureus. La toxina recibe el nombre de enterotoxina porque produce gastroenteritis o inflamacin de la mucosa que reviste el tracto gastrointestinal.Se trata de un estafilococ tpico, que se presenta en acmulos parecidos a los racimos de uvas, en parejas o en forma de cadenas cortas.Para el recuento de Staphylococcusaureus que sea coagulasa positiva, se han propiciado diversos medios especficos. Estos medios difieren especialmente en los agentes selectivos que contienen entre los que destacan el selenito potsico, el cloruro de litio, azida sdica y lisina y Polimixina B; aunque tambin se utilizan concentraciones elevadas de NaCl.Los fundamentos para realizar el recuento de S. aureus en los alimentos son: Analisis de alimentos sospechosos de haber producido intoxicacin alimentaria por presencia de S. aureuscoagulasa positiva. El riesgo en que el alimento sospechoso puede producir intoxicacin alimentaria se mantiene por condiciones que permitan la produccin y formacin de toxinas. Para demostrar que ha tenido lugar una contaminacin peligrosa posterior a la elaboracin de alimentos.OBJETIVOS Realizar el aislamiento y la identificacin de Staphyloccus aureus en muestras de queso. Realizar el recuento de colonias de Staphyloccus aureus. Confirmar la presencia y determinar la calidad higinica del alimento.

MARCO TEORICOStaphylococcus aureus es un buen indicador de los mtodos de limpieza y desinfeccin utilizados en las industrias y su presencia en alimentos no es adecuado y su presencia puede implicar intoxicacin alimentaria aunque es necesaria la demostracin de la enterotoxina.Los medios a base de yema de huevo S. aureus utiliza la Lipovitelina, manifestando la aparicin de zonas aclaradas parcialmente de un polvo blanco que procede de la formacin de sales de calcio y magnesio, adems de los cidos grasos liberados.

Prueba de coagulasa:

El plasma citratado de conejo (o humano) se mezcla con un volumen igual de caldo de cultivo o colonias en crecimiento sobre agar y se incuba a 37 C. Se incluye como control un tubo de plasma mezclado con caldo estril. Si se forma con cogulos en 1 a 4 horas la prueba es positiva.Los estafilococos coagulasa positivo se consideran patognicos para los humanos, no obstante los estafilococos positivos de los perros (S. intermedius) muy pocas veces causan enfermedades en humanos.Los estafilococos son capaces de crecer en presencia de cloruro de sodio al 7.5 por 100, que inhibe muchas bacterias, y se han usado medios selectivos que contienen sal junto con manitol, y a veces rojo de fenol como indicador cido-bsico, para aislar estafilococos de muestras muy contaminadas con otras bacterias.Schalm (1948) ha comprobado que las cepas estafiloccicas toxgeno coagulasa positiva producen reacciones tpicas en al prueba de Hotis con muetras de leche. Estos grmenes producen colonias adherentes verdes, pardo-verdosas, marrones o rojizas, con centros blancos, tras la incubacin de la leche durante 16 a 20 horas. Despus de nueva incubacin (40 horas) se digiere la leche.MATERIALESMuestra: Queso. Materiales de laboratorio: Frasco papilla estril Gradilla Mechero Tubos de dilucin Placas Medios de cultivo: Agar Baird Parker Agar Vogel-Johnson Agar yema de huevo azida Agar DNasa. Caldo triptosaDiluyente: Agua peptonadaHuevo crudoPROCEDIMIENTO1. DilucionesPesar 3 gr de la muestra (queso fresco) y agregar 27 mL del diluyente (agua peptonada + 2% de citrato de sodio) y homogenizar. Esta ser la dilucin 10-1. Diluir hasta 10-3.

2. SiembraCon ayuda de una esptula de Drigalsky, sembrar en superficie en Agar Baird Parker 0.1 mL (2 placas porcada dilucin).

Incubar a 35 37C por 24 48 horas.3. LecturaObservar colonias negras, medianas, brillantes y con halo.4. Identificacin Tincin Gram Prueba de Coagulasa Prueba de TermonucleasaRESULTADOSSiembra por superficie en Agar Baird Parker

Colonias de un promedio de 2mm de dimetro, convexas, brillantes, reductoras de telurito (centro negro) y presentan un halo.

Tincin Gram

Cocos gram positivos aislados.

CONCLUSIONES No se logr el aislamiento de Staphylococcus aureus en queso fresco. Se concluy que el alimento es de buena calidad higinica, por que se el alimento es apto para el consumo humano.

CUESTIONARIO1. Cul es el fundamento de la Prueba de Termonucleasa?La deteccin de la desoxirribonucleasa termoestable estafiloccica (termonucleasa) en los alimentos, se utiliza como una prueba indirecta de la presencia de grandes cantidades de Staphylococcusaureus en los alimentos, as como de la posible formacin de enterotoxina estafiloccica. La produccin de esta enzima se inhibe en anaerobiosis y se estimula por la presencia de oxgeno, requiere iones calcio para su actividad enzimtica, posee un pH ptimo de 8,6 y se precipita de cultivos fluidos con sulfato de amonio. Su termoestabilidad (resiste temperatura de 130 C por 16,6 min.) es la nica asociacin con el crecimiento de S.aureus. Esta relacin ha motivado el desarrollo de diferentes mtodos para detectar esta enzima en el alimento y utilizarla como pesquisaje en los alimentos susceptibles a la contaminacin de S. aureus. El azul de toluidina (0.1 M) presente en el medio vira a rosa por accin del pH formado por la enzima endonucleasas.2. Fundamento de la Prueba de Coagulasa.La cual es una enzima producida por la mayora de los Staphylococcus presentes en infecciones producidas por este microorganismo, esta enzima es termoestable y se presenta como cierto nmero de determinantes antignicos, varios de los cuales pueden ser producidos por una misma cepa staphylococica.Staphylococcus aureus posee dos tipos de coagulasa:a) Una endocoagulasa o coagulasa ligada o "clumping factor" que est unida a la pared celular. Esta acta directamente sobre el fibringeno provocando la formacin de cogulos o grumos cuando se mezcla una suspensin bacteriana con plasma citratado (test en lmina).b) Una exocoagulasa o coagulasa libre que acta mediante la activacin de un factor (CRF), formndose un complejo coagulasa-CRF, el cual reacciona con el fibringeno producindose un cogulo de fibrina (test en tubo).3. Fundamente la formacin de halo en el agar Baird Parker

La yema de huevo empleada en el medio sirve para evidenciar la accin bacteriana sobre la lecitina y sobre la lipovitelina (lipoprotena) y es responsable de la opacidad del medio. Cuando los estafilococos utilizan la lipovitelina reducen el tamao de la molcula, le restan opacidad al medio, por lo que quedan reas claras bajo y alrededor de las colonias. El precipitado opaco se debe a la formacin de sales de calcio y magnesio de los cidos grasos liberados cuando acta la lecitina de la yema de huevo, accin que se manifiesta solo despus de 24 horas y que podra estar en algunas cepas de S. aureus.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

Koneman Diagnstico Microbiolgico 6ta Edicion Paranmerica.

Rodrguez E. (2005)Bacteriologa General: Principios Y Prcticas de Laboratorio. Universidad de Costa Rica.

REFERENCIAS LINKOGRAFICAS

http://www.britanialab.com/productos/253_hoja_tecnica_es.pdf

http://www.minag.gob.pe/portal/download/pdf/pre-publicaciones/2013/reg-leche-prod-lacteos.pdf

http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/U3c_PruebasBioquimicas_17461.PDF