1

UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS

MODALIDAD: INVESTIGACIÓN

TEMA:

Estudio Farmacognóstico Fitoquímico, Preliminar de las Alga Parda

Sargassum ecuadoreanum en Santa Elena: Elaboración del

Detergente Líquido de Uso Tópico

TRABAJO DE TITULACIÓN PRESENTADO COMO REQUISITO PREVIO

PARA OPTAR POR EL GRADO DE QUÍMICO(A) Y FARMACÉUTICO (A)

AUTORES:

MEJIA CASTRO MEIBY MARINA

MEJIA CHELE JAVIER JOAQUIN

TUTOR:

Dr. QF. OSWALDO PESANTES DOMINGUEZ, MSc.

GUAYAQUIL – ECUADOR

2019

XII

Dedicatoria

A Jehová Dios por haberme escuchado todas mis oraciones y por darme la

fuerza la salud la perseverancia para lograr tener mi título universitario un camino

de muchos obstáculos, pero sobre todo de mucho aprendizaje.

A mi mama Martina castro te lo dedico con todo mi corazón mi amiga de

batallas que ha estado en todo momento conmigo dándome ese empujón que

necesito para no rendirme has llorado mis derrotas y has celebrado mis triunfos

y sobre todos nunca has perdido la fe en mí que es lo que me lleva en este

momento a convertirme en una profesional.

A mi papa Mauricio Mejía mi rey esto también te lo dedico a ti gracias por

confiar en mí y sobre todo gracias por el apoyo porque fuiste testigo de cuán

difícil fue el camino y fuiste ese empujo q necesitaba para seguir y verte lo

orgulloso que esta de mi eso lo vale todo.

A Iliana Mejía mi hermana, mi mejor amiga, te lo dedico y te lo agradezco porque

estuviste todo el tiempo conmigo llorando, enojándote cuando salía mal de

clases ,y saltando conmigo cuando sacabas buenas notas y verte en este

momento lo feliz que estas por mí no tienen precio .

A mi abuelo Héctor Mejía lo logramos abuelito tu confianza fue lo que me lleva

hoy a obtener este título se lo orgulloso que estabas de mí y se cuánto anhelabas

verme ya graduada la vida no permitió que lográramos vernos físicamente, pero

te llevo todo los días en mi corazón y cuando nos volvamos a encontrar te lo

contare todo.

A mi abuela Judith Borja la más orgullosa por ver a su nieta cumplir te llevo en

mi corazón como en mis pensamientos nunca olvido cuan orgullosa estabas de

mí y como lo comentabas con todas tus amistades

A mi abuela Marina Zambrano por todo su apoyo y a mis amigos a todos los

que confiaron en mí solo me decirle lo ¡logramos!!

MEIBY MARINA MEJIA CASTRO

XIII

Dedicatoria

Primeramente, dedico este logro alcanzado a DIOS sobre todo porque sin el

nada de esto fuera posible, ya que me dio la fuerzas y la voluntad para seguir

adelante durante todo este camino transitado de momentos difíciles con

obstáculos pero que al mismo tiempo lleno de mucho esfuerzo y dedicación

constancia y perseverancia para llegar al objetivo alcanzado en estas instancias

de mi vida.

Segundo dedico esta meta alcanzada a toda mi familia que estuvieron ahí para

Mí, apoyándome emocionalmente, brindándome esos consejos de seguir

adelante sin mirar atrás, gracias a mi padre que estuvo ahí siempre apoyando

en lo q más pueda bien la forma o manera de apoyarme en todo sentido de la

palabra, gracias a mi madre que está siempre hay conmigo ambos guiándome

para ser la persona que hoy en día soy, gracias hermana por todo tus consejo,

tus cuidados siempre estás ahí conmigo jamás dices no, siempre estas

predispuesta eres una gran hermana por no decir la mejor hermana.

Y por último no menos importante le dedico este triunfo a mi abuelito que a pesar

de que no está conmigo sé que estuvo y estará desde allá del cielo siempre a mi

lado cuidándome, protegiéndome y dándome esas fuerzas de seguir y jamás

darme por vencido por más grande que sea los obstáculos desde allá del cielo,

gracias a todos que estuvieron conmigo: amigos, familia, juntos logrando un

objetivo más en vuestras vidas.

JAVIER JOAQUIN MEJIA CHELE

XIV

Agradecimiento

Por esta nueva meta alcanzada le agradezco primero a Jehová Dios por darme

Fe, fuerza, salud y la constancia para seguir hasta lograr mis objetivos.

A mis padres por ser un gran apoyo en todo el momento de este camino

universitario han estados conmigo en las buenas y en las malas y sobre todo

dándome el apoyo necesario para seguir hasta el final

A mi compañero de tesis Javier Mejía que fue de gran apoyo en este trabajo de

titulación

A mi tutor Dr. Q.F. Oswaldo pesantes Domínguez y A mi tutora revisora Q.F.

María del Carmen Villacrés que estuvo apoyándonos y impartiendo sus

conocimientos al largo de proyecto.

a la Facultad de Ciencias Químicas como la Facultad de Ciencias Naturales y el

laboratorio UBA que nos ayudaron con sus instalaciones para poder trabajar y

llevar a cabo este trabajo de titulación .

MEJIA CASTRO MEIBY MARINA

XV

Agradecimiento

Agradecido con Dios porque él fue mi motor, mi apoyo incondicional para no

dejarme vencer de los obstáculos que se me presentaron durante mi carrera y

mi vida, gracias abuelito que sé que desde allá arriba me cuidas, también

agradezco a mi Padre Javier Mejia Aguilar, mi madre Dolores Chele Delgado,

mi hermana Maritza Mejia chele, mis tíos, mis tías toda mi familia que me han

apoyado en todo el lapso de mi carrera universitaria gracias por siempre estar

conmigo.

Gracias compañeros futuros colegas amigos, que me extendieron la mano

durante todo estos años, que siempre estuvieron en las buenas y sobre todo en

las malas conmigo.

Gracias queridos/as docentes que estuvieron aportando un granito de

conocimiento para que todo sea posible, gracias Dr. Oswaldo Pesantes por

conformar este equipo tan grandioso e increíble junto con mi compañera Meiby

Mejia gracias a ella y a todos las personas que estuvieron con nosotros

agradecerles infinitamente, MUCHAS GRACIAS A TODOS!.

JAVIER JOAQUIN MEJIA CHELE

XVI

ÍNDICE GENERAL

RESUMEN.......................................................................................................................XXI ABSTRACT.........................................................................................................................................................................XXII

INTRODUCCIÓN .......................................................................................................... 1

CAPITULO I: PROBLEMA ........................................................................................... 3

I.1. Planteamiento del problema ............................................................................. 3

I.2. Justificación e importancia .............................................................................. 4

I.3. Hipótesis ............................................................................................................ 4

I.4. Objetivos ............................................................................................................ 5

I.4.1. Objetivo general ................................................................................................. 5

I.4.2. Objetivos específicos ........................................................................................ 5

I.5. Operacionalización de las variables .................................................................... 6

CAPITULO II MARCO TEÓRICO ................................................................................. 7

II. 2. Antecedentes ................................................................................................... 7

II.2. ALGA PARDA Sargassum ecuadoreanum ..................................................... 9

II.3. Aspecto teórico ................................................................................................ 9

II.3.1. Origen de la especie Sargassum ecuadoreanum .................................... 9

II.3.2. Habitad…………………………...……………................................................9

II.3.3. Descripción botánica…………………………………………………………...11

II.4. Taxonomía ....................................................................................................... 12

II.5. Morfología ........................................................................................................ 12

II.6. Reproducción .................................................................................................. 12

II.7. Potencial nutritivo ........................................................................................... 13

II.8. Algas pardas Sargassum en la cosmética .................................................... 14

II.9. Cenizas ………………………………………..………………………………………14

II.10. Parámetros fisicoquímicos ........................................................................... 15

II.11. Humedad ........................................................................................................ 15

II.12. Análisis de cationes ...................................................................................... 16

II.13. Actividad antioxidante .................................................................................. 17

II.14. Tamizaje Fitoquímico .................................................................................... 17

II.15. Detergente líquido ......................................................................................... 18

CAPITULO III MATERIALES Y MÉTODOS ................................................................ 20

III.1. Tipo de investigación ..................................................................................... 20

III.2. Equipos, Aparatos, Materiales y Reactivos .................................................. 20

III.2.1. Equipos.......................................................................................................20

III.2.2. Materiales ................................................................................................ 21

XVII

III.2.3. Reactivos....................................................................................................22

III.3. Muestra .......................................................................................................... 23

III.3.1. Recolección del material vegetal ............................................................ 23

III.3.2. Preparación y secado de las algas pardas Sargassum ecuadoreanum

...........................................................................................................................................23

III.4. Metodología Experimental ............................................................................. 24

III.4.1. Metodología Experimental ...................................................................... 25

III.4.2. Alcaloides ................................................................................................ 25

III.4.3. Saponinas ................................................................................................ 27

III.4.4. Ensayo para mucilagos ........................................................................... 27

III.4.5. Ensayo de cumarinas .............................................................................. 28

III.4.6. Extracto alcohólico .................................................................................. 29

III.4.7. Humedad ...................................................................................................32

III.4.8. Cenizas...................................................................................................... . 32

III.4.9. Actividad Antioxidante DPHH (2,2-difenil-1-picrilhidrazilo) .................. 33

III.4.10. Espectrofotometría de absorción atómica para el ión (selenio) ...... 33

III.4.11. Espectrofotometría de absorción atómica para el ión (Zinc) ............ 33

III.4.12. Preparación y análisis del extracto vegetal......................................... 34

III.4.13. Análisis físico -químicos de detergente líquido .................................. 35

CAPITULO IV .............................................................................................................. 36

IV.1. Resultados ..................................................................................................... 36

IV.1.1. Determinación de los índices farmacognósticos de Sargassum

ecuadorianum .................................................................................................... 36

IV.1 2. Determinación de metabolitos secundarios por tamizaje fitoquímico. 36

IV.1.3. Determinación de los parámetros Físico- Químicos ............................ 36

IV.1.4. Humedad ................................................................................................. 38

IV.1.5. Cenizas .................................................................................................... 38

IV.1.6. Actividad Antioxidante ........................................................................... 38

IV.1.7. Espectrofotometría atómica del ion selenio ......................................... 39

IV.1.8. Espectrofotometría atómica del ion Zinc .............................................. 39

IV.1.9. Descripción de Propiedades Organolépticas del Jabón Líquido ....... 40

IV.1.10 Presentación de diferentes condiciones que se mantuvo al detergente

liquido ................................................................................................................. 41

IV.2. Discusión ....................................................................................................... 42

CONCLUSIONES ........................................................................................................ 43

RECOMENDACIONES ............................................................................................... 44

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS............................................................................ 45

VOCABULARIO .......................................................................................................... 47

XVIII

ÍNDICE DE TABLAS

Tabla I Operacionalización de las variables ....................................................... 6

Tabla II Materiales ............................................................................................ 21

Tabla III Reactivo análisis fisicoquímico ........................................................... 22

Tabla IV Reactivos para elaboración de Detergente líquido……………………..22

Tabla V Actividad Antioxidante…………………………..………………………….33

Tabla VI Catión zinc…………………………………………………………….…….34

Tabla VII Componente de detergente líquido ................................................... 34

Tabla VIII Resultado tamizaje Srenning Fitoquímico ........................................ 37

Tabla IX Resultados de análisis de humedad................................................... 38

Tabla X Resultados de análisis de cenizas ...................................................... 38

Tabla XI Expresa el resultado selenio proporcionado por el laboratorio UBA .. 39

Tabla XII Expresa el resultado zinc proporcionado por el laboratorio UBA ...... 39

Tabla XIII Observación de diferentes condiciones organolépticas ................... 40

Tabla XIV Propiedades físicas y químicas del detergente líquido .................... 40

Tabla XV Resultado preliminar de estabilidad del detergente líquido ............... 41

XIX

ÍNDICE DE FIGURA

Figura 1 Muestra Sargassum ecuadoreanum recolectada en Ballenita ........... 11

Figura 2 Metodología experimental .................................................................. 24

Figura 3 Esquema para análisis de alcaloide .................................................. 26

Figura 4 Esquema del ensayo rápido de saponinas ......................................... 27

Figura 5 Esquema para detectar mucilagos .................................................... 27

Figura 6 Esquema para análisis de cumarinas ................................................. 28

Figura 7 Esquema para análisis de metabolitos de extracto alcohólico .......... 31

XX

ÍNDICE DE ANEXOS

Anexo A Pesado del Sargassum ecuadoreanum ............................................. 49

Anexo B Trituración del Sargassum ecuadoreanum...........................................49

Anexo C Pesado de la muestra ...................................................................... . 50

Anexo D Extracto acuoso .............................................................................. ..50

Anexo E Reactivos De Tamizaje Fitoquímico ................................................ ..52

Anexo F Extracto alcohólico .......................................................................... ..52

Anexo G Ensayos de Aceites esenciales ...................................................... ..53

Anexo H Antocianinas ..................................................................................... 54

Anexo I Cenizas .............................................................................................. 54

Anexo J Cenizas totales .................................................................................. 55

Anexo K Actividad antioxidante DPHH ............................................................ 57

Anexo L Catión selenio.................................................................................... 58

Anexo M Catión zinc........................................................................................ 59

Anexo N Elaboración de detergente líquido .................................................... 60

Anexo P Viscosidad Del detergente Liquido ................................................... 62

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS XXI

CARRERA QUÍMICA Y FARMACIA

UNIDAD DE TITULACIÓN

“Estudio Farmacognóstico Fitoquímico, Preliminar de las Alga Parda

Sargassum ecuadoreanum en Santa Elena: Elaboración del Detergente

Líquido de Uso Tópico”

Autores: JAVIER JOAQUIN MEJIA CHELE Y MEIBY MARINA MEJIA CASTRO

Tutor: Dr. OSWALDO PESANTES DOMINGUEZ, MSc.

RESUMEN

El presente trabajo de investigación tiene como finalidad el estudio farmacognóstico y

fitoquímico de las algas pardas Sargassum ecuadoreanum, en Ballenita, provincia de Santa

Elena. Para ello se realizaron pruebas como el tamizaje Fitoquímico, y la identificación de

metabolitos secundarios, tanto en extracto acuoso como en extracto alcohólico. Además de ello

se realizaron determinaciones de ceniza, humedad, antioxidantes (DPHH) y análisis de

cationes como el zinc y selenio, luego de los análisis preliminares de las algas y su

comprobación de actividad antioxidante. De acuerdo a lo establecido, se procedió a elaborar

detergente líquido a base de las algas pardas Sargassum ecuadoreanum, el mismo que fue

sujeto a estudios organolépticos y de estabilidad acelerada. El detergente líquido presentó

características aceptables de estabilidad. Las determinaciones químicas indicaron niveles altos

de zinc y actividad antioxidante. Concluimos que las algas pardas Sargassum ecuadoreanum

tienen beneficios que podrían ser utilizados en la industria cosmética.

PALABRAS CLAVES:

ALGAS PARDAS, Sargassum ecuadoreanum, ANTIOXIDANTE, TAMIZAJE FiTOQUÍMICO, DETERGENTE LÍQUIDO

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS XXII

CARRERA QUÍMICA Y FARMACIA

UNIDAD DE TITULACIÓN

"Preliminary Phytochemical Pharmacognostic Study of Brown Algae Sargassum

ecuadoreanum in Santa Elena: Preparation of Liquid Detergent for Topical Use"

Authors: Meiby Marina Mejia Castro y Javier Joaquin Mejia Chele

Advisor: Dr. OSWALDO PESANTES DOMINGUEZ, MSc.

The purpose of this work is to study the pharmacokinetic and phytochemical characteristics of

the brown algae Sargassum ecuadoreanum, in Ballenita, Santa Elena province. Phytochemical

screening and the identification of secondary metabolites were performed both in aqueous and

alcoholic extracts. Determinations of ash, moisture, and cation analysis such as zinc and

selenium were also made after preliminary analysis of the algae and verification of their

antioxidant activity by DPHH analysis. Liquid detergent based on Sargassum ecuadoreanum

brown algae was prepared and subjected to organoleptic and accelerated stability studies. The

liquid detergent presented acceptable stability. Chemical analyses detected high levels of zinc

and antioxidant activity. We conclude that the brow algae Sargassum ecuadoreanum have

benefits that could be useful in the cosmetic industry

KEY WORDS: BROWN ALGAE, Sargassum ecuadorianum, ANTIOXIDANT, FiTOCHEMICAL SIZE, LIQUID DETERGENT

1

INTRODUCCIÓN

Las algas pardas corresponden a un grupo muy grande de algas marinas, Su

pigmentación varía de amarillo pardo a pardo oscura y produce gran cantidad de

un mucus protector, son organismos que presentan en su composición química

cantidades apreciables de compuestos antioxidantes (1)

Los extractos de algas marinas presentan actividad antioxidante explicada

por varios mecanismos de acción; entre estos se encuentran la capacidad

atrapadora de radicales libres, la quelación de metales prooxidantes, los

mecanismos de donación y aceptación de electrones y la capacidad de

interrupción de la peroxidación lipídica (2)

Los antioxidantes naturales de las algas marinas se utilizan desde hace

muchos años atrás en las industrias alimentarias y cosmética, de tal manera que

la demanda de algas de producción de productos industriales se ha

incrementado en los últimos años. En países como China y Japón el cultivo de

algas se encuentra en expansión a nivel industrial y esto se ha extendido hasta

algunos países del continente americano incluyendo a Ecuador, ya que es un

recurso abundante que es utilizado de nuestras costas. (3)

Las algas pardas contienen varios compuestos inorgánicos y orgánicos que

son muy beneficiosos para la salud humana, se les atribuye propiedades

curativas de varias enfermedades como resfriado e influenza, esto posiblemente

debido a su alto valor nutricional. (3)

Estas especies de algas que han demostrado amplia versatilidad en su

composición química dentro de las cuales están las proteínas, carbohidratos,

lípidos, minerales y vitaminas, deben estar influenciados por factores

ambientales como temperatura, salinidad, localización, temporadas estacionales

y condiciones de almacenamiento.

2

Estudios recientes demuestran que las algas pardas tienen compuestos

potencialmente bioactivos capaces de producir varios metabolitos secundarios

con actividades biológicas importantes propiedades antivirales, antifúngicos,

antioxidantes y antibacterianas (4).

El campo cosmético e industrial de las algas se inicia a principio del siglo

XX. Los primeros productos elaborados con algas fueron cremas de afeitar,

maquillaje, champús, espumas, jabones y diversos productos de baños. Gracias

a su composición se benefician las personas ya que estos productos se reportan

como depurativos, suavizantes, hidratantes, tonificantes.

Las algas pardas contienen abundantes hidrocoloides o ficocoloides, dentro

de las cuales están los alginatos que son los más importantes ya que estos

ayudan a aumentar la viscosidad del producto y se aplican como agentes

espesantes, y gelificante (5)

3

CAPITULO I: PROBLEMA

I.1. Planteamiento del problema

Desde hace miles de años algunas especies de algas pardas se consumen

en Asia, las que son recogidas en poblaciones actuales de las costas y más

recientemente obtenidas de operaciones de acuicultura. En China, Japón y

Corea principalmente se cultivan diversas especies ya sea para el consumo

directo como para la obtención de alginato (6).

En las costas del Ecuador contamos con variedades de especies de algas

pardas del género Sargassum, que normalmente son desechadas. Estos

compuestos proporcionan resistencia y flexibilidad ya que forman geles en las

matrices intracelulares ayudándoles a resistir las tensiones provocadas por las

olas y las corrientes (6)

Las algas se vienen utilizando en la medicina tradicional China desde hace

milenios. Gracias a su gran diversidad biológica, las algas marinas suponen una

fuente de nuevos productos para usarse en la industria alimenticia y cosmética.

El sector de la cosmética marina se desarrolla desde hace 2 décadas con la

utilización de los hidrocoloides como agente texturizante. Más recientemente se

han incorporado extractos de algas en los productos cosméticos debido a sus

principios activos; por ejemplo, la acción anti-edad (6).

Las principales algas utilizadas en cosmetología son pardas y en menor grado

se usan las rojas. Los alginatos y derivados que poseen las algas pardas son el

componente utilizado en los diferentes productos cosmetológicos y entre las

especies más usadas se encuentra la Mocrocystis pyrifera y la Fucus vesiculosus

(8).

Las aplicaciones son variadas, fibras de alginato de calcio, de considerable

fuerza, son usadas por sus propiedades antibacterianas y hemostáticas.

Además, son fácilmente por el cuerpo humano, o se pueden retirar aplicando

solución salina de sodio. (9)

4

Estos mismos compuestos son los que hacen las algas pardas sean de gran

utilidad e interés económico ya que se pueden emplear como aglutinante,

espesantes y estabilizantes. En las industrias alimentarias están clasificadas

como aditivos alimenticios y sus componentes procesados cómo helado,

mermeladas, salsas y productos lácteos (10).

FORMULACION DEL PROBLEMA

¿El alga parda Sargassum ecuadoreanum presentará características

farmacognóstico y fitoquímica y propiedades antioxidantes, para su uso en la

industria cosmética?

I.2. Justificación e importancia

En la costa Ecuatoriana contamos con una gran variedad de algas pardas

localizadas en la provincia de Santa Elena – Ballenita. Este recurso actualmente

desapercibido, puede ser muy útil gracias a sus propiedades naturales. Su

desarrollo persistirá la expansión de su producción a niveles industriales también

será atractivo en la industria cosmética gracias a su contenido de aminoácidos,

vitaminas, sales minerales, oligoelementos o diversos metabolitos secundarios

que sirven para mantener un buen estado de la piel, ya que son directamente

accesibles a las células cutáneas.

A través de este diseño experimental se realizaran estudios

Farmacognóstico y fitoquímicos, para identificar sus propiedades antioxidantes

debido a que en Ecuador no encontramos mucha investigación científica sobre

dicha alga y los potenciales beneficios antioxidantes que pueden proporcionar.

I.3. Hipótesis

Las propiedades antioxidantes y los diversos metabolitos secundarios que

poseen las algas pardas Sargassum ecuadoreanum tendrán beneficios que

podrían ser utilizados en la industria cosmética.

5

I.4. Objetivos

I.4.1. Objetivo general

Analizar químicamente extractos de las algas pardas Sargassum

ecuadoreanum y explorar su utilidad potencial en la elaboración de un

detergente.

I.4.2. Objetivos específicos

Identificar metabolitos secundarios en las algas pardas Sargassum

ecuadoreanum.

Evaluar la capacidad antioxidante de las algas pardas Sargassum

ecuadoreanum.

Formular un detergente líquido a partir de extracto de las algas

Sargassum ecuadoreanum.

6

I.5. Operacionalización de las variables

Tabla I Operacionalización de las variables

Tipo Variables Conceptualización Indicador

Dependientes

Humedad Cantidad de líquido

presente en una droga vegetal

Porcentaje (%)

Densidad Cantidad de masa por unidad de volumen de

una sustancia

Celsius °c

Cenizas

Residuo inorgánico que se obtiene al incinerar

una droga vegetal

Porcentaje

(%)

Tamizaje fitoquímico

Determinar cualitativamente los

principales metabolitos

secundarios presentes en el material vegetal

Presencia

(+)

Ausencia (-)

Viscosidad Resistencia que ofrece

un líquido a fluir mPa.S

pH Escala de acidez y

basicidad Escala del 1

al 14

Actividad

antioxidante

molécula capaz de prevenir o retardar la

oxidación

mg/100 g

Análisis de cationes

determinar la cantidad o concentración en que se encuentra una sustancia

específica en una muestra

Porcentaje %

Independientes

Tiempo Tiempo necesario para

la recolección Min

Temperatura Temperatura necesaria

para el secado °c

Cantidad de muestra

Peso necesario para los

análisis y elaboración del producto.

g

Interviniente Zonas de

recolección Puntos de recolección

de las muestras

Fuente: autor(es)

7

CAPITULO II MARCO TEÓRICO

II. 2. Antecedentes

Las algas pardas pertenece a la clase Phaeophyceae, algas de color marrón

dorado que van desde pequeñas formas filamentosas hasta algas grandes y

complejas. De las 1.836 especies estimadas en aproximadamente 285 géneros,

menos del 1% se encuentran en hábitats de agua dulce. Debido a que existen

tan pocas algas marrones de agua dulce en todo el mundo y nuevos

descubrimientos continúan, aunque en la actualidad solo cinco de las siete

especies descritas han sido confirmadas en sitios de América del Norte. (9)

Para el desarrollo del presente trabajo de titulación, es necesario mostrar

investigaciones que mantengan mayor semejanza con la actual, dado a que es

importante conocer cuáles son las posibles características de las Algas Pardas

Sargassum ecuadoreanum a través de un estudio Farmacognóstico Fitoquímico,

para ello se nombrarán a los siguientes autores:

Según Burbano (11), en su trabajo de titulación llamado Determinación de las

características fisicoquímicas del alga parda Sargassum ecuadoreanum en la

zona intermareal, ubicada en Santa Elena, se determinó que son excelentes

dado a que se evidenciaron varios metabolitos secundarios, como alcaloides y

cumarinas consiguiendo ser usados en el área farmacéutica por su acción

farmacológica. Cabe mencionar que estas algas fueron encontradas con

mayores cantidades de agua, con un bajo porcentaje en grasas, las cuales,

según los autores fue menor al 1%, lo cual es considerado útil para las industrias.

También son de interés en la industria de alimentos, ya que también poseen un

alto valor nutricional.

8

Por otra parte, la autora García (12), en su trabajo de investigación llamado

Caracterización bromatológica de Macroalgas "Rodofítas, Clorofítas y Feofítas"

Marinas en las zona intermareal Rocosa del puerto de Manta, muestra que las

pardas en sí presentan un tono oscuro, por la presencia de una xantofila, el cual

es considerado como un colorante protector de la luz solar llamado fucoxantina,

protegiendo así el color de la clorofila a y c de los beta carotenos y otros

pigmentos. Como materia de reserva poseen polisacáridos. De la misma

manera, resulta esencial mencionar que según lo establecido por el autor la

cantidad de proteínas habitualmente es de 5-24% de peso. Por esta razón, las

algas son estimadas como fuentes ricas en proteínas.

La fucoxantina y la flavoxantina son algunas de las xantofilas más comunes

en estas algas. A su vez, se determina que la pared celular de estas algas

contiene una pequeña porción de celulosa y una gran cantidad de ácido algínico,

un polisacárido que se puede extraer y tiene un uso comercial. (11)

En América del Sur, Chile es visto como un país pionero en el estudio y el

cultivo de algas pardas, no solo para reponer las reservas de algas modificadas

o depredadoras en los bosques marinos, sino en cuidado y la preservación del

ecosistema marino a fin de mantener biodiversidad en la vida marina costera,

también se propone su uso como biorefinerías en la producción de

biocombustibles, además del interés en el valor agregado de sus materias

primas. “En la actualidad, el país se ve necesitado en aumentar el valor de las

materias primas, especialmente aquellas para las que recientemente se ha

comenzado a determinar su enorme valor, como las algas pardas que crecen en

la costa norte del país” (13).

9

II.2. ALGA PARDA Sargassum ecuadoreanum

Dentro de las algas pardas, hay un gran subgrupo de algas similares con

características comunes. Estas son algas laminares, también conocidas como

algas kelp. Todos parecen grandes "plantas marinas" que forman los "bosques"

de algas submarinas e incluyen alrededor de 30 géneros diferentes. Se

diferencian, en particular, que contienen una mayor cantidad de yodo. Las algas

más famosas que se usan en los alimentos son las algas Wakame, Kombu,

Arama Además de algas marinas, también distinguimos las algas Fucus, que no

se usan ampliamente en la cocina, pero a partir de las cuales se hacen aditivos

que permiten utilizar sus propiedades beneficiosas. (14)

De la pared celular la Phaeophyceae o algas pardas están formados por

polisacáridos sulfatados como los fucoidanos. Su morfología es muy diversa y

tienen una forma que van desde algas con tejidos especializados hasta algas

filamentosas de estructura sencilla. Son conocidas por su gran tamaño y por su

crecimiento rápido, su coloración se da por la presencia de pigmentos tales como

carotenoides (fucoxantinas). La clasificación taxonómica actual incluye a las

algas pardas conformadas por una sola clase, Phaeophyceae en la cual

comprende aproximadamente 250 géneros y entre 1500 a 2000 especies

descritas. (15)

II.3. Aspecto teórico

II.3.1. Origen de la especie Sargassum ecuadoreanum

El origen de las algas Sargassum, que llega masivamente a la costa

dominicana en el verano de 2015, ha sido controvertido, y la pregunta sigue sin

respuesta. El hecho de que estas dos especies parezcan mezcladas en la costa,

sugiere que la fuente de la invasión puede ser el Mar de los Sargazos, donde

coexisten dos algas. Como fue el caso de Nigeria en julio de 2012 (16).

10

Las algas pardas o llamadas también phéophytes son casi exclusivamente

marinas porque solo se conocen unas pocas especies de agua dulce. Son muy

numerosos en las costas rocosas, donde se desarrollan en la zona costera, es

decir en la zona que va desde el punto de pleamar al de bajamar y sub- costa,

especialmente en aguas frías, agitadas y bien ventiladas. Las algas pardas se

reproducen en estas áreas costeras, donde finalmente forman verdaderos

"bosques submarinos" que proporcionan un ambiente muy favorable para

muchos animales marinos ya sean vertebrados o invertebrados. (16)

Su mayor diversidad se encuentra en las latitudes polares, boreales y

templadas, también se pueden encontrar en aguas tropicales y subtropicales, el

ejemplo más famoso de las cuales son las altas concentraciones de algas pardas

de las especies de Sargassum, que caracterizan el mar de los Sargazos. (16)

II.3.2. Habitad

Las algas viven tanto en cuerpos de agua como en un ambiente deshidratado,

en rocas desnudas, aguas termales, nieve y glaciares. Para sobrevivir, necesitan

una baja concentración de nutrientes, baja intensidad de luz y bajas

temperaturas, cuando las algas son los principales géneros colonizadores

durante la formación de un nuevo entorno. Las plantas marinas se encuentran

en el fondo marino con varias fanerógamas marinas como Thalassia testudinum,

Syringodium filiforme, Halodule wrightii y Halophila decipiens. (12)

Las algas pardas son casi exclusivamente marinas. Solo unas pocas especies

de ocho géneros crecen en agua dulce. Estos son organismos bentónicos que

viven en lo profundo de los ecosistemas acuáticos. Algunas especies de

sargazos son pelágicas, es decir su crecimiento se da cerca de la superficie. Las

especies de agua dulce están presentes en el hemisferio norte, con la excepción

de Ectocarpus siliculosus. (12)

11

Esta especie cosmopolita suele ser marina, aunque ha sido descubierta en

cuerpos de agua dulce en Australia. Phaeophycea marina son componentes de

la flora costera marina, son distribuidas a partir de zonas subpolares hasta el

ecuador. Su mayor diversidad se encuentra en las aguas frías de la zona

templada. Los quelpos, en su mayoría aquellas especies de Laminariales,

conforman bosques en las entrañas de la zona templada, con la excepción del

Ártico. Las especies pelágicas de Sargassum forman grandes áreas en el

famoso Mar de los Sargazos del Atlántico. (12)

II.3.3. Descripción botánica

Alga parda (Sargassum ecuadoreanum) es una planta marina de color café

oscuro, ramas alargadas, delgadas y flácidas, hasta 70 cm de largo que se

fragmentan con el oleaje, fronde alterna, las láminas angosto-elípticas,

lanceoladas u oblogo-elipticas de 3-5 cm de longitud, las márgenes dentadas,

con vesículas globosas presentes, de 0,5 cm de diámetro. (Facultad de Ciencias

Naturales,2019)

Figura 1 Muestra Sargassum ecuadoreanum recolectada en ballenita

12

II.4. Taxonomía

La taxonomía de las Algas Pardas Sargassun ecuadorianum, es la siguiente:

Reino: Chromista

Phylum: Ochrophyta ò Heterokontophyta

Clase: Phacophycidae

Subclase: Fucophycidae

Orden: Fucales

Familia: Sargassaceae

Género: Sargassum

Especie: Sargassum ecuadoreanum W.R Taylor

II.5. Morfología

La especie Sargassum ecuadoreanum tiene un color marrón claro o café y

una longitud de 23 a 27.5 cm. Su base es un pecíolo ligeramente alargado y poco

conocido. Algunas ramas lisas con hojas delgadas de 4.5 cm de largo y 3.5 mm

de ancho están realzadas por un montículo o tejido falso de algas. Sus bordes

están notablemente cortados, con dientes de 1 mm de largo. La vena central se

palpa cerca de la parte superior de las hojas. Además, sus vesículas son lisas y

esferoidales con un diámetro de 4 mm. (12)

II.6. Reproducción

Las algas pardas tienen la capacidad de reproducirse sexual y asexualmente,

mostrando una gran generación alterna, es decir, las especies se alternan entre

generaciones de esporofitos y gametofitos, completando así su ciclo de vida en

dos fases, tales como diploide y otro haploide (17)

13

La generación diploide esporofítica y la meiosis ocurren en los esporangios

durante la formación de zoosporas específicas para la reproducción de algas. A

su vez, la reproducción asexual se logra mediante la fragmentación del astrágalo;

Las especies más desarrolladas, que flotan en la superficie del mar, se restauran

por completo mediante la fragmentación de una de sus partes, la más efectiva

durante su reproducción, como en el caso de la especie Sargassum natans. (17)

II.7. Potencial nutritivo

Las algas son una buena fuente de nutrientes, ya que posee de proteínas,

vitaminas, minerales y fibra dietética. Por consiguiente, las algas de fibra

dietética son particularmente ricas en fracción soluble. Si se comparan las algas

con vegetales terrestres, se puede evidenciar que existen otros componentes

saludables, como los ácidos grasos y las moléculas biológicamente activas. Por

ello, se dice que las algas sintetizan varios metabolitos secundarios con actividad

antioxidante, antiinflamatoria, anticancerígena y antidiabética. (18)

La calidad de los nutrientes de las algas y el alto contenido de compuestos

biológicamente activos que tienen un efecto beneficioso sobre la salud son dos

razones importantes para el aumento de su consumo. Además, las algas tienen

propiedades relacionadas con las estructuras de proteínas, lo que les permite

ser incluidas en productos de carne y pasta, al tiempo que mantienen o mejoran

su calidad sensorial, nutritiva y saludable. (18)

Las algas marinas se consideran uno de los alimentos más ricos y nutritivos.

La peculiaridad es que contienen una cantidad significativa de aminoácidos,

proteínas, fibras, minerales y compuestos fenólicos que le dan a esta especie

actividad antioxidante., incluso si es rico en polisacáridos y que la mayoría de

ellos no pueden ser consumidos, debido a que son parte de la fibra dietética. (19)

14

La fracción proteica en las algas cambia a lo largo del año, al igual que las

especies. Las algas rojas y verdes generalmente contienen entre 10 y 47% de

proteína en peso seco. En contraste, las algas pardas cubren niveles más bajos,

que van del 3 al 15%. (19).

II.8. Algas pardas Sargassum en la cosmética

Los extractos de algas pueden ser utilizado en cosmética gracias a sus

cualidades hidratantes, nutrientes, tonificantes, anti-radicales o anti-edad como

principios activos entre 0,2-2%. También como colorantes, aromatizantes o

conservantes que se pueden integrar como aditivos al menos del 0,2%. Gracias

a sus características gelificantes y espesantes se pueden emplear como

excipientes entre 2-20%, también se reporta sus aplicaciones entran en la

formulación de geles antiinflamatorios, agentes revitalizadores para el cabello

tanto en las lociones capilares, lociones suavizantes y geles protectores

solares. (20)

II.9. Cenizas

El contenido total de cenizas presente en las algas da idea de la proporción

de minerales presentes en las mismas. El contenido de minerales en las algas

en general adquiere valores significativamente altos. (21)

La determinación de las cenizas dentro de las algas da una aproximación a

las cantidades de minerales que se encuentran dentro de las algas, debido que

las algas tienen valores altos significativamente y si se realiza una comparación

con productos de origen animal o plantas terrestres las algas se convierten en

uno de los productos alimenticios más completos en minerales por delante de

los antes mencionados. (21)

La variación de los minerales depende exclusivamente del tipo de planta que

se analice, a su geografía, estación del año y los factores ambientales que la

rodean, por esto es de mucha utilidad el uso de cenizas para la elaboración de

cosméticos ya que su gran cantidad y variedad de minerales favorecen al buen

15

cuidado de la piel si se realiza una producción y uso adecuado de las algas

pardas Sargassum se obtienen un producto natural que brinde beneficios para

cada tipo de piel en el consumidor. (20)

II.10. Parámetros fisicoquímicos

Las propiedades físico‐químicas de las algas, tales como las propiedades de

hidratación, vienen determinadas por la cantidad de fibra presente en ellas y por

el tipo de fibra (soluble o insoluble). (22)

Se podrá determinar las propiedades de hidratación de las algas mediante la

fibra que se obtenga, determinando la capacidad de retención de líquido y

capacidad de hinchamiento del alga (22)

La capacidad de retención se mide a través de la cantidad de agua que pueda

retener el alga en cada gramo de muestra, tomando a consideración la

temperatura, tiempo y velocidad de centrifugación es posible calcular La

capacidad de hinchamiento e a través del tamaño de volumen que obtenga el

alga por cada gramo de muestra al momento de esta hidratarse en condiciones

de tiempo y temperatura establecidas, estas dos herramientas se utilizan

generalmente para la obtención de la capacidad de retención de aceite. (22)

Tanto la capacidad de hinchamiento como la capacidad de retención son

propiedades importantes en la elaboración de cosmético (22).

II.11. Humedad

El contenido de agua en los alimentos naturales varía entre un 60 y un 95%.

En los tejidos vegetales y animales, el agua puede encontrase en dos formas

generales: “agua libre” Y “agua ligada”. El agua libre o absorbida, que es la forma

16

Predominante, se libera con gran facilidad. El agua ligada se halla combinada o

absorbida. (23)

Existen varias razones por las cuales, la mayoría de las industrias de

alimentos determinan la humedad. La principal causa es, que no se desea

adquirir materia prima con agua en exceso ya que, facilita el desarrollo de los

microorganismos afectando la calidad de los alimentos. Siendo así, que la

determinación del contenido en agua es un control importante en las diferentes

etapas de la fabricación de alimentos (23)

II.12. Análisis de cationes

En las algas pardas, el ácido algínico es uno de los principales constituyentes

de las paredes celulares, se encuentra con otros polisacáridos, diferenciándose

por la propiedad de insolubilidad en el agua y por encontrarse asociado con

varios cationes: zinc, calcio, magnesio y sodio. (24)

Los cationes no son más que cargas eléctricas positivas, por ende han perdido

electrones, y reflejan una oxidación de las moléculas. Dentro de la especie de

las algas pardas se encuentra inmerso el ácido algínico como principal

constituyente sobre las paredes celulares del alga. Se encuentran otro tipo de

polisacáridos, de las cuales se hace una diferencia debido a la poca resistencia

a ser inseparable dentro del agua y a su vez porque se relacionan con diferentes

tipos de cationes. (24)

Los cationes livianos están inmersos de forma natural en las algas, y pueden

ser intercambiados con iones metálicos si se aplica un proceso de adsorción.

Para realizar un análisis de cationes es necesario establecer un método general

para el análisis de las sustancias de manera preliminar, luego es necesario

realizar la determinación de cationes por técnicas sensibles y específicas. (23)

17

II.13. Actividad antioxidante

Se han encontrado antioxidantes fuertes en los últimos años en algunas

especies de algas pardas debido a su contenido de poli fenoles, como los

fluoroglucoles, que contienen radicales libres que neutralizan la actividad

oxidativa. Científicos japoneses descubrieron recientemente que estos

compuestos tienen actividad 5-lipogenasa. Estos compuestos tienen actividad

antibacteriana, son inhibidores moderados de la monoaminooxidasa y pueden

contribuir a su fuerte actividad antidepresiva. (25)

El fucano es un polisacárido sulfatado aislado de algas pardas que ha

demostrado un efecto inhibitorio sobre el crecimiento celular en varios modelos

experimentales. Estas acciones antioxidantes pueden ayudar a neutralizar los

efectos del estrés oxidativo en los organismos vivos, teniendo en cuenta los

efectos de este tipo de estrés en muchas enfermedades crónicas, muchas de las

cuales están relacionadas con el envejecimiento. (25)

II.14. Tamizaje Fitoquímico

El tamizaje fitoquímico constituye una de las técnicas que nos ayuda a

determinar cualitativamente los principales grupos de constituyentes químicos

presentes en la planta.

El tamizaje fitoquímico nos permite identificar qué tipo de plantas son útiles y

cuales son dañinas según muestras comparativas entre vegetales y otras formas

de vida, permitiendo así la relación botánica. La función de métodos de

investigación, sistematización y análisis químico permiten la creación de la

fitoquímica, ciencia que nos brinda información acerca de los diferentes

productos químicos naturales que poseen las plantas los cuales pueden ser

extraídos, purificados y separados para su uso. (26)

Es una de las partes medias de la investigación fitoquímica, donde se podrá

determinar las cualidades de los grupos químicos dentro de una planta y a partir

18

De allí, elaborar la extracción para el aislamiento de los grupos químicos de

mayor importancia para lo que se pretende desarrollar. (26)

El tamizaje fitoquímico permite la extracción de los componentes químicos

naturales que se requieran para la elaboración de los cosméticos, y a su vez

poder determinar que grupos químicos son dañinos para no afectar el producto

de manera negativa ya que estos pueden afectar la piel en diferentes grados

según el componente, Nos brinda toda la información necesaria para poder

determinar qué beneficios naturales podrá tener el producto a desarrollar, la

viabilidad del mismo y seguridad de las prestaciones que brinda cada

compuesto, cabe recalcar que el tamizaje Fitoquímico no es más que una

orientación la cual debe ser interpretada de forma correcta, para su buen uso.

(26)

II.15. Detergente líquido

La tecnología ha evolucionado para mejorar este producto y seguir el principio

para el que fue creado: la higiene del consumidor y su bienestar con sus

texturas, colores y aromas, que en algunos casos pueden tener funciones

adicionales, como la hidratación. Se pueden encontrar en forma sólida, en forma

de barra o en forma líquida. (27)

El detergente líquido generalmente contiene tensioactivos que, cuando se

aplican a una superficie sucia en combinación con agua, mantienen

efectivamente las partículas de suciedad en suspensión, de modo que cuando

se enjuagan, limpian la superficie que es el cuerpo u objetos humanos. Es decir,

barren los elementos que componen la "suciedad". (27)

19

Esta línea de productos incluye jabones antibacterianos que se han utilizado

durante décadas en millones de hogares, escuelas, lugares de trabajo y oficinas

en todo el mundo. Este tipo de jabón contiene ingredientes antimicrobianos, cuya

función principal es controlar la contaminación por microorganismos, lo que

conduce a la prevención de enfermedades como infecciones de la piel y

gastrointestinales, entre otras. (27)

20

CAPITULO III MATERIALES Y MÉTODOS

III.1. Tipo de investigación

La presente investigación es de tipo exploratoria y cuantitativa, se llevó a cabo

en el Laboratorio del Productos naturales, Programa de Gestión de la facultad

de Ciencias Químicas de la Universidad de Guayaquil. Este estudio se basa en

la determinación farmacognóstico y fitoquímico para determinar los metabolitos

secundarios, su actividad antioxidante y sus componentes físicos y químicos que

poseen en su estructura, para luego proceder a formular un detergente líquido

a base de algas parda Sargassum ecuadoreanum que pueden servir a nivel

industrias cosmética en nuestro país.

La investigación es también cuantitativa debido a que dentro de los análisis

se realizarán determinaciones porcentuales de humedad, cenizas y tamizaje

fitoquímico entre otros para responder la hipótesis de trabajo.

La viscosidad, acción antioxidante y la detección de los cationes zinc y

selenio en el detergente liquido se realizaron en el laboratorio UBA (Analitycal

laboratories).

III.2. Equipos, Aparatos, Materiales y Reactivos

III.2.1. Equipos

Estufa

Mufla

Balanza

Fuente: autor(es)

2121

III.2.2. Materiales

Tabla II Materiales

Nombre Función Tipo de material

Embudo de vidrio

Instrumento empleado para Canalizar líquidos y materiales sólidos granulares en recipientes con bocas estrechas.

Vidrio.

Vaso precipitado

Preparar o calentar sustancias y traspasar líquidos

Vidrio

Fiola Contener y medir líquidos. Vidrio.

Frasco de reactivo

guardar sustancias para almacenarlas los hay ámbar y transparentes

Vidrio.

Probeta milimetrad

a

Es un instrumento volumétrico, que permite medir volúmenes

Vidrio.

Pipeta Es un instrumento volumétrico de laboratorio que permite medir la alícuota de líquido con bastante Precisión.

Vidrio

Mechero de alcohol

Sirve para calentar sustancias con alcohol. Metal.

Pinza Esta herramienta sirve para sujetar los tubos de ensayos

Metal

Tubo de ensayo

Es un tubo cilíndrico pequeño utilizado en la contención de muestras líquidas y también para calentar

Vidrio

Matraz Recipiente de cristal donde se mezclan las soluciones químicas

Vidrio

Vidrio de reloj

Se usa para pesar sustancias solidas o desecar pequeñas cantidades en disolución.

Porcelana

Crisoles Recipiente de porcelana es un material de laboratorio utilizado principalmente para calcinar sustancias

Porcelana

Mortero con pilón

Se usa para moler o reducir el tamaño de las Sustancias.

Porcelana

Gradilla Es utilizada para sostener y almacenar gran cantidad de tubos de ensayo,

Plástico

Papel Filtro

Filtro para las impurezas insolubles y permitir el paso de la solución a través de sus poros. Papel

22

III.2.3. Reactivos

Tabla III Reactivo análisis fisicoquímico

REACTIVOS: ANÁLISIS

FISICOQUÍMICOS

Ácido Clorhídrico Al 10 %

Agua Destilada

Ácido Nítrico

Reactivo de Dragendorff

Reactivo de Bouchardat

Reactivo de Wagner

Ácido Sulfúrico

Anhídrido Acético

Cloroformo

Hidróxido de Sodio

Alcohol Etílico

Fehling A

Fehling B

Reactivo de Benedict

Limaduras de Magnesio

Ácido Clorhídrico

Benceno

Fuente: autor(es)

Tabla IV Reactivos para elaboración de detergente líquido

Reactivos para elaboración de detergente

líquido Antibacterial

Texapón 70 (Lauril éter sulfato de sodio)

Comperland (cocodietanolamina)

Sal industrial

Agua destilada

Glicerina

Concentrado de algas Sargassun

ecuadoreanum

23

III.3. Muestra

III.3.1. Recolección del material vegetal

Las algas pardas Sargassum ecuadoreanum fueron recolectadas en la

Provincia de Santa Elena – Ballenita en febrero del 2019. Se recolectaron 5 kilos

en varios envases herméticos para posteriormente realizar una clasificación

botánica en el Instituto de investigaciones de recursos naturales (IRN) de la

Facultad de Ciencias Naturales para su respectiva taxonomía botánica.

III.3.2. Preparación y secado de las algas pardas Sargassun ecuadoreanum

Las algas fueron lavadas con agua destilada para eliminar cualquier residuo.

Posteriormente se dejó al ambiente por 24 horas, luego se colocó en la estufa a

40 °C por 24 horas para eliminar residuo de humedad, después se trituró con la

ayuda de un mortero y pilón de porcelana hasta lograr un polvo uniforme. El polvo

fue guardado en un envase de plástico protegido de luz y humedad.

24

Recolección de la Muestra del alga parda Sargassum ecuadoreanum

Lavado de la muestra

Proceso de secado a temperatura

ambiente por 24 horas

Proceso de secado en estufa a 40ºC

durante 24 horas.

Trituración de la muestra

Obtención del extracto acuoso y

alcohólico

Screnning fitoquimico

Análisis de humedad , cenizas

Análisis de antioxidantes DPHH.

Elaboración de el jabón liquido Antibacterial

Análisis de estado físico químicos del

jabón líquido Antibacterial

Estudio de viscosidad .

Interpretación de resultados

Conclusiones y

III.4. Metodología Experimental

Figura 2 Metodología experimental

Fuente: autor(es)

25

III.4.1. Metodología Experimental

Estos análisis se realizaron en el Laboratorio de fitoquímica y farmacognóstico

de la Universidad de Guayaquil Facultad de Ciencias Químicas Se realizaron

los siguientes extractos acuosos y alcohólicos del alga parda Sargassun

ecuadoreanum.

Para el extracto acuoso se pesó aproximadamente 10 gramos de la muestra

seca y se le añadió la fase liquida (60 ml) de agua destilada e inmediatamente

se procedió a filtra y se dividió para realizar los correspondientes ensayos.

Para el extracto alcohólico se pesó aproximadamente 8 gramos de la muestra

seca y se colocó 10 ml de alcohol. Esta suspensión se filtró y se tomó de este

extracto las alícuotas correspondientes para los ensayos que se explicara a

continuación:

III.4.2. Alcaloides

Método de Dragendorff

Se tomó una alícuota del extracto acuoso (0.5 ml), se agregó 5 gotas de HCl al

10%, se homogenizó y adicionó 4 gotas del reactivo de Dragendorff. Como

resultado un precipitado anaranjado marrón será interpretado como positivo.

Composición de reactivo Dragendorff: se mezcla 8 g de nitrato de bismuto

pentahidratado en 20 ml de ácido nítrico al 30 % con una solución de 27.2 g de

yoduro de potasio en 50 ml de agua

Reacción de Wagner

Se tomó una alícuota del extracto acuoso (0.5 ml) se agregó 5 gotas de HCl al

10%, se homogenizó y adicionó 4 gotas del reactivo de wagner, un precipitado

color marrón fue interpretado como resultado positivo

Composición de reactivo Wagner: disolver 1.27 g de yodo (resublimado) y 2

gotas de yoduro de potasio en 20 ml de agua; aforar la solución con 100 ml de

agua destilada.

26

Se formará una opalescencia

blanca que será interpretado

como positivo

Reactivo de

Wagner

Reactivo de

Mayer

Finalmente, de 2 a 4 gotas del reactivo

de:

Luego 5 gotas de HCl al 10 % y

homogenizar

En 4 tubos se adiciona a 0.5 del extracto acuoso

Reacción de Bouchardat

Se tomó una alícuota del extracto acuoso (0.5 ml) se agregó 5 gotas de HCl al

10%, se homogenizó y adicionó de 2 a 4 gotas del reactivo de Bouchardart,

Como resultado Un precipitado marrón fue interpretado como resultado positivo.

Mayer

Se tomó una alícuota del extracto acuoso (0.5 ml) se agregó 5 gotas de HCl al

10%, se homogenizó y adicionó 4 gotas del reactivo. Una opalescencia blanca

que será interpretado como positivo.

Composición de reactivo de Mayer: disolver 1,3 g de cloruro mercúrico y 5 g

de yoduro de potasio por cada 100 ml de agua destilada.

Figura 3 Esquema para análisis de alcaloide

Fuente: Autor(es)

Se formará un precipitado marrón será interpretado

como positivo

Reactivo de

Bouchard

Se formará un precipitado anaranjado marrón será interpretado

como positivo.

Reactivo de

Dragendorff

Se formará un

precipitado flatulento

marrón será interpretado

como positivo

Alcaloides

27

Mucilagos

1. En un tubo de

ensayo se adiciona 2 ml de extracto acuoso

2. Se enfría a 5 grado centígrados

3. Si la solución tomo consistencia

gelatinosa el ensayo se considera positivo

III.4.3. Saponinas

Ensayo para Saponinas

Se tomaron 3 ml del extracto acuoso y se agito vigorosamente. La presencia de

saponinas se indica por una espuma persistente caso contrario será interpretado

como negativo

Figura 4 Esquema de ensayo rápido de saponinas

Fuente: Autor(es)

III.4.4. Ensayo para Mucilagos

Una alícuota (2ml) del extracto acuoso se lo somete a una temperatura de 5

grados centígrados por 10 minutos. El ensayo se considera positivo caso

contrario reportar negativo.

Figura 5 Esquema para detectar Mucilagos

Fuente: Autor(es)

1. Se mide 3 ml de extracto acuoso y se agita

vigorosamente

3. Caso contrario se reportara negativo

2. La presencia de saponinas se indica por una

espuma persistente

Sa

pon

ina

s

28

III.4.5. Ensayo de Cumarinas

Se coloca en un tubo de ensayo 4 ml de extracto acuoso de la muestra del alga

parda Sargassum ecuadoreanum, luego se cubre el tubo con un papel filtro

humedecido con 1 gota de solución de NaOH 10%. Se lo lleva a baño de maría

por 5 minutos. Se retira el papel filtro y se lo lleva a una cámara ultravioleta. La

presencia de cumarinas será representada por una fluorescencia amarilla,

verdosa, rosada, purpura o azul como positiva.

Se coloca en un tubo de ensayo de 4 ml de extracto acuoso

Cumarinas

Luego se cubre el tubo con un papel

filtro humedecido en solución de Na(OH)

al 10 %

Se observa la presencia de una florescencia amarilla, verdosa, rosada que se reporta como positivo

Se coloca el tubo en baño maría por varios minutos a continuación se retira el papel filtro del tubo y se expone a la luz ultravioleta

Figura 6 Esquema para análisis de cumarinas

Fuente: Autor(es)

29

III.4.6. Extracto alcohólico

III.4.6.1. Ensayo para Taninos

Se tomó una alícuota de 1 ml el extracto alcohólico en un tubo de ensayo y se

añadió 5 gotas de cloruro férrico al 5%. La prueba es considerada positiva al dar

coloración azul, verde, parda o negra.

III.4.6.2. Ensayo para Glucósidos

Para determinar la presencia de glucósidos en la muestra, se tomó 2 ml del

extracto alcohólico en un tubo de ensayo y se adicionó 1 ml de reactivo de

Fehling A y 1 ml del reactivo de Fehling B, se lleva la reacción a baño maría. La

formación de precipitado color ladrillo indica positivo a la prueba, pero si el

ensayo es un precipitado se mantiene de color azul será negativo.

III.4.6.3. Ensayo para Glucósidos cardiotónicos

Se toma 1 ml del extracto alcohólico en un tubo de ensayo y se adicionó 1 ml de

reactivo de Benedict, se lo lleva a baño maría por 5 minutos. La formación de

precipitado color amarillento - naranja indica positivo el ensayo, pero si el

precipitado se mantiene un color azul será negativo el ensayo.

III.4.6.4. Ensayo para aceites esenciales

Para determinar la presencia de aceites esenciales se tritura una parte de las

especies vegetal fresca. La presencia de olor indica que los aceites esenciales

se han liberado. Poner de 3 g de la muestra fresca triturada en 1 tubo y hervir

con agua, observar si hay incremento en el aroma o formación de gotas

aceitosas lo cual interpreta como reacción positiva.

30

III.4.6.5. Ensayo para Flavonoides

Para determinar la presencia de flavonoides en la muestra, se toma 1 ml del

extracto alcohólico en un tubo de ensayo y se adiciona limadura de magnesio.

Luego se añade 0.5 ml de HCl concentrado una coloración roja será reacción

positiva para flavonoides

III.4.6.6. Ensayo para Triterpenos y/o esteroides

Para la determinación de triterpenos y esteroides se toma 5 ml del extracto

alcohólico y se lleva a evaporación (sequedad) de 1 a 2 minutos luego se añade

20 gotas de anhídrido acético más 10 gotas de H2SO4 concentrado. Cambio de

coloración tonos vivos de purpura, rosa, verde, azules se considera como

reacción positiva.

III.4.6.7. Ensayo de Resina

Para detectar este tipo de compuesto se adicionó a 2 ml de la solución alcohólica

10 ml de agua destilada. La aparición de un precipitado o turbidez indicó un

ensayo positivo

III.4.6.8. Ensayo de Borntrager para quinonas

Para la presencia de quinonas en 1 ml a extracto alcohólico se adiciona 1 ml de

hidróxido de potasio al 5 % se agita la mezcla y se deja en reposo hasta su

separación se considera positivo la reacción si la fase acuosa (alcalina superior)

se colorea de rosado o rojo.

31

Figura 7 Esquema para análisis de metabolitos en el extracto alcohólico

Fuente: Autor(es)

32

III.4.7. Humedad

Determinación de Humedad, este análisis se realizó en el Laboratorio UBA,

donde se empleó la metodología descrita por la institución

Para los calculó se empleó la expresión:

% 𝐻𝑢𝑚𝑒𝑑𝑎𝑑 = ( 2−𝑀1

𝑀2−𝑀

HG: porcentaje en peso por desecación (%)

M2: masa de la capsula con la muestra en ensayos (g)

M1: masa de la capsula con la muestra de ensayo desecada (g)

M: masa de la capsula vacía (g)

100: factor matemático para cálculo.

III.4.8. Cenizas

Pesar 8 g del alga parda Sargassum ecuadoreanum triturado y tamizado en un

crisol de porcelana a temperatura hasta carbonizar y posteriormente incinerar en

un horno mufla a una temperatura de 600 °C, durante 5 horas. Enfriar el crisol

en una desecadora y pesar, repitiéndose hasta masa constante. Al enfriar el

crisol el residuo es de color blanco o casi blanco.

Para calcular los resultados se aplica la expresión:

Dónde:

𝑀2−𝑀1 ) ∗ 100

𝑀2−𝑀

C: porcentaje de cenizas totales en base hidratada

M: masa del crisol vacío (g)

M1: masa de crisol con la porción de ensayo (g)

M2: masa del crisol con la ceniza (g)

100: factor matemático para cálculo porcentual

) ∗ 100

C = (

33

III.4.9. Actividad Antioxidante DPHH (2,2-difenil-1-picrilhidrazilo)

Determinación de antioxidante DPHH (2,2-difenil-1-picrilhidrazilo), este análisis

se realizó en el Laboratorio UBA, donde se empleó la metodología descrita por

la institución

Inicialmente se hizo un ensayo en Cromatografía de Capa Fina (CCF) de cada

una las fracciones con el fin de realizar un análisis cualitativo antioxidante. Se

ensayaron mezclas de varios eluyentes en diferentes proporciones, entre ellas

hexano/acetato de etilo y cloroformo/metanol, hasta encontrar el sistema que

reprodujera una mejor separación de los compuestos. Posteriormente se reveló

con una solución de DPPH al 0.2% en metanol (positivo: manchas amarillas

sobre fondo violeta)

Tabla V Actividad Antioxidante

Actividad antioxidante

DPHH ( mg/kg)

Fuente: Autor(es)

III.4.10. Espectrofotometría de absorción atómica para el ión selenio

La determinación de ion atómica del catión selenio por espectrofotometría de

absorción atómica, se realizó en el Laboratorio UBA, donde se empleó la

metodología descrita por la institución.

III.4.11. Espectrofotometría de absorción atómica para el ión zinc

Determinación de ion atómica del catión zinc por espectrofotometría de

absorción atómica, se realizó en el Laboratorio UBA, donde se empleó la

metodología descrita por la institución

34

Tabla VI Catión zinc

CATIO N Zinc

Zinc 0.188 – 3 mg/kg

Fuente: Jonh Suárez (2017)

III.4.12. Preparación y análisis del extracto vegetal

Colocar 5 g de muestra previamente humedecida con alcohol de 96º luego cubrir

con alcohol de la misma concentración. Taparlo para evitar la contaminación.

Obtener el percolado a las 24 y 48 horas. (28)

III.4.12.1. Elaboración de detergente líquido

Tabla VII Componente de detergente líquido

COMPONENTES UNIDADES

Comperland Kd

COCODIETANOLAMINA) 2 g

Texapón 70% (LAURIL ÉTER SULFATO

DE SODIO) 15 g

Agua des-ionizada 78.5 ml

Sal Industrial 1.5 g

Glicerina 2 ml

Concentrado de Sargassun

Ecuadorianum 1.5 ml

Fuente: Autor(es)

35

III.4.12.2. Procedimientos del detergente Líquido 100 ml

1. Se mezcló la mitad del Agua destilada con el Texapón (70%) en. Luego

se adicionó el Comperland KD en la mezcla del Texapón.

2. Se agregó la sal Industrial a la otra mitad de Agua destilada y se mezcló

hasta disolución completa.

3. Luego se incorporó la mezcla 2 en la 1ra mezcla hasta obtener una mezcla

homogénea.

4. Se colocó al principio activo1, 5 del Sargassum ecuadoreanum.

5. Se agregó la Glicerina para darle suavidad al jabón líquido.

6. Se dejó reposar unas horas hasta que el producto tome consistencia y la

espuma se reduzca.

III.4.13. Análisis físico -químicos de detergente líquido

Modo de Empleo

Aplique en manos húmedas o secas directamente y sin diluir.

Lave las manos total y profundamente

Enjuague con agua corriente

Seque

Propiedades Físico-químico

Aspecto Líquido Ligeramente Viscoso

Color Verde Oscuro

Olor Herbal

Temperatura: 50°C

PH (100%) 25°C RANGO 5-7

Densidad (25°C) g/cm3 0.90 – 1.10

Viscosidad (25°C) mPa.s. 10.000-15.000 UBA

36

CAPITULO IV

IV.1. Resultados

En este capítulo se detallará en tablas, los datos experimentales y los

resultados obtenidos en las diferentes pruebas realizadas en algas pardas

Sargassum ecuadorianum. Estos fueron.

IV.1.1. Determinación de los índices farmacognósticos de Sargassum ecuadorianum

Se detalla los resultados obtenidos de los ensayos físicos-químicos en las

algas pardas (Sargassum ecuadorianum). Estos fueron realizados en la facultad

de Ciencias Químicas en el Laboratorio de Productos naturales y Laboratorios

UBA.

IV.1.2. Determinación de metabolitos secundarios por tamizaje fitoquímico

La planta posee una gran diversidad de compuestos evidenciando un gran

potencial farmacológico, Estos componentes dieron una reacción positiva en los

extractos, dentro de los cuales tenemos alcaloides, cumarinas, saponinas,

glucósidos, glucósidos cardioticos, flavonoides, triterpenoides, esteroides,

mucilagos, antocianinas, taninos (Tabla VII).

IV.1.3. Determinación de los parámetros Físico- Químicos

A la especie se determinaron los parámetros fisicoquímicos: humedad

residual, cenizas totales, viscosidad, análisis catiónicos actividad antioxidante.

37

Tabla VIII Resultado tamizaje Fitoquímico

Extracto acuoso

Ensayo Metabolito Resultados Semicuantificación

Dragendorff Alcaloides Positivo +

Mayer Alcaloides negativo -

Bouchardat Alcaloides negativo -

Wagner Alcaloides Positivo +

Espuma saponina positivo ++

Na(OH) al 10%

Cumarina positivo +

Extracto alcohólico

Ensayo Metabolito Resultados Semicuantificación

Lieberman burchard

Triterpenoides Positivo +++

Lieberman burchard esteroides Positivo ++

Mucilagos Positivo ++

Hidróxido de potasio al 5% Borntrager Negativo -

antocianinas positivo ++

Cloruro férrico al 5% Taninos Positivo +

Aceites esenciales

Positivo +

Shinoda Flavonoides Positivo +

Fehling Glucósidos Positivo ++

Benedict Glucósidos cardiotónicos

positivo +

Fuente: Autor(es)

38

IV.1.4. Humedad

Tabla IX Resultados de análisis de humedad

PLANTA UNIDADES RESULTADOS

Sargassum ecuadoreanum

% 6.60

Fuente: autor(es)

En la muestra triturada y pulverizada, el contenido de humedad fue 6.62%

(tabla VIII).La humedad nos permite conocer la estabilidad de la materia prima,

Si existe un exceso de agua en una droga esto puede provocar crecimiento

bacteriano, la presencia de hongos o insectos y el deterioro, seguido de la

hidrólisis de los principios activos.

IV.1.5. Cenizas

Tabla X Resultados de análisis de cenizas

PLANTA UNIDADES RESULTADOS

Sargassum ecuadoreanum

% 51.0

Fuente: Autor(es)

En la muestra pulverizada y seca el contenido de cenizas totales fue de 51%

(tabla IX). Las cenizas totales nos indican el contenido de sales minerales en la

planta. Es importante porque la materia mineral puede ser valiosa en las

actividades metabólicas del consumidor

39

IV.1.6. Actividad Antioxidante

Se realizó el análisis de esta planta, en muestra pulverizada siguiendo la

metodología DPPH que se encuentra en él Se muestra en la tabla IV. Los

antioxidantes son sustancias que pueden impedir, retrasar o inhibir las

oxidaciones catalíticas y los procesos que inducen a la formación de radicales

libres.

IV.1.7. Espectrofotometría atómica del ion selenio

Tabla XI Resultado selenio proporcionado por el laboratorio UBA.

Planta Unidades Resultados

Sargassum

ecuadoreanum <0.1 mg/kg

Fuente: Laboratorio UBA (2019)

IV.1.8. Espectrofotometría atómica del ion zinc

Tabla XII Resultado del ion zinc proporcionado por el

laboratorio UBA

Planta Resultados Unidades

Sargassum

ecuadoreanum 2.60 mg/kg

Fuente: Laboratorio UBA (2019)

40

IV.1.9. Descripción de Propiedades Organolépticas del Jabón Líquido

Tabla XIII Observación de diferentes condiciones organolépticas

Propiedades Organolépticas

Aspecto Liquido

Ligeramente

viscoso

Color Verde oscuro

Olor Herbal

Fuente: autor(es)

Se encontró que los parámetros organolépticos del jabón líquido no tienen

estándares de referencia que sirva para comparación se observa que los

carácter organolépticos tienen valor propio y características dependientes de

cada especie analizada.

Tabla XIV Propiedades físicas y químicas del detergente líquido

PROPIEDADES FÍSICAS VALOR DE LA MEDICIÓN

pH 7,30

Densidad 26 °C 1,03

Peso Especifico 0.998

PROPIEDADES QUÍMICAS

Viscosidad 990 mPa.S

Fuente: Laboratorio UBA (2019)

41

Los valores determinados en el estudio del jabón líquido Sargassum

ecuadoreanum están acorde a las especificaciones de la metodología OMS, con

un valor de pH 7.30. Este valor está cercano a otros productos en el mercado

para limpieza cutánea que tiene pH 7.40.

IV.1.10 Presentación de diferentes condiciones que se mantuvo al

detergente liquido

Tabla XV Resultado de estudio preliminar de estabilidad del detergente líquido.

PROPIEDADES ORGANOLÉPTICAS

ESTUFA A 50 °C

Propiedad Días 0 Día 15 Día 30

Aspecto

Liquido

ligeramente

viscoso

Liquido

ligeramente

viscoso

Liquido

ligeramente

viscoso

Color Verde

oscuro

Verde

oscuro

Verde

oscuro

Olor Herbal Herbal Herbal

PROPIEDADES

FISICOQUÍMICAS Densidad 1.03 1.035 1.040

pH 6.90 6.90 6.90

Viscosidad 990 992 992

Fuente: Autores

Las preparaciones de detergente líquido fueron sometidas a almacenamiento

a 50 grados centígrados para simular condiciones externas y evaluar cualquier

efecto negativo sobre el producto. Las propiedades fisicoquímicas (densidad,

pH, viscosidad permanecieron en condiciones) valores similares por los 30 días

que duró el ensayo a 50 grados centígrados (Tabla XIV)

42

IV.2. Discusión

Nuestras observaciones concluimos que nuestra especie algas pardas Sargassum ecuadoreanum contiene un alto contenido de zinc a nuestros conocimientos este es el primer reporte indicando la presencia de zinc en este tipo de algas referencial.

Así mismo en cuanto a la fuente de compuestos con actividad antioxidante del alga parda Sargassum ecuadoreanum se logró identificar que las algas poseen una cantidad en mayor cantidad que las algas marinas Bryothamnion triquetrum y Halimeda opuntia. (29)

Con respecto a la presencia de selenio en las algas rojas al catión selenio las algas Phaeophyta las más conocidas en nuestro país son Macrocystis pyrifera (huiro), Lessonia nigrescens (huiro negro), Durvillaea antarctica (cochayuyo). Las algas rojas o Rhodophyta que son el segundo grupo más grande de algas y son las más primitivas correspondiente a un grupo muy grande de algas marinas contienen una cantidad superior de selenio en comparación con la algas Sargassum ecuadoreanum (30)

Finalmente en cuanto al porcentaje de humedad de algas pardas sargassum spp se conoce que posee 11.17 ± 0.08 g/100g, en cuanto al zinc, esta especie de alga se mantiene con 0.98 ± 0.04. (31) Por otra parte, con respecto al desarrollo del presente trabajo investigativo, el alga Sargassum ecuadoreanum posee 51.0% de humedad, mientras que en zinc posee 2.60 mg/Kg. (30)

43

CONCLUSIONES

Se identificó la clasificación taxonómica del alga, determinando que

corresponde a Sargassum ecuadoreanum, a la especie Sargassum

ecuadoreanum W.R Taylor, mismo que fue certificado por el Instituto de

investigaciones de recursos naturales (IIRN) de la facultad de Ciencias

naturales.

Con el desarrollo del proceso de investigación, en cuanto a los

resultados obtenidos, se determina que las algas pardas tienen una

cantidad significativa de antioxidantes que puede ser de gran uso para la

industria cosmética, siendo ricas en metabolitos segundarios, dado a que

según los estudios aplicados en las algas Sargassum ecuadoreanum, se

evidenció saponina, Cumarina, triterpenoides, esteroides, mucílagos,

antocianinas, taninos, aceites esenciales, flavonoides, glucósidos,

glucósidos cardiotónicos.

Con la aplicación de la metodología DPPH, para determinar

antioxidantes, se encontró que las algas poseen una cantidad de 347.22

g/100mg, mostrándose establecida dentro de los rangos.

De acuerdo con los resultados obtenidos, según con el estudio del

selenio y el zinc, se logró evidenciar su existencia en las algas pardas

Sargassum ecuadoreanum, dando como resultado que el Selenio es

encontrado en menor cantidad de <0.1 mg/Kg, mientras que el Zinc es

encontrado con 2.60 mg/Kg.

Con respecto al análisis del detergente líquido, durante tres

sesiones, se determinó que el mismo se encuentra dentro de los rangos

establecidos en cuanto a sus parámetros, tales como propiedad, aspecto,

44

color, olor, densidad, pH y viscosidad, ya que en dichas sesiones no se

presentaron variaciones que pudieran alterar la elaboración del mismo.

RECOMENDACIONES

Se recomienda realizar estudios de estabilidad a largo plazo al

detergente líquido a base de algas pardas Sargassum ecuadoreanum.

Efectuar estudios sobre las acciones farmacológicas que poseen

las algas pardas Sargassum ecuadoreanum de esta manera se probará

conocer el comportamiento y el beneficio de la salud en las personas.

Desarrollar los estudios microbianos al detergente líquido para

transformarlo en un detergente líquido Antibacterial ya que en nuestro país

no son utilizadas para ningún fin y se estarían desperdiciando sus demás

propiedades.

Continuar con los análisis de metales pesados para una

investigación más completa.

45

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ingrediente funcional. Rev Chil Nutr. 2012 Diciembre; 39(196-202).

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47

VOCABULARIO

Alcaloides.- Los alcaloides son sustancias orgánicas nitrogenadas con propiedades básicas, de origen vegetal en su mayoría y acción fisiológica enérgica

Alginatos.- Es un polisacárido aniónico presente ampliamente en las paredes celulares de las algas marinas pardas. También es producido por algunas especies bacterianas.

Cumarinas.- Las cumarinas constituyen una clase de metabolitos secundarios, ampliamente distribuidos en el reino vegetal, pudiendo también ser encontrados en hongos y bacterias.

Esporófitas.- Es la fase más larga y conspicua de estos organismos y generalmente es perenne, cuando las condiciones ambientales le son favorables; esta fase es vital porque se producen numerosos esporangios que nacen en las hojas o en apéndices modificados de las mismas

Flavonoides.- Están ampliamente distribuidos en las plantas y funcionan como pigmentos, moléculas señalizadores y defensores frente a infecciones y lesiones.

Compuesto bioactivos.- Tipo de sustancia química que se encuentra en pequeñas cantidades en las plantas y ciertos alimentos (como frutas, verduras, nueces, aceites y granos integrales).

Saponinas.- Las saponinas pertenecen al grupo de fitoquímico, una de

las numerosas estructuras que se descubren en las fuentes vegetales. Estas sustancias presentan una serie de características, tales como no ser nutritivas, además de ofrecer protección frente a agentes externos

Taninos.- Los taninos son compuestos fenólicos que poseen propiedades astringentes y antiinflamatorias, por lo tanto, son muy útiles ante diarrea

48

o gastroenteritis. Además, tienen acción antioxidante que protegen a las células ante los radicales libres y permiten reducir el riesgo de enfermedades degenerativas.

Triterpenos.- Este grupo de principios activos está constituido por numerosos compuestos, estructuralmente muy similares, derivados mayoritariamente del epoxiescualeno

49

ANEXOS

Anexo A. pesado del Sargassun ecuadorianum fresco

Anexo B. trituración de la muestra desecada

50

Anexo C. Pesado de la muestra pulverizada

Anexo D. Extracto Preparación de alcohólico

51

Anexo D2. Filtración del extracto alcohólico

52

Anexo E. Reactivos De Tamizaje Fitoquímico

Anexo F. Extracto acuoso con reactivo:

1. Dragendorff 2. Mayer 3. Bouchardat 4. Wagner

53

Anexo G. Ensayos de Aceites esenciales

54

Anexo H. Antocianinas

Anexo I. Pesado para cenizas

55

Anexo I2. PREPARACION PARA CENIZAS

Anexo J. Cenizas totale

56

Anexo: Taxonomía De La Alga Parda sargassum ecuadoreanum

57

Anexo K. actividad antioxidante DPHH

58

Anexo L. Catión selenio

59

Anexo M. Catión zinc

60

Anexo N. Materiales para el detergente liquido

Anexo N1. Preparación de Extracto De Sargassum ecuadoreanum

Anexo N2. Mezcla de Texapón con agua destilada

61

Anexo N3. Mezcla de Comperlan y detergente liquido

Anexo N4. Detergente liquido final

62

Aneo P Viscosidad Del Jabón Líquido