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UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA CARRERA DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA “Determinación de la presencia de residuos de Boldenona (análogo de la testosterona) en bovinos de carne; faenados en el Camal Metropolitano de Quito” Trabajo de Grado presentado como requisito para optar por el Título de Médico Veterinario-Zootecnista AUTOR: Elvis Horacio Morales Pérez TUTOR: Dr. Javier Vicente Vargas Estrella Quito, Septiembre 2016
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UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
CARRERA DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
“Determinación de la presencia de residuos de Boldenona (análogo de la
testosterona) en bovinos de carne; faenados en el Camal Metropolitano de
Quito”
Trabajo de Grado presentado como requisito para optar por el Título de
Médico Veterinario-Zootecnista
AUTOR:
Elvis Horacio Morales Pérez
TUTOR:
Dr. Javier Vicente Vargas Estrella
Quito, Septiembre 2016
i
“El triunfo no está en vencer siempre, sino en nunca rendirse”
Napoleón Bonaparte
ii
DEDICATORIA
A Dios,
A mis padres Horacio y Elsa, porque están siempre pendientes de mí, por sus
consejos, llevarme juntos en este largo camino y no dejarme solo, por su cariño y
apoyo incondicional para alcanzar este maravilloso logro, sin ustedes hubiese
sido muy difícil.
A mis hermanos Diana, Ángela, Ismael, Romel que depositaron sus buenas
energías y deseos para alcanzar este objetivo.
A mi Familia,
Mis Profesores,
Mis Amigos.
Elvis.
iii
AGRADECIMIENTOS
En primer lugar agradezco a Dios por darme la existencia, por hacerme pensar
que soy una persona muy afortunada y permitirme llegar donde estoy, por
bendecirme con paz, felicidad y salud. A mi familia por apoyar cada uno de mis
sueños y locuras, a mis amigos que hice durante mi estancia en la universidad
(ustedes saben quiénes son), con quienes compartí muchas experiencias y
aprendí de ustedes, quienes creyeron y depositaron la confianza en mí y a todas
aquellas personas que contribuyeron directa e indirectamente para lograr este
grandioso objetivo.
A mis profesores, a lo largo de la carrera, quienes a más de ser mis maestros
fueron amigos, les debo toda mi formación académica y mi futuro profesional.
Agradezco al Doctor Alex Andrade (+), que desinteresadamente contribuyó en la
realización de este trabajo de investigación, por su apoyo y sus conocimientos en
relación a mi proyecto de grado.
Expreso mi más sincero agradecimiento a mi tutor Dr. Javier Vargas Estrella,
quien me acogió bajo su tutela y dirección, con quien compartí y di mis primeros
pasos en mi anhelada Farmacología, que siempre estuvo ahí para guiarme hasta
la culminación de este proyecto.
Agradezco al Camal Metropolitano de Quito, por la gentil autorización en la toma
de muestras; particularmente al Departamento Veterinario por su colaboración y
apoyo incondicional.
Finalmente quiero agradecer a la Coordinación General de Laboratorios de la
Agencia Ecuatoriana de Aseguramiento de la Calidad del Agro (AGROCALIDAD);
en especial a las Químicas Paulette Andrade, Responsable del Laboratorio de
Contaminantes de Productos Pecuarios y a la Química Paola Flores, quienes me
abrieron las puertas de su laboratorio para el desarrollo experimental de mi
proyecto de investigación, por su aprecio, apoyo y amistad.
iv
© DERECHOS DE AUTOR
Yo, Elvis Horacio Morales Pérez en calidad de Autor del proyecto de investigación
“Determinación de la presencia de residuos de Boldenona (análogo de la
testosterona) en bovinos de carne; faenados en el Camal Metropolitano de Quito”,
por la presente autorizo a la Universidad Central del Ecuador, hacer uso de todos
los contenidos que me pertenecen o de parte de los que contienen esta obra, con
fines estrictamente académicos o de investigación.
Los derechos que como autor me corresponde, con excepción de la presente
autorización, seguirán vigentes a mi favor, de conformidad con el establecimiento
en los artículos 5, 6, 8, 19 y demás pertinentes de la Ley de Propiedad Intelectual
y su Reglamento.
Así mismo, autorizo a la Universidad Central del Ecuador para que realice la
digitalización y publicación de este trabajo de investigación en el repositorio
virtual, de conformidad a lo dispuesto en el Art. 144 de la Ley Orgánica de
Educación Superior.
En la ciudad de Quito, Septiembre 2016.
____________________________
Elvis Morales Pérez
CI: 1805053913
Email: [email protected]
v
INFORME DEL TUTOR
En mi carácter de Tutor del Trabajo de Grado, presentado por el señor: Elvis
Horacio Morales Pérez, para optar por el Título o Grado de Médico Veterinario y
Zootecnista, cuyo título es “Determinación de la presencia de residuos de
Boldenona (análogo de la testosterona) en bovinos de carne; faenados en el
Camal Metropolitano de Quito”. Considero que dicho trabajo reúne los requisitos y
méritos suficientes para ser sometido a la presentación pública y evaluación por
parte del jurado examinador designado.
Quito, Septiembre 2016.
____________________________
Dr. Javier Vargas Estrella
C.I.: 050159984-9
vi
vii
viii
ix
ÍNDICE DE CONTENIDOS
DEDICATORIA ....................................................................................................................... ii
AGRADECIMIENTOS ........................................................................................................... iii
© DERECHOS DE AUTOR ................................................................................................... iv
INFORME DEL TUTOR ........................................................................................................ v
CALIFICACIÓN TRABAJO DE TITULACIÓN ESCRITO…………………………….............vi
RESUMEN ............................................................................................................................. xi
ABSTRACT ........................................................................................................................... xii
INTRODUCCIÓN ................................................................................................................... 1
CAPÍTULO I ........................................................................................................................... 3
OBJETIVOS ........................................................................................................................... 3
CAPÍTULO II .......................................................................................................................... 4
MARCO TEÓRICO ................................................................................................................ 4
Antecedentes ......................................................................................................................... 4
Generalidades ....................................................................................................................... 4
BOLDENONA UNDECILENATO ......................................................................................... 5
METODOS DE DETECCIÓN DE RESIDUOS .................................................................... 13
Técnicas para la detección de residuos de medicamentos veterinarios ............................ 13
CAPITULO III ....................................................................................................................... 15
MATERIALES Y METODOLOGÍA ...................................................................................... 15
TIPO DE INVESTIGACIÓN ................................................................................................. 26
TRABAJO DE LABORATORIO ........................................................................................... 27
Preparación de los reactivos ............................................................................................... 27
EXTRACCIÓN DEL ANALITO ............................................................................................ 28
CAPITULO IV ...................................................................................................................... 31
RESULTADOS Y DISCUSIÓN ........................................................................................... 31
CAPITULO V ....................................................................................................................... 36
CONCLUSIONES ................................................................................................................ 36
BIBLIOGRAFIA .................................................................................................................... 37
ANEXOS .............................................................................................................................. 46
ANEXO 1 ............................................................................................................................. 46
Autorización de ingreso al Camal Metropolitano ................................................................ 46
x
ANEXO 2 ............................................................................................................................. 47
Autorización y orden de trabajo Agencia Ecuatoriana de Aseguramiento de la Calidad del
Agro. (AGROCALIDAD) ...................................................................................................... 47
ANEXO 3 ............................................................................................................................. 52
Registro de toma de muestras ............................................................................................ 52
ANEXO 4. ............................................................................................................................ 53
Toma de muestras y procesamiento ................................................................................... 53
ANEXO 5. ............................................................................................................................ 58
Resultados Oficiales por método ELISA. ............................................................................ 58
INDICE DE CUADROS.
Cuadro1.- Número y porcentaje de positividad de individuos
analizados……………………………………………….………...….…………….……31
Cuadro 2. Nivel promedio de concentración de boldenona de 72 bovinos faenados
en el Camal Metropolitano de Quito ...........………………….…………..…………..32
Cuadro 3 Distribución de residuos de boldenona según edad en 72 bovinos de
carne faenados en el Camal Metropolitano de Quito………..……….……………..32
Cuadro 4 Distribución porcentual de los niveles de boldenona en bovinos
faenados en el Camal Metropolitano de Quito en función de edad y
procedencia……………………………………………………………….................….33
Cuadro 5. Distribución porcentual de los niveles de boldenona encontrados en los
bovinos faenados en el Camal Metropolitano de Quito en función de edad y
procedencia………………………………………………………………………………34
INDICE DE FIGURAS
Figura 1. Estructura química de la testosterona……………………….....................5
Figura 2. Estructura química de la boldenona…......…………………………………5
Figura 3. Vista satelital del Camal Metropolitano de Quito…………………………25
Figura 4. Vista satelital de los laboratorios de AGROCALIDAD…….……………..25
xi
DETERMINACIÓN DE LA PRESENCIA DE RESIDUOS DE BOLDENONA
(ANÁLOGO DE LA TESTOSTERONA) EN BOVINOS DE CARNE; FAENADOS
EN EL CAMAL METROPOLITANO DE QUITO.
Autor: Elvis Horacio Morales Pérez
Tutor: Dr. Javier Vargas E.
Fecha: Septiembre, 2016
RESUMEN
Las necesidades de proteína de origen animal es un factor muy importante en el
desarrollo biológico de los seres humanos, por ende deben cumplir requisitos
importantes para que sean considerados inocuos y aptos para su consumo,
puesto que en la crianza y producción de los animales, se utilizan varias
sustancias farmacológicas como promotores de crecimiento y muchas veces no
se cumplen los tiempos de retiro establecidos para que se eliminen éstos
fármacos de los tejidos comestibles, causando serias alteraciones en el
consumidor, siendo más vulnerables los lactantes, niños pequeños, mujeres
embarazadas y ancianos. Los objetivos del estudio están direccionados a
determinar si existe presencia de boldenona en carne de bovinos faenados en el
Camal Metropolitano de Quito y relacionar la presencia de ésta, en función a su
edad y procedencia. Se tomaron muestras al azar de animales con buena
conformación por un lapso de 4 semanas, posteriormente se analizaron por la
técnica ELISA, en el Laboratorio de Contaminantes de Productos Pecuarios de
AGROCALIDAD. Se determinó la presencia de residuos de boldenona en el 100%
de las muestras analizadas, los niveles de concentración detectados fueron
elevados en relación al LMR de la normativa con la que se comparó, lo que
demuestra que no se están respetando los tiempos de retiro indicado para este
principio activo en carne.
Palabras claves: Boldenona / carne / Inocuidad / Límite máximo de residuos/
diagnóstico/consumidor/.
xii
DETERMINATION OF THE PRESENCE OF RESIDUES OF
BOLDENONE (ANALOGUE TESTOSTERONE) IN BEEF CATTLE;
SLAUGHTERED IN THE METROPOLITAN ABATTOIR IN QUITO
CITY.
Author: Elvis Horacio Morales Pérez
Tutor: Dr. Javier Vargas E.
Date: September, 2016
ABSTRACT
The needs of animal protein is very important in the biological development of
human factor, therefore must meet important requirements to be considered safe
and suitable for consumption, since in breeding and animal production, It uses
several drug substances as growth promoters and often withdrawal times are not
being met for these drugs in edible tissues are removed, causing serious
disturbances in the consumer, being more vulnerable infants, young children,
pregnant women and elderly. The objectives of the study are directed to determine
whether the presence of boldenone in meat from cattle slaughtered in the Camal
Metropolitano de Quito and relate the presence of it, according to their age and
origin. The samples were taken randomly from animals with good conformation for
a period of 4 weeks, They were later analyzed by ELISA, at Laboratory of
Livestock Products of AGROCALIDAD. The presence of boldenone was
determined in 100% of samples tested, were detected high concentration levels; in
relation to MRL legislation with which it was compared demonstrating that it is not
respecting withdrawal times indicated for the active ingredient in meat.
Keywords: Boldenone / meat / Safety / Maximum Residue Limits / diagnosis /
consumer/.
1
INTRODUCCIÓN
La demanda de proteína de origen animal es uno de los elementos más
preciados enfocados a la necesidad de mantener un adecuado desarrollo
biológico de los seres humanos (Organización para la Alimentación y Agricultura,
2011).Según Fajardo et al., (2011); mencionan que la producción de carne para
el consumo humano es uno de los factores más importantes dentro de la
economía de un país, lo que ha implicado el uso de promotores del crecimiento y
dentro de éstos las hormonas (esteroides anabolizantes y otros), como fuentes
para acelerar e incrementar la producción.
Los fármacos anabólicos son una alternativa que permiten aumentar la
producción cárnica, (Rainer, 2011); dentro de los cuales los más usados en
ganadería son Esteroides, Estrógenos y Progestágenos (Ramón G., 2008);
donde el uso de Boldenona el cual es un agente anabólico análogo de la
testosterona, está indicado en bovinos, equinos, porcinos, caprinos y en perros
(Larrea & Chirinos, 2011). Sin embargo el incumplimiento del tiempo de retiro (71
días para boldenona; Boldemax, 2016), de los medicamentos veterinarios
administrados a animales de producción, está causando efectos dañinos en los
consumidores.
Debido a la falta de estudios a nivel nacional en torno al tema de residuos
farmacológicos, este estudio se orienta a determinar la presencia de sustancias
farmacológicas (boldenona), mismo que servirá como un estudio base en esta
área de investigación.
En China, Xia et al., (2007), realizaron un estudio de determinación de residuos
de trenbolona, boldenona y progesterona en carne; con los métodos,
cromatografía líquida de alta eficacia y espectrometría de masas, donde
encontraron niveles de 0.11; 0.17 y 0.02 μg/kg respectivamente, recuperándose
del 62%-99% de las hormonas sintéticas.
En Egipto, Ehab Tousson et al., (2007), realizaron un estudio acerca de los
efectos de boldenona en 16 conejos adultos machos y 16 inmaduros con el fin de
determinar en qué individuos se presentaba mayores efectos adversos tras la
administración intramuscular de boldenona; los resultados mostraron que conejos
2
inmaduros que reciben boldenona tienen marcados efectos adversos tales como
lesión hepatocelular, lesión glomerular multifocal y atrofia testicular asociada a
trastornos de la espermatogénesis en relación a individuos maduros.
Diversos estudios (Chiesa et al., 2015; Rodríguez et al., 2010; Destréz et al.,
2009) realizados en torno a la presencia de Boldenona en animales de abasto
exponen resultados que se describen a continuación:
En España, Chiesa L. et al., (2015) realizaron un estudio de residuos de B-
Boldenona en orina en 54 bovinos de los cuales se reportó que el 14.7% de los
animales presentaron niveles de residuos de boldenona de 0.05 a 0.2ng/ml con el
método de Cromatografía Liquida de alta eficacia HPLC.
En Guatemala, Rodríguez, et al. (2010) realizaron un estudio de detección de
residuos en orina con la técnica cromatografía de gases en 15 porcinos (8
machos castrados y 7 hembras) donde encontraron que el 47% de las muestras
dieron positivo a la presencia de 6B-hidroxiboldenona, el 6% resultaron positivas
a Methandrostenolona y 47% de las muestras resultaron negativas a la presencia
de esteroides anabólicos.
En Francia, Destrez et al. (2009) realizaron un estudio donde medían el tiempo en
que puede detectarse residuos de boldenona luego de su aplicación
intramuscular(IM) en bovinos con el método de cromatografía liquida de alta
eficacia(HPLC); los resultados demostraron que son medibles los metabolitos de
éste fármacos(boldenona) hasta por 30 días posterior a la última aplicación (IM).
Otra técnica utilizada es ELISA, una prueba inmunológica específica para cada
analito, se basa en la reacción antígeno-anticuerpo, para detección de residuos
de medicamentos veterinarios por las ventajas que ofrecen de buena
especificidad y sensibilidad, tiempo relativamente corto, gran número de muestras
a procesar (Reig, 2010).
3
CAPÍTULO I
OBJETIVOS
General:
• Determinar la presencia de residuos de boldenona en bovinos de carne
faenados en el Camal Metropolitano de Quito.
Específicos
• Establecer la presencia de niveles de boldenona en carne bovina por el
método ELISA.
• Relacionar la presencia de residuos de boldenona en los bovinos faenados
en el Camal Metropolitano de Quito con la edad y procedencia.
4
CAPÍTULO II
MARCO TEÓRICO
Antecedentes
El aumento creciente de la población a escala mundial ha hecho que cada vez se
requiera mayor cantidad de alimentos de origen animal y dentro de éstos el
consumo de carne, para satisfacer ésta demanda creciente; lo que ha conllevado
que en la producción de animales de abasto se utilicen una gran variedad de
productos farmacológicos, ya sea con un fin terapéutico, zootécnico o como
promotores de crecimiento Bavera et al., (2002). Sin embargo, la gran mayoría de
las sustancias medicamentosas son susceptibles de dejar residuos en los
alimentos procedentes de los animales que han sido tratados, bien del principio
activo en su forma original o de sus metabolitos (Sumano & Ocampo, 2006).
Si bien es cierto, en muchos casos es necesaria la administración de estas
sustancias con fines terapéuticos, pero cuando se utilizan de forma
indiscriminada, fraudulenta, y abusiva, sin atender a los principios de la buena
práctica veterinaria (BPV); la presencia de residuos farmacológicos en los
alimentos de origen animal puede acarrear a un grave riesgo para la salud de los
consumidores (Lozano, 2008).
Generalidades
El objetivo principal de la vigilancia de residuos de medicamentos de uso
veterinario en alimentos es evitar que lleguen al consumidor, alimentos con
residuos de sustancias que puedan tener consecuencias negativas para la salud
(Euskadi, 2012).
Dentro de las sustancias utilizadas como promotores del crecimiento, tenemos
varios grupos y cada uno de ellos tiene un mecanismo de acción diferente se
menciona que el empleo de sustancias hormonales, es una herramienta
estratégica, en cuanto al aumento de la producción cárnica, además lo hace más
rápido, siendo esto muy importante porque reduce el tiempo de producción con un
retorno financiero más rápido (Campos, A; 2015).
5
Figura 1. Estructura química de testosterona
Figura 2. Estructura química de boldenona
Sin embargo, Bavera et al., (2002) mencionan que luego de la prohibición del uso
de hormonas y anabólicos por parte de la Comunidad Europea, en los países
exportadores de productos cárnicos se ha dado una polémica de si el uso de
hormonas naturales y análogas genera alteraciones orgánicas en los
consumidores, siendo aprobado su uso en EE.UU. como ergotrópico y en Europa
solamente con fines terapéuticos, más no como promotores de crecimiento.
El uso de hormonas en animales de consumo es un tema con una polémica
internacional, como lo mencionan Perez et al., (2002), ya que existen dudas sobre
si estos residuos pueden significar un riesgo para el consumidor, debido a que las
hormonas, como todas las sustancias medicamentosas y químicas, dejan en
general residuos en las carnes que pueden ser detectados por sofisticados
métodos aún en partes muy pequeñas.
BOLDENONA UNDECILENATO
(Tomado de Manual de Farmacología Veterinaria de Plumb; Manual Saunders de
fármacos veterinarios para grandes y pequeños animales y Manual Veterinario
Merck).
Los andrógenos y análogos sintéticos son fármacos principalmente miotrópicos
(actúan directamente sobre células musculares); ya que participan en procesos
constructivos de mineralización, consolidación y regeneración ósea en casos de
raquitismo y osteomalacia a la vez se favorece la eritropoyesis en órganos como
bazo y medula ósea al estimular la síntesis de eritropoyetina a nivel renal en los
animales.
ESTRUCTURA DINÁMICA DE LA MOLÉCULA.
.
6
Fuente: Plumb’s Veterinary Drug Handbook
Farmacodinamia: La hormona actúa penetrando en la célula, se fija a un receptor
del citoplasma; va al núcleo. Se estimula la producción de un ARN mensajero,
que elabora una enzima y libera la enzima alfa reductasa que actúa en el proceso
de síntesis proteica, permitiendo al ARN aprovechar los aminoácidos y proteínas
(nitrógeno) de la dieta. Se produce la hipertrofia muscular con disminución de los
aminoácidos plasmáticos y de la urea plasmática con un balance nitrogenado
positivo, por disminución en la excreción urinaria y aumento de la somatotrofina
STH, por estímulo a nivel hipofisiario.
Igualmente, estimula el apetito por medio de la regulación metabólica y poseer
una acción de retener calcio, fósforo, potasio y cloro; la cual contribuye a un
mayor desarrollo de los huesos, constituyéndose además en un factor de
crecimiento, siempre y cuando se mantengan las dosificaciones recomendadas.
Farmacocinética: Las vías de administración más comunes son intramuscular (IM)
y subcutánea (SC), sufre metabolismo hepático y se excreta a través de la vía
renal en 90% en forma de 5-beta dihidroboldenona un metabolito inactivo de
boldenona.
Indicaciones y Dosis: En la Unión Europea y Estados Unidos, se indica
únicamente en caballos de competencia a razón de 1,1 mg/kg y puede repetirse
cada 3 semanas. En pequeñas especies no se indica y se prohíbe en especies de
consumo. También se usa con fin anabólico en bovinos en países donde se
aprueba su uso a razón de 0,2-0,5 mg/kg.
Efectos adversos de los andrógenos: Los esteroides anabolizantes presentan
numerosos efectos adversos, inducen efectos androgénicos como un aumento
exagerado de la libido en machos y un comportamiento sexual anormal en
hembras, además de alteraciones reproductivas como azoospermia, disminución
de la libido, atrofia testicular e hipertrofia del clítoris, agresividad, favorecen la
formación de edemas por retención de sodio y agua, tumores hepáticos, ictericia
por colestasis intrahepática, y toxicidad hepática, fusión de la placa epifisaria
retrasando el crecimiento.
7
Contraindicaciones: En hembras gestantes y antecedentes de alteraciones
hepáticas.
Tiempo de Retiro: No está aprobado en animales destinados a consumo en la
unión Europea y Estados Unidos; en literatura citada por Agrovet Market se indica
un tiempo de retiro de 71 días (Boldemax, 2016).
Tiempo de Aplicación: Existen varios productos que contienen boldenona, en el
mercado nacional se encuentra la presentación inyectable (IM), la misma que se
indica administrar a bovinos desde los 6 meses, administrando 1 vez cada 30 días
por 6 - 10 meses. (Boldemax, 2016).
Efectos de Residuos de Fármacos (anabólicos) Veterinarios en Salud
Humana
Kabir et., al (2004) mencionan que la utilización de sustancias medicamentosas
durante la crianza de animales para abasto es esencial, puesto que se recurre a
emplearlos con fin preventivo y terapéutico ante posibles infecciones o
enfermedades y como se ha manifestado, se aplican como promotores del
crecimiento.
Los medicamentos veterinarios como hormonas, así también las sustancias
farmacológicas(antibióticos) y químicas(insecticidas), dejan en general residuos
en las carnes, que pueden ser detectados por sofisticados métodos analíticos aún
en partes muy pequeñas. Sin embargo, existen dudas sobre si estos residuos
pueden significar un riesgo para el consumidor (CAN, 2010). Dado que una
cantidad apreciable de alimentos de origen animal de alto consumo contienen
normalmente hormonas sexuales en cantidades a veces no despreciables.
Desafortunadamente no existen investigaciones con resultados fiables y certeros
que se refieran a la peligrosidad del uso de hormonas en la producción ganadera
y su presencia en los tejidos comestibles (IIDESO, 2008).
El Comité de Expertos sobre aditivos alimentarios de la Organización de
Alimentos y Agricultura (FAO), la Organización Mundial de la Salud (OMS), y la
Administración de Drogas y Medicamentos (FDA) de los Estados Unidos de
8
Norteamérica consideraron en 1988 que los residuos presentes en la carne de
animales tratados con hormonas sexuales no representan riesgo alguno para el
consumo humano (JEFCA FAO/OMS; 2000).
Sin embargo en la Unión Europea la Directiva 96/22/CE del Parlamento Europeo,
establece que los Estados miembros deben prohibir la administración de
sustancias que tengan, un efecto estrogénico, androgénico o progestágeno a los
animales de explotación; a pesar de todos los estudios toxicológicos y
epidemiológicos disponibles que se han tenido en cuenta, no permiten realizar
una estimación cuantitativa del riesgo para los consumidores. (Consejo Europeo,
1996). La administración de estas sustancias está autorizada exclusivamente con
fines terapéuticos de acuerdo con las disposiciones de los artículos 4, 5 y 7 de
dicha directiva (Consejo Europeo, 2003).
La relación entre el consumo de carne y sus posibles consecuencias perjudiciales
se fundamenta en el hecho de que los fármacos de uso veterinario van a ejercer
su efecto también en las células del ser humano, sobre todo cuando se generan
metabolitos que pueden resistir procesos térmicos ejerciendo acciones tóxicas en
quien consume estos alimentos conteniendo residuos de éstas sustancias; un
ejemplo es la resistencia bacteriana por mal uso de antimicrobianos, las
hormonas ejercen un efecto sobre todo en mujeres embarazadas y niños, sobre
los cuales existe un creciente número de indicios de alteraciones hormonales en
los valores endógenos. (JECFA FAO/OMS, 2015).
Los residuos de clenbuterol un fármaco agonista beta 2 en animales para
consumo humano, suponen un riesgo sanitario significativo para el hombre.
Además de ser usado como anabolizante, el clenbuterol es empleado como
broncodilatador y tocolítico en vacas lo que supone un riesgo adicional (Manual
Merck, 2000).
En Francia Pulse et al., (1991) y España Mitchel et al (1998), reportaron que el
consumo de hígado de ternera con residuos de clenbuterol generó tremores
musculares, taquicardia, dolor muscular, nerviosismo, dolor de cabeza, vértigo,
náuseas, vómito y fiebre. En México, (Doyle, 2005), reportó que alrededor de 225
personas experimentaron hipertensión, temblor, dolor de cabeza y malestar
9
después de haber consumido carne de bovina que contenía residuos de
clenbuterol.
El dietilestilbestrol (DES) fue administrado a mujeres embarazadas antes de los
años 70 para prevenir abortos espontáneos. En 1971, aparecen reportes como
un cancerígeno humano (cáncer de vagina y de cuello de útero) ya que también
aumentaba la probabilidad de cáncer de mama (Gerbie, 1971). Herbst et al.,
(1979), hacen los primeros reportes de la asociación que existe entre la
exposición prenatal a dietilestilbestrol y la presencia de cáncer de cérvix y vagina
en niñas y adolescentes.
Estudios in vivo reportados por Velásquez et al., (2004) han demostrado
rompimiento del ADN y daños oxidativos desencadenados por el 17-ß estradiol,
por lo cual se considera que esta hormona tiene efecto genotóxico,
desencadenando la proliferación de células cancerígenas mamarias. Sin
embargo, las dosis para que estas alteraciones ocurran son superiores a las que
generan efectos endocrinos en los animales.
En caso de la testosterona, los efectos adversos por su parte se deben a su
actividad hormonal, particularmente en la glándula prostática, y se considera
potencialmente embriotóxica, sumado a los desequilibrios en la función endocrina
asociada a desarrollo sexual y orgánico de los individuos causando efectos
dañinos en los consumidores tales como: Infertilidad, ginecomastia, atrofia
testicular, incremento de colesterol LDL y disminución de HDL (arterioesclerosis),
hipertensión, alteraciones cardíacas, cáncer de hígado, ictericia, retención de
líquidos, vello corporal (mujeres) (NIH, 2016).
Los anabólicos en humanos están contraindicados, en pacientes con disfunción
hepática, hipercalcemia, pacientes con historial de infarto miocárdico
(hipercolesterolemia), insuficiencia hipofisaria, carcinoma prostático, nefritis
asociada con retención de sodio y agua después de sobredosis de esteroides
anabólicos (Plumb, 2008).
10
Salud Pública e Inocuidad de los Alimentos
La salud pública veterinaria juega un papel preponderante en la salud de las
poblaciones y en el bienestar; físico, mental y social del ser humano mediante los
conocimientos y aplicación de la ciencia veterinaria, los cuales puedan contribuir
de manera directa en la solución de problemas de salud y enfermedad de la
especie humana (OIE, 2004).
Para garantizar una alimentación sana y sin riesgos de alimentos de origen animal
encaminados al cumplimiento de la inocuidad de los alimentos, hace necesario
actuar en todos los niveles de la cadena de producción agroalimentaria hasta su
consumo, a fin de reducir y evitar numerosos riesgos que afectan la seguridad
alimentaria entre las fases de producción y transformación de los alimentos, para
verificar el estado sanitario de los animales y la salubridad de los productos (OIE,
2015).
La OMS en sus publicaciones brinda información acerca de las enfermedades
más importantes transmitidas por alimentos ETAs, mismas que en ciertos
casos se han subestimado, debido a la infranotificación en los diferentes
países; sumado a la dificultad para establecer una relación de causa entre la
contaminación de alimentos y enfermedades o muertes ocasionadas por éstas,
en el informe "Estimación de la carga mundial de las enfermedades de
transmisión alimentaria" publicado por la OMS en 2015, muestra estimaciones
sobre la carga de morbilidad causada por 31 agentes contaminantes en los
alimentos (bacterias, virus, parásitos, toxinas y productos químicos) a nivel
mundial y regional (OMS, 2015).
Control de residuos de fármacos
La evaluación lo realiza el JECFA FAO/OMS; Codex Alimentarius y la Food and
Drug Administration (FDA); al ser los entes que fijan restricciones de uso de los
productos veterinarios, en base a estudios de toxicidad crónica de las drogas en
las especies que se administran, ejecutan programas sobre normas alimentarias,
y definen cuál es la concentración de sustancia que no produce efecto
observable, dentro del cual se establecen los límites máximos de residuos en los
alimentos que garanticen la protección de la salud de los consumidores, para
llegar a esto se pueden utilizar modelos animales (Rico & Ferraro, 2000).
11
Legislación para los anabólicos (boldenona) comercializados en el mundo y
en Latinoamérica.
El control de medicamentos a escala mundial lo realiza la FDA, en el caso de
fármacos veterinarios se los clasifican de acuerdo al margen terapéutico y se
toman en cuenta reacciones que pueden presentarse en las diferentes especies
animales y los efectos adversos que pueden producir en el ser humano (FDA,
2016).
En la Unión Europea se prohibió el uso de hormonas en animales destinados a
consumo humano, (Consejo Europeo, 2003). En Estados Unidos está aprobado el
uso de sustancias con acción hormonal (naturales) en la producción animal,
(USDA, 2002), de hecho en el año 2015 el Departamento de Agricultura de
EE.UU, indica en su normativa que no se requiere de ningún tiempo de retiro para
estradiol y testosterona; por tanto, los límites máximos solo existen para
propionato de testosterona siendo de 0.00064 ppm. El ente regulador de uso de
medicamentos (FDA, 2016), ha autorizado no esperar el período de supresión
previo al sacrificio de animales, para la asociación de estrógenos, progesterona y
andrógenos tampoco exige el período de supresión del implante de 17 Beta-
estradiol antes del sacrificio (Fajardo, 2011).
Actualmente la FDA indica que el uso de undecilenato de Boldenona (Equipoise),
solo se limita a caballos no destinados para consumo humano y se prohíbe en
animales de consumo.
En Estados Unidos, la posesión de boldenona es ilegal sin una receta, que según
la Ley Federal debe ser emitida por un veterinario habilitado. El Departamento de
Justicia de los Estados Unidos la ha clasificado como una droga de la Lista III, y la
posesión, distribución o venta ilegal de Equipoise puede ser penalizada como un
delito grave, con hasta cinco años de prisión (FDA, 2016).
El undecilenato de boldenona está prohibido para animales destinados a consumo
en: Argentina, Uruguay, Venezuela, Brasil, Paraguay y Chile; en Uruguay y Brasil
se prohíbe el uso del zeranol y boldenona, en animales para consumo humano,
pero sí admiten el empleo de otros anabólicos (MGAP, 2015); en Brasil están
registrados 2 productos comerciales con boldenona para uso exclusivo en
12
caballos de competencia (MAPA, 2014). Argentina, prohíbe el uso de hormonas y
sus normas controlan los residuos en las carnes por medio de metodologías que
se basan en técnicas de cromatografía y de radioinmunoanálisis (SENASA, 2016).
En Paraguay están prohibidos los anabolizantes destinados a los animales de
consumo (SENACSA; 2016).
En Chile, al igual que Brasil y EE.UU., solo se usa en caballos de competencia y
se registra solo 1 producto comercial (SAG, 2016). En Perú está aprobado el uso
de boldenona, se indica 30 días de retiro y existen 5 productos registrados en el
organismo de control sanitario (SENASA, 2013). En Colombia está autorizado el
uso de boldenona en bovinos así mismo de dietilestilbestrol (DES), prohibido en el
resto de países (ICA, 2001); en México se permite el uso de boldenona pero con
un tiempo de retiro de 71 días y con un límite máximo de residuos de 0,05 µg/kg
(SAGARPA, 2011).
Legislación para los fármacos veterinarios comercializados en Ecuador.
En la actualidad desde noviembre de 2008, se crea AGROCALIDAD, entidad
adscrita al Ministerio de Agricultura, Ganadería, Acuacultura y Pesca (MAGAP),
quien asume todas las funciones de SESA (Servicio Ecuatoriano de Sanidad
Agropecuaria), donde el control de medicamentos veterinarios se lo hace a través
del departamento de Registro de Insumos Pecuarios, mismo que regula los
fármacos veterinarios comercializados y autorizados en el territorio nacional; en
2015 implantó nuevos laboratorios con el fin de brindar servicios a la sociedad y
desarrollar programas de control nacional referentes al tema de residuos y
contaminantes pecuarios de los productos que se comercializan bajo la licencia
de AGROCALIDAD y productos prohibidos por el Códex Alimentarius, y
normativas internacionales con el fin de garantizar la inocuidad de los alimentos
de origen pecuario y cuidar la salud de los ciudadanos (AGROCALIDAD, 2015).
Para el caso particular de los promotores de crecimiento de tipo anabólico y
concretamente boldenona, en el año 2015 se registraron 13 productos
comerciales en el Departamento de Registro de Insumos Pecuarios de
AGROCALIDAD, la cual está aprobada para usarse en bovinos, porcinos,
equinos, caninos y felinos en una dosis de 0,2-0,5 mg/kg, con un tiempo de retiro
13
de 70 días independientemente de la vía que se utilice (SC - IM); sin embargo en
muchos casos no se espera este tiempo indicado, lo cual genera residuos en los
tejidos provenientes de los animales a los que se administran.
Varios países que destacan en sus volúmenes de producción cárnica como
Argentina, Brasil, Uruguay, los cuales tienen en común la exportación de grandes
volúmenes de producción cárnica, indican que el uso de hormonas genera
repercusiones económicas en el ámbito comercial y pérdida de credibilidad e
incluso el cierre de mercados de productos cárnicos, al incumplir las
especificaciones dadas por parte del país importador; México indica el nivel
máximo permisible de boldenona en carne (LMR), en los otros países (Colombia,
Ecuador, Perú, Bolivia) que sí utilizan esta hormona, no se reportan éstos
parámetros.
Ecuador no cuenta con normativa nacional sobre Límites Máximos de Residuos,
pues se rige a los Límites Máximos de Residuos que plantea el Códex
Alimentarius; pero en caso de boldenona no existe un límite máximo de residuos
en este organismo, lo cual lleva a adoptar parámetros de otros países o
establecer parámetros nacionales que estén acordes con las exigencias de la
organización mundial del comercio, en cuanto a inocuidad y apertura de
mercados, (OMC, 2013) en el país no se reportan estudios de residuos de
medicamentos veterinarios en tejidos animales, pero se está implementando
programas de farmacovigilancia.
METODOS DE DETECCIÓN DE RESIDUOS
Técnicas para la detección de residuos de medicamentos veterinarios.
La presencia de hormonas esteroideas o sus metabolitos en animales destinados
para el consumo humano ha sido el sujeto de investigación durante los últimos 40
años.
Varios estudios realizados a escala mundial muestran las diferentes técnicas para
la detección de residuos, de las cuales las más utilizadas por su confiabilidad son
la espectrometría de masas y la cromatografía líquida; siendo la primera, la
técnica de elección.
14
Blasco et al., (2007) en España, Chrusch et al., (2008) en Canadá, Xu Cl et al.,
(2006) en China; estudiaron la cromatografía líquida y la espectrometría de masas
como métodos efectivos en la determinación de por lo menos 29 residuos en
tejidos de animales de sustancias o medicamentos administrados. Estos métodos
son reconocidos como precisos y selectivos.
En Francia, Destrez et al. (2009) estudiaron la presencia de boldenona
(prohibida en la Unión Europea), en orina de animales mediante HPLC y
espectrometría de masas en animales de carne para consumo humano. Se
concluyó que éstos métodos determinan niveles mínimos de sustancias
prohibidas y son satisfactorios para las que pudieran ser usadas de manera ilegal
como promotores de crecimiento.
En Japón, Furusawa, (2009) determinó que la cromatografía líquida (HPLC) es un
método fácil, barato, inofensivo y rápido para el análisis de acetato de trembolona
y 17 beta-trembolona en músculo de ganado bovino.
En Kuwait, Sawaya et al., (1998) estudiaron la presencia de cualquier residuo de
promotor de crecimiento en muestras de orina de oveja, en carne de pollo y
ternera, utilizando la técnica ELISA para determinar la precisión y exactitud de
esta metodología. Los autores también compararon esta metodología, con
cromatografía líquida y espectrometría de masas, y concluyeron que la técnica
ELISA es una muy buena metodología, que puede usarse para determinación de
residuos de sustancias usadas como promotores de crecimiento.
En Brasil, Granja et al., (2014) en un estudio de la presencia de residuos de
boldenona en hígado bovino con la técnica de cromatografía liquida y
espectrometría de masas, determinaron niveles de 1 a 10 µg/kg de boldenona en
25% de 11 muestras analizadas; y el 75% reveló niveles de 2 µg/kg.
Finalmente en Colombia, Franco et al., (2010) determinaron la presencia de
residuos de tetraciclina en canales bovinos por técnica de Elisa, y se encontró
una proporción de muestras de carne con niveles de antibióticos superiores a los
Límites Máximos de Residuos de Medicamentos Veterinarios (LMRMV) de
referencia.
15
CAPITULO III
MATERIALES Y METODOLOGÍA
MATERIALES Y REACTIVOS
DE CAMPO
DE LABORATORIO
REACTIVOS
• Estándares para boldenona
(450 ng/ml)
• Acetonitrilo
• Gas nitrógeno
• Anticuerpo de boldenona #1
• Anticuerpo conjugado #2 100X
HRP
• Diluyente de anticuerpo #2
10X PBS
• Solución de lavado 20X
• Tampón de parada
• Sustrato TMB
• Tampón de equilibrio I
• Tampón de equilibrio II
• Mezcla limpiadora de tejido
• Agua destilada
• Tejido muscular
• Guantes de látex
• Cuchillo
• Tubos para centrífuga
• Centrífuga
• Tablas de troceado
• Espátula
• Papel absorbente
• Molino de carne
• Microplaca recubierta de boldenona
• Refrigerador
• Incubador
• Pipetas de 10,20,100 y 1000 µL
• Evaporador rotatorio de gas
nitrógeno
• Vorterizador
• Balanza
• Lector de placa de
microtitulación
(Espectrofotómetro)
• Registros
• Guantes de Látex
• Cuchillo
• Cooler
• Etiquetas
• Papel aluminio
• Bolsas herméticas estériles
• Gel refrigerante
25
Figura 3. Vista satelital del Camal
Metropolitano de Quito.
Figura 4. Vista satelital de los
laboratorios de Agrocalidad.
METODOLOGÍA
Características de las zonas de estudio
Localización
El estudio fue realizado en el Camal Metropolitano de Quito, perteneciente a la
Parroquia La Ecuatoriana, Cantón Quito, Provincia Pichincha entre las coordenadas
S 0º19´10.66” W 78º 33'53.23” (ver figura3 ).
El análisis y procesamiento de las muestras se lo realizó en el Laboratorio de
Contaminantes de Productos Pecuarios en AGROCALIDAD, ubicado en la parroquia
Tumbaco, Sector La Granja, Cantón Quito, Provincia Pichincha, entre las
coordenadas N S 0º19´10.66” W 78º 33'53.23” (ver figura 4).
Fuente: Google Earth
26
TIPO DE INVESTIGACIÓN
La investigación es un estudio observacional transversal.
Recolección de información
Identificación de los individuos
Durante el periodo comprendido entre mayo y junio del 2016, se efectuó el muestreo
en el Camal Metropolitano de Quito, los días lunes, miércoles y viernes, destinados a
toma de muestras para el estudio; tomando en cuenta que son los días de
faenamiento bovino.
Para la identificación de los animales se usó una codificación donde se registra la
edad y procedencia del animal, con el fin de tabular los datos en función de los
resultados obtenidos luego del análisis.
Previo al registro, (Anexo 3) y verificación de la procedencia, los bovinos machos de
línea cárnica fueron seleccionados al azar, una vez identificados, se procedió a
determinar la procedencia del individuo, información que se obtuvo de las guías de
movilización emitidas por AGROCALIDAD.
Población y Muestra
La población objetivo de este estudio son los bovinos procedentes del Litoral
Ecuatoriano; la población en estudio son los bovinos de aptitud cárnica,
comprendidos entre 1 a 3 años de edad, faenados en el Camal Metropolitano de
Quito. El número total de muestras fue de 72 bovinos, los cuales fueron
seleccionados por muestreo aleatorio simple (Celis de la Rosa et al., 2014).
En la sala de sacrificio, se determinó la edad de los bovinos por medio de la
observación directa de la dentición (Luengo, 1990); en este estudio se consideró a
animales comprendidos entre 1 a 3 años de edad y con condición corporal de 6 a 9.
Toma de muestras
Durante la inspección veterinaria se tomó las muestras, Braña et al., (2011) indican
que es mejor tomar el músculo semitendinoso, en una proporción de 250 gramos y
27
se envuelven en papel aluminio para preservarlos, se colocan en el cooler con geles
refrigerantes para transportarlos hacia el laboratorio a temperatura de 2-4°C para
mantener la cadena de frio, y se someten a congelación en el laboratorio para su
posterior procesamiento y análisis.
TRABAJO DE LABORATORIO
Realización de la Prueba Elisa
(Tomado de "Boldenone ELISA Test Kit Manual “de la Corporación Científica BIOO)
La primera fase del análisis de laboratorio correspondió a la preparación de las
muestras y la extracción del analito de interés, se redujo el tamaño de la muestra y
se tomó una porción representativa para la Determinación de Boldenona. La segunda
fase del estudio consistió en la lectura de la placa ELISA que fue ejecutada con la
ayuda de personal del laboratorio ambas fases se desarrollaron de acuerdo al
protocolo establecido en el inserto del kit “Boldenone ELISA Test Kit Manual” de la
Corporación Científica BIOO, y se indica a continuación:
Protocolo para uso del Kit Elisa de boldenona
Preparación de la muestra
1) Preparación de 1X PBS.
Mezclar 1 volumen del 10X PBS con 9 volúmenes de agua destilada.
2) Preparación del tampón de equilibrio de la muestra 1X
Añadir 10 ml de tampón de equilibrio de la muestra I y 62 g del tampón de equilibrio
de la muestra II (polvo), en una botella plástica de 250 ml. Añadir 190 ml de agua
destilada a la botella, mezclar bien para obtener una solución homogénea.
Preparación de los reactivos
Todos los reactivos deben ser llevados a temperatura ambiente antes de usarse.
Las soluciones pueden prepararse antes de realizar la prueba ELISA, preparar los
volúmenes de acuerdo a los pocillos y muestras que se van a correr; no retornar los
reactivos a los envases.
28
1. Preparación del anticuerpo conjugado 1X HRP #2
Mezclar 1 volumen del anticuerpo conjugado #2 con 99 volúmenes del
diluyente.
2. Preparación de la Solución de lavado 1X
Mezclar 1 volumen de solución de lavado 20 X con 19 volúmenes de agua
destilada.
3. Preparación de los Estándares de boldenona
Preparar las soluciones seriadas de boldenona a partir de la solución estándar de
450 partes por billón (ppb), empezar desde la concentración más alta a la
concentración más baja en tubos de 2 ml, mezclar cada tubo y agitar por 30
segundos.
EXTRACCIÓN DEL ANALITO
Una vez en el laboratorio, las muestras deben reducirse a fragmentos de 1
cm2, y molerlas para obtener un pool de cada muestra.
1. Pesar 2 g de muestra homogenizada.
2. Añadir 6 ml de Acetonitrilo y 2.5 ml de tampón de equilibrio de la muestra
1X.
3. Vorterizar por 3 minutos a velocidad máxima.
4. Centrifugar por 10 minutos a 4000 x g (unidad de gravedad) a
temperatura ambiente (20-25°C), transferir 3 ml del sobrenadante a un
nuevo tubo.
5. Añadir 300 mg de tejido limpio en la mezcla y vorterizar por 30 segundos,
dejar a temperatura ambiente por 5 minutos.
6. Centrifugar por 10 minutos a 4000 x g (unidad de gravedad) a
temperatura ambiente (20-25°C).
7. Transferir 2.4 ml de sobrenadante a un nuevo tubo, secar la muestra con
gas nitrógeno con rotavapor en una baño María de 50-60°C.
8. Añadir 300 L de 1X PBS, vorterizar por 30 segundos a máxima
velocidad.
9. Usar 50 L de la muestra para el ensayo.
29
Prueba ELISA para Boldenona
1. Añadir 50 L de los estándares de boldenona por duplicado dentro de los
diferentes pocillos.
2. Añadir 50 L de cada muestra por duplicado dentro de los pocillos.
3. Añadir 100 L del anticuerpo #1 y mezclar bien balanceando suavemente la
placa en forma manual por 1 minuto.
4. Incubar la placa por 30 minutos a temperatura ambiente.
5. Lavar la placa 3 veces con 250 L de solución de lavado, luego en el último
lavado invertir la placa y secar suavemente con una toalla de papel.
6. Añadir 150 L de solución de anticuerpo #2 (1X), incubar la placa por 30
minutos a temperatura a temperatura ambiente (20-25 °C).
7. Lavar la placa 3 veces con 250 L 1X de solución de lavado, luego en el último
lavado invertir la placa y secar suavemente con una toalla de papel.
8. Añadir 100 L de sustrato TMB y cronometrar la reacción inmediatamente
luego de añadido el sustrato; mezclar la solución agitando suavemente en
forma manual por 1 minuto mientras se incuba a temperatura ambiente.
9. Luego incubar por 15 minutos a temperatura ambiente (20-25 °C), añadir 100
L de tampón de parada para detener la reacción enzimática.
10. Leer la placa lo más pronto posible luego de la adición del tampón de parada
en un lector de placas ELISA a una longitud de onda de 450 nanómetros (nm).
Calculo de la concentración de Boldenona
Se usa el promedio de absorbancia relativo de cada muestra para determinar la
concentración correspondiente del fármaco analizado en nanogramos por mililitro
(ng/ml) y con esto se construye una curva logarítmica, en base a los resultados de
positividad y negatividad obtenidos del análisis.
Se utiliza la siguiente fórmula:
30
Después del proceso y lectura de la placa ELISA se obtienen los resultados y se
determina la presencia de hormona y sus niveles en µg/kg. (Ver Anexo 5).
Interpretación de resultados
Los datos obtenidos se registraron en tablas simples, y cuadros realizados en el
software Microsoft Excel 2013 expresados en porcentaje.
Financiamiento
Este trabajo fue financiado por la Agencia Ecuatoriana de Aseguramiento de la
Calidad del Agro (AGROCALIDAD) en un 80% y parcialmente por el autor el 20%.
31
CAPITULO IV
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
En el presente trabajo de investigación se confirmó la presencia de residuos de
boldenona en el tejido muscular (carne) por el método ELISA; en bovinos que se
faenaron en el Camal Metropolitano de Quito, utilizando el Kit Elisa específico-
cuantitativo para boldenona de la Corporación Científica BIOO, donde todos los
individuos muestreados resultaron positivos representando el 100%, con un nivel
promedio de residuos de fármaco (boldenona) encontrado en este estudio de
1,33µg/kg; el nivel más bajo encontrado es de 0,2 µg/kg y el nivel más alto es de
35µg/kg, lo que indica que se utiliza boldenona en bovinos procedentes del litoral
con el fin de acelerar el crecimiento y producción de los animales.
Cuadro 1. Número y porcentaje de positividad de individuos analizados.
Muestra Número %
Muestras Positivas 72 100%
Muestras Negativas 0 0%
Total 72 100%
Elaboración: El autor
Fuente: Laboratorio de Contaminantes de Productos Pecuarios (AGROCALIDAD).
Presencia de residuos de boldenona en función de la edad
De las 72 muestras de los bovinos faenados en el Camal Metropolitano de Quito,
analizadas en el Laboratorio de Contaminantes de Productos Pecuarios de
AGROCALIDAD, del 100%, (72/72); el 87,5% (63/72) corresponde a juveniles (1-
2años de edad) y el 12,5% (09/72) a adultos(2-3 años).
De acuerdo a esta clasificación se encontró, que el uso de boldenona se realiza en
las 2 categorías etarias, con un nivel promedio de 1,33 µg/kg de tejido, como
mencionan Larrea et., al (2007) que el uso de sustancias de tipo hormonal, aceleran
el crecimiento de los bovinos, gracias a su efecto anabólico. En los bovinos juveniles,
de una edad de 1-2 años representando el 87,5% (63/72) presentaron niveles
promedio de 1,39µg/kg, los mismos concuerdan con un estudio que realizaron Mora
32
et., al (2009) en el que determinaron que se utilizan con una mayor frecuencia en
bovinos juveniles los fármacos de tipo hormonal, acortando el tiempo de producción.
En cuanto a los bovinos adultos de 2-3 años de edad representando, el 12,5%
(09/72) presentó en promedio niveles de boldenona de 0,93 µg/kg.
Cuadro 2. Niveles promedio de concentración de boldenona de 72 bovinos faenados
en el Camal Metropolitano de Quito.
Parámetro Juveniles(1-2 años) Adultos(2-3 años)
Número de animales 9 63
Nivel promedio (µg/kg) 1,39 0,93
Nivel promedio (µg/kg) juveniles-adultos 1,33
Los resultados de presencia de residuos se muestran a continuación.
Cuadro 3. Distribución de residuos de boldenona según la edad de 72 bovinos
faenados en el Camal Metropolitano de Quito.
Parámetro
Adultos (2-3años) Juveniles (1-2años) Total
Número de
Animales
Positivos
Porcentaje
Número de
Animales
Positivos
Porcentaje
Número de
Animales
Positivos
Porcentaje
Presencia de
residuos 09 12,5% 63 87,5% 72 100%
Negativos - - - - - -
Total 09 12,5% 63 87,5% 72 100%
Presencia de residuos de boldenona en función a la procedencia.
Elaboración: El autor
Fuente: Laboratorio de Contaminantes de Productos Pecuarios (AGROCALIDAD).
Elaboración: El autor
Fuente: Laboratorio de Contaminantes de Productos Pecuarios (AGROCALIDAD).
33
De los 72 bovinos que se tomaron para este proyecto de investigación, el 68%
(49/72) proceden de Santo Domingo, el 20,8% (15/72) proceden de la provincia de
Manabí, y el 11,2% (08/72) corresponde a la provincia de Esmeraldas, coincidiendo
con Bolaños et., al (2010) que la cantidad de residuos hallados en tejidos animales
se debe a que los animales están expuestos por periodos prolongados de principio
activo.
El nivel más bajo encontrado fue de los bovinos procedentes de Manabí y Santo
Domingo que presentan un nivel de 0,2 µg/kg, el nivel más alto encontrado fue de
35,3µg/kg en Esmeraldas, pero únicamente se encontró en una muestra, al ser un
nivel demasiado elevado se considera que existió un secuestro farmacológico, es
decir la acumulación exagerada de fármaco en un sitio del organismo,
presumiblemente por administración del fármaco de 1-2 días antes de su sacrificio
(Sumano & Ocampo, 2006).
Cuadro 4. Distribución porcentual de los niveles de boldenona en bovinos de carne
faenados en el Camal Metropolitano de Quito en función de la procedencia.
Parámetro
Manabí Santo Domingo Esmeraldas Total
Número
de
Animales
Positivos
Porcentaje
Número
de
Animales
Positivos
Porcentaje
Número
de
Animales
Positivos
Porcentaje
Número de
Animales
Positivos
Porcentaje
Presencia de residuos
de boldenona
15 20,8% 49 68% 08 11,2% 72 100%
Negativos - - - - - - - -
Total 15 49 08 72 100%
Elaboración: El autor
Fuente: Laboratorio de Contaminantes de Productos Pecuarios (AGROCALIDAD).
34
Presencia de residuos de boldenona en bovinos de carne faenados en el Camal
Metropolitano de Quito en función de la edad y procedencia.
En el cuadro 5, se reporta la presencia de niveles de residuos de boldenona, en
función a la edad y procedencia de los bovinos que se tomaron para este estudio.
Cuadro 5. Distribución porcentual de los niveles de boldenona encontrados en los
bovinos faenados en el Camal Metropolitano de Quito en función de edad y
procedencia.
Presencia de
niveles de
boldenona.
Manabí
0,70 µg/kg
Santo Domingo
0,87µg/kg
Esmeraldas
5,23 µg/kg* Total
Pos. 20,8% Pos. 68% Pos. 11,2% Pos. 100%
Juveniles
(1-2 años) 14 19,4% 44 61% 5 7% 63 87,5%
Adultos
(2-3 años) 1 1,4% 5 7% 3 4,2% 9 12,5%
Total 15 20,8% 49 68% 8 11,2% 72 100%
.
Al analizar la distribución en base a la procedencia y edad se obtiene que, para
Santo Domingo existe un 68 % de animales positivos, de este porcentaje el 61%
corresponde a juveniles y el 7% a animales adultos y un nivel promedio de 0,875
µg/kg; seguido de Manabí el 20,8% de animales resultaron positivos a la presencia
de residuos de boldenona, de este porcentaje un 19,4% corresponde a juveniles y un
1,4% a adultos, con un nivel promedio de 0,70 µg/kg; y Esmeraldas con un 11,2% de
animales positivos, el 7% corresponde a juveniles y el 4,2% a animales adultos, con
un nivel de 5,23 µg/kg (el nivel es muy elevado debido a que una muestra presentó
un nivel de 35,3 µg/kg en esta provincia), De tal manera se observa que en las zonas
de donde provienen los animales de edades diferentes se usan fármacos hormonales
como promotores del crecimiento como lo mencionan, Talero et.,al (2014) que los
Elaboración: El autor
Fuente: Laboratorio de Contaminantes de Productos Pecuarios (AGROCALIDAD).
35
agentes farmacológicos veterinarios se usan de forma reiterativa sin control técnico
adecuado.
Tabla 1. Tabla comparativa del nivel de residuos de boldenona (método ELISA),
encontrado en este estudio, con respecto a México.
País µg/kg en músculo
(Estudio)Ecuador 1,33
México 0,05
En el presente estudio se encontró un nivel promedio de 1,33 µg/kg,
(correspondiendo un nivel de 1,39 µg/kg a animales juveniles y un nivel de 0,93 µg/kg
que corresponde a animales adultos); el nivel máximo de boldenona por el método
ELISA, encontrado en el músculo semitendinoso es de 35,3 µg/kg y niveles mínimos
de 0,2 µg/kg. Con respecto al método usado; Reig (2010), menciona que las pruebas
Elisa son ampliamente usadas como pruebas de monitoreo, debido a su
especificidad, rapidez y gran número de muestras que se analizan de forma
simultánea. Se compara el nivel promedio del estudio (1,33 µg/kg) con el nivel
permitido en México y se estima un nivel de exceso de 1,28 µg/kg.
Elaboración: El autor
Fuente: Norma oficial Mexicana.
36
CAPITULO V
CONCLUSIONES
En base a los resultados obtenidos en el presente estudio se concluye lo siguiente:
Se determinó la presencia de residuos de boldenona en las 72 muestras de
bovinos analizadas, procedentes del Litoral y faenados en el Camal
Metropolitano de Quito.
El método ELISA detectó niveles de concentración de boldenona más
elevados, en bovinos comprendidos entre 1 - 2 años de edad (juveniles), con
relación a los animales comprendidos entre 2 - 3 años de edad (adultos).
En los bovinos procedentes de las provincias de Manabí y Santo Domingo, se
encontraron niveles bajos de boldenona en comparación a los bovinos
procedentes de la provincia de Esmeraldas.
37
BIBLIOGRAFIA
AGROCALIDAD, Agencia Ecuatoriana de Aseguramiento de la Calidad del Agro
(2013). Plan nacional de vigilancia y control de contaminantes. Quito.
http://www.agrocalidad.gob.ec/
AGROCALIDAD, Agencia Ecuatoriana de Aseguramiento de la Calidad del Agro
(2015), Importaciones de boldenona en Ecuador. Departamento de Registro
de Insumos Pecuarios. http://www.agrocalidad.gob.ec/
AGROCALIDAD, Agencia Ecuatoriana de Aseguramiento de la Calidad del Agro
(2015) Normas para el registro, control, comercialización y uso de productos
veterinarios. http://www.agrocalidad.gob.ec/
Bavera, G; Rocco; Beguet, H; Petrina. (2002). Promotores del crecimiento y
modificadores del metabolismo. Cursos de Producción Bovina de Carne.
Argentina
Campos, A. (2015). Implantes anabólicos, modo de acción y efectos en el bovino de
carne. Universidad Autónoma Agraria Antonio Narro. México
Braña, D.; Ramirez, E.; Rubio, M.; Sánchez, A.; Torrescano, G.; Arenas, M.; Partida,
J.; Ponce, E.; Ríos, F.; (2011). Manual de análisis de calidad en muestras de
Carne. México
BIOO Scientific Corporation (2014).Boldenone ELISA test Kit manual. Austin-Texas
Blasco C, Van-Poucke C, Van-Peteghem C. (2007). Analysis of meat samples for
anabolic steroids residues by liquid chromatography/tandem mass spectrometry.
Journal Chromatography Annual.; pág.: 230-239.
Boldemax, Agrovet Market animal Health, Tiempo de retiro Undecilenato de
Boldenona.http://www.agrovetmarket.com/productos-
veterinarios/documento/boldemax-ap-boldenona-undecilinato-anabolico-accion-
Prolongada/inserto. Consultado mayo, 2016
38
CAN, Comunidad Andina de Naciones. (2010).Decisión 742. Programa Andino para
Garantizar la Seguridad y Soberanía Alimentaria y Nutricional – SSAN Lima-
Perú
Celis de la Rosa, A.; Labrada, V. (2014). Bioestadística (3ra ed.). México D.F.,
México: Manual Moderno. pp. 63-70
Chiesa, L; Pasquale, E; Panseri Sara. (2015). Pseudoendogenous presence of B-
boldenone sulfate and glucuronide in untreated young bulls from the food chain.
Consejo Europeo (1996). Diario Oficial de la Comunidad Europea CEE. Directiva
96/22/CE del parlamento europeo y del consejo. Disposiciones 4, 5,7.; pág.: 56.
Consejo Europeo (14 de octubre de 2003).Diario Oficial de la Comunidad Europea.
(2003) Directiva 2003/74/CE del Consejo, que modifica la Directiva 96/22/CE
del Consejo por la que se prohíbe utilizar sustancias de efecto hormonal y
tireostático y sustancias β-agonistas en la cría de ganado. N°226/17.
Chrusch J, Lee S, Fedeniuk-R, Boison-JO. (2008) Determination of the performance
characteristics of a new multiresidue method for non-steroidal anti-inflammatory
drugs, corticosteroids and anabolic steroids in food animal tissues. Food
additives & contaminants Part A Chemical Analysis, control, exposure & risk
assessment. Pág.: 1482-1496.
Destrez B, Bichon E, Rambaud L, Courant F, Monteau F, Pinel G, Antignac JP, Le
Bizec B. (2009), Criteria to distinguish between natural situations and illegal use
of boldenone, boldenone esters and boldione in cattle 2. Direct measurement of
17beta-boldenone sulphoconjugate in calf urine by liquid chromatography— high
resolution and tandem mass spectrometry. Steroids. Francia.; 74 (10-11): 803-
808.
39
Doyle M. (2005). Veterinary drug residues in processed meats potential health risk.
Food Research Institute, URL: http://www.wisc.edu/ DrgRes.pdf Consultado
mayo de 2016
Ehab, T.; Mohamed S.; Gerbed E.; Somia S. (2011) Effects of maturity on
histopathological alteration after a growth promoter boldenone injection in
rabbits. Egipto.
Euskadi (2012), Evaluación del plan de investigación de Residuos de medicamentos
de uso veterinario en alimento de origen animal en el país Vasco. Pág. 104-123.
Revista Vigila. España.
Fajardo, Á., Méndes, F., & Molina, L. (2011). Residuos de fármacos anabolizantes en
carnes destinadas al consumo humano. Bogotá-Colombia. Universitas
Scientiarum.
FDA, Food and Drugs Administration, (2016) Green Book. Equipoise to Horses.
Approved animal Drugs Products. Consultado julio, 2016
http://www.fda.gov/downloads/AnimalVeterinary/Products/ApprovedAnimalDrug
Products/UCM042860.pdf
FDA, Food and Drugs Administración. (2016) Animal Drugs. Center for Veterinary
Medicine. Products by Active Ingredients. (Testosterone propionate and
Estradiol Benzoate).
http://www.accessdata.fda.gov/scripts/animaldrugsatfda/index.cfm?gb=2
Consultado Julio, 2016.
FAO, Organización de las Naciones Unidas para la Alimentación y Agricultura,
(2016). El papel de la FAO en la sanidad animal, (Consultado Junio, 2016)
Franco J, Romero M, Taborda G. (2008). Determinación de niveles residuales de
tetraciclina en canales bovinos por la técnica de Elisa. Biosalud; pág.: 47-55.
Colombia
40
Furusawa N. (2009) Harmless method for determining trenbolone acetate together
with 17beta-trenbolone in beef. Journal of Chromatography. pág.: 243-246.
Granja, R. (2014). Liquid Chromatography/Tandem Mass Spectrometry Method to
Determine Boldenone in Bovine Liver Tissues. Brasil.
Gerbie-MV. (1981) Management of the adolescent girl exposed in utero to DES.
Pediatry Annual.; pág.: 23-26.
Herbst-AL, Scully-RE, Robboy-SJ (1979). Prenatal diethylstilbestrol exposure and
human genital tract anormalities, National Cancer Institute monograph.; pág. 25-
35.
ICA Instituto Colombiano Agropecuario (1998). Comité Nacional del Codex
Alimentarius. Colombia.; 23-90.
ICA, Instituto Colombiano Agropecuario (2001). Grupo de inocuidad de las cadenas
agroalimentarias pecuarias, Bogotá –Colombia.
IIDESO, Instituto de investigación de sur occidente. (Noviembre de 2008)Universidad
de San Carlos de Guatemala. Centro Universitario de Sur Occidente
Dirección general de investigación. Determinación de esteroides anabólicos
en carne de ganado bovino proveniente de la región sur occidental de
Guatemala. Mazatenango, Biblioteca Virtual DIGI.
http://digi.usac.edu.gt/bvirtual/ Consultado junio 2016
JECFA. Joint FAO/WHO Expert Committee on Food Additives, Evaluation of certain
veterinary drug residues in food, and adverse effects to consumers WHO
Technical Report Series. 2000; pág.: 12-45.
JEFCA Codex Alimentarius/Food and Agriculture Organisation (FAO). (Julio, 2015)
Residuos de Medicamentos Veterinarios en los alimentos
41
http://www.fao.org/fao-who-codexalimentarius/standards/vetdrugs/es/
Actualizado hasta la 38a Reunión de la Comisión del Codex Alimentarius
INEN, Instituto Ecuatoriano de Normalización, (1984). Norma 776: Muestreo para
carne y derivados. Quito-Ecuador. www.normalizacion.gob.ec/ Consultado
mayo 2016
Kabir-J, Umoh V, Audu-okoh E, Umoh J, Kwaga J. (2004) Veterinary drug use in
poultry farms and determination of antimicrobial drug residues in commercial
eggs and slaughtered chicken in Kaduna State, Nigeria. Food Control.; pag.: 99-
105.
Kooper, G.; Calderón G.; Schneider S.; Domínguez, W.; Gutiérrez, G.;(2009).
Enfermedades transmitidas por alimentos y su impacto socioeconómico. Roma.
Larrea, F., & Chirinos, M. (2007). Impacto en el humano de aditivos hormonales
empleados en bovinos productores de carne. Revista de investigación clínica,
206-2011.
Lozano, M; Arias, D; (2008).Residuos de fármacos en alimentos de origen animal:
panorama actual en Colombia; Bogotá-Colombia.
Luengo, J.; Aros, C.; Gómez, L.; (1990).Determinación de la edad del bovino según
las características morfológicas de los dientes incisivos. Chile.
MGAP, Ministerio de Ganadería, Agricultura y Pesca. (Agosto, 2015).Listados de
hormonales de venta bajo receta veterinaria Departamento de Control de
Productos Veterinarios. Uruguay. Consultado Julio 2016.
http://www.mgap.gub.uy/
MAPA, Ministerio de Agricultura, Pecuária e Abastecimento. Produtos Veterinários.
(04/2014) Lista de produtos com licenças vigentes. Brasil . Consultado Julio
2016 http://www.agricultura.gov.br/
42
Manual Merck; (2000). Esteroides anabólicos.Barcelona –España 5 edición pág.:
1930.
Manual Merck; (2000). Fármacos agonistas B2. El clenbuterol pág.:1946. Barcelona
España (2000). Quinta edición.
Mitchell-G A, Dunnavan-G. (1998) Illegal Use of b-Adrenergic Agonists in the United
States, Journal Animal Scientific. pág.: 208-211.
Mora, F.; Silva, P. ;(2009) Evaluación del efecto de tres productos anabólicos y un
antígeno bacteriano en novillos de engorde en la hacienda Isabela del ingeniero
Vinicio Arteaga, ubicada en la provincia de Santo Domingo de los Tsáchilas,
UDLA, Quito-Ecuador
NIH; National Institute on Drug Abuse. (Marzo, 2016). Drug Facts. Esteroides
anabólicos. https://www.drugabuse.gov/es/publicaciones/drugfacts/los-
esteroides-anabolicos
Perez, B; López, P. (2002). Salud Humana y xenobióticos animales. Universidad
Complutense de Madrid y Universidad de Zaragoza. España.
OIE Organización Mundial de Sanidad Animal. (2016)Código Sanitario para los
Animales Terrestres. Control de peligros asociados a la alimentación animal que
constituyen una amenaza para la salud de las personas y sanidad de los
animales. Capítulo 6,3, Versión electrónica http:www.oie.int/es/seguridad-
sanitaria-de-los-alimentos/ Consultado julio, 2016.
OIE, Organización Mundial de Sanidad Animal. (2015).Inocuidad de los alimentos.
http://www.oie.int/fileadmin/Home/esp/Media_Center/docs/pdf/Fact_sheets/FOO
D_ES.pdf
43
OMS, Organización Mundial de la Salud. Organización Mundial de la Salud. (2001).
Riesgos de los productos químicos y seguridad alimentaria. Documento de
trabajo para la planificación estratégica de la seguridad alimentaria.
OMC, (2013). Organización Mundial del Comercio. Medidas sanitarias de los
productos cárnicos.
Ortega C., De Meneghi D., Balogh K., De la Rosa M. (3), Estol L. , Leguia G.,
Fonseca A., Torres M., Caballero M. 2004, Importancia de la salud pública
veterinaria en la actualidad: el proyecto SAPUVET, Revista científica y técnica
OIE.
Papich, G. M. Saunders Handbook of veterinary drugs, Small and Large Animal,
United States; Elsevier, 2011; pág 76-77
Pulce-C,Lamaison-D, Keck-G, Bostvironnois-C,Nicolas J. (2006). Collective human
food poisonings by clenbuterol residues in veal liver, Veterinary Human
Toxicology. 1991; pág.: 480-481.
Rainer, S. (2011). Hormones in meat: different approaches in the Europe Union and
in the USA. Apmis.
Ramón, G. (2008). Enciclopedia Bovina. México DF., MX Universidad Autónoma de.
México: Mc Graw-Hill. México
Reig, M. (2010). Desarrollo de métodos rápidos de detección de residuos
medicamentosos en animales de granja. Valencia-España
Rico, S.; Ferraro, D. (2000); Residuos de Medicamentos de Uso Veterinario.
APROCAL. Argentina
44
Rodríguez, Y. (2010). Determinación de esteroides anabólicos en carne de ganado
porcino proveniente de la región sur occidental de Guatemala.
SAG (2016) Servicio Agrícola y Ganadero. Sistema de Medicamentos Veterinarios
ILIUM BOLDEBAL-H (Boldenona Undecilenato 5%) Consultado julio 2016.
http://medicamentos.sag.gob.cl/ConsultaUsrPublico/BusquedaMedicamentos_1.
asp
SAGARPA Secretaria de Agricultura, Ganadería, Desarrollo rural, Pesca y
Alimentación. (2011).Norma Oficial Mexicana NOM-0404-ZOO. Límites
Máximos Permisibles y procedimientos de muestreo. Diario Oficial.
Sawaya WN, Lone K, Saeed T, Husain A, Khalafawi S. (1998). Application of an
enzyme-linked immunosorbent assay for screening of sheep urine and animal
tissue for the androgenic steroid trenbolone acetate in the State of Kuwait. Food
additives & Contaminants. págs: 151-156.
SENASA. (Abril 2016). Argentina Servicio Nacional de Sanidad y Calidad
Agroalimentaria. Coordinación de Vigilancia y Alertas de Residuos y
contaminantes Plan CREHA, Argentina http://www.senasa.gov.ar/. Consultado
julio- 2016
SENASA. Perú, Base de datos de Productos Pecuarios registrados. Perú 2014.
http://www.senasa.gob.pe/senasa/productos-registrados/ Consultado junio 2016
SENACSA, Servicio Nacional de Calidad y Salud Animal, Vademécum Veterinario
Oficial Dirección general de servicios técnicos; y Dirección de registro y control
de productos farmacológicos de uso veterinario, Marzo 2016. Consultado en
julio 2016, http://www.senacsa.gov.py/
Talero-Pérez, V.; Medina, O.; Rozo-Nuñez, W. (2014) Técnicas analíticas contemporáneas para la identificación de residuos de sulfonamidas, quinolonas y cloranfenicol, Universitas Scientiarum. Universidad Pedagógica y Tecnológica de Colombia-Colombia.
45
USDA, United States of Agriculture Departament. Meat Safety & Quality Research.
http://www.ars.usda.gov/main/main.htm Consultado junio 2016
USDA, United States of Agriculture Departament U.S. Residue Limits for Veterinary
Drugs, Food Additives, and Unavoidable Contaminants in meat, poultry, and egg
products. Apendixxe IV. United States, 2015
Velásquez, N; Fernández, M. (2004). Efectos poco publicados de los estrógenos.
(Revisión). Universidad de Zulia y Hospital Chiquinquirá de Maracaibo. Revista
de Obstetricia y Ginecología. Caracas-Venezuela.
Xia, M.; Reale, E.; Gao, H.; Wang, X.; Lui, Q.; Zhang, X. (2007). Simultaneus
determination of trembolone, Boldenone and Progesterone in animal food by
HPLC-MS.
Xu-C L, Chu-X G, Peng-C F, Jin-Z Y, Wang-L Y. (2006). Development of a faster
determination of 10 anabolic steroids residues in animal muscle tissues by liquid
chromatography tandem mass spectrometry.Journal of pharmaceutical and
biomedical analysis; pág.: 616-621
46
ANEXOS
ANEXO 1.
Autorización de ingreso al Camal Metropolitano
47
ANEXO 2.
Autorización y orden de trabajo Agencia Ecuatoriana de Aseguramiento de la
Calidad del Agro. (AGROCALIDAD)
48
49
50
51
52
ANEXO 3.
Registro de toma de muestras
Formulario para toma de muestras y resultados
53
ANEXO 4.
Toma de muestras y procesamiento
Selección de animales con PCC 6-9 (machos) Fuente: Camal Metropolitano de Quito Elaboración: El Autor
Animal seleccionado con PCC 8 Fuente: Camal Metropolitano de Quito Elaboración: El Autor
Observación de la dentición de los animales a muestrear 1-3 años) Fuente: Camal Metropolitano de Quito Elaboración: El Autor
Bovino con características ideales de edad, procedencia y línea cárnica Fuente: Camal Metropolitano de Quito Elaboración: El Autor
54
Edad fisiológica del bovino. Abundante cartílago esternal, Hueso esponjoso y coloración rojiza. Bovino de 1-1 ½ año Fuente: Camal Metropolitano de Quito Elaboración: El Autor
Sitio de toma de la muestra (músculo semitendinoso) Fuente: Camal Metropolitano de Quito Elaboración: El Autor
Muestra envuelta, etiquetada en funda estéril Fuente: Camal Metropolitano de Quito Elaboración: El Autor
Almacenamiento de las muestras en el cooler a temperatura de 2-4°C Fuente: Camal Metropolitano de Quito
55
Elaboración: El Autor
Procesamiento
Descongelación y retiro de fascias Fuente: Laboratorio de Contaminantes de Productos Pecuarios (AGROCALIDAD) Elaboración: El Autor
Tejido muscular troceado Fuente: Laboratorio de Contaminantes de Productos Pecuarios (AGROCALIDAD) Elaboración: El Autor
Molido del tejido muscular. Fuente: Laboratorio de Contaminantes de Productos
Pecuarios (AGROCALIDAD) Elaboración: El Autor
Almacenado de pool Fuente: Laboratorio de Contaminantes de Productos
Pecuarios (AGROCALIDAD) Elaboración: El Autor
56
Obtención de 2 g de la muestra previamente molida Fuente: Laboratorio de Contaminantes de Productos
Pecuarios (AGROCALIDAD) Elaboración: El Autor
Almacenamiento de la muestra que se analizará en tubos de centrifugación. Fuente: Laboratorio de Contaminantes de Productos
Pecuarios (AGROCALIDAD) Elaboración: El Autor
Kit Elisa para Boldenona. BIOO. Fuente: Instructivo de Kit para boldenona
Reactivos para Elisa de Boldenona. Fuente: Instructivo de Kit para boldenona
57
Placa para ELISA y pipeta. Fuente: Laboratorio de Contaminantes de Productos
Pecuarios (AGROCALIDAD)
Muestras para análisis ELISA de boldenona procesada Fuente: Laboratorio de Contaminantes de Productos Pecuarios (AGROCALIDAD)
Espectrofotómetro.
Fuente: Laboratorio de Contaminantes de Productos
Pecuarios (AGROCALIDAD)
Lectura de placa y en el Espectrofotómetro
Fuente: Laboratorio de Contaminantes de Productos
Pecuarios (AGROCALIDAD)
58
ANEXO 5.
Resultados Oficiales por método ELISA.
59
60
61
