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UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE ODONTOLOGÍA
CARRERA DE ODONTOLOGÍA
Efecto inhibitorio de la infusión de Anís Estrellado (Illicium
verum) sobre la Porphyromonas gingivalis. Estudio in vitro
Proyecto final de investigación presentado como requisito previo a la obtención del título
de: Odontóloga
AUTORA: Karina Estefanía Verdezoto Sánchez
TUTORA: Dra. Mariela Cumandá Balseca Ibarra
Quito, Febrero 2020
ii
DERECHO DE AUTOR
Yo, Karina Estefanía Verdezoto Sánchez, en calidad de autora y titular de los derechos
morales y patrimoniales del trabajo de titulación “EFECTO INHIBITORIO DE LA
INFUSIÓN DE ANÍS ESTRELLADO (ILLICIUM VERUM) SOBRE LA
PORPHYROMONAS GINGIVALIS. ESTUDIO IN VITRO”, modalidad Proyecto de
Investigación, de conformidad con el Art.114 del CÓDIGO ORGÁNICO DE LA
ECONOMÍA SOCIAL DE LOS CONOCIMIENTOS, CREATIVIDAD E INNOVACIÓN,
concedo a favor de la Universidad Central del Ecuador una licencia gratuita, intransferible y
no exclusiva para el uso no comercial de la obra, con fines estrictamente académicos.
Conservo a mi favor todos los derechos de autor sobre la obra, establecidos en la normativa
citada.
Así mismo, autorizo a la Universidad Central del Ecuador para que realice la digitalización
y publicación de este trabajo de titulación en el repositorio virtual, de conformidad a lo
dispuesto en el Art. 144 de la Ley Orgánica de Educación Superior.
El autor declara que la obra objeto de la presente autorización es original en su forma de
expresión y no infringe el derecho de autor de terceros, asumiendo la responsabilidad por
cualquier reclamación que pudiera presentarse por esta causa y liberando a la Universidad
de toda responsabilidad.
Firma: ________________________
Karina Estefanía Verdezoto Sánchez
CC. 0202511929
Dirección electrónica: [email protected]
iii
APROBACIÓN DEL TUTOR DEL TRABAJO DE GRADO
Yo, Dra. Mariela Cumandá Balseca Ibarra, en mi calidad de tutora del trabajo de titulación,
modalidad de Proyecto de Investigación, elaborado por Karina Estefanía Verdezoto
Sánchez; cuyo título es “EFECTO INHIBITORIO DE LA INFUSIÓN DE ANÍS
ESTRELLADO (ILLICIUM VERUM) SOBRE LA PORPHYROMONAS GINGIVALIS.
ESTUDIO IN VITRO”, previo a la obtención de grado en Odontología, considero que el
mismo reúne los requisitos y méritos en el campo metodológico y epistemológico, para ser
sometido a la evaluación por parte del tribunal examinador que se designe, por lo que
APRUEBO, a fin de que el trabajo sea habilitado para continuar con el proceso de titulación
determinado por la Universidad Central del Ecuador.
En la ciudad de Quito a los 20 días del mes de diciembre del 2019
Dra. Mariela Cumandá Balseca Ibarra
DOCENTE-TUTOR
CI. 1713718664
iv
APROBACIÓN DE LA PRESENTACIÓN ORAL/TRIBUNAL
El Tribunal constituido por: (Presidente del tribunal), (Vocal de tribunal), Dra. (Vocal del
tribunal). Luego de receptar la presentación oral del trabajo de titulación previo a la
obtención del título (o grado académico) de Odontóloga presentado por la señorita Karina
Estefanía Verdezoto Sánchez. Con el título: EFECTO INHIBITORIO DE LA INFUSIÓN
DE ANÍS ESTRELLADO (ILLICIUM VERUM) SOBRE LA PORPHYROMONAS
GINGIVALIS. ESTUDIO IN VITRO
.
Emite el siguiente veredicto: ………………………………………..
Fecha:
Para constancia de lo actuado firman:
Nombre y Apellido Calificación Firma
Presidente Dr. …………………… ………………..
Vocal 1 Dr. …………………… ………………...
Vocal 2 Dra. …………………… …………………
v
DEDICATORIA
Este logro primero lo dedico a Dios, que siempre me dio sabiduría para seguir adelante y siempre
estuvo a mi lado.
A mi Madre Gricelda que me apoyo incondionalmente con su esfuerzo y sacrificio me ayudo a cumplir
mi sueño a ella le debo todo en esta vida.
A mi Padre Pedro, siempre me guio por el camino correcto, él es mi mayor ejemplo de lucha diaria.
Mis adoradas hijas Victoria y Fiorella que son mi motor para seguir adelante y nunca rendirme, a
ellas les dedico cada uno de mis triunfos.
A mi suegra Sary que siempre me apoyo y nunca me dejo sola siempre fue como una segunda madre
sin su ayuda esto no hubiese sido posible
Mis queridos cinco hermanos German, Walter, Rolando, Jimmy, Fernando que creyeron en mí.
Gracias Familia! Son mi más grande bendición
Karina Estefanía Verdezoto Sánchez
vi
AGRADECIMIENTOS
Le agradezco a Dios por haberme permitido culminar mi carrera, a mis padres y hermanos
por haberme acompañado durante esta larga trayectoria y estar junto a mí apoyándome a
cumplir este gran sueño.
A la familia Suarez Vera que me acompañaron a lo largo de este camino sin dejarme sola
ningún instante, los quiero infinitamente.
A mi hermosa Universidad Central del Ecuador donde obtuve grandes conocimientos de mi
hermosa profesión, a cada uno de mis maestros que me guiaron para llegar a ser una gran
profesional.
A mi tutora Dra. Mariela Balseca por brindarme sus conocimientos y guiarme para realizar
esta investigación.
Mis amigos que siempre estuvieron ahí apoyándome para nunca rendirme y cumplir mi
anhelado sueño.
vii
ÍNDICE DE CONTENIDOS
DERECHO DE AUTOR ....................................................................................................... ii
APROBACIÓN DEL TUTOR DEL TRABAJO DE GRADO ............................................ iii
APROBACIÓN DE LA PRESENTACIÓN ORAL/TRIBUNAL ....................................... iv
DEDICATORIA .................................................................................................................... v
AGRADECIMIENTOS ........................................................................................................ vi
ÍNDICE DE CONTENIDOS ............................................................................................... vii
LISTA DE TABLAS ............................................................................................................. x
LISTA DE FIGURAS .......................................................................................................... xi
LISTA DE GRÁFICOS ....................................................................................................... xii
LISTA DE ANEXOS ......................................................................................................... xiii
RESUMEN ......................................................................................................................... xiv
ABSTRACT ........................................................................................................................ xv
INTRODUCCIÓN ................................................................................................................. 1
CAPITULO I ......................................................................................................................... 3
1. EL PROBLEMA ............................................................................................................ 3
1.1. Planteamiento del problema .................................................................................... 3
1.2. Objetivos ................................................................................................................. 4
1.2.1. Objetivo general .............................................................................................. 4
1.2.2. Objetivos específicos ....................................................................................... 4
1.3. Justificación ............................................................................................................ 5
1.4. Hipótesis ................................................................................................................. 6
1.4.1. Hipótesis de investigación (H1) ...................................................................... 6
1.4.2. Hipótesis nula (H0) .......................................................................................... 6
CAPÍTULO II ........................................................................................................................ 7
2. MARCO TEÓRICO ....................................................................................................... 7
viii
2.1. Enfermedad periodontal .......................................................................................... 7
2.1.1. Manifestación clínica ....................................................................................... 7
2.2. Porphyromonas gingivalis ...................................................................................... 8
2.2.1. Taxonomía ....................................................................................................... 8
2.2.2. Morfología ....................................................................................................... 9
2.2.3. Factores de virulencia ...................................................................................... 9
2.3. Anís Estrellado (Illicium verum) ........................................................................... 10
2.3.1. Descripción .................................................................................................... 10
2.3.2. Componentes ................................................................................................. 10
2.3.3. Usos ............................................................................................................... 11
2.3.4. Efectos adversos y contraindicaciones .......................................................... 12
2.4. Clorhexidina .......................................................................................................... 12
1.2.1. Composición .................................................................................................. 12
1.2.2. Mecanismo de acción .................................................................................... 13
1.2.3. Reacciones adversas ...................................................................................... 13
CAPÍTULO III .................................................................................................................... 14
3. METODOLOGÍA ........................................................................................................ 14
2.1. Diseño de la investigación .................................................................................... 14
2.2. Población de estudio ............................................................................................. 14
2.3. Selección y tamaño de la muestra ......................................................................... 14
2.4. Criterios de inclusión y exclusión ......................................................................... 14
2.5. Conceptualización de variables............................................................................. 15
2.5.1. Variable dependiente ..................................................................................... 15
2.5.2. Variables independientes ............................................................................... 15
2.6. Operacionalización de variables ........................................................................... 16
2.7. Estandarización ..................................................................................................... 17
2.8. Manejo y métodos de recolección de datos .......................................................... 17
ix
2.9. Prueba piloto ......................................................................................................... 25
2.10. Análisis estadístico ............................................................................................ 25
2.11. Aspectos bioéticos, metodológicos y jurídicos ................................................. 26
CAPÍTULO IV .................................................................................................................... 28
3. ANÁLISIS E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS ............................................ 28
3.1. Resultados descriptivos ......................................................................................... 28
3.2. Resultados estadísticos ......................................................................................... 30
3.3. Discusión .............................................................................................................. 34
CAPÍTULO V ..................................................................................................................... 37
4. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES ........................................................... 37
4.1. Conclusiones ......................................................................................................... 37
4.2. Recomendaciones ................................................................................................. 38
BIBLIOGRAFÍA ................................................................................................................. 39
ANEXOS ............................................................................................................................. 42
x
LISTA DE TABLAS
Tabla 1. Datos descriptivos del halo de inhibición (mm) .................................................... 28
Tabla 2. Efecto inhibitorio de las sustancias de estudio sobre Porphyromonas gingivalis a
los diferentes tiempos de inoculación. ................................................................................. 29
Tabla 3. Prueba de normalidad de Shapiro-Wilk ................................................................ 30
Tabla 4. Prueba Wilcoxon del halo de inhibición de las infusiones de Illicium verum....... 31
Tabla 5. Prueba Mann Whitney para muestras independientes ........................................... 32
Tabla 6. Prueba Wilcoxon del efecto inhibitorio de las de la infusión de anís estrellado
(Illicium verum) a concentración del 25%, 50% y 75% sobre cepas de Porphyromonas
gingivalis a las 24 y 48 horas de inoculación. ..................................................................... 32
Tabla 7. Prueba Mann Whitney del efecto inhibitorio de la infusión de anís estrellado con
respecto a la clorhexidina y suero fisiológico ..................................................................... 33
Tabla 8. Comparación del halo de inhibición de las sustancias entre 24 y 48 horas de
inoculación .......................................................................................................................... 33
Tabla 9. Comparación del efecto inhibitoria de las sustancias entre 24 y 48 horas de
inoculación .......................................................................................................................... 34
xi
LISTA DE FIGURAS
Figura 1. Proceso degenerativo de las encías ........................................................................ 7
Figura 2. Porphyromonas gingivalis y su relación con periodontitis .................................... 8
Figura 3. Representación de la estructura de Porphyromonas gingivalis ............................. 9
Figura 4. Representación de Porphyromonas gingivalis y liberación de vesículas secretoras
y productos ............................................................................................................................ 9
Figura 5. Anís estrellado (Illicium verum) .......................................................................... 10
Figura 6. Balanza analítica .................................................................................................. 19
Figura 7. Pesado del anís estrellado .................................................................................... 19
Figura 8. Infusión del anís estrellado (Illicium verum) ....................................................... 19
Figura 9. Cepa de Porphyromonas gingivalis ..................................................................... 20
Figura 10. Siembra en el medio de cultivo .......................................................................... 21
Figura 11. Jarra Gaspack ..................................................................................................... 21
Figura 12. Identificando cada caja Petri de forma alfanumérica ......................................... 22
Figura 13. Discos de papel impregnándolos con las diluciones de la infusión de Illicium
verum al 25%, 50% y 75% .................................................................................................. 22
Figura 14. Clorhexidina (control positivo) y suero fisiológico (control negativo) ............. 23
Figura 15. Colocación de discos en las cajas Petri .............................................................. 23
Figura 16. Cajas Petri en campana de anaerobios ............................................................... 23
Figura 17. Jarras de anaerobiosis con cultivos bacterianos Porphyromonas gingivalis ...... 24
Figura 18. Discos de papel con halos de inhibición ............................................................ 24
xii
LISTA DE GRÁFICOS
Gráfico 1. Halo de inhibición (mm) de las sustancias de estudio sobre Porphyromonas
gingivalis a los diferentes tiempos de inoculación. ............................................................. 29
Gráfico 2. Efecto inhibitorio de las sustancias de estudio sobre Porphyromonas gingivalis a
los diferentes tiempos de inoculación. ................................................................................. 30
Gráfico 3. Prueba Kruskal-Wallis para los halos de inhibición de las sustancias de estudio
en grupos de 24 y 48 horas .................................................................................................. 31
xiii
LISTA DE ANEXOS
Anexo A. Constancia aceptación de la tutoría ..................................................................... 42
Anexo B. Aceptación del tema ............................................................................................ 43
Anexo C. Certificado de la biblioteca de no reflejar coincidencia ...................................... 45
Anexo D. Carta de idoneidad ética y experticia del tutor .................................................... 46
Anexo E. Carta de idoneidad ética y experticia del investigador ........................................ 47
Anexo F. Declaración de conflictos de intereses del tutor .................................................. 48
Anexo G. Declaración de conflictos de intereses del investigador ..................................... 49
Anexo H. Carta de confidencialidad.................................................................................... 50
xiv
TEMA: Efecto inhibitorio de la infusión de anís estrellado (Illicium verum) sobre la
Porphyromonas gingivalis. Estudio in vitro
Autora: Karina Estefanía Verdezoto Sánchez
Tutora: Dra. Mariela Cumandá Balseca Ibarra
RESUMEN
Objetivo: Comprobar el efecto inhibitorio de la infusión de anís estrellado (Illicium verum) al 25%, 50% y 75% sobre la Porphyromonas gingivalis. Metodología: Estudio experimental, in vitro, aplicado sobre una muestra no probabilística conformada por 15 cajas Petri con cultivos de Porphyromonas gingivalis, que se analizaron a las 24 y 48 horas después de la inoculación, colocando 5 discos de papel impregnados con infusión de Illicium
verum al 25%, 50%, 75% de concentración, gluconato de clorhexidina (control positivo) y suero fisiológico (control negativo), respectivamente, que se llevaron a incubación en campana de anaerobiosis a 37ºC, para finalmente determinar el efecto inhibitorio mediante la medición de los halos de inhibición usando una regla milimetrada. Los datos obtenidos fueron analizados estadísticamente por medio del programa SPSS, aplicando la prueba de ANOVA y Kruskall Wallis, con un nivel de confiabilidad de 95% y una significancia del 5%. Resultados: Se evidenció efecto inhibitorio alto de Illicium verum sobre cepas de Porphyromonas gingivalis, encontrando que para las 24 horas reportó halos de inhibición de 14,8 mm al 25%, 16,96 mm al 50% y 18,56 mm al 75%, mientras que a las 48 horas arrojó una medición de 15,18% mm a una concentración de 25%, 17,62 mm al 50% y 19,18 mm al 75%, igual nivel de efectividad alto se obtuvo con el gluconato de clorhexidina al 0,12%, usado como control positivo, mientras que con el suero fisiológico (control negativo) se reportó un efecto leve. Conclusiones: La infusión de anís estrellado (Illicium verum) a diferentes concentraciones posee igual efecto inhibitorio que la clorhexidina al 0,12% y mayor acción inhibitoria que el suero fisiológico frente a las cepas de Porphyromonas
gingivalis, tanto a las 24 como a las 48 horas de inoculación.
PALABRAS CLAVES: INFUSIÓN / ILLICIUM VERUM / PORPHYROMONAS
GINGIVALIS / EFECTO INHIBITORIO / HALOS DE INHIBICIÓN
xv
ABSTRACT
TITTLE: Inhibitory effect of infusion of star anise (Illicium verum) on Porphyromonas
gingivalis. In vitro study
Author: Karina Estefanía Verdezoto Sánchez
Tutor: Dr. Mariela Cumandá Balseca Ibarra
ABSTRACT
Objective: To verify the inhibitory effect of infusion of star anise (Illicium verum) at 25%, 50% and 75% on Porphyromonas gingivalis. Methodology: Experimental study, in vitro, applied on a non-probabilistic sample consisting of 15 Petri dishes with Porphyromonas gingivalis cultures, which were analyzed 24 and 48 hours after inoculation, placing 5 paper discs impregnated with Illicium verum infusion at 25%, 50%, 75% concentration, chlorhexidine gluconate (positive control) and physiological serum (negative control), respectively, which were incubated in anaerobiosis hood at 37 ° C, to finally determine the inhibitory effect by measuring of inhibition halos using a millimeter ruler. The data obtained were statistically analyzed through the SPSS program, applying the ANOVA and Kruskall Wallis test, with a 95% reliability level and a 5% significance. Results: High inhibitory effect of Illicium verum on strains of Porphyromonas gingivalis was found, finding that for 24 hours reported halos of inhibition of 14.8 mm at 25%, 16.96 mm at 50% and 18.56 mm at 75% , while at 48 hours it showed a measurement of 15.18% mm at a concentration of 25%, 17.62 mm at 50% and 19.18 mm at 75%, the same high level of effectiveness was obtained with gluconate 0.12% chlorhexidine, used as a positive control, while with the physiological serum (negative control) a mild effect was reported. Conclusion: The infusion of star anise (Illicium verum) at different concentrations has the same inhibitory effect as 0.12% chlorhexidine and greater inhibitory action than the physiological serum against the strains of Porphyromonas gingivalis, both at 24 and 48 hours of inoculation.
KEYWORDS: INFUSION / ILLICIUM VERUM / PORPHYROMONAS GINGIVALIS /
INHIBITORY EFFECT / INHIBITION HALES
1
INTRODUCCIÓN
La periodontitis se encuentra dentro de las enfermedades crónicas multifactoriales, donde la
capacidad reducida del huésped trae como resultado la aparición de alteraciones en el
periodonto, que puede ser desde una discreta inflamación gingival hasta la pérdida de hueso
de la cresta alveolar (1), formando una biopelícula de origen bacteriano altamente organizada
en un nicho ecológico favorable para el crecimiento y desarrollo (2).
Las principales manifestaciones clínicas de la contaminación y destrucción de los tejidos de
soporte del diente (epitelios, tejido conectivo, ligamento periodontal, hueso alveolar,
cemento radicular), incluyen sangrado, movilidad dental, recesión gingival, formación de
bolsa periodontal, disfunción masticatoria y pérdida del diente (2).
La periodontitis es significante debido a que puede causar la pérdida de dientes, sin embargo,
toda periodontitis inicia con la presencia de una gingivitis y esta puede ser reversible con las
medidas de prevención (3). Se produce por bacterias anaerobias Gram negativas que crecen
dentro del surco gingival (4), encontrando que dentro de la microflora detectable en este tipo
de enfermedad periodontales, las bacterias anaerobias Gram negativas más importantes y
prevalentes en el área subgingival son: Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa),
Porphyromonas gingivalis (Pg), Prevotella intermedia (Pi) y Bacteroides forsythus (Bf),
(4).
Estas bacterias tiene un importante papel en el desarrollo de la periodontitis participando en
la formación de la bolsa periodontal, destrucción del tejido conectivo y reabsorción del hueso
alveolar a través de un mecanismo inmunopatogénico (5), con bacterias habituales a nivel
de la zona gingival del diente, con claro predominio de estreptococos orales de hasta un 82%,
que se encuentran en equilibrio con los tejidos de la encía, cuando se rompe el tejido
conectivo surgen el tipo de enfermedades gingivales ligadas a la placa (4).
La Porphyromonas gingivalis es un bacilo Gram negativo, anaerobio, no-móvil y
asacarolítico, que produce colonias con pigmentaciones marrones en medio de cultivo agar-
sangre. Los niños/as y adolescentes sanos no suelen presentarlo en su microbiota subgingival
(6), para un tratamiento con resultados de la enfermedad periodontal debemos educar en
cuidados de higiene oral y motivar a los pacientes mediante el control preventivo, previo al
2
inicio del tratamiento periodontal (7). El periodoncista o higienista dental quita la placa por
medio de un método de limpieza profunda utilizando ultrasonido posterior a este se realiza
un procedimiento llamado raspado y alisado radicular (8).
Es necesario realizar estudios a largo plazo, para evidenciar si el tratamiento con los
medicamentos disminuye la necesidad de cirugía y se logra resultados eficaces durante
períodos prolongados (8). La periodontitis se considera como una patología crónica, siendo
un desafío la búsqueda de nuevas alternativas de antibioterapia frente a la creciente aparición
de cepas resistentes a los antibióticos comúnmente usados, previniendo reacciones adversas
y contraindicaciones que causan ciertos antibióticos, siendo el reino vegetal el que ofrece
mayor variedad de sustancias potencialmente útiles aplicables a las enfermedades humanas,
en concreto a aquellas producidas por microorganismos (9), que colaboran para el
tratamiento eficaz de la periodontitis.
3
CAPITULO I
1. EL PROBLEMA
1.1. Planteamiento del problema
Porphyromonas gingivalis es una bacteria anaerobia que convive en el área subgingival, la
anatomía, fisiología del surco y las bolsas periodontales, son sitios vigorosos al efecto de
limpieza de la saliva, transformándose en un lugar propicio de estancamiento de bacterias,
las mismas se alimentan de líquido gingival, el cual comprende minerales, carbohidratos,
minerales y vitaminas que promueven el crecimiento de la microbiota del surco (10).
En la actualidad, los agentes antisépticos orales son valorados como un complemento
indispensable en el tratamiento de las enfermedades periodontales y control de la placa
dental, siendo la clorhexidina, la más recomendada por su alta efectividad comprobada, no
obstante, a pesar de proporcionar una eficacia superior a otros elementos, este compuesto
posee efectos adversos como la coloración de los dientes, el dorso de la lengua y alteración
del sentido del gusto (11).
Por esta situación surge la necesidad de recurrir a la fitoterapia, reconocida por la
Organización Mundial de la Salud (OMS) (12) como una ciencia que se ocupa del estudio
de productos vegetales para su uso en la terapia de estados patológicos, debido a su
accesibilidad, su bajo costo y a las experiencias ancestrales acumuladas en el tiempo,
convierten a la fitoterapia mediante el uso de la medicina herbaria, en la principal alternativa
para la atención de la salud (13). La planta de anís estrellado por los efectos
antiespasmódicos, eupépticos, antisépticos y antimicrobianos, resultaría ser un componente
alternativo y efectivo contra bacterias, hongos y levaduras, debido al anetol que es el
principal componente (14).
Sivakumar y cols. (2016) (15) efectuaron un estudio sobre el extracto etanólico y acuoso de
anís estrellado sobre las cepas de Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Bacillus
subtilis y Escherichia coli, determinando actividad antibacteriana en las bacterias estudiadas,
excepto Pseudomonas aeruginosa, la bacteria con máxima zona de inhibición fue Bacillus
subtilis (12,3 mm), por el contrario el extracto acuoso mostró actividad antibacteriana en
4
todas las cepas, menos en Staphylococcus aureus, la zona de mayor inhibición fue en
Escherichia coli (23,3 mm), seguido de Bacillus subtilis (13,3 mm) y Pseudomonas
aeruginosa (8.0 mm), en el estudio concluyeron que los extractos acuosos denotaron mejor
actividad contra los patógenos en comparación al extracto etanólico.
De esta manera surge la siguiente pregunta de investigación:
¿Cuál es el efecto inhibitorio de la infusión de anís estrellado (Illicium verum) en
concentraciones de 25%, 50% y 75% sobre cepas de Porphyromonas gingivalis?
¿Cuál es el efecto inhibitorio de la infusión de anís estrellado (Illicium verum) a diversas
concentraciones sobre cepas de Porphyromonas Gingivalis a las 24 y 48 horas de
inoculación?
¿Cuál es el efecto inhibitorio de la infusión de anís estrellado (Illicium verum) a diferentes
concentraciones, en comparación al control positivo (clorhexidina al 0,12%) y control
negativo (suero fisiológico) sobre cepas de Porphyromonas gingivalis a las 24 y 48 horas de
inoculación?
1.2. Objetivos
1.2.1. Objetivo general
Comprobar el efecto inhibitorio de la infusión de anís estrellado (Illicium verum) al 25%,
50% y 75% sobre la Porphyromonas gingivalis.
1.2.2. Objetivos específicos
i. Evaluar el efecto inhibitorio de la infusión de anís estrellado (Illicium verum) a
concentración del 25%, 50% y 75% sobre cepas de Porphyromonas gingivalis a las 24
horas de inoculación.
5
ii. Identificar la actividad inhibitoria de la infusión de anís estrellado (Illicium verum) a
concentración de 25%, 50% y 75% sobre cepas de Porphyromonas gingivalis a las 48
horas de inoculación.
iii. Comparar el efecto inhibitorio de la infusión de anís estrellado (Illicium verum) a
concentración de 25%, 50% y 75% sobre cepas de Porphyromonas gingivalis a las 24 y
48 horas de inoculación.
iv. Comparar el efecto inhibitorio de la infusión de anís estrellado (Illicium verum) a
diferentes concentraciones, con respecto al control positivo (gluconato de clorhexidina
al 0,12%) y control negativo (suero fisiológico) sobre cepas de Porphyromonas
gingivalis a las 24 y 48 horas de inoculación.
1.3. Justificación
Las enfermedades periodontales son consideradas patologías que ocasionan cuadros clínicos
que perjudican a las estructuras de soporte dental, siendo de origen multifactorial, se
encuentran clasificadas en gingivitis y periodontitis (16). Según la Organización Mundial de
la Salud (OMS) estas afecciones a quejan de un 15% a 20% de la población adulta de edad
media, la ausencia de higiene bucodental es la principal causa del padecimiento (17).
La bacteria Porphyromonas gingivalis tiene una serie de factores de virulencia relevantes
para persistir dentro de los tejidos y resistir a los tratamientos, comienza el proceso
infeccioso con la colonización, luego la invasión y replicación dentro de las células
epiteliales, después evade el sistema inmune del huésped hasta llegar a la destrucción de los
tejidos. Conocer estos factores de virulencia ayuda a comprender la importancia del control
microbiológico para alcanzar el éxito en la terapia periodontal (18).
Por otra parte, la Fitoterapia es definida como una ciencia que se encarga del estudio del
empleo de productos de origen vegetal con propiedades medicinales para prevenir, mitigar
o curar determinado estado patológico (19). De esta manera existen estudios donde se han
empleado una diversidad de especias y plantas, determinando las propiedades
antimicrobianas sobre determinadas bacterias o microorganismos, entre estas especias, se
encuentra el ajo, jengibre, cúrcuma o el anís estrellado, entre otras (20).
6
El anís estrellado (Illicium Verum), es una especia con efectos antimicrobianos, antifúngicos,
analgésicos y antioxidantes, debido al componente principal conocido como anetol (20),
quien, además, le otorga el sabor característico. Un estudio ejecutado por Maofari y cols.
(21) Marruecos y Yemén, determinaron actividad antibacteriana del aceite esencial de
semillas de anís contra diferentes cepas bacterianas patógenas, algunas de ellas,
Streptococcus pyogenes, Streptococcus pneumoniae y Staphylococcus aureus, sin embargo,
no existen estudios donde se conozcan los efectos de la infusión de esta especia sobre
bacterias orales patógenas comunes y a diferentes concentraciones, siendo una de ellas,
Porphyromonas gingivalis.
Por lo descrito anteriormente se realizará el presente estudio con la finalidad de determinar
el efecto inhibitorio de la infusión de anís estrellado (Illicium Verum) a concentraciones de
25%, 50% y 75% sobre las cepas de Porphyromonas gingivalis, a las 24 y 48 horas de
inoculación, la clorhexidina al 0.12% como control positivo y el suero fisiológico como
control negativo, siendo ejecutado en el laboratorio BMI Laboratorios. Comprobar la
existencia de dicho efecto resultaría en información relevante para tratar la periodontitis a
través de métodos alternativos con la utilización de la infusión de anís estrellado, de igual
forma, los resultados obtenidos brindarán información para posteriores investigaciones en la
inhibición de la bacteria.
1.4. Hipótesis
1.4.1. Hipótesis de investigación (H1)
La infusión de anís estrellado a las concentraciones de 25%, 50% y 75% posee mayor efecto
inhibitorio que la clorhexidina al 0.12% y el suero fisiológico frente a las cepas de
Porphyromonas gingivalis a las 24 y 48 horas de inoculación.
1.4.2. Hipótesis nula (H0)
La infusión de anís estrellado a las concentraciones de 25%, 50% y 75% posee igual o menor
efecto inhibitorio que la clorhexidina al 0.12% y el suero fisiológico frente a las cepas de
Porphyromonas gingivalis a las 24 y 48 horas de inoculación.
7
CAPÍTULO II
2. MARCO TEÓRICO
2.1. Enfermedad periodontal
La enfermedad periodontal es estimada como una patología crónica e inflamatoria de causas
multifactoriales, posee como factor etiológico primario, una biopelícula de origen bacteriano
estructurada en un nicho ecológico factible para su desarrollo y multiplicación, sumado a
otros elementos de origen sistémico y local, generan la infección y deterioro de los tejidos
de soporte del diente como el tejido conectivo, ligamento periodontal, hueso alveolar,
epitelios y cemento radicular (2).
Figura 1. Proceso degenerativo de las encías
Fuente: Clínica Dental Felipe (22)
2.1.1. Manifestación clínica
Las manifestaciones clínicas que revela la enfermedad periodontal, se observan mediante la
movilidad dental, sangrado, desarrollo de bolsa periodontal, disfunción masticatoria,
recesión gingival y pérdida dental. Actualmente existen estudios donde se relaciona dicha
enfermedad con otras afecciones crónicas, como diabetes, enfermedad cardiovascular,
enfermedad pulmonar crónica, cáncer y otras (2).
Según la Organización Mundial de la Salud esta patología es considerada como una de las
dos primordiales problemáticas de salud bucal a nivel global, de igual manera, existe una
fuerte relación entre las desigualdades sociales y la afección, ya que los grupos poblacionales
8
con desventaja económica y social, son quienes evidencian mayor proporción de afectación
(2).
2.2. Porphyromonas gingivalis
Es considerado un bacilo Gram negativo, siendo uno de los predominantes en la enfermedad
periodontal, es altamente agresivo debido a sus factores de virulencia, se sitúa en el surco
gingival, convirtiéndose en un ambiente adecuado para su desarrollo, su mecanismo de
acción se basa en destruir lenta y progresivamente los tejidos. Esta bacteria es factible de ser
tratada con antimicrobianos, previo a la remoción mecánica (23).
Figura 2. Porphyromonas gingivalis y su relación con periodontitis
Fuente: Periodontitis (24)
2.2.1. Taxonomía
La clasificación primaria del género bacteroides estuvo conformada por un conjunto de
bacterias heterogéneas, con características de anaerobios estrictos, no espulados, Gram
negativos y de forma bacilar, 2en la actualidad se los denomina como Porphyromonas. Se
pudo identificar tres especies en las primeras investigaciones, siendo P. gingivalis, P.
asaccharolyticus y P. endodontales, estas bacterias poseen la característica de ser no
fermentadores, además para obtener energía mediante la triptasa y peptona, usaban el
sustrato nitrógeno. Después de varios estudios ejecutados, se ha demostrado su lejanía del
género bacteroide, por lo que en la actualidad de conocen más de 12 especies, existiendo una
P. catoniae que es sacarolítica (23).
9
2.2.2. Morfología
Es considerado como un bacilo corto o coco bacilo Gram negativo, anaerobio estricto que
mide de 0.05 a 0.8 um x 1 – 3.5 um, detenta una membrana externa con endotoxinas, no
esporuladas, son encapsuladas, tienen diversas clases de abundantes fimbrias, no poseen
flagelos, a nivel externo evidencia vesículas enzimáticas que son importantes para su
virulencia, de igual manera posee variadas enzimas con la capacidad de disminuir
compuestos proteicos (23).
Figura 3. Representación de la estructura de Porphyromonas gingivalis
Fuente: Porphyromonas gingivalis y enfermedades sistémicas (10)
2.2.3. Factores de virulencia
Los factores de virulencia que comprenden la Porphyromonas gingivalis son fimbrias,
cápsula, proteinasas, lipopolisacáridos y cisteína proteinasas denominadas gingipainas, así
como la presencia de vesículas de membrana externa, como son hemaglutininas, proteínasas
no cisteinproteasas e inductores de metaloproteinasas de la matriz (25).
Figura 4. Representación de Porphyromonas gingivalis y liberación de vesículas secretoras y productos
Fuente: Porphyromonas gingivalis y enfermedades sistémicas (10)
10
2.3. Anís Estrellado (Illicium verum)
2.3.1. Descripción
Planta de origen asiático, perteneciente a la familia de las magnoliáceas (Magnoliacea),
posee características distintivas, como ser un árbol perenne, con tiempo de vida de más de 2
años, posee hojas lanceoladas, de corteza blanca, con ciertos aspectos similares al laurel,
llegando a alcanzar los 5 metros de altura (26).
2.3.2. Componentes
Los principales componentes son: entre 80% y 90% de estragol y anetol, flavonoides,
taninos, ácidos orgánicos (quínico, siquímico), carburos terpénicos (felandreno, dipenteno,
limoneno), cumarinas y lactonas sesquiterpénicas, también reconocidas como A, B y C (26).
Figura 5. Anís estrellado (Illicium verum)
Fuente: Infusión de Anís Estrellado (Illicium verum) (27)
11
2.3.3. Usos
Según la literatura de medicina natural menciona que la planta posee acción carminativa,
eupéptica, antiséptica-antimicrobiana y antiespasmódica, se utiliza como tratamiento del
cólico y tranquilizante en recién nacidos y lactantes, de igual forma se emplea para aumentar
la producción de leche (26). Es antimicrobiano, resultando efectivo contra bacterias, hongos
y levaduras, esta propiedad es debida al principal componente el anetol (14).
Maofari y cols. (2013) (21) efectuaron un estudio con la finalidad de establecer la
composición química y actividad antibacteriana de los aceites esenciales de semilla de anís
estrellado a 30% de concentración, sobre 7 bacterias Gram-positivas, entre ellas
(Staphylococcus aureus Streptococcus pneumoniae, Streptococcus pyogenes) y 10 bacterias
Gram-negativas, entre las cuales estuvieron (Pseudomonas aeruginosa, Pseudomonas
fluorescens, Acinetobacter baumannii), determinando que las bacterias Gram-positivas
fueron más sensibles en comparación a las Gram-negativas, Acenitobacter baumannii fue la
cepa más sensible de todas.
Melendez y cols. (2016) (18), desarrollaron una investigacion con el objetivo de determinar
la actividad biológica del extracto metanólico de I. verum sobre Porphyromonas gingivalis,
a cuatro concentraciones, 0.1, 1, 7 y 10mg/mL por 24 horas, estableciendo que a la
concentración de 7 mg/mL, se mostró inhibición sobre P. gingivalis.
Sivakumar y cols. (2016) (15) ejecutaron un estudio sobre el extracto etanólico y acuoso de
anís estrellado sobre las cepas de Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Bacillus
subtilis y Escherichia coli, determinando actividad antibacteriana en las bacterias estudiadas,
excepto Pseudomonas aeruginosa, la bacteria con máxima zona de inhibición fue Bacillus
subtilis (12,3 mm), por el contrario el extracto acuoso mostró actividad antibacteriana en
todas las cepas, menos en Staphylococcus aureus, la zona de mayor inhibición fue en
Escherichia coli (23,3 mm), seguido de Bacillus subtilis (13,3 mm) y Pseudomonas
aeruginosa (8.0 mm), en el estudio concluyeron que los extractos acuosos denotaron mejor
actividad contra los patógenos en comparación al extracto etanólico.
12
2.3.4 Efectos adversos y contraindicaciones
El aceite esencial de anís de estrellado en dosis elevadas puede ser tóxico sobre el sistema
nervioso central, ocasionando reacciones epileptoides delirios y convulsiones. También
posee ligera acción estrogénica, por este motivo, las mujeres con una situación hormonal
alterada deben evitarlo, así como aquellas mujeres con afecciones de cáncer de mama,
ovario, útero y endometriosis (14).
2.4. Clorhexidina
Fue descubierto a finales de los años 40, aunque en odontología, este antiséptico se lo
empezó a aprovechar desde los años 70, con el propósito de tratar y controlar infecciones
bucales, en general se lo emplea para antisepsia de la piel y mucosas, antes de una cirugía
bucal (28). Posee la capacidad de retraer el crecimiento bacteriano y el desarrollo de la
gingivitis, en casos donde no existe una higiene oral adecuada, actualmente se lo considera
el agente antiplaca más eficaz, con acción prolongada en la cavidad oral, debido a su
sustantividad por más de 12 horas y a sus propiedades, es empleado en 12 casos de
periodontitis, perdiendo la efectividad al estar en contacto con dentífricos, sugiriendo su uso
alejado de estos productos (29).
1.1.1. Composición
Este antiséptico proviene de una bisguanida de carga positiva catiónica, es decir, posee una
superficie positiva que se une a superficies negativas, como son tejidos blandos, dientes y
bacterias, es poco soluble en agua en su forma base, aunque es bastante soluble en su forma
de sal, donde se escapa su componente activo, con el nombre de Digluconato de clorhexidina
(30). Está compuesto por dos anillos simétricos de 4 clorofenil y dos grupos bisguanida,
unidos por una cadena central de hexametileno (31).
13
1.1.2. Mecanismo de acción
Según Trigoso y Trigoso (32), este antiséptico tópico, ingresa a la membrana celular
microbiana y penetra el citoplasma interfiriendo con su función, también impide la
utilización de oxígeno, lo cual reduce los niveles de ATP hasta su deceso celular.
Mientras que Wang y Siguas (33), adujeron que a bajas concentraciones ocasiona un
incremento de la permeabilidad con filtración de los componentes intracelulares, conocido
como efecto bacteriostático, por su parte en concentraciones elevadas genera la precipitación
del citoplasma bacteriano y muerte celular, denominado efecto bactericida.
1.1.3. Reacciones adversas
La clorhexidina ocasiona ciertos efectos secundarios tras un tiempo prolongado de uso, como
el teñido rojizo o marrón de las piezas dentarias, también de algunos materiales de
restauración y del dorso de la lengua, además de modificar la sensación del gusto, por cuatro
horas luego del enjuague, en ciertos casos el uso ha estado relacionado al incremento de
cálculos supragingivales (31).
14
CAPÍTULO III
3. METODOLOGÍA
2.1. Diseño de la investigación
El estudio planteado fue de tipo experimental, in vitro.
Experimental: Se determinó el efecto inhibitorio de la infusión de anís estrellado (Illicium
verum) al 25%, 50% y 75%, luego de inocularlos sobre cepas de Porphyromonas gingivalis
a las 24 y 48 horas.
In vitro: Porque corresponde a un modelo experimental que involucra infusión de anís
estrellado (Illicium verum), cepas de Porphyromonas gingivalis, cajas Petri, discos de
inoculación y material de laboratorio, el cual se desarrolló bajo un ambiente controlado,
siguiendo las normas de bioseguridad establecidas para minimizar el riesgo de
contaminación.
2.2. Población de estudio
La población de la presente investigación corresponde a la cantidad de cajas Petri con
cultivos de Porphyromonas gingivalis necesarias para desarrollar el estudio.
2.3. Selección y tamaño de la muestra
La muestra fue seleccionada de manera no probabilística por conveniencia, siguiendo la
metodología empleada en el estudio de Meléndez et al. (2016) (18), considerando 15 cajas
Petri con cultivos de Porphyromonas gingivalis.
2.4. Criterios de inclusión y exclusión
Criterios de inclusión
i. Semillas de anís estrellado (Illicium verum) en buen estado.
15
ii. Infusión de anís estrellado (Illicium verum) a concentraciones de 25%, 50% y 75%.
iii. Cajas Petri con cultivo de Porphyromonas gingivalis no contaminadas.
Criterios de exclusión
i. Semillas de anís estrellado (Illicium verum) con presencia de alguna plaga.
ii. Infusión de anís estrellado (Illicium verum) a concentraciones distintas a las requeridas
para la investigación.
iii. Cajas Petri defectuosas o con defectos de fabricación.
iv. Cajas Petri con cultivo de Porphyromonas gingivalis que se contaminen durante el
proceso de experimentación.
2.5. Conceptualización de variables
2.5.1. Variable dependiente
i. Efecto inhibitorio sobre Porphyromonas gingivalis: Capacidad que detentan ciertas
sustancias o elementos para impedir el desarrollo y crecimiento de Porphyromonas
gingivalis (34).
2.5.2. Variables independientes
i. Infusión de anís estrellado (Illicium verum): Sustancia que se obtiene de la planta de
Illicium verum, extrayendo los componentes químicos a partir de agua caliente (35).
ii. Tiempo de inoculación: Período entre la introducción de una bacteria o virus en un
cultivo y el desarrollo esperado (36).
iii. Gluconato de clorhexidina al 0.12%: Sustancia desinfectante perteneciente al grupo
de las biguanidas con efecto bactericida y bacteriostático (37).
iv. Suero fisiológico: Solución salina compuesta por cloruro de sodio al 0,9% (p/v) en agua
hipertónica, utilizada en quemaduras y cortaduras de la piel (38).
16
2.6. Operacionalización de variables
VARIABLE DEFINICIÓN OPERACIONAL TIPO CLASIFICACIÓN INDICADOR
CATEGÓRICO
ESCALA DE
MEDICIÓN
Efecto
inhibitorio
sobre
Porphyromonas
gingivalis
Capacidad que poseen ciertas sustancias para impedir el desarrollo y crecimiento de Porphyromonas gingivalis (34).
Dependiente Cuantitativa Continua
Halo de inhibición de
acuerdo a la Escala de
Mariani et al. (39) Leve ≤ 6 mm
Moderada = 7 mm - 8 mm Alta ˃ 8 mm
1 2 3
Infusión de
anís estrellado
(Illicium
verum)
Sustancia que se obtiene de la planta de Illicium verum,
extrayendo los componentes químicos a partir de agua caliente (35).
Independiente Cualitativa Ordinal
Concentración
25% 50% 75%
1 2 3
Tiempo de
inoculación
Período entre la introducción de Porphyromonas gingivalis en el cultivo y el desarrollo esperado (36).
Independiente Cuantitativa Discreta
Horas
24 48
1 2
Gluconato de
clorhexidina
Agente desinfectante perteneciente al grupo de las biguanidas con efecto bactericida y bacteriostático ampliamente usado en odontología (37).
Independiente Cualitativa Nominal
Concentración
0,12% 1
Suero
fisiológico
Solución salina compuesta por cloruro de sodio al 0,9% (p/v) en
agua hipertónica, utilizada en el tratamiento de lesiones de la mucosa oral (38).
Independiente Cuantitativa Discreta
Cantidad de ml empleados en la investigación 1
17
2.7. Estandarización
Con el fin de estandarizar las mediciones y garantizar la validez de los resultados obtenidos
en la investigación planteada, se realizó la determinación del diámetro de los halos de
inhibición empleando una regla milimetrada con calibración de fábrica. Esta medición la
realizó exclusivamente la investigadora, previo entrenamiento del asesor metodológico.
La cepa de Porphyromonas gingivalis se adquirirá en MEDIBAC, empresa importadora de
microorganismos e insumos para investigación, localizada en la ciudad de Quito, las cuales
serán inoculadas en cajas Petri e incubadas a 37ºC por 48 horas, ajustando la turbidez al
estándar Mc Farland 0,5 para hacer una dilución de 1,5 x 108 UFC/ml, siguiendo el
procedimiento establecido por el Manual de Pruebas de Susceptibilidad Antimicrobiana
(40).
Para la obtención de la infusión de anís estrellado se adquirió las semillas de Illicium verum
en un mercado mayorista de la ciudad de Quito, de tal manera que se garantice el buen estado
de las mismas, sin presencia de partes dañadas o evidencias de poseer algún tipo de plaga.
Todo el proceso de experimentación fue supervisado por el encargado del Laboratorio BMI
Laboratorios para garantizar la validez de los resultados alcanzados.
2.8. Manejo y métodos de recolección de datos
El desarrollo del procedimiento experimental se realizó siguiendo la metodología que se
describe a continuación:
1. Solicitud de permisos
Previo al inicio de la investigación fue redactada una solicitud dirigida al director de la
Unidad de Graduación, Titulación e Investigación de la Facultad de Odontología de la UCE
(Anexo K), con el objetivo de obtener la aprobación para el desarrollo de la misma. Luego
de obtener la aprobación será solicitado el permiso para usar las instalaciones del Laboratorio
de Microbiología BMI Laboratorios (Anexos J).
18
2. Selección de los materiales y equipos necesarios para la investigación
Para el desarrollo del estudio fue necesario el empleo de los siguientes materiales y equipos:
a) Infusión de anís estrellado al 25%, 50% y 75%.
b) Artículos de bioseguridad: Mascarilla, gorro desechable, guantes, gafas protectoras.
c) Autoclave.
d) Balanza de precisión.
e) Cajas Petri.
f) Cámara de flujo laminar.
g) Cepa liofilizada de Porphyromonas gingivalis.
h) Discos de papel filtro de celulosa.
i) Gradilla.
j) Hisopos estériles.
k) Incubadora.
l) Jarra GasPak (anaerobiosis).
m) Mechero.
n) Micropipeta.
o) Puntas para pipeta.
p) Solución de McFarland 0,5.
q) Tubos de ensayo.
3. Obtención de la Infusión de Illicium verum
Las semillas de Illicium verum, fue adquiridos en un mercado de la ciudad de Quito, llevando
al laboratorio BMI donde fueron lavadas con agua corriente y agua destilada, colocándolas
en toallas de papel para el secado, para posteriormente pesar el producto en balanza analítica.
19
Figura 6. Balanza analítica
Fuente: Karina Estefanía Verdezoto Sánchez
Figura 7. Pesado del anís estrellado
Fuente: Karina Estefanía Verdezoto Sánchez
Para preparar la infusión de anís estrellado se hierven 300 ml de agua a una temperatura de
100ºC, se colocan 6 gramos de semillas de Illicium verum en un recipiente estéril y cuando
el agua alcance la temperatura deseada se vierte en el recipiente y se tapa, dejando reposar
la infusión entre 3 y 5 minutos.
Figura 8. Infusión del anís estrellado (Illicium verum)
Fuente: Lic Jefferson Cisnero
20
Posteriormente la infusión resultante se filtró con papel de nitrocelulosa para extraer los
sólidos de la preparación, obteniendo las concentraciones empleadas en el estudio (25%,
50% y 75%) de acuerdo al siguiente esquema:
Dilución infusión (%) Infusión (µl) Agua (H20) (µl)
75 75 25 50 50 50 25 25 75
Finalmente, las muestras obtenidas fueron almacenadas en frasco sellado color ámbar
debidamente identificados por un tiempo que no supere las 12 horas para garantizar las
propiedades de la preparación.
4. Activación de la cepa de Porphyromonas gingivalis
La cepa de Porphyromonas gingivalis fue adquirida en la empresa MEDIBAC, importadora
de microorganismos e insumos propios de investigación, localizada en la ciudad de Quito y
se activó siguiendo las instrucciones del fabricante apoyado con la asesoría del personal
encargado en el Laboratorio de Microbiología BMI Laboratorios.
Figura 9. Cepa de Porphyromonas gingivalis
Fuente: MEDIBAC
21
Para la siembra en el medio de cultivo se utilizó un asa desechable, realizando este
procedimiento en la cámara de flujo laminar para mantener el control de los riesgos de
contaminación, colocando posteriormente el medio con la cepa sembrada en jarra Gaspack
y llevando a incubadora a 37ºC por 24 horas.
Figura 10. Siembra en el medio de cultivo
Fuente: Karina Estefanía Verdezoto Sánchez
Figura 11. Jarra Gaspack
Fuente: Karina Estefanía Verdezoto Sánchez
5. Inoculación cajas Petri con cepas de Porphyromonas gingivalis
Se prepararon 15 cajas Petri con Agar Muller Hinton suplementado con 5% de sangre, donde
se hizo la siembra de la cepa de Porphyromonas gingivalis, empleando un hisopo estéril que
22
se frotará sobre la superficie del agar y rotando la posición de 60º de ida y vuelta, repitiendo
este paso tres veces, con el objetivo de garantizar la distribución homogénea del inóculo,
identificando cada caja Petri de forma alfanumérica.
Figura 12. Identificando cada caja Petri de forma alfanumérica
Fuente: Karina Estefanía Verdezoto Sánchez
6. Colocación de discos en cajas Petri
Posterior al proceso de siembra se procedió a embeber discos de papel con una micropipeta
1 gota (20 µl = 20 microlitros), impregnándolos con las diluciones de la infusión de Illicium
verum al 25%, 50% y 75%.
Figura 13. Discos de papel impregnándolos con las diluciones de la infusión de Illicium verum al 25%,
50% y 75%
Fuente: Karina Estefanía Verdezoto Sánchez
Clorhexidina que fue el control positivo y suero fisiológico como control negativo, para ser
colocadas una muestra de cada disco en las cajas Petri previamente rotuladas y numeradas,
con la ayuda de una pinza estéril, distribuyéndolos de forma constante a no menos de 15 mm
de distancia entre ellos y 1,5 cm del borde de la placa.
23
Figura 14. Clorhexidina (control positivo) y suero fisiológico (control negativo)
Fuente: Karina Estefanía Verdezoto Sánchez
Figura 15. Colocación de discos en las cajas Petri
Fuente: Karina Estefanía Verdezoto Sánchez
Luego de colocar los discos en las 15 cajas Petri fueron llevadas a incubación en campana
de anaerobios a una temperatura de 37ºC por 24 y 48 horas.
Figura 16. Cajas Petri en campana de anaerobios
Fuente: Karina Estefanía Verdezoto Sánchez
24
Figura 17. Jarras de anaerobiosis con cultivos bacterianos Porphyromonas gingivalis
Fuente: Karina Estefanía Verdezoto Sánchez
7. Medición de los halos de inhibición
Con el fin de identificar el efecto inhibitorio de la infusión de Illicium verum sobre la cepa
de Porphyromonas gingivalis se midió el halo formado alrededor del disco con una regla
milimetrada, empleando como referencia la escala establecida en la clasificación de Mariani
et al. (39):
Leve ≤ 6 mm
Moderada = 7 mm - 8 mm
Alta ˃ 8 mm
Figura 18. Discos de papel con halos de inhibición
Fuente: Karina Estefanía Verdezoto Sánchez
25
Los resultados obtenidos de las mediciones fueron registrados en una hoja de recolección de
datos especialmente diseñada para el presente estudio (Anexo L).
8. Manejo y eliminación desechos infecciosos y contaminantes
Al finalizar el procedimiento experimental se eliminará el material contaminante siguiendo
las normas establecidas en el Laboratorio de Microbiología BMI Laboratorios, que es el
siguiente:
1. Los cultivos de agentes infecciosos, cajas Petri y los instrumentos para manipular,
mezclar o inocular microorganismos se recolectaron en recipientes específicos rotulados
y llevados al área de generación del Laboratorio BMI Laboratorios.
2. Las cajas Petri, tubos de ensayo e hisopos contaminados se colocaron en una autoclave
a 134°C, 1,1 atmósferas por 30 minutos, dejando enfriar por un tiempo aproximado de
30 minutos.
3. Todo material de desecho que se genere fue colocado en una funda roja rotulado con la
siguiente información: contenido, peso, fecha y persona responsable.
4. El manejo externo de desechos biológicos será efectuado por la empresa EMGIRS-EP
(Empresa Pública Metropolitana Integral de Residuos Sólidos) quienes trabajan
conjuntamente con el laboratorio BMI Laboratorios y son los encargados de retirar del
área de depósito de desechos infecciosos, biológicos y especiales.
2.9. Prueba piloto
No es necesario realizar prueba piloto para la presente investigación.
2.10. Análisis estadístico
Con los resultados obtenidos se realizó un análisis estadístico, empleando el programa SPSS
versión 25, aplicando la prueba de Shapiro-Wilk para determinar la normalidad de los datos,
se utilizaron las pruebas no paramétricas Kruskall Wallis, Mann Whitney, Wilcoxon con un
nivel de confiabilidad de 95% y una significancia del 5%.
26
2.11. Aspectos bioéticos, metodológicos y jurídicos
Aspectos bioéticos
A. Respetar a la persona y comunidad que participa en el estudio: No aplica.
B. Valorar el beneficio que generará el estudio para la persona, la comunidad y el país: El
presente estudio permitirá aumentar el grado de conocimientos del investigador y de la
comunidad en lo que referente a las alternativas naturales de desinfección sobre los
agentes patógenos que habitan en la cavidad bucal, optimizando de esta manera los
tratamientos aplicados durante la práctica clínica.
C. Confidencialidad: Señalado en los anexos H, I y J.
D. Riesgos potenciales del estudio: El estudio propuesto posee características que no
representan riesgo a la salud o integridad del investigador.
E. Beneficios potenciales del estudio: Beneficio directo: La Facultad de Odontología de la
Universidad Central del Ecuador, los docentes y la comunidad odontológica del país,
debido que podrá contar con una investigación que servirá de fundamento para futuras
investigaciones en lo concerniente al efecto inhibitorio de la infusión de Illicium verum
sobre la cepa de Porphyromonas gingivalis, bacteria patógena oral causante de
enfermedades periodontales. Beneficio indirecto: Específicamente los pacientes que
contarán con un tratamiento alternativo para minimizar el efecto de estos
microorganismos en el desarrollo de diversas patologías periodontales.
F. Selección equitativa de la muestra y protección de población vulnerable: No aplica.
G. Conflicto de intereses: Señalado en los anexos F y G.
H. Idoneidad ética y experticia del estudio: Señalado en los anexos D y E.
Aspectos metodológicos
A. Pertinencia o relevancia clínica de la investigación: La investigación planteada permitirá
diseñar y aplicar tratamientos novedosos contra patologías periodontales fundamentada
en infusión de Illicium verum, así como motivar futuras investigaciones sobre la acción
inhibitoria de este agente desinfectante natural sobre otros tipos de microorganismos
presentes en la cavidad bucal, causantes de diversas patologías periodontales,
optimizando de esta manera la atención odontológica durante la práctica clínica con el
apoyo de sustancias alternativas.
B. Validez interna del diseño del estudio para producir resultados fiables: Para garantizar la
validez de los resultados obtenidos la medición de los halos de inhibición será realizada
27
por el investigador, utilizando una regla milimetrada que estará calibrada de fábrica,
previo entrenamiento del asesor metodológico Dra. Mariela Cumandá Balseca Ibarra.
C. Validez externa del diseño del estudio para ser extrapolado al conjunto de la población:
No aplica.
Aspectos jurídicos
No aplican para la presente investigación.
28
CAPÍTULO IV
3. ANÁLISIS E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
Los datos descriptivos obtenidos (media, desviación estándar, mínimos y máximos) respecto
al halo de inhibición de la infusión de anís estrellado (Illicium verum) sobre Porphyromonas
gingivalis se obtuvo a través de pruebas estadísticas de normalidad Shapiro-Wilk, y pruebas
no paramétricas Kruskall Wallis, Mann Whitney, Wilcoxon con un nivel de confiabilidad de
95% y una significancia del 5%. Los datos obtenidos se tabularon en el programa Microsoft
Excel, para el análisis estadístico se utilizó el programa SPSS versión 25.
3.1. Resultados descriptivos
En la tabla 1 se evidencia que la infusión de Illicium verum en una concentración de 75%
presenta el mayor halo de inhibición sobre Porphyromonas gingivalis con un promedio de
18,56 mm a las 24 horas y 19,18 mm a las 48 horas, sin embargo la compararlos con los
controles, se demuestra que la clorhexidina 0,12% (control positivo) reporta un mayor halo
de inhibición tanto a 24 y 48 horas, mientras que para el control negativo son menores los
halos respecto de las infusiones de Illicium verum sobre el microorganismo a diferentes
concentraciones y tiempo de inoculación. (Gráfico 1)
Tabla 1. Datos descriptivos del halo de inhibición (mm)
Sustancias
24 horas 48 horas
X 95% IC
DE X 95% IC
DE Mín Máx Mín Máx
Infusión Illicium verum 25% 14,80 14,56 15,04 0,81 15,18 14,88 15,47 0,98 Infusión Illicium verum 50% 16,96 16,63 17,28 1,09 17,62 17,26 17,99 1,21 Infusión Illicium verum 75% 18,56 18,26 18,85 0,99 19,18 18,84 19,52 1,13 Clorhexidina 0,12% horas 31,53 30,77 32,30 2,55 32,36 31,74 32,97 2,06 Suero Fisiológico 6,00 6,00 6,00 0,00 6,00 6,00 6,00 0,00
X: media
DE: Desviación estándar Fuente y elaboración: Karina Estefanía Verdezoto Sánchez
En el gráfico 1 se demuestra que a medida que aumenta la concentración de la infusión de
Illicium verum es mayor la media del halo de inhibición sobre Porphyromonas gingivalis a
las 24 y 48 horas, además a las 48 horas se reporta el mayor valor de la media del halo de
inhibición de las infusiones de anís estrellado y clorhexidina.
29
Gráfico 1. Halo de inhibición (mm) de las sustancias de estudio sobre Porphyromonas gingivalis a los
diferentes tiempos de inoculación.
Fuente y elaboración: Karina Estefanía Verdezoto Sánchez
Con respecto al efecto inhibitorio de las sustancias se estableció en base a la escala sugerida
por el artículo de Mariani et al., evidenciando que la infusión de Illicium verum a las
diferentes concentraciones sobre Porphyromonas gingivalis y la clorhexidina al 0,12%
presentan un alto efecto inhibitorio (halo de inhibición Alta ˃ 8 mm), en cambio el suero
fisiológico el efecto es leve (Leve ≤ 6 mm). (Tabla y gráfico 2)
Tabla 2. Efecto inhibitorio de las sustancias de estudio sobre Porphyromonas gingivalis a los diferentes
tiempos de inoculación. Tiempo de
inoculación Sustancias Concentración Leve Moderada Alta
24 horas
Infusión Illicium verum 25% 0% 0% 100% 50% 0% 0% 100% 75% 0% 0% 100%
Suero Fisiológico 100,00% 0% 0% Clorhexidina 0,12% 0% 0% 100%
48 horas
Infusión Illicium verum 25% 0% 0% 100% 50% 0% 0% 100% 75% 0% 0% 100%
Suero Fisiológico 100,00% 0% 0% Clorhexidina 0,12% 0% 0% 100%
Fuente y elaboración: Karina Estefanía Verdezoto Sánchez
14,8
0 16,9
6
18,5
6
31,5
3
6,00
15,1
8 17,6
2
19,1
8
32,3
6
6,00
0,00
5,00
10,00
15,00
20,00
25,00
30,00
35,00
Infusión lliciumVerum 25%
Infusión IlliciumVerum 50%
Infusión IlliciumVerum
Clorhexidina 0,12% Suero Fosiológico
24 Horas
48 Horas
30
Gráfico 2. Efecto inhibitorio de las sustancias de estudio sobre Porphyromonas gingivalis a los
diferentes tiempos de inoculación.
Fuente y elaboración: Karina Estefanía Verdezoto Sánchez
3.2. Resultados estadísticos
Se aplicó la prueba estadística Shapiro-Wilk para identificar si los datos proceden de una
distribución normal, evidenciando que los p valores<0,05, por lo tanto los datos del halo de
inhibición de las infusiones de Illicium verum a las diferentes concentraciones y tiempo de
inoculación y los controles sobre Porphyromonas gingivalis, provienen de una distribución
no paramétrica.
Tabla 3. Prueba de normalidad de Shapiro-Wilk
Sustancias
Shapiro-Wilk
Estadístico gl Sig.
Infusión Illicium verum 25% -24 horas 0,87 45,00 0,00 Infusión Illicium verum 50% -24 horas 0,91 45,00 0,00 Infusión Illicium verum 75% -24 horas 0,92 45,00 0,00 Clorhexidina 0,12% - 24 horas 0,86 45,00 0,00 Suero Fisiológico - 24 horas 0,64 45,00 0,00 Infusión Illicium verum 25% -48 horas 0,90 45,00 0,00 Infusión Illicium verum 50% -48 horas 0,93 45,00 0,01 Infusión Illicium verum 75% -48 horas 0,92 45,00 0,01 Clorhexidina 0,12% - 48 horas 0,87 45,00 0,00 Suero Fisiológico - 48 horas 45,00
Fuente y elaboración: Karina Estefanía Verdezoto Sánchez
En la tabla 4, mediante el test Wilcoxon se evidencia que existe diferencias significativas en
los halos de inhibición entre las distintas concentraciones de las infusiones de Illicium verum
- - -
100,
00%
- - - -
100,
00%
-
100%
100%
100%
-
100%
100%
100%
100%
-
100%
0%
10%
20%
30%
40%
50%
60%
70%
80%
90%
100%
25% 50% 75% . . 25% 50% 75% . .
Infusión Illicium verum SueroFisiológico
Clorhexidina0,12%
Infusión Illicium verum SueroFisiológico
Clorhexidina0,12%
24 horas 48 horas
Alta
Moderada
Leve
31
(anís estrellado) sobre Porphyromonas gingivalis (25%-50%), (50%-75%) y (25%-75%)
tanto a las 24 y 48 horas de inoculación (p< 0,05).
Tabla 4. Prueba Wilcoxon del halo de inhibición de las infusiones de Illicium verum
Tiempo de
inoculación Concentraciones Z Sig. asintótica(bilateral)
24 horas Infusión Illicium verum 50% - 25% -5,859 0,000 Infusión Illicium verum 75% - 25% -5,896 0,000 Infusión Illicium verum 75% - 50% -5,605 0,000
48 horas Infusión Illicium verum 50% - 25% -5,768 0,000 Infusión Illicium verum 75%- 25% -5,917 0,000 Infusión Illicium verum 50%-75% -5,457 0,000
Fuente y elaboración: Karina Estefanía Verdezoto Sánchez
Al realizar la prueba Kruskal- Wallis, se evidencia que existe diferencia significativa entre
la media del halo de inhibición de las sustancias de estudio a las 24 y 48 horas de inoculación
del Porphyromonas gingivalis (p< 0,05). (Gráfico 3)
Gráfico 3. Prueba Kruskal-Wallis para los halos de inhibición de las sustancias de estudio en grupos de
24 y 48 horas
Fuente y elaboración: Karina Estefanía Verdezoto Sánchez
En la tabla 5, a través de la prueba Mann Whitney se demuestra que existe diferencia
significativa de la media del halo de inhibición de la infusión de anís estrellado (Illicium
verum) a concentración del 25%, 50% y 75% sobre cepas de Porphyromonas gingivalis con
respecto a la media del halo de inhibición del control positivo (clorhexidina) y control
negativo (suero fisiológico) a las 24 y 48 horas de inoculación (p<0,00).
32
Tabla 5. Prueba Mann Whitney para muestras independientes
Tiempo Sustancia U de Mann - Whitney
Z Valor p
24 horas
Infusión Illicium verum (25%) – Suero Fisiológico 0,000 -8,821 ,000 Infusión Illicium verum (50%) - Suero Fisiológico 0,000 -8,796 ,000 Infusión Illicium verum (75%) - Suero Fisiológico 0,000 -8,798 ,000 Infusión Illicium verum (25%) – Clorhexidina 0,12% 0,000 -8,255 ,000 Infusión Illicium verum (50%) - Clorhexidina 0,12% 0,000 -8,235 ,000 Infusión Illicium verum (75%) - Clorhexidina 0,12% ,500 -8,233 ,000
48 horas
Infusión Illicium verum (25%) - Suero Fisiológico 0,000 -8,796 ,000 Infusión Illicium verum (50%) - Suero Fisiológico 0,000 -8,779 ,000 Infusión Illicium verum (75%) - Suero Fisiológico 0,000 -8,792 ,000 Infusión Illicium verum (25%) - Clorhexidina 0,12% 0,000 -8,235 ,000 Infusión Illicium verum (50%) - Clorhexidina 0,12%) 0,000 -8,221 ,000 Infusión Illicium verum (75%) - Clorhexidina 0,12% 2,500 -8,211 ,000
Fuente y elaboración: Karina Estefanía Verdezoto Sánchez
En la tabla 6 se evidencia la comparación del efecto inhibitorio de las infusiones de Illicium
verum sobre Porphyromonas gingivalis entre las concentraciones, demostrando que no
existe diferencia significativa entre el efecto de las infusiones de anís estrellado al comparar
25%-50%, 50%-75% y 25%-75% tanto a las 24 y 48 horas de inoculación (p>0,05), por lo
tanto se puede indicar estadísticamente que presentan igual efecto inhibitorio.
Tabla 6. Prueba Wilcoxon del efecto inhibitorio de las de la infusión de anís estrellado (Illicium verum)
a concentración del 25%, 50% y 75% sobre cepas de Porphyromonas gingivalis a las 24 y 48 horas de
inoculación.
Tiempo de
inoculación Concentraciones Z Sig. asintótica(bilateral)
24 horas Infusión Illicium verum 50% - 25% ,000b 1,000 Infusión Illicium verum 75% - 25% ,000b 1,000 Infusión Illicium verum 75% 50% ,000b 1,000
48 horas Infusión Illicium verum 50% - 25% ,000b 1,000 Infusión Illicium verum 75%.25% ,000b 1,000 Infusión Illicium verum 75%-50% ,000b 1,000
Fuente y elaboración: Karina Estefanía Verdezoto Sánchez
Con la prueba estadística Mann Whitney se estableció que no existe diferencia significativa
entre el efecto inhibitorio de la infusión de anís estrellado (Illicium verum) a concentración
del 25%, 50% y 75% sobre cepas de Porphyromonas gingivalis y el efecto de la clorhexidina
(p>0,05), este comportamiento es igual a las 24 y 48 horas de inoculación. Sin embargo, al
contrastar el efecto inhibitorio de la infusión de anís estrellado con el control negativo, se
identifica diferencia significativa entre los efectos inhibitorio de ambas sustancias a los
diferentes tiempos de inoculación (p<0,05). (Tabla 7)
33
Tabla 7. Prueba Mann Whitney del efecto inhibitorio de la infusión de anís estrellado con respecto a la
clorhexidina y suero fisiológico
Tiempo Sustancia U de Mann -
Whitney Z Valor p
24 horas
Infusión Illicium verum (25%) – Suero Fisiológico 0,000 -9,434 ,000 Infusión Illicium verum (50%) - Suero Fisiológico 0,000 -9,434 ,000 Infusión Illicium verum (75%) - Suero Fisiológico 0,000 -9,434 ,000 Infusión Illicium verum (25%) – Clorhexidina 0,12% 1012,500 -9,434 1,000 Infusión Illicium verum (50%) - Clorhexidina 0,12% 1012,500 -9,434 1,000 Infusión Illicium verum (75%) - Clorhexidina 0,12% 1012,500 -9,434 1,000
48 horas
Infusión Illicium verum (25%) - Suero Fisiológico 0,000 -9,434 ,000 Infusión Illicium verum (50%) - Suero Fisiológico 0,000 -9,434 ,000 Infusión Illicium verum (75%) - Suero Fisiológico 0,000 -9,434 ,000 Infusión Illicium verum (25%) - Clorhexidina 0,12% 1012,500 -9,434 1,000 Infusión Illicium verum (50%) - Clorhexidina 0,12% 1012,500 -9,434 1,000 Infusión Illicium verum (75%) - Clorhexidina 0,12% 1012,500 -9,434 1,000
Fuente y elaboración: Karina Estefanía Verdezoto Sánchez
Mediante la prueba Kruskal Wallis, se realizó la comparación del halo de inhibición infusión
de anís estrellado (Illicium verum) por el tiempo de inoculación, determinando que existió
diferencia significativa de la media del halo de inhibición de las concentraciones 50% y 75%
sobre cepas de Porphyromonas gingivalis entre el tiempo de inoculación 24 y 48 horas (p<
0,05), mientras que la media del halo de inhibición de la infusión de anís estrellado a 25%
comparando a las 24 y 48 horas de inoculación no existió diferencia significativa (p>0,05),
similar comportamiento se presentó en los controles. (Tabla 8)
Tabla 8. Comparación del halo de inhibición de las sustancias entre 24 y 48 horas de inoculación
Sustancias H de Kruskal-Wallis gl Sig. asintótica
Infusión Illicium verum 25%, 24-48 horas 3,503 1 0,061 Infusión Illicium verum 50%, 24-48 horas 8,035 1 0,005 Infusión Illicium verum 75%, 24-48 horas 8,205 1 0,004
Clorhexidina 0,12%, 24-48 horas 2,607 1 0,106 Suero Fisiológico, 24-48 horas 0,000 1 1,000
Fuente y elaboración: Karina Estefanía Verdezoto Sánchez
Con respecto al efecto inhibitorio de las sustancias de estudio no existió diferencia
significativa entre el tiempo de inoculación de las cepas de Porphyromonas gingivalis a 24
y 48 horas (p> 0,05), es decir no existe variación estadística entre el efecto inhibitorio de las
sustancias a las 24 y 48 horas. (Tabla 9)
34
Tabla 9. Comparación del efecto inhibitoria de las sustancias entre 24 y 48 horas de inoculación
Sustancias H de Kruskal-Wallis gl Sig. asintótica
Infusión Illicium verum 25%, 24-48 horas 0,000 1 1,000 Infusión Illicium verum 50%, 24-48 horas 0,000 1 1,000 Infusión Illicium verum 75%, 24-48 horas 0,000 1 1,000
Clorhexidina 0,12% 24-48 horas 0,000 1 1,000 Suero Fisiológico 24-48 horas 0,000 1 1,000
Fuente y elaboración: Karina Estefanía Verdezoto Sánchez
3.3. Discusión
Los resultados del presente estudio desarrollado con el objetivo de comprobar el efecto
inhibitorio de la infusión de anís estrellado (Illicium verum) al 25%, 50% y 75% sobre la
Porphyromonas gingivalis, demuestran un efecto inhibitorio alto de la planta sobre las cepas
bacterianas con incremento gradual a mayor tiempo de exposición y mayor concentración,
encontrando que para las 24 horas reportó halos de inhibición de 14,8 mm al 25%, 16,96
mm al 50% y 18,56 mm al 75%, mientras que a las 48 horas arrojó una medición de 15,18%
mm a una concentración de 25%, 17,62 mm al 50% y 19,18 mm al 75%, existiendo
diferencias significativas en los halos de inhibición (p<0,05) entre las distintas
concentraciones de las infusiones de Illicium verum sobre Porphyromonas gingivalis, tanto
a las 24 como a las 48 horas de inoculación, destacando que de acuerdo a De y cols. (2002)
(41) la actividad antimicrobiana del anís estrellado (Illicium verum) se debe principalmente
al anetol, así como otros compuestos que forman parte de la composición en menor
proporción.
Estos resultados coinciden con el estudio de Melendez y cols. (2016) (18) al señalar que el
extracto de Illicium verum inhibe el crecimiento in vitro de Porphyromonas gingivalis a
concentraciones elevadas luego de 24 horas de incubación, encontrando similitud también
con la investigación de Singh y cols. (2007) (42) al concluir que el extracto de plantas como
el Illicium verum, aunque son menos efectivos a una concentración más baja, dan lugar a
una inhibición completa del crecimiento bacteriano cuando la concentración aumenta. Por
otra parte, Valladares (2011) (43) desarrolló una investigación con el objetivo de determinar
el efecto inhibitorio de la infusión del anís estrellado sobre el crecimiento de Streptococcus
mutans, empleando cinco diversas concentraciones (5%, 25%, 50%, 75% y 100%),
demostrando que el efecto inhibitorio aparece a partir de la concentración del 25%,
alcanzando el mayor nivel a una concentración del 75%.
35
Igualmente, existe coincidencia con el estudio de Ruíz (2011) (44) que analizó el efecto
inhibitorio de la infusión de anís estrellado a concentraciones del 5%, 25%, 50%, 75% y
100% sobre la placa bacteriana bucal demostrando variación en el promedio del diámetro de
halo de inhibición, especialmente a partir del 50%, aumentando el efecto inhibitorio a
medida que se incrementaba la concentración, similar coincidencia se observa en la
investigación de Alhajj y cols. (2019) (45) donde se evaluaron tres extractos obtenidos del
anís estrellado, correspondientes a dos extractos metanólicos (metanol absoluto y metanol al
50%) y un extracto acuoso, obtuvo como resultado que los extractos de la planta exhibieron
efectos inhibitorios contra bacterias Gram negativas (Escherichia coli y Salmonella
entérica), mismo grupo al que pertenece Porphyromonas gingivalis, variando las zona de
inhibición entre 7 y 15 mm, siendo importante destacar que el extracto acuoso exhibió la
actividad antibacteriana más baja entre los extractos, con zonas de inhibición que
presentaron un máximo de 9 mm, sin embargo, se mantiene en un rango alto.
Por el contrario los resultados obtenidos en la presente investigación no coinciden con el
estudio de Iauk y cols. (2003) (46) desarrollado con el objetivo de determinar la actividad
antibacteriana de extractos de plantas medicinales contra bacterias periodontopáticas y
tampoco coinciden con Shan y cols. (2007) (47) donde se determinó la actividad
antibacteriana in vitro de un total de 46 extractos de especias dietéticas y hierbas
medicinales, resultando en ambas investigaciones que el Illicium verum fue la planta
medicinal que mostró ninguna o menor actividad antibacteriana contra las cepas Gram
negativas analizadas, entre las cuales se encontraba la Porphyromonas gingivalis, aunque
este resultado podría explicarse por el mecanismo particular de acción de algunos
componentes activos presentes en la planta que causan menor interferencia con el
metabolismo de estas bacterias en comparación con otros extractos vegetales.
Con respecto al efecto inhibitorio del gluconato de clorhexidina al 0,12%, usado como
control positivo sobre Porphyromonas gingivalis, el presente estudió determinó un efecto
alto, presentando halos de inhibición superiores, tanto a las 24 horas (31,53 mm) como a las
48 horas (31,74 mm), en relación a la infusión de anís estrellado (Illicium verum) a diferentes
concentraciones, mientras que con respecto al suero fisiológico usado como control negativo
este mostró un efecto leve con iguales halos de inhibición, tanto a las 24 como a las 48 horas
(6 mm), evidenciando para ambos controles diferencias estadísticamente significativas en la
medición de halos de inhibición con respecto al Illicium verum en las diversas
concentraciones y tiempos, resultados que coinciden con la investigación de Singh y cols.
36
(2005) (48), Aunque señala que el extracto de Illicium verum a pesar que registró dentro del
rango un efecto inhibitorio alto mostró una mayor actividad con respecto a los bactericidas
comerciales, como la ampicilina y la clorhexidina, encontrando alta efectividad sobre
bacterias Gram negativas, diferencia que se puede considerar porque la actividad de los
componentes del anís estrellado puede verse afectada con la duración del periodo de
almacenamiento.
Estos resultados no coinciden con los alcanzados en el estudio de Ruíz (2011) quien al
realizar la comparación general del promedio del diámetro de halo de inhibición encontró
que la clorhexidina presentó una mayor actividad inhibitoria con respecto a la infusión de
Illicium verum, aunque se puede explicar aduciendo que el estudio se fundamentó en la
escala de Duraffourd, la cual presenta 4 niveles de efectividad con rangos más amplios que
van de < 8 mm a ≥ 20 mm.
Finalmente, los hallazgos reflejados en el estudio de Yang y cols. (2010) (49), realizado con
el objetivo de identificar compuestos antimicrobianos en Illicium verum y evaluar la eficacia
antibacteriana de estos contra patógenos resistentes a antibióticos, obteniendo zonas de
inhibición entre 15 y 21 mm sobre las bacterias analizadas, sugieren la posibilidad de utilizar
los extractos de la planta como antimicrobianos naturales debido a la comprobada actividad
antibacteriana.
Entre las limitaciones encontradas al realizar la revisión bibliográfica para el desarrollo de
la presente investigación son las escasas investigaciones previas que relacionen directamente
el efecto del extracto de anís estrellado (Illicium verum) con cepas de Porphyromonas
gingivalis, por lo que se realizó la comparación de los resultados alcanzados con
publicaciones que considerarán esta planta con algunas otras bacterias, especialmente del
grupo Gram negativas.
37
CAPÍTULO V
4. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
4.1. Conclusiones
El efecto inhibitorio de la infusión de anís estrellado (Illicium verum) sobre la
Porphyromonas gingivalis se incrementa en la medida que aumentan los niveles de
concentración del extracto de la planta.
La infusión de anís estrellado (Illicium verum) a concentración del 25%, 50% y 75%
reportan un alto efecto inhibitorio (halo de inhibición >8 mm) sobre cepas de
Porphyromonas gingivalis a las 24 horas de inoculación, a la concentración de 75%
se reporta el mayor valor de la media del halo de inhibición (18,26 mm).
La infusión de anís estrellado (Illicium verum) a concentración de 25%, 50% y 75%
exhibe una alta actividad inhibitoria sobre cepas de Porphyromonas gingivalis a las
48 horas de inoculación, el mayor valor de la media se evidencia en la sustancia al
75% con 18,84 mm.
Al comparar el efecto inhibitorio de la infusión de anís estrellado (Illicium verum) a
concentración de 25%, 50% y 75% sobre cepas de Porphyromonas gingivalis a las
24 y 48 horas de inoculación, se demuestra que en ambos tiempos de inoculación
tienen un alto efecto inhibitorio en el 100% de las muestras estudiadas, sin embargo,
existe diferencia significativa entre los halos de inhibición a las concentraciones de
50% y 75%.
Mediante los resultados se evidenció que la infusión de anís estrellado (Illicium
verum) a diferentes concentraciones posee igual efecto inhibitorio que la
clorhexidina al 0.12% y mayor acción inhibitoria que el suero fisiológico frente a las
cepas de Porphyromonas gingivalis a las 24 y 48 horas de inoculación.
38
4.2. Recomendaciones
Desarrollar investigaciones con extracto de Illicium verum a una concentración del 100%
con el fin de determinar si maximiza el efecto inhibitorio sobre Porphyromonas
gingivalis.
Realizar más estudios sobre el efecto antimicrobiano del anís estrellado sobre
Porphyromonas gingivalis considerando otros métodos de extracción como puede ser el
extracto metanólico o el aceite esencial.
Investigar el efecto inhibitorio del anís estrellado sobre otros tipos de microorganismos
patógenos residentes en la cavidad bucal.
Diseñar tratamientos preventivos de patologías infecciosas bucales con base en el uso
del extracto de anís estrellado (Illicium verum), que permitan disminuir costos y efectos
secundarios en los pacientes.
39
BIBLIOGRAFÍA
1. González M, Toledo B, Nazco C. Enfermedad periodontal y factores locales y sistémicos asociados. Rev Cubana Estomatol. 2002 septiembre-diciembre; 39(3): p. 374-395.
2. Pardo F, Hernández L. Enfermedad periodontal: enfoques epidemiológicos para su análisis como problema de salud pública. Revista de salud pública. 2018 Abril; 20(2): p. 41-50.
3. Carvajal P. Enfermedades periodontales como un problema de salud pública: el desafío del nivel primario de atención en salud. Rev. Clin. Periodoncia Implantol. Rehabil. Oral. 2016 agosto; 9(2): p. 177-183.
4. Díaz A, Vivas R, Puerta L, Ahumedo M, Cabrales R, Herrera A, et al. Periodontitis, Porphyromonas gingivalis y su relación con la expresión de quorum sensing. Rev Cubana Estomatol. 2010 octubre-diciembre; 47(4): p. 404-416.
5. Bascones A, Figuero E. Las enfermedades periodontales como infecciones bacterianas. Avances en Periodoncia. 2005 diciembre; 17(3): p. 147-156.
6. Bascones A, Caballero A. Actinobacillus Actinomycetemcomitans y Porphyromonas Gingivales como principales patógenos periodontales. Avances en Periodoncia. 2000 septiembre; 12(2): p. 69-75.
7. Echeverría J, Lang N. Periodoncia clínica. diagnóstico y tratamiento periodontal de Periodoncia. Revista científica de la Sociedad Española. 2018; IV(11): p. 128-135.
8. Instituto Nacional de Investigación Dental y Craneofacial. https://www.nidcr.nih.gov/sites/default/files/2018-01/enfermedad-encias-enfermedad-periodontal_3.pdf. [Online].; 2013 [cited 2020 enero 22. Available from: https://www.nidcr.nih.gov/sites/default/files/2018-01/enfermedad-encias-enfermedad-periodontal_3.pdf.
9. Stockwell C. Nature's Pharmacy: A History of Plants and Healing. 1st ed. California: Century; 1988.
10. Orrego M, Parra MA, Salgado Y, Muñoz E, Fandiño V. Porphyromonas gingivalis y enfermedades sistémicas. CES odontol. 2015 Junio; 28(1): p. 26-31.
11. Baruch N, Nachón M, García M, Briseño M, Hernández G, López G, et al. Eficacia de la clorhexidina en el tratamiento de gingivitis: tabletas o colutorio. Rev Med UV. 2012 Diciembre; 12(2): p. 6-12.
12. Organización Mundial de la Salud. Estrategia de la OMS sobre medicina tradicional. Ginebra:; 2013.
13. Gallegos M. Las plantas medicinales: principal alternativa para el cuidado de la salud, en la población rural de Babahoyo, Ecuador. An. Fac. med. 2016 Diciembre; 77(4): p. 56-63.
14. Fundación Dr. Antonio Esteve. Guía de plantas medicinales del Magreb: Anís Estrellado. ; 2016.
15. Sivakumar , Sree , Padma J, Nithyananthi M, Saraniya P, Smila K. Antimicrobial activity of selected spices- a bio preservative approach. Journal of Chemical and Pharmaceutical Sciences. 2016 Junio; 9(1): p. 304-307.
16. Vázquez D, Pérez ME, Reyna A, Méndez I, Tamayo. Periodontopatías y algunos factores de riesgo en población adulta de la Policlínica César Fornet Fruto. CCM. 2013 Septiembre; 17(3): p. 60-64.
40
17. Organización Mundial de la Salud. Salud bucodental. [Online].; 2018 [cited 2019 Noviembre 9. Available from: https://www.who.int/es/news-room/fact-sheets/detail/oral-health.
18. Melendez F, Barrón M, Rodríguez R, Morales M, Elizondo A. Inhibición de Porphyromonas gingivalis por Cinnamomun verum E Illicium verum. Investigación y Desarrollo en Ciencia y Tecnología de Alimentos. 2016 Diciembre; 1(1): p. 280-285.
19. Hernández A. Fitoterapia. Bases científicas y legales para su aplicación. Boletín Latinoamericano y del Caribe de Plantas Medicinales y Aromáticas. 2005 Julio; 4(4): p. 71-74.
20. D'Souza S, Chavannavar , Kanchanashri B, Niveditha S. Perspectivas farmacéuticas de especias y condimentos como remedio antimicrobiano alternativo. J Evid basado complementario Altern Med. 2017 Octubre; 22(4).
21. Maofari A, Hajjaji S, Debbab A, Zaydoun S, Ouaki B, Charof R, et al. Chemical composition and antibacterial properties of essential oils of Pimpinella Anisum L. Growing in Morocco and Yemen. St. Cerc. St. CICBIA. 2013 Enero; 14(1): p. 11 – 16.
22. Clínica Dental Felipe. Que tipos de enfermedades periodontales existen. [Online].; 2018 [cited 2020 enero 22. Available from: https://www.clinicadentalfelipe.es/que-tipos-de-enfermedades-periodontales-existen/.
23. Ramos D, Moromi H, Martínez. Porphyromonas gingivalis: patógeno predominante en la periodontitis crónica. Odontol. Sanmarquina. 2011 Abril; 14(1): p. 34-38.
24. 123RF. Periodontitis. [Online].; 2016 [cited 2020 enero 22. Available from: https://es.123rf.com/photo_82111757_ilustraci%C3%B3n-vectorial-de-la-periodontitis-porphyromonas-gingivalis-estomatolog%C3%ADa-.html.
25. Abusleme L. Genotipificación de los genes rgpA y kgp que codifican para las gingipaínas de Porphyromonas gingivalis. Revista clínica de periodoncia, implantología y rehabilitación oral. 2012 Febrero; 5(3): p. 135-138.
26. Chaves K. Intoxicación por anís de estrella. Acta pediátr costarric. 2009 Noviembre; 21(1): p. 60-61.
27. LUSH. Infusión de Anís Estrellado (Illicium verum). [Online].; 2020 [cited 2020 enero 22. Available from: https://es.lush.com/ingredients/infusion-de-anis-estrellado-illicium-verum.
28. Romero. Antisépticos en Odontología. Tendencias en Medicina. 2009 Mayo; 1(1): p. 83-86.
29. Naverac N, de Grado P, Gil F. Periodoncia para el higienista dental. Periodoncia y Osteointegración. 2007 Marzo; 17(1): p. 41-52.
30. Maya JJ, Pacheco , Valderrama , Villegas. Papel de la clorhexidina en la prevención de las infecciones asociadas a la atención en salud. Infectio. 2011 Abril; 15(2): p. 98-107.
31. Torres M, Díaz M, Acosta A. La clorhexidina, bases estructurales y aplicaciones en la estomatología. Gaceta Médica Espirituana. 2009 enero-abril; 11(1): p. 12-17.
32. Trigoso L, Trigoso V. Efecto antimicrobiano del digluconato de clorhexidina al 0,5%, aplicado por aspersión, en la contaminación bacteriana de los cepillos dentales. Vist Dent. 2011 Enero; 14(1): p. 23-27.
33. Wang , Siguas. Estudio comparativo de la efectividad antibacteriana de la asociación de la clorhexidina al 2%, de hidróxido de calcio, puntas de hidróxido de calcio y puntas de clorhexidina frente al Enterococcus faecalis. Kiru. 2007 Marzo; 4(1): p. 14-15.
41
34. Bonilla D, Mendoza Y, Moncada C, Murcia O, Rojas Á, Calle J, et al. Efecto del aceite esencial de Rosmarinus officinalis sobre Porphyromonas gingivalis cultivada in vitro. Rev. Colomb. Cienc. Quím. Farm. 2016 Diciembre; 45(2): p. 275-287.
35. Madurga M. Anís estrellado, ¿una planta medicinal inocua? Revista Pediatría de Atención Primaria. 2002 Diciembre; IV(16): p. 105-114.
36. Santambrosio E, Ortega M, Garibaldi P. Siembra y recuento de microorganismos. Argentina: Universidad Tecnológica Nacional, Ingeniería química; 2009.
37. Diomedi A, Chacón E, Delpiano L, Hervé , Jemenao , Medel M, et al. Antisépticos y desinfectantes: apuntando al uso racional. Recomendaciones del Comité Consultivo de Infecciones Asociadas a la Atención de Salud, Sociedad Chilena de Infectología. Rev Chilena Infectol. 2017 Septiembre; 34(2): p. 156-174.
38. Martín R, Yep G, Sánchez M, Villalobos E, Flores P. Estudio sobre la eficacia y utilidad de la solución salina hipertónica al 3% en la bronquiolitis aguda del lactante hospitalizado. Rev Pediatr Aten Primaria. 2013 Junio; 15(58): p. 256-262.
39. Mariani M, Jaimes G, Fernandez R. Efecto bacteriostático del extracto de semillas de cacao (Theobroma cacao L.) sobre el crecimiento de Streptococcus mutans in vitro. ODOUS Científica. 2014 enero-junio; 11(1): p. 15-22.
40. Cavalieri S. Manual de Pruebas de Susceptibilidad Antimicrobiana. Seattle: Library of Congress Cataloging-in-Publication Data; 2015.
41. De M, De A, Sen P, Banerjee A. Antimicrobial properties of star anise (Illicium verum Hook f). Phytother Res. 2002 febrero; 16(1): p. 94-95.
42. Singh G, Maurya S, Marimuthu P, Murali H, Singh A. Antioxidant and antibacterial investigations on essential oils and acetone extracts of some spices. Natural Product Radiance. 2007; 6(2): p. 114-121.
43. Valladares E. Efecto inhibitorio "in vitro" de la infusión de anís estrella (Illicium verum) sobre el crecimiento de Streptococcus mutans. Tesis de Grado. Trujillo: Universidad Nacional de Trujillo, Facultad de Medicina; 2011.
44. Ruiz C. Efecto inhibitorio in vitro de la infusión de anis estrellado (Illicium verum) y de la clorhexidina al 0,12% sobre bacterias anaeróbicas facultativas primarias de la placa bacteriana. Tesis de Grado. Trujillo: Universidad Nacional de Trujillo, Escuela de Estomatología; 2011.
45. Alhajj M, Qasem M, Jar El Nabi A, Al-Mufarrej S. In-Vitro Antibacterial and Antifungal Effects of High Levels of Chinese Star Anise. Braz. J. Poult. Sci. 2019; 21(1): p. 1-8.
46. Iauk L, Lo Bue A, Milazzo I, Rapisarda A, Blandino G. Antibacterial activity of medicinal plant extracts against periodontopathic bacteria. Phytother Res. 2003 junio; 17(6): p. 599-604.
47. Shan B, Cai Y, Brooks J, Corke H. The in vitro antibacterial activity of dietary spice and medicinal herb extracts. Int J Food Microbiol. 2007 junio; 117(1): p. 112-119.
48. Singh G, Maurya S, deLampasona M, Catalan C. Chemical constituents, antimicrobial investigations and antioxidative potential of volatile oil and acetone extract of star anise fruits. Journal of the Science of Food and Agriculture. 2005; 86(1): p. 111-121.
49. Yang J, Yang C, Chang H, Yang C, Wang S, Hsieh M, et al. Chemical composition and antibacterial activities of Illicium verum against antibiotic-resistant pathogens. J Med Food. 2010 octubre; 13(5): p. 1254-1262.
42
ANEXOS
Anexo A. Constancia aceptación de la tutoría
43
Anexo B. Aceptación del tema
44
45
Anexo C. Certificado de la biblioteca de no reflejar coincidencia
46
Anexo D. Carta de idoneidad ética y experticia del tutor
47
Anexo E. Carta de idoneidad ética y experticia del investigador
48
Anexo F. Declaración de conflictos de intereses del tutor
49
Anexo G. Declaración de conflictos de intereses del investigador
50
Anexo H. Carta de confidencialidad
51
52
53
Anexo I. Oficio de la autorización de la institución donde se realiza el estudio
54
55
Anexo J. Hoja de recolección de datos
56
57
Anexo K Certificado de MEDIBAC de la cepa de Porphyromona gingivalis.
58
59
60
Anexo L Certificado de protocolo manejo de desechos
61
Anexo M. Certificado de la elaboración de la infusión de Illicium verum.
62
Anexo N. Certificado de viabilidad ética
63
Anexo O. Certificación del Urkund.
64
65
Anexo P. Certificación de renuncia a la autoría del estadístico.
66
Anexo Q. Certificado renuncia a la autoría del laboratorio.
67
Anexo R. Certificado del abstract.