Universidad Autónoma de TamaulipasFacultad de Enfermería de Nuevo Laredo

M.E. Daniel Zamora FernándezUNIDAD II

Microscopia

Tipos de Microscopio

Microscopio Compuesto Microscopio Óptico Microscopio Digital Microscopio Fluorescente Microscopio Electrónico Microscopio estéreo

El medio de cultivo se emplea para el crecimiento de una bacteria dada ha de contener todos los nutrientes indispensables y la concentración adecuada de sales e iones, y debe de tener además el pH apropiado para que el crecimiento bacteriano ocurra. La humedad también es esencial para que los diversos ingredientes estén en forma soluble o de modo que puedan ser solubilizados para facilitar la difusión dentro de la célula.

Medios de Cultivo

Medio sintetico : los nutrientes se proporcionan qumicamente puros (bacterias heterotrofas)

Medios complejos: no son definidos con exactitus los ingredientes, por lo general mezclas de productos organicos de plantas, animales o levaduras solo con sales adecuadas.(desarrollo amplio de bacterias)

Con frecuencia se emplean productos como extractos de malta, musculos u otro tejodo animal o levadura para hornear. Tambien se usan acidos o enzimas de carne digerida, caseina o proteína de soya

Tipos de medios de cultivo

Cultivos Puros: Para estudiar u caracterizar un microorganismo en particular, primero se tiene que separar y desarrollar libre de otros microorganismos; esto es lo que se llam un cultivo puro.

El tiempo de generacion de un microbio es el que se requiere para una division celular completa. Algunos microbios son capaces de dividirse a intervalos hasta de 12 a 15 minutos; otros tardan de 15 minutos a varias horas; y unos pocos son de crecimiento lento y pueden requererir mas de 1 o 2 dias para que se realice la division celular. El crecimiento de los microorganismos puede ser dinamico y tener efectos profundos sobre el medio que lo rodea cuando disponen de los nutrientes adecuados y otras condiciones le son favorables

Crecimiento Microbiano

Fisión binaria es la forma de división celular de las células procariotas. Mitosis es la forma más común de la división celular en las células eucariotas. Una célula que ha

adquirido determinados parámetros o condiciones de tamaño, volumen, almacenamiento de energía, factores medioambientales, puede replicar totalmente su dotación de ADN y dividirse en dos células hijas, normalmente iguales. Ambas células serán diploides o haploides, dependiendo de la célula madre.

Meiosis es la división de una célula diploide en cuatro células haploides. Esta división celular se produce en organismos multicelulares para producir gametos haploides, que pueden fusionarse después para formar una célula diploide llamada cigoto en la fecundación.

Los seres pluricelulares remplazan su dotación celular gracias a la división celular y suele estar asociada a la diferenciación celular. En algunos animales, la división celular se detiene en algún momento y las células acaban envejeciendo. Las células senescentes se deterioran y mueren, debido al envejecimiento del cuerpo. Las células dejan de dividirse porque los telómeros se vuelven cada vez más cortos en cada división y no pueden proteger a los cromosomas. Las células cancerosas son inmortales. Una enzima llamada telomerasa permite a estas células dividirse indefinidamente.

La característica principal de la división celular en organismos eucariotas es la conservación de los mecanismos genéticos del control del ciclo celular y de la división celular, puesto que se ha mantenido prácticamente inalterable desde organismos tan simples como las levaduras a criaturas tan complejas como el ser humano, a lo largo de la evolución biológica.

Procesos de división celular

Metodos de Tincion

En su mayor parte los microorganismos son demasiado pequeños para observarse a simple vista: protozoos, algas, hongos, bacterias y virus.

Estos microorganismos difieren en características tales como forma de nutrición, estructura, tamaño, composición entre otros aspectos; es por ello que se emplea el estudio microscópico el facilita notablemente la observación; principalmente en las bacterias se facilita al tratarlas con colorantes o tintes los cuales facilitan también la observación de ciertas estructuras celulares.

En este informe vamos a distinguir la estructura intracelular de algunos microorganismos, tal es el caso de la sarcina, Klecciela, Bacilo Serium entre otros. Desarrollamos los métodos de tinción y damos a conocer un análisis de los resultados obtenidos en la práctica.

Tinciones

DESARROLLO: Mecanismos de Coloración: La coloración celular y tejidos son una combinación de fenómenos

físicos y químicos de absorción: los fenómenos físicos de absorción, capilaridad y ósmosis participan en cierto grado. La afinidad de colorantes básicos por los tejidos ácidos y viceversa indican que hay reacción química.

Los Colorantes: Son compuestos, orgánicos que contienen radicales cromóforos esto

es que producen color y grupo de anxocromos que forman sales los grupos nitrito (-NO2) y azo (-N = N) son cromóforos. Los radicales hidroxilo (-OH) y amino (-NH2) son grupos anxocromos. Los cromóforos imparten la propiedadcromógena al colorante y los anxocromos permiten que el colorante se una con la fibra o tejido.

Preparación de Frotis Bacteriano para Coloración: Entes de la tinción las bacterias suelen encontrarse

en agua o en otro líquido en un porta objeto limpio y son extendido en una película uniforme y delgada. Se deja que la película seque en el aire y los microorganismos son fijados por sustancias químicas o por el calor moderado.

Tinciones: Es un método utilizado para estudiar microorganismos.

(no vivos); en estas tinciones se observa morfología, estructura y agrupamientos de microorganismos.

Tipos de Tinción: Tinción Simple: utiliza un solo colorante. Tinción de Gram: Utiliza varios colorantes (cristal violeta 1m, Yodo 1m, lavado con alcohol,

Safranina 30 seg) Tinción Ácido Resistente: Una vez teñidos, conservan su color resistiendo al lavado con ácido

mineral reducido. En esta tinción las bacterias ácido resistentes conservan el colorante primario color rosa o rojo, los demás microorganismos son decolorados por el ácido y toman el color azul.

Tinción de Giensa: El colorante se aplica a un frotis de sangre y se utiliza cuando se sospeche de protozoos en la

sangre para observar materias núcleos de la células. Tinción de Esporas: Se usa verde de malaquita en contraste con safranina. Tinción de Cápsula: Colorante nigrosuna, aquí se observa microorganismos encapsulados

creando resistencias. Tinción de Flagelos: Se usa mordiente el cual aumenta el tamaño del microorganismo. Endósporas: Son unos cuerpos resistentes que se producen en el interior de la célula los

cuales contienen los componentes necesarios para conservar la vida. Las esporas pueden situarse en el centro de la célula o en situaciones excéntricas cerca de un

extremo de la misma. Levaduras: Son esféricas, elípticas y cilíndricos, su tamaño varía notablemente. Son hongos

cuya forma corriente y dominante de crecimiento es unicelular. Las Cápsulas: Son estructuras grueso viscosas gelatinosas que rodean las células de algunas

especies. Sarcina: Son anaerobios obligados y son extremadamente ácido – tolerantes que pueden

fermentar azúcares y crecer a pH inferior a 2. Este género comprende 2 especies de bacterias que se dividen en tres planos perpendiculares para producir paquetes de 8 en una célula.

Bacillus Cereus: La mayoría se encuentra en el suelo o en partículas de polvo en suspensión y son uno de los organismos del género Bacillus que pueden ser aislados fácilmente. Puesto que los formadores de esporas pueden aislarse selectivamente a partir del suelo, alimentos o de otro material dejando las muestras a 80 ºC durante 10 minutos. Los bácillus suelen crecer en medios sistemáticos que contengan azúcares, ácidos orgánicos, alcoholes, etc, como única fuente de carbono y amoníaco como única fuente de nitrógeno.

Análisis de Resultados: Existe varios tipos de tinciones de loas cuales estudiamos: Tinción de Gram Tinción simple Tinción de esporas Tinción de Gram: Dividida en gram positivo y gram negativo, en el caso de los gram (+) la 

muestra fue sarcina, puesto que una tonalidad violeta fijada en su estructura determina la presencia de la misma puesto que fijó en su estructura el cristal violeta.

Y en el gran (-) utilizamos salmonella identificada por la presencia de muchas estructura un poco triangulares de color rojo.

En la muestra de la práctica anterior 3 eran gran positivo por su coloración morada.

Tinción Simple: Estudia levaduras, en este experimento se usa un solo colorante que fue azul

de metileno, donde observamos que las levaduras tenían cocos. Estas células bacterianas difieren desde el punto de vista químico de su medio exterior y por eso se tiñen contrastando con su alrededor.

Tinción de Esporas: La bacteria es una estructura muy pequeña, sin embargo, por medio de esta

tinción pudimos observar la estructura interna de la célula bacteriana, particularmente las endosporas, en este experimento se utiliza una tinción simple debido a que la misma permite que se coloree toda la célula excepto la espora que se observa de un tamaño bien aceptable.

Estafilococo Estreptococos Neumococos Neisserias Espiroquetas Clostridios Pseudomonas Salmonellas Proteus S. Shigellas Ricepcias y Clamidias

Bacteriología especial

Metodos de Esterilizacion y desinfeccion

La esterilización es el proceso de eliminación de toda forma de vida, incluidas las esporas. Es un término absoluto que implica pérdida de la viabilidad o eliminación de todos los microorganismos contenidos en un objeto o sustancia, acondicionado de tal modo que impida su posterior contaminación.

Que es la esterilización?

Métodos físicos Calor húmedo (en autoclave de vapor) Calor seco (en horno de esterilización) Radiación gamma

Métodos químicos óxido de etileno peróxido de hidrógeno

Metodos de esterilizacion

Métodos químicos Los métodos químicos de esterilización son

aquellos que involucran el empleo de sustancias letales para los microorganismos, tales como el óxido de etileno y el peróxido de hidrógeno. El uso de este método es muy limitado para la Industria Alimentaria pero muy utilizado en otras industrias como la farmacéutica por ejemplo.

Métodos físicos Los métodos físicos son aquellos que no

involucran el empleo de sustancias letales para los microorganismo, sino procedimientos físicos como la radiación ionizante, el calor o la filtración de soluciones con membranas que impiden el paso de microorganismos, incluyendo virus.

Métodos térmicos Los métodos térmicos suelen englobar todos los

procedimientos que tienen entre sus fines la destrucción de los microorganismos por el calor. Nos estamos refiriendo tanto a la Pasteurización y a la Esterilización, cuya finalidad principal es la destrucción microbiana, como al Escaldado y a la Cocción, procesos en los que también se consigue una cierta reducción de la flora microbiana, pero que sus objetivos principales son la variación de las propiedades físicas.

Aplicaciones En investigación de laboratorios científicos es empleado

principalmente para eliminar microorganismos de los elementos de trabajo, evitando así la contaminación de la muestra, recipientes y material de trabajo.

En la industria alimentaria se emplea para aumentar la vida útil de los alimentos. Los alimentos esterilizados más comunes son los enlatados.

Se usa también para la conservación y alargamiento de la vida de libros, muebles, obras de arte y otros bienes.

En los hospitales es empleado principalmente para eliminar agentes patógenos de los instrumentos quirúrgicos reutilizables.

Los fabricantes de productos sanitarios esterilizan los productos para poder utilizarlo con asepsia en un procedimiento quirúrgico o de laboratorio por los profesionales sanitarios.

Se denomina desinfección a un proceso físico o químico que mata o inactiva agentes patógenos tales como bacterias, virus y protozoos impidiendo el crecimiento de microorganismos patógenos en fase vegetativa que se encuentren en organismos vivos.

Los desinfectantes reducen los organismos nocivos a un nivel que no dañan la salud ni la calidad de los bienes perecederos. Algunos, como los compuestos fenólicos, pueden actuar también como antisépticos.

Los desinfectantes se aplican sobre objetos inanimados, como instrumentos y superficies, para tratar y prevenir las infecciones. Entre los desinfectantes químicos del agua más habituales se encuentran el cloro, las cloraminas, el ozono. La desinfección del agua también puede ser física cuando se emplea la ebullición, la filtración y la irradiación ultravioleta. Se deben distinguir los desinfectantes de los sanitizantes que son sustancias que reducen el número de microorganismos a un nivel seguro.

Que es la Desinfección?

Esterilización química: se eliminan todos los microorganismos y esporas con tiempos de exposición prolongados (3-12 h).

Desinfección de alto nivel: Con concentraciones similares pero con períodos de exposición más cortos, se matan todos los microorganismos excepto gran número de esporas.

Desinfección de nivel intermedio: se matan mico bacterias, bacterias vegetativas, la mayoría de virus y hongos, pero no necesariamente esporas.

Desinfección de bajo nivel: se matan la mayoría de bacterias, algunos hongos, y algunos virus en un práctico período de tiempo (hasta10 min.)

Categorias

El médico norteamericano E. H. Spaulding hizo en 1968 el primer estudio racional, sobre desinfección atendiendo al riesgo de infección en pacientes derivado del uso del instrumento a tratar. Dividió a dichos instrumentos en tres categrías:1

Clasificación de instrumental atendiendo a su riesgo

Artículos críticos: son los que entran en contacto con tejidos estériles o el sistema vascular del paciente. Presentan un alto riesgo de infección si son contaminados por algún microorganismo. Dentro de esta categoría están los instrumentos quirúrgicos, catéteres cardiacos y urinarios, implantes, pruebas de ultrasonidos usadas en cavidades corporales estériles. Estos instrumentos deben ser esterilizados utilizando vapor o esterilizantes químicos.

Artículos semicríticos: son los que contactan con mucosas o piel no intacta. En esta categoría están los instrumentos para terapia respiratoria y anestesia, algunos endoscopios, palas de laringoscopio, pruebas manométricas esofageales, cistoscopios, catéteres de manometría anorectal y anillos diafragmáticos. Deben estar libres de todo microorganismo, pero se permite un pequeño número de esporas. Como mínimo requieren desinfección de alto nivel, usando desinfectantes químicos.

Artículos no críticos: Contactan con piel intacta pero no con mucosas. Virtualmente no existe riesgo documentado de transmisión de agentes infecciosos. Pertenecen a esta categoría: Artículos no críticos del cuidado del paciente, manguitos de medida de presión, muletas,…, y superficies medioambientales no críticas, frecuentemente tocadas con las manos y que potencialmente podrían contribuir a la transmisión secundaria entre el trabajador y el paciente: camas, utensilios de comida, muebles y suelo. Deben ser descontaminados con desinfectantes de bajo nivel.

Existen diferentes mezclas de desinfectantes totalmente registradas donde podemos encontrar aparte de todas las materia activas mencionadas anteriormente alguna otra.

Es importante que antes de usar un desinfectante, nos aseguremos que este cumple con la normativa vigente y que precisa del registro (HA) que es el necesario para poderlos aplicar en las Industrias alimentarias.

También hay que valorar aparte del coste económico del producto y la efectividad, los peligros que estos entrañan y seguir los consejos del fabricante. Hay productos de bajo coste económico y alta efectividad, pero que sin embargo son productos tóxicos, carcinogénicos, mutagénicos, etc. y en caso de accidente o peligro disponer siempre de las fichas de seguridad de todos los productos que usemos.

Entre los desinfectantes habituales se encuentran: Alcoholes. Cloro y compuestos clorados. Formaldehído. Glutaraldehído. Peróxido de Hidrógeno. También llamada agua oxigenada, limpia y desinfecta la piel,

ofreciendo todo el cuidado e higiene que la piel necesita proporcionando una limpieza e higiene para la piel y desinfectando las pieles sanas. No se puede ingerir y su uso es para desinfectar zonas externas, hay que evitar el contacto con ojos, mucosas y zonas sensibles.

Yodóforos. Orto-ftalaldehído (OPA). Ácido Peracético. Compuestos fenólicos. Compuestos de Amonio cuaternario.

Tipos de Desinfectantes

Alto poder bactericida (que actúe a grandes diluciones). Amplio espectro. Estable (período activo durante un mínimo de 3 a 6 meses). Homogéneo (concentración similar en todos los niveles de

una solución). Penetrante (de tensión superficial baja). Soluble en agua, por lo que es útil para el lavado de piel,

escaras, etc. Soluble en grasas. Compatible con otros productos químicos (jabón, cera, etc.). Disponibilidad y buena relación costo-riesgo-beneficio

Características de un Desinfectante