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1.1. GENERALIDADES

La Microbiología es la ciencia encargada del estudio de los microorganismos, seres vivos pequeños (de micros "pequeño", bios, "vida" y logos, "estudio"), también conocidos como microbios. Es la rama de la biología dedicada a estudiar los organismos que son solo visibles a través del microscopio (virus, procariontes y eucariontes simples). Son considerados microbios todos los seres vivos microscópicos consistentes en una sola célula, es decir unicelulares, así como aquellos que forman agregados celulares en los cuales todas las células son equivalentes (en los cuales no existe diferenciación celular). Los microorganismos pueden ser eucariotas (las células poseen núcleo), tales como los hongos y los protistas, o procariotas (células carentes de núcleo), como las bacterias y los virus (aunque los virus no son considerados seres vivos estrictamente hablando).

1.2. MICROORGANISMO

Son seres que forman parte de una vida pequeña, por lo que no son observados a simple vista sino con la ayuda del microscopio, además estos organismos pueden cumplir con una acción benéfica como patógena. Los microorganismos se subdividen en: parásitos, bacterias, mohos, levaduras, virus, algas y protozoarios. 1.3. IMPORTANCIA Y BENEFICIOS DE LA MICROBIOLOGÍA

Los microbiólogos han hecho contribuciones fundamentales a la biología y medicina, especialmente en los campos de la bioquímica, genética y biología celular. Los microbios tienen muchas características que los hacen organismos modelo ideales:

Son pequeños, por lo que no consumen muchos recursos. Algunos tienen tiempos de generación muy cortos (el tiempo necesario

para la división de una célula baterial en dos en condiciones óptimas; 30 minutos para E. coli, pero de 12 a 24 horas para Mycobacterium tuberculosis).

Las células pueden sobrevivir fácilmente separadas de otras células. Los eucariontes unicelulares se reproducen por división mitótica y los

procariontes mediante fisión binaria. Esto permite la propagación de poblaciones clónicas genéticamente iguales.

Pueden permanecer congelados por grandes períodos de tiempo. Aún y cuando el 90% de las células mueran en el proceso de congelación, existen millones de células en cada mililitro de líquido cultural.

A pesar de que los microbios son a menudo vistos negativamente a causa de su asociación con muchas enfermedades humanas, éstos son también los

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responsables de muchos procesos beneficiosos, entre ellos las fermentaciones industriales (para la producción de bebidas alcohólicas o productos lácteos), la producción de antibióticos o la de otros productos de interés farmacéutico o biotecnológico (hormonas, enzimas,...). Finalmente, cabe también destacar el papel esencial que los microorganismos juegan en los laboratorios de investigación biológica de todo el mundo como herramientas para la clonación de genes y la producción de proteínas.

1.4. TIPOS DE MICROBIOLOGIA

El campo de la microbiología puede ser dividido en varias ramas:

1.4.1. FISIOLOGÍA MICROBIANA: Estudio a nivel bioquímico del funcionamiento de las células microbianas. Incluye el estudio del crecimiento, el metabolismo y la estructura microbiana. 1.4.2. GENÉTICA MICROBIANA:

Estudio de la organización y regulación de los genes microbianos y como éstos afectan el funcionamiento de las células. Está muy relacionada con la Biología Molecular. 1.4.3. MICROBIOLOGÍA MÉDICA:

Estudio del papel de los microbios en las enfermedades humanas. Incluye el estudio de la patogénesis microbiana y la epidemiología y está relacionada con el estudio de la Patología de la enfermedad y con la Inmunología. 1.4.4. MICROBIOLOGÍA VETERINARIA

Estudio del papel de los microbios en la medicina veterinaria, así mismo incluye la patogénesis microbiana y la epidemiología. 1.4.5. MICROBIOLOGÍA AMBIENTAL: Estudio de la función y diversidad de los microbios en sus entornos naturales. Incluye la Ecología Microbiana, la geomicrobiología, la diversidad microbiana y la biorremediación. 1.4.6. MICROBIOLOGÍA EVOLUTIVA:

Estudio de la evolución de los microbios. Incluye la Sistemática y la Taxonomía bacterianas.

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1.4.7. MICROBIOLOGÍA INDUSTRIAL: Estudia la explotación de los microbios para uso en procesos industriales. Ejemplos son la fermentación industrial y el tratamiento de aguas residuales. Muy cercana a la industria de la biotecnología. 1.4.8. AEROMICROBIOLOGÍA

Estudio de los microorganismos transportados por el aire, que pueden ejercer su fisiología en otros ambientes. 1.2.10. MICROBIOLOGÍA DE LOS ALIMENTOS Estudio de los microorganismos que hacen que los alimentos se estropeen o se alteren, provocando modificaciones en su composición.

1.3. RELACIÓN DE LA MICROBIOLOGÍA CON OTRAS CIENCIAS

La Microbiología como ciencia biológica se relaciona con otras ramas ya que actúan de una manera dependiente, esa decir en una forma conjunta con otras ciencias.

1.3.1. Biología:

Es el estudio de la vida.

1.3.2. Química Inorgánica: Se encarga de describir los compuestos inorgánicos.

1.3.3. Química Analítica:

Estudia las diferentes reacciones entre compuestos.

1.3.5. Química Orgánica:

Se relaciona con los compuestos orgánicos.

1.3.6. Bioquímica:

Estudia los diferentes procesos metabólicos.

1.3.7. Anatomía:

Se refiere al estudio de la morfología de las diferentes partes del cuerpo.

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1.3.8. Fisiología:

Estudia la función de los diferentes sistemas, órganos y tejidos.

1.3.9. Patología:

Se encarga de la descripción de las diferentes enfermedades.

1.3.10. Farmacología:

Se ocupa de la composición y acción de los diferentes fármacos.

1.5. RESEÑA HISTÓRICA

El desarrollo de la microbiología, se da por las referencias de hombres que convencieron al mundo, de aquellos que desarrollaron una técnica, un objetivo o un concepto adoptado de manera general o explicaron sus descubrimientos tan clara que la ciencia creció y prosperó. El conocimiento humano sobre los efectos producidos por los microorganismos ha estado presente incluso desde antes de tener conciencia de su existencia; debido a procesos de fermentación provocados por levaduras se puede hacer pan, bebidas alcohólicas y productos derivados de la leche. En la antigüedad la causa de las enfermedades era atribuida a castigos divinos, fuerzas sobrenaturales o factores físicos (La palabra malaria significa “mal aire”, se creía que era el aire viciado de los pantanos el que provocaba esta enfermedad). Durante este periodo previo al descubrimiento de los microorganismos, los naturalistas solo podían especular sobre el origen de las enfermedades.

El descubridor de los microbios fue el holandés "ANTHONY VANLEEUWENHOEK" que combinaba una destreza como observador e intérprete científico. Este descubrimiento posibilitó que 200 años más tarde (1822-1895), se compruebe la participación de esos microorganismos en las reacciones de fermentación y que Robert Koch, Pasteur y otros, establecieron su relación con las enfermedades. Koch es recordado por el aislamiento de bacterias del Carbunco y la Tuberculosis considerados posteriormente agentes causales de enfermedades.

En 1590 HANS y HANSEN crearon la lupa, considerado como una especie de microscopio simple; pero ya en 1610 GALILEO elabora el primer microscopio simple como tal. En 1675 con las observaciones microscópicas de ANTHONY VANLEEUWENHOEK con lentes pulidos por el mismo (aumento hasta de 160 diámetros), descubre los microorganismos. En 1762 PLENC1Z reconoce el posible significado del descubrimiento de los microorganismos de LEEUWENHOEK y atribuye a cada enfermedad infecciosa un microorganismo específico.

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.El término bacteria fue introducido en el año 1828 por Christian Gottfried Ehrenberg. Sin embargo, la primera observación microbiológica registrada, de los cuerpos fructíferos de mohos, fue realizada en 1665 por Otilio Andres. La bacteriología (más tarde una subdisciplina de la microbiología) se considera que fue fundada por Ferdinand Cohn, un botánico cuyos estudios sobre algas y bacterias fotosintéticas lo llevó a describir varias bacterias, tales como Bacillus. Ferdinand Cohn fue también el primero en formular un esquema para la clasificación taxonómica de las bacterias.

Louis Pasteur (1822-1895) y Robert Koch (1843-1910) fueron contemporáneos de Cohn y son considerados como los fundadores de la microbiología médica. Entre1876 y 1890 es considerado un período de descubrimientos sobre los cuales se desarrollo la bacteriología moderna con las actividades realizadas por PASTEUR y KOCH. Quizá el mayor logro de Pasteur consistió en la refutación mediante cuidadosos experimentos de la por aquel entonces muy respetada teoría de la generación espontánea, lo cual permitió establecer firmemente a la microbiología dentro de las ciencias biológicas. Pasteur también diseñó métodos para la conservación de los alimentos (pasteurización) y vacunas contra varias enfermedades como el anthrax, el cólera aviar y la rabia, realiza todos sus trabajos con medios líquidos que exigía una habilidad técnica en el aislamiento de bacterias. Robert Koch es especialmente conocido por su contribución a la teoría de los gérmenes de la enfermedad, donde, mediante la aplicación de los llamados postulados de Koch, logró demostrar que enfermedades específicas están causadas por microorganismos patogénicos específicos. KOCH introdujo los medios sólidos facilitando enormemente la técnica bacteriológica. Además en 1881 hizo el primer frotis de bacterias. Koch fue uno de los primeros científicos en concentrarse en la obtención de cultivos puros de bacterias, lo cual le permitió en el año de 1882 aislar y describir varias especies nuevas de bacterias, entre ellas Mycobacterium tuberculosis, el agente causal de la tuberculosis. En 1837 CAGNIARD DE LA TOUR prueba que la fermentación depende de la actividad de las levaduras. En el año de 1838 EHEENBERG hizo un intento de clasificación de las bacterias formando parte del reino animal. En 1854 se produce la consolidación de que la idea de la fermentación y la putrefacción dependen de los microorganismos, refutación definitiva de la teoría de la generación espontánea, cuya iniciativa tuvo PASTEUR.

Mientras Louis Pasteur y Robert Koch son a menudo considerados los fundadores de la microbiología, su trabajo no reflejó fielmente la auténtica diversidad del mundo microbiano, dado su enfoque exclusivo en microorganismos de relevancia médica. Dicha diversidad no fue revelada hasta más tarde, con el trabajo de Martinus Beijerinck (1851-1931) y Sergei Winogradsky (1856-1953). Martinus Beijerinck hizo dos grandes contribuciones a la microbiología: el descubrimiento de los virus y el desarrollo de técnicas de

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cultivo microbiológico. Mientras que su trabajo con el virus del mosaico del tabaco estableció los principios básicos de la virología, fue su desarrollo de nuevos métodos de cultivo el que tuvo mayor impacto inmediato, pues permitió el cultivo de una gran variedad de microbios que hasta ese momento no habían podido ser aislados. A fines del siglo XIX Martinus Beijerinck puso más énfasis en el conocimiento de la microbiología del suelo y sobre la inmunología. En 1867 se promueve el desarrollo de la cirugía antiséptica por LISTER, basado en los trabajos de PASTEUR sobre la causa de la fermentación. En1872 se produce el perfeccionamiento del microscopio (corrección de la esfericidad, y de la cromaticidad de los objetivos, objetivo de inmersión; condensador) gracias a los trabajos de ABBE. En 1890 GRAM hizo una clasificación de acuerdo a cultivos puros de levaduras y bacterias

Durante el siglo pasado (XX), sucedieron una serie de acontecimientos que contribuyeron al avance científico como los siguientes: la microscopía electrónica, la microscopia de contraste de fases, la microscopía fluorescente, la quimioterapia, la radioterapia, los antibióticos, los cultivos de tejidos, las vacunas

Aunque los conocimientos microbiológicos de que se dispone en la actualidad son muy amplios, todavía es mucho lo que queda por conocer y constantemente se efectúan nuevos descubrimientos en este campo. Tanto es así que, según las estimaciones más habituales, sólo un 1% de los microbios existentes en la biosfera han sido estudiados hasta el momento. Por lo tanto, a pesar de que han pasado más de 300 años desde el descubrimiento de los microorganismos, la ciencia de la microbiología se halla todavía en su infancia en comparación con otras disciplinas biológicas tales como la zoología, la botánica o incluso la entomología.

1.6. OBSERVACIONES MICROSCÓPICAS DE LOS ALIMENTOS El microscopio es el instrumento más común en el laboratorio de microbiología, propicia un aumento que permite la observación de microorganismos y estructuras visibles a simple vista. Las unidades de medida utilizadas en microbiología son el micrón. Los microscopios pertenecen a dos categorías: luminoso (óptico) y electrónico dependiendo del principio en que se basa la aplicación.

1.6.1. MICROSCOPIA LUMINOSA La microscopia en la cual el aumento es obtenido por un sistema de lentes ópticos (microscopios luminosos) incluye: Microscopía de Campo Luminoso Microscopía de Campo Oscuro

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Microscopía de Fluorescencia

Microscopía de Contraste de Fase

FIGURA 1.1: MICROSCOPIA LUMINOSA

1.6.1.1. MICROSCOPIO DE CAMPO CLARO

Los microscopios de este tipo generalmente producen un aumento de 1000 veces el tamaño original. El límite lo tienen en unas 2000 veces. Las lentes de un microscopio óptico son el condensador, el objetivo y el ocular. La luz que entra en el sistema debe enfocarse sobre la preparación y para esto se utiliza el condensador. Elevando o bajando el condensador puede alterarse el plano del foco de luz y elegirse una posición que consiga el foco preciso. El objetivo es la lente situada cerca del objeto que se observa. El aumento primario del objeto es producido por la lente objetivo y la imagen se transmite al ocular, donde se realiza el aumento final. Los microscopios que se usan normalmente en microbiología están equipados con tres objetivos: bajo poder, alto poder y objetivo de inmersión. Estos objetivos están montados sobre una pieza que se llama revolver que puede rotarse para alinear el objetivo deseado con el condensador. La imagen formada por el objetivo es finalmente aumentada por el ocular. El aumento total de un microscopio compuesto es el producto del aumento de su objetivo y de su ocular. El microscopio compuesto es capaz de conseguir aumentos considerablemente mayores que el microscopio construido con una sola lente. Este último, llamado microscopio simple, se usa principalmente como lupas y cristales de aumento. Además del aumento, una propiedad importante de un microscopio es su poder resolutivo; esto es la capacidad de mostrar distintos y separados dos puntos muy cercanos. Cuanto mayor sea el poder resolutivo, mayor será la definición de un objeto. Los microscopios de gran poder resolutivo son especialmente buenos para ver pequeñas estructuras. El poder resolutivo de un microscopio compuesto depende de la longitud de onda utilizada y de una propiedad óptica de la lente conocida como apertura numérica. Como los microscopios ópticos utilizan luz visible, la longitud de onda está fijada y es por lo que la resolución

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de un objeto es función de la apertura numérica; cuanto mayor sea la apertura, el objeto resuelto será más pequeño. El Microscopio de campo claro usa como fuente de luz directa bien una bombilla bien la luz solar. Ya que los microorganismos son transparentes es difícil distinguirlos con este tipo de microscopía y es por lo que se suelen teñir. 1.5.1.2. MICROSCOPIO DE CAMPO OSCURO:

Usa un microscopio óptico equipado con un condensador y objetivo especial que iluminan los microorganismos en la muestra frente a un fondo oscuro. Este método se utiliza para visualizar microorganismos vivos sin teñir. Se basa en el límite entre fases de índice de refracción distintos la luz se dispersa, este microscopio no es más que un microscopio convencional en el que el condensador es sustituido por otro que da lugar a que el haz de luz ilumine el objeto sin penetración directa de la luz a través del objetivo. La muestra aparece brillante con un fondo oscuro.

1.5.1.3. MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA

La muestra se tiñe con una sustancia fluorescente que absorbe la energía de las ondas cortas de la luz (azul) y emite la luz de longitudes de ondas más largas (verde). Se utiliza en inmunofluorescencia, técnica en la cual una sustancia fluorescente se une a un anticuerpo específico de ciertos microorganismos. Si el anticuerpo fluorescente se une al microorganismo, este microorganismo emite fluorescencia y se puede identificar. Esta técnica se usa en clínica. 1.5.1.4. MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASES:

Es un microscopio óptico modificado que permite contrastar sustancias de diferente grosor o densidad. Mediante un condensador y un objetivo especial se controla la iluminación de tal manera que vaya en diferentes rutas a través de las distintas partes de una célula. El resultado es una imagen con diferentes grados de brillo y oscuridad. Con este método, el material denso aparece brillante, mientras que las partes de la célula que tienen una densidad cercana al H2O (citoplasma) aparecen oscuras. Se utiliza para visualizar estructuras celulares sin necesidad de usar colorantes o matar microorganismos. Mediante métodos ópticos las diferencias existentes entre el trayecto de las ondas luminosas en diferencias de intensidad visibles y en consecuencia, en contraste. Se emplea 1) un diafragma anular situado por debajo del condensador y 2) un objetivo que contiene una placa de fase o de difracción situada en la porción posterior del plano focal. Esta placa separa la onda directa de la onda difractada, y aumenta la intensidad de la relación entre las fases lo que da lugar a la formación de una imagen visible. El objetivo recibe la onda directa y la difractada.

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1.6.2. MICROSCOPIA ELECTRÓNICA

Los microscopios electrónicos utilizan rayos de electrones en lugar de la luz, lo que les permite tener un poder de resolución muy elevado. La longitud de onda de los rayos de electrones es de 0,005 - 0,0003 nm, muy corta comparada con la de la luz visible (426 - 750 nm; violeta - rojo). Es posible con el microscopio electrónico resolver objetos separados por una distancia de 0,003 µm, comparado con los 0,25 µm de uno óptico. Los aumentos pueden llegar a ser de un millón de veces. A causa de la naturaleza de este instrumento sólo pueden examinarse objetos muy delgados; incluso una sola bacteria es demasiado gruesa para ser observada directamente. Por lo que, para preparar muestras para el microscopio electrónico se necesitan técnicas especiales de cortes ultrafinos. Para seccionar las células primero deben ser fijadas y deshidratadas (etanol o acetona). Después de la deshidratación, la muestra se incluye en una resina y es aquí donde se realizan cortes finos con un ultra micrótomo, por lo general equipado con una cuchilla de diamante. Una sola célula bacteriana puede cortarse en cinco o seis secciones muy finas. Si sólo tiene que observarse el contorno de un organismo, no son necesarias secciones finas por lo que se montan células enteras que se recubren de una capa fina de un metal pesado (oro). El rayo de electrones es dirigido sobre la preparación y los electrones dispersados por el metal pesado activan una pantalla de observación produciendo una imagen. A la primera técnica se la denomina Microscopía Electrónica de Transmisión (MET) y a la segunda Microscopía Electrónica de Barrido (MEB).

FIGURA 1.2: MICROSCOPIA ELECTRONICA

1.7. MEDIOS DE CULTIVO

Los medios de cultivo son una mezcla equilibrada de nutrientes (agua, compuestos nitrogenados, fuentes de energía, factores de crecimiento, etc.)

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que en concentraciones adecuadas y con condiciones físicas óptimas permiten un buen crecimiento de los microorganismos. Contienen una base mineral; fuente de carbono, nitrógeno y azufre; atmósfera adecuada y los factores de crecimiento necesarios que de forma sólida o liquida, posibilitan el crecimiento de cualquier microorganismo. A los medios de cultivo, se les añade otra serie de sustancias, según la necesidad de crecimiento de cada microorganismo, pues no podemos olvidar que hay bacterias cuyo ambiente ecológico es bastante restrictivo. De esto se deduce la existencia de una gran variedad de medios de cultivo, si bien es posible destacar el agar-agar nutritivo como medio base al que se va añadiendo otros componentes más específicos del crecimiento bacteriano. El enrequicimiento es una técnica que permite el desarrollo de un grupo de microorganismos a partir de una muestra que contiene una gran variedad de microorganismos. Se utiliza un medio para favorecer la competencia entre los organismos y se incuba bajo determinadas condiciones. Aquellos microorganismos para los que el ambiente sea más favorable crecerán más que los otros y finalmente serán predominantes

En la actualidad estos medios de cultivo se pueden conseguir preparados en forma deshidratada o en placas (diversas firmas se dedican a su fabricación); Oxoid, Difco, Merck, etc.

1.7.1. CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO De acuerdo al propósito para el cual son fabricados los medios de cultivo, existen diversos tipos de medios que pueden ser clasificados de la siguiente forma: Según su estado físico pueden ser: sólidos, semisólidos, líquidos 1.7.1.1. MEDIO MÍNIMO

Son los medios que presentan la mínima cantidad de nutrientes capaz de permitir el desarrollo de los microorganismos.

1.7.1.2. MEDIO COMPLEJO Medios que contienen nutrientes de composición química variable o no establecida. Son mezclas complejas y poco definidas de sustancias. Se forman a partir de extractos animales, vegetales, etc. Se utilizan cuando se necesita obtener una amplia gama de microorganismos.

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1.7.1.3. MEDIO SINTÉTICO

Son los medios que contienen una composición química definida cualitativamente y cuantitativamente. Se utilizan para el estudio de requerimientos nutricionales y para obtener resultados reproducibles. 1.7.1.4. MEDIOS DE CULTIVO BÁSICOS

Son medios que generalmente contienen los nutrientes esenciales para promover el desarrollo de microorganismos poco exigentes nutricionalmente Son utilizados para análisis cuantitativos y muestreo de medio ambiente y superficies. Ejemplo:

Caldo nutriente, agar nutriente, caldo tioglícolato y caldo triptosa. 1.7.1.5. MEDIO SELECTIVO Medio que sólo permite el crecimiento de un grupo de microorganismos e inhibe el de otros. Permite seleccionar y aislar microorganismos a partir de poblaciones mixtas, son muy utilizados cuando se trabaja con muestras tomadas de sitios corporales que poseen una flora normal abundante (faringe, boca, piel, nariz, vagina, etc.). En estos medio se incorporan sustancias inhibitorias (colorantes, antibióticos, inhibidores del metabolismo, sales viliares, selenitos, teluritos, citratos, tetrationatos etc.), que condicionan el no crecimiento de un determinado grupo de microorganismos y favorecen el de otros grupos. Son muy utilizados cuando se trabaja con muestras tomadas de sitios corporales que poseen una flora normal abundante (faringe, boca, piel, nariz, vagina, etc.). En estos medio se incorporan sustancias inhibitorias (colorantes, antibióticos, inhibidores del metabolismo, sales viliares, selenitos, teluritos, citratos, tetrationatos etc.), que condicionan el no crecimiento de un determinado grupo de microorganismos y favorecen el de otros grupos. La elección de un medio selectivo dependerá en definitiva, de la clase de alimento y de las características de la flora que se vaya a estudiar. Es interesante destacar dos tipos de medios que sirven para aislar dos grandes grupos de microorganismos: Medios para bacterias Gram negativas; llevan cristal violeta y medios para bacterias Gram positivos; llevan telurito potásico, acetato de talio y acida sódica. Agar salado-manitol o Chapman (permite el crecimiento de ciertos Staphilococos). 1.7.1.6. MEDIOS NO SELECTIVOS

Son medios líquidos, constituidos por peptona, extracto de carne, cloruro sódico y agua, o sólidos, con caldos nutritivos solidificados con agar-agar de uso general para el cultivo de la mayoría de los microorganismos. Estos medios se denominan caldos nutritivos si son líquidos y agares nutritivos si son sólidos.

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1.7.1.7. MEDIO ENRIQUECIDO Medio que tiene un gran exceso de nutrientes y se utiliza para microorganismos que tienen grandes exigencias nutricionales. Son medios suplementados con otros elementos nutritivos que proporcionan "factores de crecimiento" cuya finalidad es promover el crecimiento de microorganismos más exigentes, por lo que favorecen algún condicionamiento fisiológico de los microorganismos que se desea analizar. Estos medios se utilizan para incrementar el número de microorganismos que se quiere aislar e identificar y que en el alimento objeto de estudio aparecen en pequeñas cantidades. Ejemplo: agar sangre, agar chocolate, agar suero, agar gliceerol y todos los medios adicionados con plasma, vitaminas y aminoácidos. 1.7.1.8. MEDIO DIFERENCIAL Medio que permite revelar características fisiológicas de los microorganismos. Permiten el reconocimiento rápido de los microorganismos, porque forman colonias típicas. Agar sangre (permite visualizar la síntesis de hemolisinas). Levine (permite visualizar la fermentación de lactosa por viraje de un indicador ácido-base). 1.7.1.9. MEDIOS SELECTIVOS Y DIFERENCIALES A veces un único medio cumple a la vez los dos objetivos, el selectivo y el diferencial. Estos medios llevan un indicador que cambia el ph al crecer un determinado tipo de microorganismos, es un ejemplo el medio MacConkey que diferencia el grupo de enterobacterias, bacterias que fermentan la lactosa (coliformes) y forman colonias rojas en el agar-agar, mientras que otras del mismo grupo forman colonias incoloras. 1.7.1.10. MEDIO DE CULTIVO ANAEROBIO Si los microorganismos que se van a cultivar son anaerobias estrictas, se precisan ambientes carentes de oxígeno, para conseguirlos se recurren a medios que contienen sustancias reductoras o se añaden estas sustancias a otros medios, de tal forma que el ambiente se modifica (glucosa, ácido ascórbico etc.). Para eliminar el oxígeno del medio de cultivo, este se calienta y se cubre con una gruesa capa de agar-agar solidificado, o con otros tipos de cierres, como vaselina y parafína sólida para que el oxígeno no se difunda. Así mismo existen métodos para incubar en atmósferas carentes de oxígeno: son las llamadas vasijas anaerobias en las cuales el oxigeno se sustituye por hidrógeno o por nitrógeno. Muchos organismos anaerobios necesitan una atmósfera enriquecida con anhídrido carbónico para crecer (ciertos tipos de Brucella). En estos casos se genera una atmósfera con dicho gas cuando se pone un vaso con una solución

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de HC1, 2N y se introduce en él un trozo de mármol de 1 a 1,2 g. También se consigue utilizando generadores de anhídrido carbónico que suministran las casas comerciales. 1.7.1.11. MEDIOS PARA EL ESTUDIO DE CARBOHIDRATOS En los medios de cultivo, los carbohidratos y glucósidos son muy utilizados como fuente de energía por los microorganismos y particularmente para diferenciar géneros e identificar especies. Normalmente el agua peptonada es utilizada como base para el estudio de los azúcares. Las soluciones de carbohidratos empleadas en estas pruebas deben ser esterilizadas por filtración ya que por el enriquecimiento (y por el súper enriquecimiento) los azúcares sufren varios fenómenos como la hidrólisis de los azúcares completos, la formación de productos de oxidación y reacción con otros componentes del medio de cultivo, como aminoácidos. La descomposición de un carbohidrato por el calor, se manifiesta por la disminución del ph, o visiblemente por el oscurecimiento de la solución. Ejemplo: medio Basal Of de Hugh & Leifson y todos aquellos en los cuales se utiliza algún azúcar en especial.

1.7.1.12. MEDIOS DE TRANSPORTE Son los medios utilizados para el envío de las muestras al laboratorio. La mayoría de estos contiene sustancias y componentes para prevenir la disociación, oxidación e inhibir las reacciones enzimáticas autodestructivas, conservando la muestra viable hasta la llegada al laboratorio. Ejemplo: medio de Stuart, medio de Amies, caldo de tioglicolato, etc.