UJI SITOTOKSIK EKSTRAK ETANOL, FRAKSI POLAR, SEMIPOLAR DAN NONPOLAR...
Transcript of UJI SITOTOKSIK EKSTRAK ETANOL, FRAKSI POLAR, SEMIPOLAR DAN NONPOLAR...
UJI SITOTOKSIK EKSTRAK ETANOL, FRAKSI POLAR,
SEMIPOLAR DAN NONPOLAR HERBA KEMANGI (Ocimum
sanctum L.) TERHADAP SEL T47D
SKRIPSI
Oleh:
RIZKI AWALIA PUSPITANINGRUM
K100130192
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
SURAKARTA
2016
i
UJI SITOTOKSIK EKSTRAK ETANOL, FRAKSI POLAR,
SEMIPOLAR DAN NONPOLAR HERBA KEMANGI (Ocimum
sanctum L.) TERHADAP SEL T47D
SKRIPSI
Diajukan untuk memenuhi salah satu syarat mencapai
derajat Sarjana Farmasi (S.Farm) pada Fakultas Farmasi
Universitas Muhammadiyah Surakarta
di Surakarta
Oleh:
RIZKI AWALIA PUSPITANINGRUM
K100130192
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
SURAKARTA
2016
iv
KATA PENGANTAR
Assalamu’alaikum warahmatullahi wabarakatuh,
Alhamdulillah, puji syukur kepada Allah SWT atas limpahan rahmat dan
hidayahnya sehingga skripsi ini dapat terselesaikan dengan baik. Salawat dan
salam semoga selalu tercurah pada baginda Rasulullah SAW. Skripsi ini berjudul
“UJI SITOTOKSIK EKSTRAK ETANOL, FRAKSI POLAR, SEMIPOLAR
DAN NONPOLAR HERBA KEMANGI (Ocimum sanctum L.) TERHADAP
SEL T47D”. Skripsi ini disusun untuk memenuhi salah satu syarat meraih gelar
Sarjana Farmasi (S.Farm) di Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah
Surakarta.
Terimakasih penulis sampaikan kepada pihak-pihak yang membantu
selama penyusunan skripsi ini. Secara khusus rasa terimakasih penulis sampaikan
kepada :
1. Bapak Azis Saifudin, Ph.D., Apt. selaku Dekan Fakultas Farmasi
Universitas Muhammadiyah Surakarta.
2. Ibu Maryati, Ph.D., Apt. selaku pembimbing skripsi.
3. Bapak Dr. Muhammad Da’i, M.Si., Apt. selaku penguji 1.
4. Ibu Ratna Yuliani, M. Biotech.St. selaku penguji 2.
5. Ibu Setyo Nurwaini, S.Farm. selaku pembimbing akademik.
6. Kedua orang tua dan adik yang telah memberikan semangat, dukungan
dan doa yang tak terhingga selama ini.
7. Rekan-rekan tim seperjuangan skripsi: Putri, Atikah, Dhinar, dan
Selviana.
Semoga skripsi ini nantinya dapat bermanfaat bagi penulis, pembaca dan
perkembangan dunia kesehatan terutama bidang farmasi.
Wassalamu’alaikum warahmatullahi wabarakatuh
Surakarta, 29 November 2016
Penulis
v
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL ................................................................................... i
HALAMAN PENGESAHAN ..................................................................... ii
DEKLARASI .............................................................................................. iii
KATA PENGANTAR ................................................................................ iv
DAFTAR ISI ............................................................................................... v
DAFTAR GAMBAR .................................................................................. vii
DAFTAR TABEL ....................................................................................... viii
DAFTAR LAMPIRAN ............................................................................... ix
DAFTAR SINGKATAN ............................................................................ x
ABSTRAK .................................................................................................. xi
ABSTRACT .................................................................................................. xii
BAB I. PENDAHULUAN ...................................................................... 1
A. Latar Belakang Masalah ........................................................ 1
B. Rumusan Masalah .................................................................. 2
C. Tujuan Penelitian ................................................................... 3
D. Tinjauan Pustaka .................................................................... 3
1. Tanaman Kemangi ............................................................. 3
a. Sistematika Tanaman Kemangi ..................................... 3
b. Kandungan Kimia ......................................................... 3
c. Aktivitas Farmakologi ................................................... 4
2. Kanker ................................................................................ 4
a. Kanker Payudara ........................................................... 5
b. Gejala Kanker Payudara ................................................ 5
c. Faktor Risiko Kanker Payudara .................................... 5
3. Sel T47D ............................................................................ 6
4. Uji Sitotoksik dengan Metode MTT assay ........................ 6
E. Landasan Teori ....................................................................... 7
F. Hipotesis ................................................................................. 8
BAB II. METODE PENELITIAN ........................................................... 9
vi
A. Kategori dan Rancangan Penelitian ....................................... 9
B. Variabel Penelitian dan Definisi Operasional ........................ 9
C. Alat dan Bahan ....................................................................... 9
1. Alat ..................................................................................... 9
2. Bahan ................................................................................. 9
D. Tempat Penelitian .................................................................. 10
E. Jalannya Penelitian ................................................................. 10
1. Determinasi Tanaman ........................................................ 10
2. Preparasi Bahan ................................................................. 10
3. Ekstraksi dan Fraksinasi .................................................... 10
4. Pembuatan Media Kultur ................................................... 11
5. Pemanenan dan Penghitungan Sel T47D ........................... 11
6. Pembuatan Larutan Stok .................................................... 12
7. Uji MTT Assay .................................................................. 12
8. Uji Kromatografi Lapis Tipis ............................................ 13
F. Analisis Data .......................................................................... 14
BAB III. HASIL DAN PEMBAHASAN .................................................. 15
A. Determinasi Tanaman ............................................................ 15
B. Ekstraksi dan Fraksinasi ........................................................ 15
C. Uji Sitotoksik Terhadap Sel T47D ......................................... 16
D. Analisis Kromatografi Lapis Tipis ........................................ 20
BAB IV. KESIMPULAN DAN SARAN ................................................... 25
A. Kesimpulan ............................................................................ 25
B. Saran ...................................................................................... 25
DAFTAR PUSTAKA ................................................................................. 26
LAMPIRAN ................................................................................................ 30
vii
DAFTAR GAMBAR
Gambar 1. Reaksi pembentukan kristal formazan ................................................ 17
Gambar 2. Sel T47D normal tanpa perlakuan ....................................................... 17
Gambar 3. Grafik hubungan konsentrasi dengan persen sel hidup. ...................... 18
Gambar 4. Profil KLT ekstrak etanol herba kemangi . ......................................... 21
Gambar 5. Profil KLT fraksi kloroform ................................................................ 22
viii
DAFTAR TABEL
Tabel 1. Reagen deteksi senyawa.......................................................................... 13
Tabel 2. Data absorbansi sel, persen sel hidup, dan nilai IC50 .............................. 19
Tabel 3. Deteksi golongan senyawa pada ekstrak etanol ...................................... 21
Tabel 4. Deteksi golongan senyawa pada fraksi kloroform...................................22
ix
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Determinasi tumbuhan kemangi ....................................................... 30
Lampiran 2. Perhitungan rendemen ...................................................................... 31
Lampiran 3. Perhitungan seri konsentrasi larutan uji............................................ 32
Lampiran 4. Perhitungan kepadatan sel T47D pada uji sitotoksik........................34
Lampiran 5. Perhitungan persen sel hidup dan nilai IC50 .................................... 35
x
DAFTAR SINGKATAN
CO2 : Karbondioksida
COX-2 : Cyclooxigenase-2
DMSO : Dimetil Sulfoksida
DNA : Deoxyribonucleid Acid
ELISA : Enzyme-linked Immunosorbent Assay
GF254 : Gel Fluoresensi 254
IAPs : Inhibitor of Apoptosis
IC50 : Inhibitory Concentration 50
IL-1β : Interleukin-1β
KLT : Kromatografi Lapis Tipis
LAF : Laminar Air Flow
MTT : 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5 difeniltetrazolium bromid
NF-kB : Nuclear Factor kappa B
P.A : Pro Analisis
PBS : Phosphate Buffered Saline
Rf : Retardation Factor
RPMI : Roswell Park Memorial Institute
SDS : Sodium Dodecyl Sulfat
UV 254 : Ultraviolet 254
UV 366 : Ultraviolet 366
xi
ABSTRAK
Kemangi (Ocimum sanctum L.) merupakan tanaman yang telah diteliti
memiliki aktivitas sebagai antikanker, antibakteri dan antioksidan. Penelitian ini
bertujuan untuk mengetahui efek sitotoksik ekstrak etanol 96%, fraksi polar,
semipolar dan nonpolar herba kemangi terhadap sel T47D dan mengetahui
golongan senyawa yang terkandung dalam ekstrak etanol herba kemangi dan
fraksi yang memiliki aktivitas sitotoksik paling baik.
Ekstraksi dilakukan dengan cara maserasi menggunakan penyari etanol
96%. Ekstrak etanol selanjutnya difraksinasi dengan partisi cair-cair. Uji
sitotoksik dilakukan dengan metode MTT assay untuk mendapatkan nilai IC50.
Kandungan senyawa dalam ekstrak maupun fraksi dengan IC50 paling baik
diidentifikasi menggunakan Kromatografi Lapis Tipis (KLT) dengan berbagai
pereaksi semprot. Hasil uji sitotoksik menunjukkan bahwa ekstrak etanol, fraksi kloroform,
fraksi n-heksan, fraksi etil asetat memiliki nilai IC50 berturut turut adalah
>250 µg/mL, >250 µg/mL, 36,98 µg/mL, and >250 µg/mL. Fraksi kloroform
merupakan fraksi yang memiliki aktivitas sitotoksik paling baik. Hasil uji KLT
menunjukkan bahwa ekstrak etanol herba kemangi mengandung golongan
senyawa flavonoid, terpenoid, saponin, alkaloid, dan fenolik. Fraksi kloroform
mengandung golongan senyawa flavonoid, terpenoid, alkaloid, dan fenolik.
Kata kunci : Ocimum sanctum L., sitotoksik, MTT assay, sel T47D.
xii
ABSTRACT
Previous experiment indicated broad spectrum biological activity of
Basil (Ocimum sanctum L.) ie anticancer, antibacterial, and antioxidant. This
experiment aimed to determine the cytotoxic effects of ethanol extract 96%, polar,
semipolar, and nonpolar fraction Basil (Ocimum sanctum L.) on T47D cells and
to know the compounds contained in herbs basil as well as the fraction of the best
cytotoxic activity.
Extraction was conducted by maceration method using ethanol extract
96%. The ethanolic extract fractionated by using liquid partition. The content of
the compounds in the extract and the fractions were identified using Thin Layer
Chromatography (TLC) with various spray reagent. Cytotoxic test performed by
using MTT assay method to obtain IC50 values.
This experiment conclude IC50 of ethanol extract 96%, n-hexane, chloroform, and ethyl acetate fraction were IC50 >250 µg/mL, >250 µg/mL,
36,98 µg/mL, and >250 µg/mL respectivly. Chloroform fraction has the strongest
effect anticancer. TLC test results show that the ethanol extract of the herbs basil
contain the class of flavonoids, terpenoids, saponins, alkaloids and phenolic.
Chloroform fraction containing class of flavonoids, terpenoids, alkaloids and
phenolic.
Keywords: Ocimum santum L., cytotoxic, MTT assay, T47D cell.