TRATTAMENTI ILLECITI: il nuovo panorama dei

controlli

IZSTOIstituto Zooprofilattico

Sperimentale del Piemonte,

Liguria e Valle d’Aosta

I Trattamenti Illeciti

“Utilizzazione di sostanze o prodotti non autorizzati,

ovvero di sostanze o prodotti autorizzati, a fini o a

condizioni diversi da quelli previsti dalle disposizioni

vigenti” (DLgs n. 158/2006, art.1, comma 3, lettera g)

Il controllo in ITALIA è puntuale

alta sensibilità riposta al controllo alimentare

I Trattamenti Illeciti

I Trattamenti Illeciti

I Trattamenti Illeciti

IstologiaIstologia

Biosensori

Proteomica

Dal 2008

0.0

5.1

.15

.2

2008 2010 2012 2014 2016anno

r(mean) r(lb)/r(ub)

0.0

1.0

2.0

3.0

4

2010 2012 2014 2016anno

r(mean) r(lb)/r(ub)

La prevalenza di trattamento con cortisonicicortisonicicortisonicicortisonici è•Vitelli P= 9,4; IC95% 3,1 – 2,1; •VitelloniP= 8,3 IC95% 6,1-11,1

La prevalenza di trattamento con steroidi sessualisteroidi sessualisteroidi sessualisteroidi sessuali è•Vitelli P= 0 IC95% 0 – 5,5•VitelloniP= 0,4 IC95% 0,04 – 1,3

VITELLI

steroidi sessuali

VITELLONI

corticosteroidi

Piano di Monitoraggio Istologico 2017

IZS PLV 02/17 RCIZS PLV 02/17 RCIZS PLV 02/17 RCIZS PLV 02/17 RC

Progetto pilota: piano di sorveglianza nazionale dei Progetto pilota: piano di sorveglianza nazionale dei Progetto pilota: piano di sorveglianza nazionale dei Progetto pilota: piano di sorveglianza nazionale dei

trattamenti illeciti con anabolizzanti basato sul trattamenti illeciti con anabolizzanti basato sul trattamenti illeciti con anabolizzanti basato sul trattamenti illeciti con anabolizzanti basato sul

rischiorischiorischiorischio•IZSPLVA

•IZS UMBRIA E MARCHE

•IZS VENEZIE

•IZS LOMBARDIA E

EMILIA ROMAGNA

•ISS

•ASL CN1

•ASL TO3

•REGIONE PIEMONTE

•LABERCA

Sviluppo di

metodi innovativimetodi innovativimetodi innovativimetodi innovativi

da applicarsi in

associazione a controlli ufficialiassociazione a controlli ufficialiassociazione a controlli ufficialiassociazione a controlli ufficiali

ALLEVAMENTOGR-CALUX

Cellule modificate con Cellule modificate con Cellule modificate con Cellule modificate con

tecniche di ingegneria tecniche di ingegneria tecniche di ingegneria tecniche di ingegneria

molecolare:molecolare:molecolare:molecolare:

• Iper-esprimono

selettivamente i recettori GR

• Sono immortalizzate

• Producono luciferasi dopo

interazione con molecole

target

•Effetto trascurabile dei

glucocorticoidi endogeni ai

livelli fisiologici

Giorno 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23

Trattamento anaboliz

zante*X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X

Prelievo T1 T2 T3 T4 T5 T6

NNNN° 20 Trattati20 Trattati20 Trattati20 Trattati NNNN° 36 Controlli36 Controlli36 Controlli36 ControlliSeparazione proteineSeparazione proteineSeparazione proteineSeparazione proteine

plasmaticheplasmaticheplasmaticheplasmatiche

Peso molecolare

Punto isoelettrico

* con Dexamethasone 21 disodium phosphate (0,4 mg/die per os)

ELETTROFORESI ELETTROFORESI ELETTROFORESI ELETTROFORESI BIDIMENSIONALE (2DE)BIDIMENSIONALE (2DE)BIDIMENSIONALE (2DE)BIDIMENSIONALE (2DE)

PON1 / DESAMETASONEPON1 / DESAMETASONE

ANALISI PROTEOMICHE per cercare marcatori plasmatici di trattamento illecito

PON1 / DESAMETASONEPON1 / DESAMETASONE

T6T6T6T6

pH3 10

T1T1T1T1

10

200kDa

pH3 10

L’analisi statistica ha stimato:•SENSIBILITSENSIBILITSENSIBILITSENSIBILITÀÀÀÀ del 95%(95% CI: 75.1% - 99.9%) •SPECIFICITSPECIFICITSPECIFICITSPECIFICITÀÀÀÀ del 100%(95% CI: 90.3%-100%)

PON1 PON1 PON1 PON1 èèèè un utile marcatore di trattamento un utile marcatore di trattamento un utile marcatore di trattamento un utile marcatore di trattamento

illecitoillecitoillecitoillecito

con desametasonecon desametasonecon desametasonecon desametasone

Scomparsa di due isoforme della PON1PON1PON1PON1 negli animali trattati a scopo anabolizzante.

Nessuna variazione per PON1 negli animali non trattati / trattati a scopo terapeutico.

PR come biomarker di trattamentoPR come biomarker di trattamento

PR expressionPR expression

(7gg post(7gg post--trattamento)trattamento)

Gh. bulbouretrali P-value Prostata P-value

17βestradiolo

Congelato 290.02 0.028* 41.05 0.158

FFPE 27.8 0.001* -

Nandrolone

Congelato 2.32 0.348 4.91 0.235

FFPE 1.35 0.482 -

17βestradiolo+nandrolone

Congelato 9.36 0.004* 1.74 0.455

FFPE 7.09 0.009* -

PR come biomarker di trattamentoPR come biomarker di trattamento

Ministero della Salute

Regione Piemonte

Regione Lombardia

IZSLER

Servizi Veterinari Piemontesi e Lombardi

SC Genetica e Immunobiochimica

SC Istopatologia e Test Rapidi