TRABAJO FIN DE GRADO Mecanismos moleculares …147.96.70.122/Web/TFG/TFG/Memoria/NATALIA MARIA...
Transcript of TRABAJO FIN DE GRADO Mecanismos moleculares …147.96.70.122/Web/TFG/TFG/Memoria/NATALIA MARIA...
FACULTAD DE FARMACIA
UNIVERSIDAD COMPLUTENSE
TRABAJO FIN DE GRADO
Mecanismos moleculares implicados en la regulación
de la muerte celular y patologías asociadas a
alteraciones en dicha regulación
Autor: Natalia María García Simón
D.N.I.: 05467178D
Tutor: Almudena Porras Gallo
Convocatoria: Junio
- 2 -
Contenido
Resumen……………………………………………………...………………………………..3
Introducción y antecedentes………………………………………………………………….3
1. Muerte celular……………………………………………………………………...3
2. Apoptosis o muerte celular programada: mecanismos………………...………..….4
3. Proteína p53………………………………………………………………………..5
4. Cáncer………………………………………………………………………………8
Objetivos………………………………………………………………………………………9
Palabras clave…………………………………………………………………………………9
Metodología…………………………………………………………………………………...9
Resultados y discusión………………………………………………………………………..9
1. p53 y enfermedad………………………………….……………………….…….8
1.1 p53 y cáncer de pulmón……….……...…….…………………………...10
1.2 p53 y cáncer de mama……………….……….………………………….11
1.3 p53 y cáncer de colon..……..……………….…………………………..12
2. p53 y tratamiento.………………………………….…………………………….13
2.1 Moléculas que actúan sobre p53 salvaje……………..………………….13
2.2 Moléculas que actúan sobre p53 mutada……………….….……..…….....15
Conclusiones……………………………………………………………………………...….17
Bibliografía……………………………………………………………………………….….17
Abreviaturas
ADPRT: Adenosina difosfato ribosil transferasa
APC: adenomatous polyposis coli Bcl-2: célula B de linfoma 2
CDK kinasas ciclina-dependiente
FHIT: Bis(5'-adenosil)-trifosfatasa
Mdm2: doble minuto murina 2
MdmX: doble minuto murina X
NBS1: nibrin
OGG1: oxoguanina glicosilasa
XPA: xeroderma pigmentosum complementación grupo A
- 3 -
Resumen
La apoptosis es uno de los principales mecanismos de muerte celular por el cual el organismo
elimina las células envejecidas o dañadas. La proteína p53 es un factor de transcripción entre
cuyas funciones se encuentra la activación y regulación de la apoptosis. Como consecuencia
de su mutación, se desarrollan una amplia variedad de enfermedades, entre las cuales se
encuentra el cáncer. En este trabajo se estudió la relación entre p53 y los cánceres de pulmón,
mama y colon, que son los principales tipos de cáncer en España. También se investigó sobre
el posible uso de p53 en el desarrollo de terapias anti-tumorales. Se concluyó que la mutación
de p53 está involucrada en varios procesos de desarrollo de los distintos tipos de cáncer
presentándose como una importante diana terapéutica a partir de la cual se están llevando a
cabo investigaciones.
Introducción y antecedentes
1. Muerte celular.
La muerte celular se puede llevar a cabo por tres principales vías: la necrosis, la autofagia y
la apoptosis.1, 2
La autofagia es el principal proceso catabólico proteico por el cual se produce la degradación
de proteínas citoplasmáticas longevas. Además, la autofagia también puede desencadenar la
muerte celular tanto en el desarrollo normal como en situaciones patológicas. Esta autofagia
(o macroautofagia) se lleva a cabo mediante el secuestro de orgánulos y proteínas
citplasmáticas en vesículas con doble membrana (autofagosomas). Seguidamente, estos se
unen a los lisosomas, creando autolisosomas, donde el contenido es degradado.3, 4
La necrosis es la muerte celular que conlleva a una rápida pérdida de la membrana celular que
permite la salida de los componentes celulares al espacio extracelular. Estos componentes
atraen células del sistema inmune provocando la activación de un proceso inflamatorio que
daña las células sanas vecinas.4, 5
Sin embargo, la apoptosis (también denominada muerte celular programada) no provoca
daños a su alrededor, siendo el principal mecanismo por el cual los organismos pluricelulares
eliminan células indeseadas y dejan paso a otras nuevas. Se inicia con una picnosis (reducción
del volumen celular), condensación de la cromatina y fragmentación del DNA que provoca la
destrucción de la célula. La célula apoptótica se divide en cuerpos apoptóticos, vacuolas, que
recogen fragmentos celulares e impiden que lleguen a la matriz extracelular. Seguidamente
- 4 -
serán eliminados por fagocitos lo que evita que se produzca inflamación y con ello, el daño a
las células vecinas.4-6
A continuación, se explica de manera resumida los mecanismos de la apoptosis.
2. Apoptosis o muerte celular programada: mecanismos.
Existen dos vías principales por las que se induce la apoptosis en una célula: la vía intrínseca
y la vía extrínseca.
La cascada de señales que componen la vía intrínseca da comienzo cuando las células están
dañadas o sufren algún tipo de estrés. El paso principal de esta cascada es la liberación hacia
el citosol de varios componentes de la mitocondria, entre ellos el citocromo c. En estado
fisiológico normal, el citocromo c se encuentra en la membrana interna mitocondrial, pero
cuando comienza el proceso de apoptosis, este atraviesa la membrana externa mitocondrial
por permeabilización de la misma y pasa al citosol. Aunque los estímulos que desencadenan
esta permeabilización de la membrana externa mitocondrial (MOMP) son variados, está
mediada principalmente por proteínas de la familia Bcl-2. Dentro de esta familia se pueden
distinguir las proteínas anti-apoptóticas de las pro-apoptóticas, donde las primeras bloquean la
apoptosis por inhibición de las segundas mediante interacciones proteína-proteína. Dentro de
las últimas también se pueden distinguir dos subgrupos: las que contienen varios dominios
homólogos a Bcl-2 (llamados BH) como son BAX, BAK, BOK; y aquellas que sólo tienen
uno, el BH3, como BID, BIM, PUMA, NOXA, BIK, BAD, HRK, y BMF . Tras activarse la
apoptosis, BAX y BAK, se insertan en la membrana externa mitocondrial en forma de
oligómeros e interaccionan con proteínas antiapoptóticas para provocar la apertura del poro
mitocondrial, aumentado la permeabilidad de la misma y permitiendo la salida de diversas
moléculas como el citocromo c. Una vez se encuentra en el citosol, el citrocromo c se une a
Apaf-1 (factor 1 activador de la proteasa apoptótica) y a ATP formando un complejo
denominado apoptosoma. El apoptosoma presenta un dominio amino terminal que es capaz de
unirse a la pro-caspasa 9, atrayendo varias moléculas de pro-caspasa 9, que se activan entre sí,
y dan lugar a una cascada de activaciones de otras caspasas efectoras (3, 2 y 7), especialmente,
la caspasa 3, que en última instancia activan la degradación de los componentes celulares
(Figura 1). 5, 7
- 5 -
Por otra parte, existen también señales extracelulares que activan el mecanismo de apoptosis a
través de su unión a receptores de muerte, lo que se conoce como vía extrínseca. Esta ruta se
lleva a cabo por la unión de ligandos
extracelulares como son TNF- (Factor de
Necrosis Tumoral ), FASL (FAS ligando)
o TRAIL (ligando inductor de apoptosis
relacionado con TNF-), con los dominios
extracelulares de receptores transmembrana
de TNF- tipo1, FAS (CD95/Apo-1) o
receptores TRIAL. Una vez se ha unido el
ligando al receptor, el dominio intracelular
de muerte de éste (DD) se une a otros DD de
la proteína adaptadora FADD (dominio de
muerte asociado a FAS) o TRADD (dominio
de muerte asociado a TNF). Estas proteínas
adaptadoras cuentan también con un
dominio de muerte efector (DED) que es
capaz de interaccionar con DED presentes
en la pro-caspasa 8, formando un complejo de inducción de muerte (DISC) que promueve la
autoactivación de pro-caspasa 8. Esta caspasa activa otras caspasas efectoras que llevan a la
muerte de la célula.4, 7
Al contrario de lo que se puede pensar, ambas vías no son mutuamente
excluyentes, pues existen algunas células (células tipo II) en las cuales proteínas de la vía
intrínseca son activadas por caspasas de la vía extrínseca, mediante la intermediación de BID:
la caspasa 8 proteoliza BID, transformándose en BID truncada (tBID) que es capaz de
permitir la liberación del citocromo c por MOMP y promover la formación del apoptosoma
como muestra la Figura 1.5
Para regular estos procesos de muerte celular, se cuenta con varios mecanismos de control.
El más directo es la regulación a nivel de caspasas. Existen unas proteínas inhibidoras de la
apoptosis (IAP), que según su tipo inhibirán a unas caspasas o a otras mediante ubiquitinación
o bloqueo. Para que estas puedan ser activas, el IAP se escinde de la caspasa por
intermediación de la proteína Smac/DIABLO, la cual, pasa al citosol desde la mitocondria
junto con el citocromo c.
Figura 1. Apoptosis: vía extrínseca (1) e intrínseca (2).
Las líneas negras indican activación y las líneas rojas
inhibición. El asterisco indica la cascada de unión
entre la vía extrínseca y la intrínseca.5
*
- 6 -
Además, existe una ruta de control genómico en la cual proteínas concretas regulan la
expresión de ciertos genes que intervienen en el proceso apoptótico. Es el caso de la proteína
p53, un factor de transcripción que regula la expresión de cientos de genes involucrados en la
regulación del crecimiento celular, división y también, apoptosis.8
3. Proteína p53
Esta proteína es un supresor tumoral que actúa frente a diversas señales de estrés, como es el
DNA dañado, eventos oncogénicos anormales, erosión de los telómeros e hipoxia. Su misión
final es evitar la replicación de DNA dañado, y la realiza mediante la inducción de la parada
del ciclo celular, la reparación del DNA y muerte celular.9
Esta proteína es un factor de transcripción que regula la expresión de muchos genes. Su
estructura se puede dividir en tres dominios: dominio N terminal transactivador, encargado
de activar la transcripción; dominio rico en prolina; dominio central de unión al DNA;
dominio de tetramerización; y dominio regulador C terminal, en donde existe una señal de
localización nuclear. Es importante señalar, además, que el dominio central es el más
susceptible a sufrir mutaciones en determinados puntos (denominados “hot spots” en inglés),
que son, en la gran mayoría de los casos, las responsables de un mal funcionamiento de p53 y
con ello, de la aparición de las patologías asociadas (Figura 2).5, 9
Para su regulación, p53 sufre un variado número de modificaciones post-traducionales
mediante fosforilación, acetilación, metilación y ubiquitinación, Las reacciones de
Figura 2. Estructura de p53 y modificaciones post-traduccionales. La estructura de p53
compone por varios dominios: dominio N terminal transactivador (TAD), dominio rico
en prolina (PRID), dominio central de unión al DNA (DBD), dominio de tetramerización
(TD), dominio regulador C terminal (CRD). Debajo se muestran los sitios principales de
modificaciones post-traduccionales, con las enzimas responsables de cada modificación a
la derecha. Adaptada de: Apoptosis: controlled demolition at the cellular level.5
- 7 -
fosforilación en restos de serina y treonina abarcan toda la proteína pero se concentran
principalmente en los dominios N y C terminal, donde se regula su actividad o los cambios
conformacionales. La fosforilación en el dominio N terminal es una de las modificaciones
más importantes para activar a p53.10
Las reacciones de acetilación de residuos de lisina
predominan en el dominio de tetramerización y C terminal, y se ha visto que son requeridos
para la formación del tetrámero y localización nuclear. En estos mismos dominios se
concentran también los sitios de metilación, principalmente en restos de lisina pero también
en restos de arginina, cuya repercusión puede ser de activación o de represión según la
localización y los grupos metilo incorporados. Por último, las reacciones de ubiquitinación se
concentran también en el dominio de tetramerización y C terminal. En este caso, es
importante distinguir entre mono ubiquitinación, que favorece la translocación de p53 al
citosol (importante, como se verá a continuación para activar la apoptosis no transcripcional),
y poliubiquitinación, cuyo objetivo es la degradación proteosomal de p53 (Figura 2). Una de
las enzimas que realiza esta modificación por ubiquitinación es Mdm2, principal actor en la
degradación de p53. En estados fisiológicos normales donde la célula no debe entrar en
apoptosis, Mdm2 por su actividad ubiquitin ligasa poli-ubiquitiniza p53 para promover su
salida del núcleo y dirigirlo a la degradación por proteasomas. Para este proceso, se cuenta
también con MdmX la cual se une a Mdm2 y p53 creando un complejo que mejora la eficacia
de la ubiquitinación y afianza la inactivación trnascripcional de p53. Cuando se requiere que
la célula entre en apoptosis, p53 se escinde de estas enzimas por pérdida de afinidad mediante
fosofrilación. 8, 9, 11
Cuando se detecta un daño a nivel del DNA, se activa p53 mediante la escisión de p53 con
Mdm2 y MdmX, mediante fosforilación, así como la expresión de p53. Los estímulos que
activan a p53 componen un amplio abanico, desde radiaciones hasta hipoxia, y según qué
estímulo incida, los mediadores y las cascadas que la activan son también numerosos. Con el
fin de restaurar los daños, p53 pone en marcha una complicada red de mecanismos para
detener el ciclo celular y activar la reparación, a través de la expresión del gen de la proteína
p21, entre otros muchos como son los que codifican para Gadd45, 14-3-3σ, PTGFβ, etc.12
Una de las funciones de la proteína p21 es la inhibición de CDK. Las CDK, en forma de
complejo junto con ciclinas D y E, fosforilan diversas proteínas entre las que se encuentra
pRB. La fosforilación de pRB favorece la liberación del factor de transcripción E2F para que
pueda unirse al DNA. Al inhibir las CDKs, p21 evita que E2F quede libre y por tanto no
puede llevar a cabo su función, deteniéndose el ciclo celular para que la célula repare el daño
antes de seguir dividiéndose.13
- 8 -
Sin embargo, si la reparación no es viable porque el daño es muy extenso, p53 pone en
marcha mecanismos de apoptosis evitando la propagación del daño. Para ello, puede utilizar
dos mecanismos: uno transcripcional y otro no transcripcional. La vía dependiente de
transcripción se basa en la función de p53 como factor de transcripción, para lo cual se
transloca al núcleo y se tetrameriza, lo que favorece la expresión de varios de sus genes diana
que codifican para proteínas pro-apoptóticas de la familia Bcl-2 como Bax, Noxa o Puma que,
como se ha explicado, activan la vía intrínseca de la apoptosis. p53 también puede inducir la
expresión de receptores de muerte.14, 15
En la vía independiente de transcripción, p53 se transloca desde el citoplasma hasta la
mitocondria, en donde interacciona directamente con proteínas antiapoptóticas de la familia
de Bcl-2, Bcl-2 y Bcl-XL, rompiendo el complejo que forman con BAX y BAK. Una vez
liberadas, estas proteínas inducen la formación del poro en la membrana mitocondrial externa
como se ha mencionado, activando la apoptosis. Además, p53 también puede activar
directamente a BAX y BAK.13, 16
4. Cáncer
El cáncer es definido por la OMS como un término genérico que designa un amplio grupo de
enfermedades que pueden afectar a cualquier parte del organismo y se caracteriza por la
multiplicación rápida de células anormales que se extienden e invaden partes adyacentes del
cuerpo o se propagan a otros órganos, lo que se denomina como metástasis.17
Este proceso se
desarrolla a través de varios estadios durante los cuales las células tumorales van adquiriendo
las alteraciones genéticas necesarias para proliferar y sobrevivir. Estas alteraciones las
capacitan para inactivar los mecanismos de apoptosis, por lo que aun estando rodeadas de un
constante estrés que debería poner en marcha su destrucción, esta no se lleva a cabo. Esta
modulación de la apoptosis se realiza mediante cambios transcripcionales, traduccionales y
post-traduccionales, los cuales, no son mutuamente excluyentes si no que se pueden
desarrollar varios mecanismos a la vez para evitar la apoptosis. En algunos casos, las células
tumorales escapan de la apoptosis disminuyendo la expresión o estabilización de genes
proapoptóticos, como es el caso de p53, mediante modificaciones post-traduccionales como la
fosforilación. Así pues, la pérdida de la funcionalidad de p53 se presenta como uno de los
enclaves principales del desarrollo del cáncer por lo que el estudio de sus mutaciones en
relación con los diversos tipos de cáncer nos acerca a una mejor comprensión de esta
enfermedad así como a nuevas terapias eficaces frente a ella.18
- 9 -
Objetivos
Los objetivos específicos de este trabajo son:
1. Analizar la implicación de las mutaciones de p53 en el desarrollo de los cánceres de
pulmón, mama y colon.
2. Determinar la importancia de conocer el estado de p53 a la hora de aplicar el
tratamiento
3. Determinar el interés de tratamientos anti-tumorales basados en la presencia de p53.
Palabras clave: apoptosis, p53, mutación, cáncer, tratamiento
Metodología
Este trabajo se ha llevado a cabo mediante una revisión bibliográfica realizada,
principalmente, a través de artículos procedentes de los buscadores más populares y usados, a
saber: PubMed, Scienci Direct, Search Medica. La búsqueda de los artículos a partir de los
cuales se ha sacado la información, se ha realizado principalmente mediante las palabras clave
mencionadas, en lengua inglesa, anteponiendo aquellos con fechas más actuales. Se usaron 42
artículos de revistas científicas, además de otras páginas de información como la OMS y
SEOM (Sociedad Española de Oncología Médica), en este caso en lengua española.
Resultados y discusión
1. p53 y enfermedad
p53 es uno de los genes que con más frecuencia se encuentra mutado en las patologías
tumorales. Como se ha mencionado anteriormente, la proteína p53 se compone
principalmente de tres regiones. La mayoría de las mutaciones que se relacionan con procesos
patológicos, y más concretamente con el cáncer, se localizan en el dominio central, que es el
de unión al DNA.19, 20
Además, se ha visto que los tumores que presentan la proteína p53
mutada tienen una mayor capacidad de invasión y agresividad que aquellos que con la forma
salvaje de p53.21,
En contraste con la actividad supresora de tumores que presenta la proteína
p53 salvaje, la presencia de mutaciones en el gen de p53 puede dar lugar a tres situaciones: 1)
mutaciones que hagan inviable la expresión de la proteína; 2) mutaciones que dan lugar a una
proteína no funcional; y 3) mutaciones que le confieran a p53 nuevas funciones, lo que se
denomina “ganancia de función”, a través de las cuales se acentúa directamente la progresión
del cáncer.8, 22
El problema que se presenta en las dos primeras situaciones, las más comunes,
- 10 -
es que no se puede desarrollar la función normal de factor de transcripción de p53,
provocando fallos en los múltiples procesos en los que interviene como la reparación de DNA
o la inducción de la apoptosis. Es decir, no se lleva a cabo su función antitumoral haciendo
más fácil el desarrollo de procesos tumorales. La tercera situación es todavía más grave
debido a que existe esa pérdida de función antitumoral a lo que se le une esa “ganancia de
función” que se relaciona con varios procesos que favorecen el desarrollo y progresión
tumoral como son el aumento de la capacidad de invasión e inducción de metástasis, la
resistencia a quimioterapia y en último término el aumento de la mortalidad.18, 23
Seguidamente, se realiza un desglosamiento de la implicación de p53 mutada en los
principales cánceres presentes en la población española.
1.1 p53 y cáncer de pulmón
Según datos de la OMS, el cáncer de pulmón es la primera causa de muerte por cáncer, no
sólo a nivel nacional sino también a nivel mundial.17
Si desglosamos los datos por sexos a
nivel nacional, el cáncer de pulmón constituye la primera causa de muerte por cáncer en
hombres y la tercera en mujeres.24
En aproximadamente un 50% de casos de cáncer de pulmón se ha encontrado mutación en el
gen p53. Uno de los factores de riesgo principales en el desarrollo de este tipo de cáncer es el
tabaco, y es responsable de la aparición de mutaciones en varios genes, entre las que se
encuentran las mutaciones en p53. Se ha visto que en cánceres de pulmón hay un mayor
número de transversiones G:C a T:A, a diferencia de otros tipos de cáncer, aunque el origen
de ello sigue siendo desconocido. Sin embargo, actualmente se ha encontrado que un
componente del tabaco, BPDE (benzo[a]pireno dihidrodiol epóxido), es responsable de
mutaciones en el gen de p53 al ser capaz de formar aductos de guanina en varios codones
dentro de los puntos calientes (hot spots). Entre ellos, se encuentra el codon 157 que tiene
mayor probabilidad de mutación en pacientes fumadores, y el aducto que induce BDPE en ese
sitio provoca una distorsión estructural. Según lo señalado en la Figura 2, el codón 157 se
encuentra en la región de unión al DNA, por lo que esta distorsión lleva a una unión
incorrecta con el DNA y con ello a un mal funcionamiento de la proteína p53 que no permite
el desarrollo normal de los mecanismos en los que interviene, entre ellos la apoptosis,
pudiendo influir en la aparición del cáncer.25, 26
Existen otros mecanismos por los que se puede desarrollar a una mutación de p53 que derive
en cáncer de pulmón. Uno de ellos es el inducido por la infección del virus del papiloma
humano (VPH). Aunque este virus se relaciona fundamentalmente con el cáncer de cuello
- 11 -
uterino, también tiene un papel en el desarrollo del cáncer de pulmón. Según un estudio
realizado, se ha visto que los casos de cáncer con VHP positivo tenían una tasa mayor de
mutaciones de p53 que en aquellos con VHP negativo. EL VPH inhibe la función de p53
mediante ubiquitinación a través de su proteína E6 en forma de complejo junto a una E3
ubiquitin ligasa (E6AP). Para que VPH pueda inducir cáncer de pulmón, se estudió además la
posible necesidad de cooperación de la pérdida de FHIT. Esta enzima cataliza la reacción de
formación de ADP y AMP a partir de P1, P3-bis (5'-adenosil) trifosfato que está involucrada
en la ruta de síntesis de purinas. El VPH es capaz de integrarse en el sitio frágil FRA3B que
incluye el gen FHIT y provocar por consiguiente la pérdida de la enzima. Sin embargo, el
estudio concluye que esta correlación aún no está clara y se promueve una más profunda
investigación.27
Sin embargo, no sólo los factores externos son responsables de mutaciones en p53 que dan
lugar a cáncer de pulmón, sino que también existen factores genéticos que predisponen.
Existen ciertos polimorfismos de un solo nucleótido (SNPs) que pueden regular la presencia
de mutaciones de p53. Se estima una relación entre la presencia de varios genotipos malignos
derivados de esos polimorfismos, con el incremento de la prevalencia de mutaciones de p53.
Por ahora, se han relacionado con estas mutaciones cuatro SNP, a saber: rs1800975 en el gen
XPA, rs1052133 en el gen OGG1, rs1136410 en el gen ADPRT, y rs1805794 en el gen NBS1.
Así, pacientes que poseen 3 ó 4 genotipos de este tipo tienen una mayor frecuencia de
mutaciones en la proteína p53 que aquellos con menos o ninguno de esos genotipos.28
1.2 p53 y cáncer de mama
El cáncer de mama representa la principal causa de muerte en mujeres por enfermedad
tumoral, tanto a nivel mundial como nacional. 17, 24
Como en todos los procesos tumorales,
dentro de un tipo de cáncer existe una clasificación de varios subtipos, pero en el caso del
cáncer de mama es de vital importancia ya que el tratamiento depende del tipo que se trate.
No se trata de una clasificación morfológica, sino de una clasificación por expresión o
ausencia de ciertos receptores: 1) cáncer receptor hormonal positivo, donde están presentes
receptores de progesterona y estrógenos; 2) cáncer HER2 positivo, en el cual el receptor
HER2 está sobre-expresado; y 3) cáncer triple negativo, donde no están presenten los
receptores hormonales ni hay sobre-expresión de HER2.29
En relación con p53, se encuentran
mutaciones de p53 en un gran número de casos, especialmente en aquellos subtipos altamente
agresivos, en los cuales, p53 está mutada hasta en un 80% de los casos.30
Existen una gran
- 12 -
variedad de mutaciones de p53 resultando en distintos mecanismos de inducción de tumores,
de los cuales, algunos ya han sido explicados y otros quedan todavía por describir.20
Uno de ellos se lleva a cabo por la alteración de la vía de regulación del factor de
transcripción KLF17 (Kruppel-like-factor) por p53. En condiciones normales, KLF17 impide
la generación de metástasis inhibiendo la transición epitelio mesénquima (EMT) a través de la
regulación de sus genes. En este caso, las mutaciones que conducen al desarrollo de la
enfermedad son aquellas que provocan una ganancia de función de p53. Estas mutaciones,
localizadas en el dominio central, le confieren a p53 la capacidad de inhibir la expresión de
KLF17. Por lo tanto, no existe un control negativo de la EMT, favoreciendo la migración e
invasión de las células tumorales en el cáncer de mama.19
Sin embargo, este no es el único mecanismo que favorece la migración e invasión de estas
células tumorales. Debido a mutaciones puntuales en el dominio central de unión a DNA, p53
pierde su conformación original y adopta una nueva que le permite interaccionar con otras
proteínas de la familia como es p63. Esta proteína es también un factor de transcripción, entre
otras cosas, regula la expresión de genes que inhiben los procesos de invasión celular y la
actividad de algunos receptores de membrana, como el receptor del factor de crecimiento
epidérmico (EGFR). Por ello, la unión de p53 mutada a p63 impide el correcto
funcionamiento de esta última, provocando un incremento de la invasión celular.31
El cáncer de mama también se puede desarrollar por un fallo en la función de algún miRNA
debido a una interacción con p53 mutada. Concretamente, la mutación R273H de p53
posibilita la unión de la proteína al promotor de miRNA30a, inhibiendo su expresión y
favoreciendo la expresión del receptor del factor de crecimiento insulínico tipo 1 (IGR-1R).
La vía de señalización que induce este receptor promueve la proliferación y, en última
instancia, la migración de células tumorales. Por tanto, la expresión de p53 mutada lleva a un
incremento de la migración en células tumorales mamarias.32
1.3 p53 y cáncer de colon
El cáncer de colon supone en España la segunda causa de muerte por cáncer, tanto en varones
como en mujeres24
. El proceso de desarrollo de esta enfermedad comprende varios estadios:
desde un colon sano, pasando por un adenoma pequeño seguido de uno mayor, acabando
finalmente en un adenocarcinom.33
La evolución de este proceso puede darse a partir de
diferentes y diversos mecanismos, entre los cuales destacan las mutaciones de varios genes.34
De forma generalizada, los genes que con mayor frecuencia se encuentran involucrados en
este tipo de cáncer son el oncogen K-ras y los factores supresores de tumores, APC y p53.33-36
- 13 -
El gen p53 se estima que se presenta mutado en aproximadamente el 40-60% de los casos de
cáncer de colon.34
A pesar de su prevalencia, los mecanismos a través de los cuales, p53 induce cáncer de colon
no se conocen bien. Se sabe que dentro de la variedad de mutaciones que puede sufrir, los
codones que se presentan mutados con mayor frecuencia son los codones 175, 248, 273,
situados en el dominio central, que modifican la conformación normal de p53, así como las
interacciones entre p53 y distintas proteínas.34, 37
Un claro ejemplo de ello es la interacción
entre p53 y APC. Ambas proteínas son supresoras de tumores y se encargan de activar la
apoptosis en células dañadas. Además, p53 es un regulador de la expresión de APC. Cuando
p53 está activa, aumenta la actividad del promotor del gen de APC, lo que aumenta su
expresión y activa la apoptosis. Si una mutación en p53 impide la correcta unión entre p53 y
el promotor de APC, la activación de la apoptosis se ve comprometida y se favorece la
aparición de células cancerosas en el colon.35
2. p53 y tratamiento
Según lo visto anteriormente, p53 juega un papel importante en el control y desarrollo de los
procesos tumorales. Son, por tanto, necesarias investigaciones sobre posibles terapias
anticancerosas dirigidas a actuar sobre p53. La primera es favorecer el aumento de los niveles
de p53 salvaje en aquellas células cuyo gen no esté mutado, pero que por otras razones no está
funcionando correctamente (alteraciones de Mdm2, exclusión del núcleo, etc.), y por tanto,
inducir a apoptosis en las células que contengan daños a otro nivel. En el caso de que existan
mutaciones en el gen, se pueden desarrollar moléculas que corrijan o eliminen la proteína
mutada. Para conseguirlo, se está estudiando la posibilidad de utilizar terapias genéticas en las
cuales se introduzca la propia proteína salvaje, se utilicen vectores con moléculas que corrijan
la mutación o se usen adenovirus modificados que reconozcan células con p53 mutada y la
destruyan.38
A continuación, se detallan algunas de las estrategias más novedosas que están en fase de
investigación y las cuales, según los resultados obtenidos hasta el momento, se presentan
prometedoras.
2.1 Moléculas que actúan sobre p53 salvaje
Como se ha comentado los procesos tumorales pueden cursar con una disminución de la
actividad de p53 por factores que no son intrínsecos a ella como es alteraciones en Mdm2 que
provocan una mayor degradación de p53 de la requerida. Frente a este problema, varias
moléculas están siendo investigadas. La más estudiada y que está presentando mejores
- 14 -
resultados es Nutlina (nutlin). Las Nutilinas son una serie de pequeñas moléculas que
interrumpen la unión entre p53 y Mdm2 al tener una alta afinidad de unión por Mdm2 que
bloquea el sitio de unión con p53 impidiendo así la degradación de la proteína, y por lo tanto,
aumentando sus niveles. En concreto, nutlina-3 ha demostrado aumentar los niveles y la
actividad de p53 en varios tipos de cáncer entre los que se encuentran el de pulmón, mama y
colon. 26, 38
Con un mecanismo de acción muy parecido, se encuentra la molécula MI-219 que
imita los residuos de p53 y se une a Mdm2 con mayor afinidad que la propia p53 lo que le
permite eludir su degradación y aumentar sus niveles.38
En una línea similar, está el agente anticanceroso FL118. Esta molécula, similar a lo que
ocurría con las anteriores, tiene como objetivo impedir la ubiquitinación de p53 por Mdm2.
En concreto, su mecanismo de acción se basa en disminuir las interacciones entre p53 y
Mdm2, y estimular las que se producen entre Mdm2 y MdmX, lo que provoca una
ubiquitinación y posterior degradación de MdmX. Como resultado se ve aumentada la
concentración de p53. Una ventaja que añade esta molécula frente a Nutlina es que es capaz
de inducir un proceso apoptótico independiente de p53 cuando esta está ausente o hay
sobreexpresión de Mdmx. Esta molécula se ha estudiado en líneas celulares de cáncer de
colon y se prevé su uso principalmente en este tipo de cáncer.36
Siguiendo la línea de inhibición de la actividad de Mdm2, pero utilizando otros mecanismos,
encontramos los siRNAs (RNAs de interferencia). Estas moléculas de RNA pequeñas son
capaces de inducir la degradación del RNAm diana disminuyendo así los niveles de la
proteína codificada, en este caso, MDM2. Con ayuda de nanotubos de carbono, se promueve
la introducción de siRNAs en las células cancerosas que impide la expresión de Mdm2 y se
favorece el acúmulo de p53 y la posterior activación de la apoptosis de la célula dañada.39
Por otro lado, con el mismo mecanismo en mente, pero dirigiéndose más a una terapia
específica de cáncer de pulmón, se está intentando desarrollar una terapia a través de la
curcumina. La curcumina se usa como colorante natural, pero en las últimas décadas ha
aumentado su interés como terapia anticancerosa, ya que se le ha relacionado con múltiples
vías de señalización en tumores. Una de sus implicaciones es en la activación de la vía p53-
microRNA-XIAP. En esta vía, la curcumina aumenta la expresión de p53, que actúa como
factor de transcripción de los genes que codifican para los miRNA, miRNA-192-5p y
miRNA-215. Estos miRNA inhiben la expresión de XIAP, un miembro de la familia de las
IAP que inactiva la caspasa 3, favoreciendo la apoptosis. Esta posible terapia se quiere dirigir
a tratar NSCLC (cáncer de pulmón de células no pequeñas), uno de los tipos de cáncer de
pulmón más comunes (constituye el 80% de todos los casos por cáncer de pulmón).40
- 15 -
Por otro lado, no sólo la liberación de Mdm2 aumenta los niveles de p53. En este camino,
encontramos a KP46. Se trata de un complejo gálico cuya actividad anticancerosa se
desarrolla por la competición que existe entre el hierro y el galio para ser absorbidos por la
célula. Según el estudio, la acumulación de KP46 en la mitocondria coincide con una
disminución de los niveles de hierro y con un aumento de la actividad de p53. Para que p53
pase al citosol y sea degradado por las ubiquitinasas debe unirse a hemoglobina. Como el
hierro es requerido por las mitocondrias para sintetizar hemoglobina, los niveles de esta se
ven reducidos. Por tanto, al no poder trasladarse al citosol, p53 aumenta sus niveles en el
núcleo donde desarrolla su función transcripcional. En concreto, los resultados indican que el
tratamiento de células tumorales con KP46 hace del gen que codifica para BNIP3L la diana
mayoritaria de p53. BNIP3L es una proteína pro-apoptótica perteneciente a la familia de Bcl-
2 entre cuyas funciones se encuentra aumentar la permeabilización de la mitocondria para
activar la apoptosis. Este tratamiento se ha estudiado en líneas de cáncer de colon.41
Sin embargo, Mdm2 no es la única molécula a la cual se puede dirigir una terapia de
activación de p53. Sin la intervención de terceras moléculas, se está estudiando un nuevo
compuesto derivado de naftalamida, denominado NA-17. Su mecanismo de acción se basa en
aumentar los niveles de p53 fosforilada en el núcleo y mitocondria. Según los resultados, las
moléculas de p53 fosforiladas inducidas por NA-17 en el núcleo se unen directamente al
promotor del gen de Bcl-xl inhibiendo su transcripción; mientras que en la mitocondria, las
moléculas de p53 fosforiladas se unen al complejo Bak-Bcl-xl causando la disociación de Bak
del complejo y por consiguiente la activación del proceso de apoptosis. Adicionalmente,
comparando los efectos entre las diferentes líneas de células utilizadas, se ha visto que NA-17
tiene mayor actividad en aquellas líneas celulares tumorales con p53 inactivada, y sin
embargo, en las líneas celulares normales, presenta una baja toxicidad, de lo que se infiere
que NA-17 es capaz de distinguir entre células tumorales y células sanas.10
2.2 Moléculas que actúan sobre p53 mutada
Como se ha indicado anteriormente, más de la mitad de los cánceres cursan con una p53
mutada frente a lo cual las terapias anteriores no tienen validez. Con la idea de salvar este
obstáculo, aparecieron otras propuestas como es PRIMA-1. Este compuesto se podría utilizar
en casos en los que la proteína p53 esté mutada ya que su mecanismo de acción se asienta en
una unión entre él y el domino central de la p53 mutada permitiendo una alquilación de los
grupos tioles de la proteína, que induce a una transformación en su conformación
estabilizándola y asemejándola a la de p53 salvaje y restaurando su funcionalidad. Esta
- 16 -
molécula ha sido testada en varias líneas de células tumorales, pero los mejores resultados se
han obtenido en líneas de cáncer de pulmón.26, 38
Otra novedosa estrategia que promete buenos resultados, emplea dos inhibidores de la enzima
histona desacetilasa (HDACI): el ácido hidroxámico suberoilanilida (SAHA) y el butirato
sódico (NaB). Esta terapia está enfocada sobre todo al cáncer de mama triple negativo
(TNBC), por varias razones ya que representa uno de los subtipos de cáncer de mama más
agresivos, para el cual no existe tratamiento actual porque no existen dianas. En torno a un
52% cursa con mutaciones en p53. SAHA-NaB se basa en la inhibición de la transcripción del
gen p53 mutado a través del bloqueo del eje HDAC/YY1 (factor de transcripción Yin Yan 1).
YY1es uno de los factores de transcripción que regulan positivamente la transcripción del gen
que codifica para p53 mutada. Para ello, YY1 debe unirse al promotor del gen p53, para lo
cual se requiere que YY1 esté desacetilada. Esta desacetilación, en concreto, de YY1, la lleva
a cabo HDAC8. El mecanismo de acción de SAHA y NaB se basa en inhibir la asociación
entre HDAC8 y YY1 para evitar la desacetilación de este último. Esto consigue que YY1 esté
hiperacetilada lo que provoca que disminuya su capacidad de unión a DNA, y por tanto, se
disminuya la transcripción de p53 mutada.42
En una dirección más concreta, dirigida sobre todo al tratamiento de cáncer de colon, se están
estudiando dos nuevas moléculas. El primer agente, es la molécula CP-31398, que actúa a
nivel de la proteína ya formada. Su mecanismo de acción se basa en restaurar y estabilizar la
conformación original de la p53 salvaje a partir de p53 mutada. Se ha visto que en células con
p53 mutada tratadas con CP-31398, se producía detección del ciclo celular y se inducía la
apoptosis. De estas repuestas, se dedujo que la actividad de p53 había sido restaurada. Por lo
tanto, CP-31398 transforma p53 mutada en p53 salvaje y con ello se recupera la capacidad de
inducir la parada del ciclo celular y la apoptosis.43
El segundo agente, tiene como objetivo corregir la proteína a nivel de RNA. Mediante
adenovirus modificados que actúen como vector, se introduce un mRNA de p53 salvaje, es
decir sin mutaciones, que se empalma al mRNA mutado endógeno. Mediante un
espliceosoma se realiza un corte y empalme en trans con el mRNA introducido, que corrige
el mRNA mutado de la célula. De esta manera, se presenta una nueva terapia en el tratamiento
de cáncer de colon, presumiblemente extensible a otros tipos. Aunque existen ciertas
desventajas en esta terapia, pues no todas las mutaciones fueron corregidas, y existe una
limitación en la cantidad de exones que se pueden corregir, también presenta grandes ventajas.
No presenta la desventaja con respecto al espacio limitado que se manifiesta en las terapias
con vectores porque sólo se requiere introducir un fragmento del gen; además no se espera la
- 17 -
presencia de efectos adversos en células normales pues sólo tiene que activarse el mecanismo
cuando esté presente el RNA diana.44
Conclusiones
- Los mecanismos por los cuales un fallo en p53 puede derivar en cáncer de colon, mama o
pulmón son variados según el tipo de cáncer que se trate e incluso existe variedad dentro de
un mismo tipo.
- A la hora de dirigir una terapia es importante saber si p53 se encuentra mutada o no. En caso
de mutación se opta por una terapia de restauración de la acción, mientras que en casos con
p53 salvaje, se dirige a un aumento de su actividad fisiológica.
- La proteína p53 se presenta como una potencial diana anticancerosa interesante, y los
estudios realizados sobre terapias en base a ella obtienen resultados prometedores para poder
incluirla en tratamientos actuales en un futuro.
Es por tanto, que desde este trabajo se promueve e incentiva la investigación y elaboración de
nuevas estrategias para acercarnos más a una terapia de curación efectiva y segura del cáncer.
Bibliografía
1. Degterev A, Yuan J. Expansion and evolution of cell death programmes. Nat Rev Mol
Cell Biol. 2008; 9(sd5):378-90
2. Galluzzi L, Vitale I, Abrams JM, Alnemri ES, Baehrecke EH, Blagosklonny MV, et al.
Molecular definitions of cell death subroutines: recommendations of the Nomenclature
Committee on Cell Death 2012. Cell Death Differ. 2012; 19(1):107-20.
3. Ben Loos, Anna-Mart Engelbrecht, Richard A. Lockshin, Daniel J. Klionsky, Zahra Zaker.
The variability of autophagy and cell death susceptibility. Autophagy. 2013
Sep;9(9):1270-85.
4. Vassiliki Nikoletopoulou, Maria Markaki, Konstantinos Palikaras, Nektarios Tavernarakis.
Crosstalk between apoptosis, necrosis and autophagy. Biochim Biophys Acta. 2013
Dec;1833(12):3448-59.
5. Rebecca C. Taylor, Sean P. Cullen and Seamus J. Martin. Apoptosis: controlled
demolition at the cellular level. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2008; 9 (231-241)
6. G Kroemer, L Galluzzi, P Vandenabeele, J Abrams, ES Alnemri, Baehrecke.
Classification of cell death: recommendations of the Nomenclature Committee on Cell
Death 2009. Cell Death and Differentiation (2009) 16, 3–11.
7. Samira Goldar, Mahmoud Shekari Khaniani, Sima Mansoori Derakhshan, Behzad
Baradaran. Molecular Mechanisms of Apoptosis and Roles in Cancer Development and
Treatment. Asian Pac J Cancer Prev, 16 (6), 2129-2144.
- 18 -
8. Jayne Loughery, David Meek. Switching on p53: an essential role for protein
phosphorylation? BioDiscovery 2013; 8: 1
9. Chao Dai, Wei Gu. p53 post-translational modification: deregulated in tumorigenesis.
Trends Mol Med. 2010 November ; 16(11): 528–536.
10. Guohai Zhang, Yunfeng An, Xing Lu, Hui Zhong, Yanhong Zhu, Yiming Wu, et al. A
Novel Naphthalimide Compound restores p53 function in Non–Small–Cell Lung Cancer
by Reorganizing the Bak–Bcl-xl Complex and Triggering Transcriptional Regulation. J
Biol Chem. 2016 Feb 19;291(8):4211-25.
11. Caroline J. DeHart, Jasdave S. Chahal, S. J. Flint, David H. Perlman. Extensive Post-
translational Modification of Active and Inactivated Forms of Endogenous p53. Mol Cell
Proteomics. 2014 Jan; 13(1): 1–17.
12. Zhen Wang, Yi Sun. Targeting p53 for Novel Anticancer Therapy. Transl Oncol. 2010
Feb; 3(1): 1–12.
13. Abde M. Abukhdeir, Ben Ho Park. P21 and p27: roles in carcinogenesis and drug
resistance. Expert Rev Mol Med. 2008 Jul 1;10:e19.
14. Amaral, J.D., Xavier, J.M., Steer, C.J., Rodrigues, C.M., 2010. The role of p53 in
apoptosis. Discov. Med. 9, 145–152.
15. Seung-Wook Chi. Structural insights into the transcription-independent apoptotic pathway
of p53. BMB Rep. 2014; 47(3): 167-172.
16. Christophe Debena, Vanessa Deschoolmeestera, Filip Lardona, Christian Rolfoc, Patrick
Pauwelsa,baCenter. TP53 and MDM2 genetic alterations in non-small cell lung cancer:
Evaluating their prognostic and predictive value. Crit Rev Oncol Hematol. 2016
Mar;99:63-73.
17. Organización Mundial de la Salud. Cáncer. Ginebra: OMS; 2015. Nota descriptiva Nº297.
18. Kaleigh Fernald, Manabu Kurokawa. Evading apoptosis in cancer. Trends Cell Biol. 2013
December ; 23(12): 620–633.
19. Amjad Ali, Abdus Saboor Shah, Ayaz Ahmad. Gain-of-function of mutant p53: mutant
p53 enhances cancer progression by inhibiting KLF17 expression in invasive breast
carcinoma cells. Cancer Lett. 2014 Nov 1;354(1):87-96.
20. Mariana Fitarelli-Kiehl, Juliana Giacomazzi, Patricia Santos-Silva, Marcia Silveira
Graudenz, Edenir Inez Palmero, Rodrigo Augusto Depieri Michelli et al. The breast
cancer immunophenotype of TP53-p.R337H carriers is different from that observed
among other pathogenic TP53 mutation carriers. Fam Cancer. 2015 Jun;14(2):333-6.
21. 1 Lang GA, Iwakuma T, Suh YA, Liu G, Rao VA, Parant JM, Valentin-Vega YA, Terzian
T, Caldwell LC, Strong LC, El- Naggar AK, Lozano G. Gain of function of a p53 hot spot
mutation in a mouse model of Li-Fraumeni syndrome. Cell. 2004; 119:861–872.
22. Nataly Shtraizent, Hiroshi Matsui, Alla Polotskaia, Jill Bargonetti. Hot SpotMutation in
TP53 (R248Q) Causes Oncogenic Gain-of-Function Phenotypes in a Breast Cancer Cell
- 19 -
Line Derived from an African American Patient. Int. J. Environ. Res. Public Health 2015,
13, 22.
23. Catherine A. Vaughan, Rebecca Frum, Isabella Pearsall, Shilpa Singh, Brad Windle,
Andrew Yeudall et al. Allele specific gain-of-function activity of p53 mutants in lung
cancer cells. Biochem Biophys Res Commun. 2012 Nov 9;428(1):6-10.
24. Sociedad Española de Oncología Médica. Las Cifras del Cáncer en España 2016. Madrid:
(SEOM); 2016.
25. Georgina E. Menzies, Simon H. Reed, Andrea Brancale, Paul D. Lewis. Base damage,
local sequence context and TP53 mutation hotspots: a molecular dynamics study of
benzo[a]pyrene induced DNA distortion and mutability. Nucleic Acids Res. 2015 Oct 30;
43(19): 9133–9146.
26. Don L. Gibbons, Lauren A. Byers, Jonathan M. Kurie. Smoking, p53 Mutation, and Lung
Cancer. Mol Cancer Res. 2014 January ; 12(1): 3–13.
27. Yan Yu, Xiaofei Liu, Yuxuan Yang, Xiaodan Zhao, Jianjun Xue, Weixiao Zhang, Aimin
Yang. Effect of FHIT loss and p53 mutation on HPV-infected lung carcinoma
development. Oncol Lett. 2015 Jul;10(1):392-398
28. Sukki Choa, Min Jung Kimb, Yi Young Choib, Seung Soo Yoo, Won Kee Lee, Eun Jin
Lee. Associations between polymorphisms in DNA repair genes and TP53 mutations in
non-small cell lung cancer. Lung Cancer. 2011 Jul;73(1):25-31.
29. Breast Cancer Treatment–Health Professional Version (PDQ®). National Cancer Institute.
Actualizado: 2 febrero 2016; acceso: 11 mayo 2016. Disponible en:
http://www.cancer.gov/types/breast/hp/breast-treatment-pdq
30. Hudis CA, Gianni L. Triple-negative breast cancer: an unmet medical need. Oncologist.
2011; 16:1–11.
31. Igor Bado, Fotis Nikolos, Gayani Rajapaksa, Jan-Åke Gustafsson, Christoforos Thomas.
ERβ decreases the invasiveness of triple-negative breast cancer cells by regulating mutant
p53 oncogenic function. Oncotarget. 2016 Feb 10
32. Fangdong Guo, Hongshen Chen, Jian Chang, Lin Zhang. Mutation R273H confers p53 a
stimulating effect on the IGF-1R-AKT pathway via miR-30a suppression in breast cancer.
Biomed Pharmacother. 2016 Mar;78:335-41
33. Pooja Malhotra, Mumtaz Anwar. Neha Nanda, Rakesh Kochhar, Jai Dev Wig, Kim
Vaiphei, et al. Alterations in K-ras, APC and p53-multiple genetic pathway in colorectal
cancer among Indians. Tumor Biol. 2013; 34:1901–1911.
34. Chaar Ines, Ounissi Donia, Boughriba Rahma, Azza Ben Ammar, Amara Sameh, Taher
Khalfallah, et al. Implication of K-ras and p53 in colorectal cancer carcinogenesis in
Tunisian population cohort. Tumor Biol. 2014; 35:7163–7175.
35. Aruna S. Jaiswal, Satya Narayan. p53-dependent Transcriptional Regulation of the APC
Promoter in Colon Cancer Cells Treated with DNA Alkylating Agents. J Biol Chem. 2001
May; 276(21):18193-9.
- 20 -
36. Xiang Ling, Chao Xu, Chuandong Fan, Kai Zhong, Fengzhi Li, Xinjiang Wang. FL118
Induces p53-Dependent Senescence in Colorectal Cancer Cells by Promoting Degradation
of MdmX. Cancer Res. 2014 Dec 15; 74(24):7487-97
37. Gillian Smith, Francis A. Carey, Julie Beattie, Murray J. V. Wilkie, Tracy J. Lightfoot,
Jonathan Coxhead, et al. Mutations in APC, Kirsten-ras, and p53—alternative genetic
pathways to colorectal cancer. Proc Natl Acad Sci U S A. 2002 Jul 9;99(14):9433-8
38. Zhen Wang, Yi Sun. Targeting p53 for Novel Anticancer Therapy. Transl Oncol. 2010
Feb; 3(1): 1–12
39. Hailong Chen, Xingyuan Maa, Zhi Li, Qiaoyun Shi, Wenyun Zheng, Yang Liu, et al.
Functionalization of single-walled carbon nanotubes enables efficient intracellular
delivery of siRNA targeting MDM2 to inhibit breast cancer cells growth. Biomed
Pharmacother. 2012 Jul;66(5):334-8
40. Mingxiang Ye, Jin Zhang, Jiän Zhang, Qing Miao, Libo Yao, Jian Zhang. Curcumin
promotes apoptosis by activating the p53-miR-192-5p/215-XIAP pathway in non-small
cell lung cancer. Cancer Lett. 2015 Feb 1;357(1):196-205
41. Nastasia Wilfinger, Shane Austin, Barbara Scheiber-Mojdehkar, Walter Berger, Siegfried
Reipert, Monika Praschberger. Novel p53-dependent anticancer strategy by targeting iron
signaling and BNIP3L-induced mitophagy. Oncotarget. 2016 Jan 12;7(2):1242-61
42. Zhao-Tong Wang, Zhuo-Jia Chen, Guan-Min Jiang, Ying-Min Wu, Tao Liu, Yan-Mei Yi,
et al. Histone deacetylase inhibitors suppress mutant p53 transcription via HDAC8/YY1
signals in triple negative breast cancer cells. Cell Signal. 2016 ;28(5):506-15
43. Xingxing He, Xinjuan Kong, Junwei Yan, Jingjun Yan, Yunan Zhang, Qian Wu. CP-
31398 prevents the growth of p53-mutated colorectal cancer cells in vitro and in vivo.
Tumor Biol. (2015) 36:1437–1444
44. Xingxing He, Jiazhi Liao, Fang Liu, Junwei Yan, Jingjun Yan, Haitao Shang. Functional
repair of p53 mutation in colorectal cancer cells using trans-splicing. Oncotarget. 2015
Feb 10;6(4):2034-45.